CN113016622B - 一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法 - Google Patents

一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法。本发明以红花蕉优良株系的未开放的幼嫩花蕾为外植体，通过外植体的获得和消毒、愈伤组织增殖和分化、体细胞胚分化形成植株、不定芽生根壮苗培养和试管苗移栽等等阶段，选择适合各培养阶段的培养基配方和培养条件，成功地进行了红花蕉种苗的规模化繁殖，繁育出优质的红花蕉种苗满足市场的需要。本发明技术简单实惠，切实可行，应用价值高。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。

Description

一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法。
背景技术：
红花蕉(Musa coccinea Andr.)，又称红蕉、指天蕉等，芭蕉科芭蕉属多年生常绿丛生草本植物，原产于中国云南东部、广东、广西等地。红花蕉株形潇洒，花序硕大，苞片鲜红艳丽，开花持久，是一种观赏价值极高的观赏花卉，在华南等温暖地区可种植于庭院墙角、窗前、假山、亭口或池边等地，极富南方特色，亦可盆栽观赏；其鲜艳挺拔的红色直立花序，又是极好的插花材料，可作切花观赏。自然状态下，红花蕉主要采用分株繁殖，繁殖速度慢，难以满足市场的需求，利用植物组织培养技术能有效地解决这个问题，但以红花蕉的地下根状茎为外植体时，污染率高。
目前，国内外还没有红花蕉组织培养种苗繁殖的报道。
发明内容：
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法，包括以下步骤：
a)外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取红花蕉(Musa coccinea Andr.)的幼嫩花蕾，经消毒处理后，接入愈伤组织诱导培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，外植体基部有愈伤组织和体细胞胚产生，所述的愈伤组织诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、噻苯隆0.2-0.5毫克、激动素1.0-2.0毫克、椰子水50-100毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
b)愈伤组织增殖：将步骤a)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，愈伤组织继续进行增殖并形成愈伤组织和体细胞胚，愈伤组织增殖培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、噻苯隆0.1-0.3毫克、椰子水50-100毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
c)愈伤组织分化：将步骤a)或步骤b)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，愈伤组织分化出不定芽，所述的愈伤组织分化培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
d)体细胞胚分化形成植株：将步骤a)或步骤b)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将体细胞胚转移到体细胞胚分化培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，体细胞胚形成植株，所述的体细胞胚分化培养基每升含有：萘乙酸0.5-1.0毫克、椰子水25-75毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
e)不定芽生根壮苗培养：将步骤c)愈伤组织分化形成的不定芽切下接种到生根培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，不定芽生根并形成植株，所述的生根培养基每升含有：吲哚丁酸0.5-1.0毫克、椰子水25-75毫升、蔗糖10-20克、琼脂6-7克，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；
f)试管苗移栽：将4-5厘米高的步骤d)或步骤e)的植株从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入栽培基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红花蕉种苗。
所述的消毒处理具体为：先在体积分数75％酒精中浸泡20-40秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8-10分钟，无菌水冲洗4-5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒2-4分钟，无菌水冲洗4-5次。消毒成功率85-95％。
所述的栽培基质包括泥炭土和珍珠岩，所述的泥炭土:珍珠岩的体积比为(2-4):1。
所述的MS为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京：中国林业出版社，1991.)；所述的1/2MS是将MS中的大量元素浓度减半，而其他成分浓度不变而形成的培养基。
本发明以红花蕉优良株系的未开放的幼嫩花蕾为外植体，通过外植体的获得和消毒、愈伤组织增殖和分化、体细胞胚分化形成植株、不定芽生根壮苗培养和试管苗移栽等等阶段，选择适合各培养阶段的培养基配方和培养条件，成功地进行了红花蕉种苗的规模化繁殖，繁育出优质的红花蕉种苗满足市场的需要。
本发明技术简单实惠，切实可行，应用价值高。实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的红花蕉(Musa coccinea Andr.)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡20秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗4次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒4分钟，无菌水冲洗5次后，接入愈伤组织诱导培养基中，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天，培养40天时，外植体基部有愈伤组织和体细胞胚产生，消毒成功率85％。愈伤组织诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)1.0毫克、噻苯隆(TDZ)0.5毫克、激动素(KT)1.0毫克、椰子水100毫升、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。
2.愈伤组织增殖和分化：将初代培养中获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天，愈伤组织能继续进行增殖并形成愈伤组织和体细胞胚的混合体，一个月内的愈伤组织增殖3倍，每团愈伤组织能形成3个体细胞胚。愈伤组织增殖培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)0.5毫克、噻苯隆(TDZ)0.3毫克、椰子水50毫升、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。将增殖获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织(也可以为初代培养中获得的愈伤组织)转接到愈伤组织分化培养基中，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天，培养40天愈伤组织能直接分化出不定芽。愈伤组织分化培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)0.5毫克、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。
