CN112957404A - 一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物及其制备方法 - Google Patents
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- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
Abstract
本发明涉及农业技术领域，提供了一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物，包括如下组分：陈皮柑果肉提取物30份‑50份；油甘果提取物15份‑30份；红毛丹果皮提取物10份‑20份；乳酸链球菌发酵裂解液7份‑12份；高山茶叶发酵液5份‑10份；橄榄叶浸提液3份‑7份；桑叶浸提液1份‑5份。该组合具有优异的抑菌效果，相比于单一使用各组分，其功效明显，适用于经产母猪和后备母猪。同时，本发明还提供了该环保型清洗液组合物的制备方法。
Description
技术领域
本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物及其制备方法。
背景技术
中草药治疗动物疾病已被广泛使用。母猪阴道护理对于母猪的繁殖至关重要。
CN201510479009.X公开了一种添加有治疗阴道炎疾病的中草药的红茶，包括以下重量份的原料：800～1000份新鲜茶叶，治疗阴道炎疾病的中草药；该中草药包括土茯苓40～60份、萆薢30～50份、茵陈40～60份、淡竹叶40～50份、天花粉40～60份、地肤子30～45份。
CN201911398276.9公开了一种紧致抑菌凝胶，包括以下组份：中药提取液、生育酚、乳酸杆菌、梨汁发酵产物滤液、卡波普、丙二醇、丙三醇、甘油、薄荷醇、冰片，其中，所述的中药提取液混合液由以下中药为原料：蛇床子提取液、藏红花提取液、紫草提取液、百部提取液、当归提取液、苦参提取液、橄榄叶提取液。采用上述技术方案，通过蛇床子提取液、藏红花提取液、紫草提取液、百部提取液、当归提取液、苦参提取液、橄榄叶提取液，相互协同，不仅能够有效抑制细菌的生长和繁殖。
中草药很多组分都能够起到对于人畜阴道细菌抑制的效果。
但是对于经产母猪和后备母猪来说，其阴道菌类的抑制比其他动物和人类来说难度更大。
鉴于此，本发明希望能提出一种环保型清洗液组合物以提高清洗液的抑菌效果。
发明内容
本发明的目的之一在于，提供一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物，该组合具有优异的抑菌效果，相比于单一使用各组分，其功效明显，适用于经产母猪和后备母猪。
同时，本发明还提供了该环保型清洗液组合物的制备方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物，包括如下组分：
陈皮柑果肉提取物30份-50份
油甘果提取物15份-30份
红毛丹果皮提取物10份-20份
乳酸链球菌发酵裂解液7份-12份
高山茶叶发酵液5份-10份
橄榄叶浸提液3份-7份
桑叶浸提液1份-5份。
在上述的环保型清洗液组合物中，所述陈皮柑肉提取物中总黄酮含量为1.8％-2.2％；总酸≥4.8％。
在上述的环保型清洗液组合物中，所述红毛丹果皮提取物中总浸提物≥35％，总酸≥1.5％。
在上述的环保型清洗液组合物中，油甘果提取物中总浸提物≥30％，总酸≥8.8％。
在上述的环保型清洗液组合物中，所述高山茶叶发酵液的制备方法为：
取高山茶叶500kg，按25：1比例加入麦麸20kg，混合均匀，获得茶麦混合体系，按1wt％接种量向体系中喷洒菌液浓度为109cfu/ml乳酸片球菌，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵5d，再按1wt％接种量向体系中喷洒菌液浓度为(3-10)*108cfu/ml混合菌液，其中，混合菌液中含黑曲霉≥108cfu/ml，产朊假丝酵母≥108cfu/ml和酿酒酵母≥108cfu/ml，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵7d；发酵结束后，发酵茶叶用45℃-55℃烘干，水分含量为8.0％-12.0％，常温密封保存备用。
在上述的环保型清洗液组合物中，所述乳酸链球菌发酵裂解液的制备方法为：取嗜热乳酸链球菌冻干粉用MRS琼脂培养基平板活化，刮下菌泥制备获得种子液，将种子液进行规模化发酵3-5d，即获得发酵液，发酵液的菌落数为10^10cfu/ml，发酵液经超声破碎细胞仪，超声10-15分钟，经0.22um超滤，获得乳酸链球菌发酵裂解液。
在上述的环保型清洗液组合物中，所述橄榄叶浸提液的制备方法为：取60-80目橄榄叶5份，加入50℃-60℃水醇混合液1份。水醇混合液的体积比为2：1，充分混合均匀，在常温下，提取36-48h，期间搅拌3-4次；提取结束后，过滤去除残渣，获得提取混合液，混合液减压浓缩至浓度为1g/ml，分别得到橄榄叶浸提液；
