CN113045405B - 一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺 - Google Patents

Abstract

一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，包括将含有鼠尾草酸、熊果酸的粗品溶解在特定比例的低沸点溶剂中，经过滤得到提纯液和滤饼；滤饼经干燥得熊果酸粉末；减压浓缩提纯液，再进行结晶，可得含≥40％鼠尾草酸的结晶。该工艺可通过改变低沸点溶剂的比例，可以得到不同纯度的结晶，并且操作简便、纯化效率高、产品收率高，综合利用率高，适合规模化生产。

Description

一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺

技术领域

一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，涉及利用溶剂选择性提取技术制备高纯度熊果酸，同时提高鼠尾草酸纯度的方法，属于天然产物分离技术领域。

背景技术

熊果酸是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物，高含量为有光泽的棱柱状(无水乙醇)或细毛样针状结晶(稀乙醇)，低含量为棕黄色或黄绿色粉末，具特殊的气味。不溶于水，溶于甲醇，乙醇，丙酮，吡啶。熊果酸具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。

鼠尾草酸是我国批准使用的迷迭香抗氧化剂的主要活性成分。鼠尾草酸作为一种脂溶性天然抗氧化剂，在稳定油脂方面，其抗氧化效果远远优于合成类抗氧化剂。可用于油脂及含脂食品、生物医药、化工、化妆品和饲料等方面，除了可以阻止或延缓油脂或含油食品的氧化，提高食品的稳定性和延长储存物的存储时间，还可作为肉类和鱼类的调味剂。

这两种成分均为迷迭香中的主要活性成分，在提取迷迭香过程中常获得含有上述两种成分的粗提取物。目前专利报道较多的主要是关于鼠尾草酸、熊果酸单独的提取、纯化工艺，产品的纯度在15％～85％之间，应用范围主要是医药和食品等相关领域。但同时得到两种产品的工艺少见报道。

申请号201611038472.1专利中，使用陶瓷膜过滤和离心技术分离鼠尾草酸、熊果酸；申请号201910609698.X专利中使用微波辅助提取分离鼠尾草酸、熊果酸；申请号201210587352.2使用二乙胺、三乙胺回流提取熊果酸，此类方法工艺流程较多，成本较高，不适宜工业化生产。申请号201410809832.8专利中，使用单一溶剂石油醚提取鼠尾草酸，所得鼠尾草酸纯度较低，只能达到25％；申请号201911277355.4专利中，使用单一溶剂提取鼠尾草酸，所得鼠尾草酸的纯度只能达到10％～40％，提取得率只有90～96.5％，都较低。因此，寻找工艺简单、易于操作，纯化效果好，收率高，易于放大生产的鼠尾草酸、熊果酸分离纯化方法迫在眉睫。

发明内容

为了克服现有技术缺点，本发明提供一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，该方法工艺简单、易于操作、时间短、效果显著，实现了鼠尾草酸、熊果酸很好的分离，鼠尾草酸和熊果酸的收率达到98％以上，鼠尾草酸的纯度达到40％以上，并且通过溶剂比例的调整能产出多种规格的鼠尾草酸产品，满足市场需求，综合利用度高，是一种适用于工业化生产的纯化技术。

本发明解决其技术问题所采取的技术方案，包括以下步骤：

(1)提纯液的制备：在含有鼠尾草酸、熊果酸的粗品中，加入特定比例混合的低沸点有机溶液，搅拌，提取，过滤，得到提纯液和滤饼；

(2)将步骤(1)得到的滤饼进行干燥，得到熊果酸粉末；

(3)将步骤(1)得到的提纯液进行减压浓缩，得到一定固含量的浓缩液；

(4)将浓缩液在一定温度下搅拌结晶，过滤，得到鼠尾草酸结晶。

进一步，其中各项步骤、参数可进一步优选为：

所述含有鼠尾草酸、熊果酸的粗品中，鼠尾草酸含量为5％～30％、熊果酸含量为3％～20％的粗品；优选的，粗品中鼠尾草酸含量为10％～25％、熊果酸含量为5％～15％；进一步优选的，粗品中鼠尾草酸含量为15％～20％、熊果酸含量为8％～12％。