3.体细胞胚分化形成小植株：将步骤1和步骤2中形成的体细胞胚转移到体细胞胚分化培养基中，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天，体细胞胚40天能形成小植株。体细胞胚分化培养基每升含有：萘乙酸(NAA)0.5毫克、椰子水75毫升、蔗糖20克、琼脂6克，余量为MS培养基，pH 5.8。
4.不定芽生根壮苗培养：将愈伤组织分化形成的不定芽切下接种到生根培养基中，培养温度24℃，光照度1500lx，光照16小时/天，培养40天时，能正常生根并形成健壮植株，生根率可达100％，每株苗有根数4条。生根培养基每升含有：吲哚丁酸(IBA)0.5毫克、椰子水75毫升、蔗糖10克、琼脂6克，余量为1/2MS培养基，pH 5.8。
5.试管苗移栽：将4厘米高的体细胞胚和不定芽来源的离体培养的小植株用镊子从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍珠岩体积比为2:1的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红花蕉种苗，成活率可达95％。
实施例2：
1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的红花蕉(Musa coccinea Andr.)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡30秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒9分钟，无菌水冲洗5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒3分钟，无菌水冲洗4次后，接入愈伤组织诱导培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照14小时/天，培养35天时，外植体基部有愈伤组织和体细胞胚产生，消毒成功率90％。愈伤组织诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)1.5毫克、噻苯隆(TDZ)0.3毫克、激动素(KT)1.5毫克、椰子水75毫升、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。
2.愈伤组织增殖和分化：将初代培养中获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照14小时/天，愈伤组织能继续进行增殖并形成愈伤组织和体细胞胚的混合体，一个月内的愈伤组织增殖4倍，每团愈伤组织能形成4个体细胞胚。愈伤组织增殖培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)0.7毫克、噻苯隆(TDZ)0.2毫克、椰子水75毫升、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH5.9。将增殖获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织(也可以为初代培养中获得的愈伤组织)转接到愈伤组织分化培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照14小时/天，培养35天愈伤组织能直接分化出不定芽。愈伤组织分化培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)0.7毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。
3.体细胞胚分化形成小植株：将步骤1和步骤2中形成的体细胞胚转移到体细胞胚分化培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照14小时/天，体细胞胚35天能形成小植株。体细胞胚分化培养基每升含有：萘乙酸(NAA)0.7毫克、椰子水50毫升、蔗糖25克、琼脂6.5克，余量为MS培养基，pH 5.9。
4.不定芽生根壮苗培养：将愈伤组织分化形成的不定芽切下接种到生根培养基中，培养温度28℃，光照度2000lx，光照14小时/天，培养35天时，能正常生根并形成健壮植株，生根率可达100％，每株苗有根数5条。生根培养基每升含有：吲哚丁酸(IBA)0.7毫克、椰子水50毫升、蔗糖15克、琼脂6.5克，余量为1/2MS培养基，pH 5.9。
5.试管苗移栽：将4.5厘米高的体细胞胚和不定芽来源的离体培养的小植株用镊子从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍珠岩体积比为3:1的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红花蕉种苗，成活率可达98％。
实施例3：
1.外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取生长旺盛、无病虫害危害的红花蕉(Musa coccinea Andr.)优良株系的未开放的幼嫩花蕾，先在体积分数75％酒精中浸泡40秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒2分钟，无菌水冲洗5次后，接入愈伤组织诱导培养基中，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天，培养30天时，外植体基部有愈伤组织和体细胞胚产生，消毒成功率95％。愈伤组织诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)2.0毫克、噻苯隆(TDZ)0.2毫克、激动素(KT)2.0毫克、椰子水50毫升、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。
2.愈伤组织增殖和分化：将初代培养中获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天，愈伤组织能继续进行增殖并形成愈伤组织和体细胞胚的混合体，一个月内的愈伤组织增殖5倍，每团愈伤组织能形成5个体细胞胚。愈伤组织增殖培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)1.0毫克、噻苯隆(TDZ)0.1毫克、椰子水100毫升、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。将增殖获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织(也可以为初代培养中获得的愈伤组织)转接到愈伤组织分化培养基中，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天，培养30天愈伤组织能直接分化出不定芽。愈伤组织分化培养基每升含有：6-苄基嘌呤(6-BA)1.0毫克、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。
3.体细胞胚分化形成小植株：将步骤1和步骤2中形成的体细胞胚转移到体细胞胚分化培养基中，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天，30天体细胞胚能形成小植株。体细胞胚分化培养基每升含有：萘乙酸(NAA)1.0毫克、椰子水25毫升、蔗糖30克、琼脂7克，余量为MS培养基，pH 6.0。
4.不定芽生根壮苗培养：将愈伤组织分化形成的不定芽切下接种到生根培养基中，培养温度30℃，光照度2500lx，光照12小时/天，培养30天时，能正常生根并形成健壮植株，生根率可达100％，每株苗有根数6条。生根培养基每升含有：吲哚丁酸(IBA)1.0毫克、椰子水25毫升、蔗糖20克、琼脂7克，余量为1/2MS培养基，pH 6.0。
5.试管苗移栽：将5厘米高的体细胞胚和不定芽来源的离体培养的小植株用镊子从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土:珍珠岩体积比为4:1的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红花蕉种苗，成活率可达100％。

