CN112458201A - 一种用于检测新型冠状病毒的荧光rt-rpa引物、探针及检测方法 - Google Patents

一种用于检测新型冠状病毒的荧光rt-rpa引物、探针及检测方法 Download PDF

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罗洁
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Abstract

本发明提供了一种用于逆转录重组酶介导核酸扩增技术检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)的荧光RT‑RAA引物和荧光探针以及该荧光RT‑RAA引物和荧光探针在检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)中的应用，该荧光RT‑RAA引物和荧光探针可以快速、定性检测咽拭子样本中的新型冠状病毒(2019‑nCoV)，能在39℃常温下检测，20分钟内即可出诊断结果，大大缩短检测时间；该荧光RT‑RAA引物和荧光探针特异性更强、灵敏度更高，完全满足疫情快速诊断和全程监控，为疫情早诊断、早治疗、降低病死率以及控制疫情争取时间。

Description

一种用于检测新型冠状病毒的荧光RT-RPA引物、探针及检测 方法
技术领域
本发明属于体外核酸检测领域，具体涉及一种用于检测咽拭子样品中新型冠状病毒(2019 novel Coronavirus，2019-nCoV)的荧光RT-RAA引物、探针和检测方法。
背景技术
新型冠状病毒急性呼吸疾病(2019-nCoV acute respiratory disease) 是由新型冠状病毒(2019 novel Coronavirus，2019-nCoV)引起的一种较严重的呼吸系统疾病，是继SARS-CoV及MERS-CoV后一种新发现的传播力强、可感染人的冠状病毒。因此，为及时有效发现新型冠状病毒(2019-nCoV)病毒，建立快速、敏感、特异的2019-nCoV检测方法十分必要。
新型冠状病毒(2019-nCoV)主要症状表现为发热、乏力、干咳。少数伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，与其它呼吸道病毒感染症状类似，很难区分。而且部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现,临床上没有症状，但具有传染性，无疑进一步加大了2019-nCoV病毒的防控难度。目前尚无针对新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的有效抗病毒治疗药物以及疫苗。因此，建立快速诊断新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的实验室方法显得尤为重要。
传统的检测方法检测周期长，且分离阳性率低，往往会延误病程和疫情的控制。分子生物学诊断方法可以在病毒血症时期检测到病毒的感染，并且快速灵敏，能够应用于新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测。目前，用于病毒检测的分子生物学方法主要是实时荧光RT-PCR法，但PCR方法需要使用复杂的仪器和装备精良的实验室，而LAMP方法引物较复杂，必须用特殊的软件设计，且用LAMP方法得到的扩增产物是一些大小不等的片段，无法直接克隆和测序，只能用于判断目的基因的存在。
发明内容
本发明的有益效果包括：
本发明目的是提供一种用于逆转录重组酶介导核酸扩增技术检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的荧光RT-RAA引物和荧光探针以及该荧光RT-RAA引物和荧光探针在检测新型冠状病毒(2019-nCoV)中的应用，该荧光RT-RAA引物和荧光探针可以快速、定性检测咽拭子样本中的新型冠状病毒(2019-nCoV)。
本发明提供的荧光RT-RAA引物和荧光探针，应用该荧光RT-RAA引物和荧光探针检测新型冠状病毒(2019-nCoV)时，不依赖于昂贵的PCR仪器，且检测时间较PCR方法或荧光PCR显著缩短，而灵敏度与荧光PCR相当甚至更高。
在RT-RAA反应过程中，新型冠状病毒(2019-nCoV)RNA首先通过反转录酶合成cDNA，再利用重组酶代替PCR高温变性，完成对双链的解链，解开的双链被单链结合蛋白结合，防止DNA链复性，再由聚合酶完成链的延伸，以cD NA为模板合成目的产物。反应在39℃下进行20分钟.此外，RAA技术还能完成多重引物扩增，配合荧光仪，可形成一套RAA多重荧光实时检测系统，即利用不同颜色的荧光标记，在同一个反应里检测到不同的目的基因，这是其他恒温核酸扩增技术或巢式PCR技术无法相比的。
本发明可以实现单管现场、快速检测新型冠状病毒(2019-nCoV)，其它检测技术相比具有以下优点：
1、全封闭反应，实时监控荧光数据，无需后续处理，避免污染，保证检测结果的可靠性；2、不依赖于PCR等贵重仪器，甚至能在37-39℃常温下检测，20分钟内即可出诊断结果，大大缩短检测时间；3、本发明提供的荧光R T-RAA引物和荧光探针特异性更强、灵敏度更高，完全满足疫情快速诊断和全程监控，为疫情早诊断、早治疗、降低病死率以及控制疫情争取时间。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的荧光RT-RAA引物、探针的设计
针对于中东呼吸综合征冠状病毒的特异保守区域为靶标区域，设计特异性引物及荧光RAA探针，其序列分别是：
正向引物，如序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列：
5'-AATGTCTGGTAAAGGCCAACAACAACAAGG-3'