步骤(1)中所述的特定比例混合的低沸点有机溶剂为正己烷-95％乙醇100:1～100:10(体积比)的混合物。

步骤(1)中所述提取为常规的溶剂提取方法，可以是浸提、渗漉提取、回流提取等，也可采用微波、超声等辅助提取方式。

步骤(1)中粗品与低沸点有机溶剂的料液比为1:5～1:10(kg:L)。

步骤(1)中所述的过滤是通过正压或者负压以滤纸或者滤布滤去溶液中不溶解的颗粒状物质。

步骤2)中的提取时间为10-50min，优选20～40min；提取次数为1-5次；优选2～4次；

步骤(2)中所述的干燥是负压或者常压下的烘干或者冷冻干燥。

步骤(3)中所述的浓缩液，其固含量为30％～45％；优选35％～40％。

步骤(4)中所述的结晶温度为15℃～45℃；优选20℃～40℃。

进一步本发明，提供了优选的技术方案，包括以下步骤：

(1)提纯液的制备：在含鼠尾草酸10％～25％、熊果酸5％～15％的粗品中，加入正己烷与95％乙醇以100:1～100:10(体积比)混合的溶剂，搅拌，提取20～40min，过滤，得到提纯液和滤饼；

(2)将步骤(1)得到的滤饼进行干燥，得到熊果酸粉末；

(3)将步骤(1)得到的提纯液进行减压浓缩，获得固含量35％～40％的浓缩液；

(4)将浓缩液在20℃～40℃下搅拌结晶，过滤，得到鼠尾草酸结晶。

本发明的有益效果是：(1)可同时获得熊果酸粉末产品和含量≥40％的鼠尾草酸结晶；(2)工艺简单，易于操作，成本低，分离效果好，活性成分损失少，鼠尾草酸和熊果酸的收率均达到98％以上；(3)通过控制正己烷与95％乙醇的比例，可以直接得到不同含量的鼠尾草酸结晶，产出不同规格的产品，不需要调配；(4)该方法得到的鼠尾草酸结晶丙酮溶解性好，溶解后溶液澄清透明，颜色浅；(5)该方法得到的熊果酸无异味、颜色浅，产品状态较好。

附图说明

图1为本发明实施例1得到的鼠尾草酸晶体的高效液相色谱图。

图2为本发明实施例1得到的含熊果酸的滤饼的高效液相色谱图。

具体实施方式

实施例1

取含有鼠尾草酸和熊果苷的粗品20g(其中鼠尾草酸及熊果苷含量见表1)，按照料液比1:8(g：mL)加入至正己烷-95％乙醇100:1(g：mL)的混合溶剂中，搅拌30min充分混合，过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取2次，合并三次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量38％的浓缩液，将浓缩液在35℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。

实施例2

取含有鼠尾草酸和熊果苷的粗品20g(其中鼠尾草酸及熊果苷含量见表1)，按照料液比1:8(g：mL)加入至正己烷-95％乙醇100:5(g：mL)的混合溶剂中，搅拌30min充分混合,过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取2次，合并三次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量38％的浓缩液，将浓缩液在30℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。

实施例3

取含有鼠尾草酸和熊果苷的粗品20g(其中鼠尾草酸及熊果苷含量见表1)，按照料液比1:10(g：mL)加入至正己烷-95％乙醇100:10(g：mL)的混合溶剂中，搅拌40min充分混合,过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取3次，合并四次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量40％的浓缩液，将浓缩液在35℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。使用高效液相色谱-标准曲线法测定并计算熊果酸、鼠尾草酸结晶、鼠尾草酸结晶母液中对应主成分的含量。

对比例1

取含有鼠尾草酸和熊果苷的粗品20g(其中鼠尾草酸及熊果苷含量见表1)，溶剂只使用正己烷。鼠尾草酸粗品按照料液比1:8(g：mL)加入至正己烷中，搅拌30min充分混合,过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取2次，合并三次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量38％的浓缩液，将浓缩液在35℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。

对比例2

取含有鼠尾草酸和熊果苷的粗品20g(其中鼠尾草酸及熊果苷含量见表1)，溶剂只使用95％乙醇。鼠尾草酸粗品按照料液比1:8(g：mL)加入至乙醇中，搅拌30min充分混合,过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取2次，合并三次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量38％的浓缩液，将浓缩液在35℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。

对比例3

取鼠尾草酸含量为16.7％的鼠尾草酸粗品20g，按照料液比1:8(g：mL)加入至正己烷-95％乙醇100:20(g：mL)的混合溶剂中，搅拌30min充分混合,过滤，得过滤液，将滤饼按照前述步骤再重复提取3次，合并四次提取的过滤液得到提纯液，将提纯液进行减压浓缩得到固含量38％的浓缩液，将浓缩液在35℃下搅拌结晶，再过滤得到鼠尾草酸结晶。