Claims (3)

1.一种红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
a)外植体的获得和消毒方法：在生长季节选取红花蕉(Musa coccinea Andr.)的幼嫩花蕾，经消毒处理后，接入愈伤组织诱导培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，外植体基部有愈伤组织和体细胞胚产生，所述的愈伤组织诱导培养基每升含有：6-苄基嘌呤1.0-2.0毫克、噻苯隆0.2-0.5毫克、激动素1.0-2.0毫克、椰子水50-100毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
b)愈伤组织增殖：将步骤a)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织接种到愈伤组织增殖培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，愈伤组织继续进行增殖并形成愈伤组织和体细胞胚，愈伤组织增殖培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、噻苯隆0.1-0.3毫克、椰子水50-100毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
c)愈伤组织分化：将步骤a)或步骤b)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，愈伤组织分化出不定芽，所述的愈伤组织分化培养基每升含有：6-苄基嘌呤0.5-1.0毫克、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
d)体细胞胚分化形成植株：将步骤a)或步骤b)获得的愈伤组织和体细胞胚分开，将体细胞胚转移到体细胞胚分化培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，体细胞胚形成植株，所述的体细胞胚分化培养基每升含有：萘乙酸0.5-1.0毫克、椰子水25-75毫升、蔗糖20-30克、琼脂6-7克，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；
e)不定芽生根壮苗培养：将步骤c)愈伤组织分化形成的不定芽切下接种到生根培养基中，培养温度24-30℃，光照度1500-2500lx，光照12-16小时/天，不定芽生根并形成植株，所述的生根培养基每升含有：吲哚丁酸0.5-1.0毫克、椰子水25-75毫升、蔗糖10-20克、琼脂6-7克，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；
f)试管苗移栽：将4-5厘米高的步骤d)或步骤e)的植株从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入栽培基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红花蕉种苗。
2.根据权利要求1所述的红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，所述的消毒处理具体为：先在体积分数75％酒精中浸泡20-40秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8-10分钟，无菌水冲洗4-5次后，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒2-4分钟，无菌水冲洗4-5次。
3.根据权利要求1所述的红花蕉组织培养优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，所述的栽培基质包括泥炭土和珍珠岩，所述的泥炭土:珍珠岩的体积比为(2-4):1。
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