反向引物，如序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列：
5'-ATTTGCGGCCAATGTTTGTAATCAGTTCCT-3'
寡核苷酸探针，如序列表中SEQ ID №：3所示核苷酸序列：
5'-CTGTCACTAAGAAATCTGCTGCTGAGGCT(FAM-dT)(THF)(BHQ-dT)AAGAAGCCTCGGCAA-3'；
其中：
FAM-dT表示携带有荧光素基团FAM(6-Carboxyfluorescein)的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
THF表示四氢呋喃(tetrahydrofuran)连接子；
BHQ-dT表示携带有荧光淬灭基团BHQ(black hole quencher)的胸腺嘧啶脱氧核苷酸；
实施例2、一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的荧光RT-RAA方法的建立
(一)荧光RT-RAA反应
1)样本RNA的提取：所述样本RNA可以采用德国凯杰生物工程有限公司的viralRNA核酸提取试剂盒，按照试剂盒说明书进行提取。
2)以步骤1)制备的待检测样本RNA为模板，加入RT-RAA反应液、酶混合液等配成RT-RAA反应体系，进行扩增反应。
其中反应体系如下：
25μl RAA反应缓冲液(江苏奇天基因生物科技有限公司RAA基础试剂盒提供)；
实施例1设计的正向引物、反向引物(10μM)各2μL；
0.5μL实施例1设计的探针(10μM)；
1μL步骤1)制备的待检测样本RNA模板；
0.5μL的M-MLV逆转录酶(ThermoFisher公司产品，200U/μL)
加16.5μL双蒸水至47.5μL，混合均匀，然后加入到有干粉(江苏奇天基因生物科技有限公司RAA基础试剂盒提供)的反应管中，再次混匀。各管加入2.5μL 280mM醋酸镁溶液并混匀。
(二)荧光检测
将上述反应管放置于RAA F-6100荧光基因检测仪(江苏奇天基因生物科技有限公司)，在39℃反应20min，进行荧光检测。
阴性对照：FAM通道无扩增曲线，且无Tt值；
阳性对照：FAM通道有扩增曲线，Tt值均≤8min
上述对阳性对照和阴性对照的要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需要重新进行实验。
4)样品检测结果判读：
当所检测的样品FAM通道均有扩增曲线，质量控制正常时，可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)阳性；
当所检测的样品FAM通道无扩增曲线，且Tt值显示为Undet或No Tt，质量控制正常时，可判定新型冠状病毒(2019-nCoV)阴性。
(三)灵敏度实验
该实验验证该检测方法的最低检测限，采用浓度为1.0×106copies/mL、 1.0×105copies/mL、1.0×104copies/mL、1.0×103copies/mL、1.0×102co pies/mL、10copies/mL等的假病毒阳性标准品作为检测限参比品，通过该实验表明该检测方法的检测限达到10copies/mL。
其中106拷贝、105拷贝、104拷贝、103拷贝、102拷贝、10拷贝分别表示浓度为1.0×106copies/mL、1.0×105copies/mL、1.0×104copies/mL、 1.0×103copies/mL、1.0×102copies/mL、10copies/mL的阳性质控品扩增曲线，阴性为阴性质控品，用横坐标表示反应时间，纵坐标mv表示荧光值。结果表明，该检测方法的检测限达到10copies/mL。
(四)特异性实验
该实验选择与新型冠状病毒(2019-nCoV)具有相同感染症状的常见病原体作为特异性参考品。特异性参考品分别为甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒。利用Qigen公司的Viral病毒RNA提取试剂盒提取以上样本中的RNA作为模板进行实验。结果表明，这4种特异性参考品均未有扩增曲线，说明该检测方法的特异性良好。
(五)临床阳性样品检测实验
该实验室选择2例经商品化PCR试剂盒检测确认为新型冠状病毒(2019 -nCoV)核酸阳性的样本核酸对该方法进行检测、验证。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制，但凡采用等同替换或等效变换的形式所获得的技术方案，均应落在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 宁波国际旅行卫生保健中心（宁波海关口岸门诊部）
<120> 一种用于检测新型冠状病毒的荧光RT-RPA引物、探针及检测方法
<141> 2020-02-10
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
aatgtctggt aaaggccaac aacaacaagg 30
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
atttgcggcc aatgtttgta atcagttcct 30
<210> 3
<211> 47
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(30)
<223> n=fam-dt
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(31)
<223> n=thf
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> n=bhq-dt
<400> 3
ctgtcactaa gaaatctgct gctgaggctn nnaagaagcc tcggcaa 47