效果比较：使用高效液相色谱-标准曲线法测定并计算实施例1-3及对比例1-2中提取过滤后的滤饼中熊果酸含量、鼠尾草酸结晶中鼠尾草酸的含量，鼠尾草酸结晶及鼠尾草酸母液(浓缩液经过滤去除其中的鼠尾草酸结晶后称为结晶母液)中鼠尾草酸的质量。

其中高效液相色谱条件为：

1.鼠尾草酸含量测定的色谱条件：色谱柱：C18色谱柱(250*4.6mm，5μm)；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0mL/min；流动相：0.1％磷酸乙腈：0.1％磷酸水＝20:80；

梯度洗脱条件：

2.熊果苷含量测定的色谱条件：色谱柱：C18色谱柱(150*4.6mm，5μm)；检测波长：210nm；柱温：25℃；进样量：10μL；流速：1.0mL/min；流动相：0.1％磷酸水：甲醇＝12:88。

测定分离纯化前后熊果酸和鼠尾草酸的含量并计算单体质量。结果见下表，表中分离纯化后的鼠尾草酸含量指结晶中的鼠尾草酸含量，分离纯化后的熊果酸含量指提取后的滤饼(未干燥)中的熊果酸含量。

表一本发明部分实施例、对比例纯化前后纯度检测结果

在上表中，收率的计算公式为：

收率＝分离纯化后单体质量÷分离纯化前单体质量

(注：分离纯化后鼠尾草酸的单体质量包括结晶和结晶母液中的鼠尾草酸；为体现原料中含有的鼠尾草酸在分离过程中是否存在损失，所以将结晶母液和结晶中的鼠尾草酸单体质量之和记于表内，以便与加工前的原料进行对比)

可以看出，按照本申请所给出的特定比例的混合溶剂比例制备所得的鼠尾草酸、熊果酸收率在98％以上，即表明本申请技术方案对于鼠尾草酸与熊果苷的分离效果较对比例有明显的优势，此外，在本申请给出的特定比例范围内调整溶剂比例，可以得到不同纯度的鼠尾草酸结晶。使用单一溶剂，或使用不按照本申请所述特定比例的正己烷-95％乙醇的混合溶剂，则会影响最终产品的纯度或收率，或同时影响最终产品的纯度和收率。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。

Claims (7)

1.一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，该工艺包括以下步骤：

(1)提纯液的制备：在含有鼠尾草酸、熊果酸的粗品中，加入特定比例混合的低沸点有机溶剂，搅拌，提取，过滤，得到提纯液和滤饼；

(2)将步骤(1)得到的滤饼进行干燥，得到熊果酸粉末；

(3)将步骤(1)得到的提纯液进行减压浓缩，得到固含量为30％～45％的浓缩液；

(4)将浓缩液在15℃～45℃的温度下搅拌结晶，过滤，得到鼠尾草酸结晶；

步骤（1）所述粗品中，鼠尾草酸含量为5％～30％、熊果酸含量为3％～20％；所述的特定比例混合的低沸点有机溶剂为正己烷-95％乙醇100:1～100:10体积比的混合物。

2.根据权利要求1所述的分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，步骤(1)

中粗品与低沸点有机溶剂的料液比为1:5～1:10kg:L。

3.根据权利要求1-2任一项所述的分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，步骤（1)中的提取时间为10-50min，提取次数为1-5次。

4.根据权利要求3所述的分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，步骤（1)中的提取时间为20～40min；提取次数为2～4次。

5.根据权利要求4所述的分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，步骤(3)中所述的浓缩液，其固含量为35％～40％。

6.根据权利要求5所述的分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，步骤(4)中所述的结晶温度为20℃～40℃。

7.一种分离鼠尾草酸、熊果酸的工艺，其特征在于，该工艺包括以下步骤：

(1)提纯液的制备：在含鼠尾草酸10％～25％、熊果酸5％～15％的粗品中，加入正己烷与95％乙醇以100:1～100:10体积比混合的溶剂，搅拌，提取20～40min，过滤，得到提纯液和滤饼；

(2)将步骤(1)得到的滤饼进行干燥，得到熊果酸粉末；

(3)将步骤(1)得到的提纯液进行减压浓缩，获得固含量35％～40％的浓缩液；

(4)将浓缩液在20℃～40℃下搅拌结晶，过滤，得到鼠尾草酸结晶。

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