Claims (9)

1.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的引物对，其特征在于，所述引物对包括序列表中SEQ ID №：1所示核苷酸序列和序列表中SEQ ID №：2所示核苷酸序列。
2.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为：5'-CTGTCACTAAGAAATCTGCTGCTGAGGCTNNNAAGAAGCCTCGGCAA-3'，其中，所述N代表任意核苷酸或任意修饰后的核苷酸。
3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为序列表中SEQ ID№：3所示核苷酸序列。
4.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的组合物，其特征在于，所述组合物包括下述1)和2)：
1)权利要求1所述的引物对；
2)权利要求2或3任一所述的探针。
5.一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括下述1)-3)所述中的至少一种：
1)权利要求1所述的引物对；
2)权利要求2或3任一所述的探针；
3)权利要求4所述组合物。
6.根据权利要求5，其特征在于：所述引物对与所述探针的终浓度比例为4：4：1。
7.根据权利要求5-7任一所述检测方法，其特征在于：所述检测方法在用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)时，反应温度包括39℃；反应时间包括20分钟以上。
8.权利要求1所述引物对、权利要求2或3任一所述探针、权利要求4所述组合物、权利要求5-8任一所述检测方法在检测新型冠状病毒(2019-nCoV)中的应用。
9.权利要求1所述引物对、权利要求2或3任一所述探针、权利要求4所述组合物、权利要求5-8任一所述检测方法在制备检测新型冠状病毒(2019-nCoV)相关产品中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113373262A (zh) * 2021-05-27 2021-09-10 中国检验检疫科学研究院 一种用于新型冠状病毒检测的引物探针、试剂盒及快速检测方法
CN114561495A (zh) * 2022-04-28 2022-05-31 广东国盛医学科技有限公司 核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557496A (zh) * 2017-10-13 2018-01-09 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测MERS‑CoV病毒的荧光RT‑RAA引物、探针及检测方法
CN111206120A (zh) * 2020-03-20 2020-05-29 江苏奇天基因生物科技有限公司 一种检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物探针组及检测方法
CN111270021A (zh) * 2020-04-15 2020-06-12 齐永 一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对、探针、组合物、试剂盒及应用
CN111518951A (zh) * 2020-05-06 2020-08-11 首都儿科研究所 RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2的引物、探针、试剂盒和检测方法
CN111534636A (zh) * 2020-04-09 2020-08-14 中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心 用于检测2019-nCoV的引物对、探针、试剂盒、检测方法及其应用
CN111647690A (zh) * 2020-06-22 2020-09-11 华侨大学 用于检测covid-19病毒的rt-raa引物对和诊断试剂盒

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107557496A (zh) * 2017-10-13 2018-01-09 宁波国际旅行卫生保健中心 一种用于检测MERS‑CoV病毒的荧光RT‑RAA引物、探针及检测方法
CN111206120A (zh) * 2020-03-20 2020-05-29 江苏奇天基因生物科技有限公司 一种检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物探针组及检测方法
CN111534636A (zh) * 2020-04-09 2020-08-14 中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心 用于检测2019-nCoV的引物对、探针、试剂盒、检测方法及其应用
CN111270021A (zh) * 2020-04-15 2020-06-12 齐永 一种用于检测新型冠状病毒SARS-CoV-2的引物对、探针、组合物、试剂盒及应用
CN111518951A (zh) * 2020-05-06 2020-08-11 首都儿科研究所 RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2的引物、探针、试剂盒和检测方法
CN111647690A (zh) * 2020-06-22 2020-09-11 华侨大学 用于检测covid-19病毒的rt-raa引物对和诊断试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TAO WU等: "A reverse-transcription recombinase-aided amplification assay for the rapid detection of N gene of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2(SARS-CoV-2)", 《VIROLOGY》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113373262A (zh) * 2021-05-27 2021-09-10 中国检验检疫科学研究院 一种用于新型冠状病毒检测的引物探针、试剂盒及快速检测方法
CN114561495A (zh) * 2022-04-28 2022-05-31 广东国盛医学科技有限公司 核酸组合及其应用、病毒检测试剂盒和检测病毒的方法

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