所述桑叶浸提液的制备方法同橄榄叶浸提液，原料为桑叶。
同时，本发明还公开一种如上所述的环保型清洗液组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物、油甘果提取物及红毛丹果皮提取物，加入乙醇溶液，搅拌，获得终浓度为10％w/v-30％w/v复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液、高山茶叶、发酵橄榄叶浸提液液及桑叶浸提液缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌，获得混合溶液；
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机均质处理，获得清洗液组合物；
(4)分装。
在上述的环保型清洗液组合物的制备方法中，包括如下步骤：
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物、油甘果提取物及红毛丹果皮提取物，按一定比例加入浓度为55％v/v乙醇，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度为10％w/v-30％w/v复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液、高山茶叶、发酵橄榄叶浸提液液及桑叶浸提液缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌10-15分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为35℃-50℃下均质处理5～10min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：500-1000mL；灌装速度：15-20瓶/min；精度：±1％。
有益效果
本发明的组合物具有如下明显功效：
1、体外单菌种抑菌效果优异；
2、母猪分泌物体外培养菌种抑菌效果优异；
3、应用于母猪阴道护理时，其可达到良好的护理效果。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的描述，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围内。
为了详细说明本发明的技术内容，以下结合实施方式作进一步说明。
原材料和仪器设备来源：
产朊假丝酵母(GDM2.148)、黑曲霉(GDM3.25)、嗜热乳酸链球菌(GDM 1.83)、乳酸片球菌(GDM1.263)及椭圆酿酒酵母菌(GDM 2.83)均购于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)。马铃薯培养基(PDA)、麦芽汁琼脂培养基、MRS培养基及酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)，均购于广东环凯微生物科技有限公司。大肠杆菌(编号：201905P001.1)、铜绿假单胞菌(编号：201905P001.5)、恶臭假单胞菌(编号：201905P001.7)、嗜水气单胞菌(编号：201905P001.2)、葡萄球菌(编号：201905P001.10)，5种母猪阴道炎分离菌种来源于广东省农业科学院动物科学研究所。
陈皮柑肉提取物(总黄酮含量为1.8％-2.2％；总酸≥4.8％)、红毛丹果皮提取物(总浸提物≥35％，总酸≥1.5％)及油甘果提取物(总浸提物≥30％，总酸≥8.8％)均来源于广州五丰动物保健品有限公司。
制备种子液
(1)取乳酸片球菌冻干粉用MRS琼脂培养基平板活化，培养3d，刮下菌泥用MRS液体培养基，37℃厌氧培养3d，获得种子液，种子液浓度为109cfu/ml。
(2)取黑曲霉冻干粉用PDA琼脂培养基平板活化，刮下菌泥用PDA液体培养基，28℃培养5d，获得种子液，种子液浓度为109cfu/ml。
(3)分别取产朊假丝酵母(GDM2.148)和椭圆酿酒酵母菌(GDM 2.83)冻干粉，用麦芽汁琼脂培养基和酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)平板活化，刮下菌泥用相应的液体培养基，30℃培养24h，获得种子液，种子液浓度为109cfu/ml。
上述种子液用于制备下述高山茶叶发酵液。
乳酸链球菌发酵裂解液：取嗜热乳酸链球菌冻干粉用MRS琼脂培养基平板活化，刮下菌泥制备获得种子液，将种子液进行规模化发酵3-5d，即获得发酵液(菌落数：10^10cfu/ml)，发酵液经超声破碎细胞仪，超声10-15分钟，经0.22um超滤，获得乳酸链球菌发酵裂解液。
橄榄叶和桑叶浸提液制备：分别取60-80目橄榄叶和桑叶5份，加入50℃-60℃水醇混合液(水：醇＝2：1)1份，充分混合均匀，在常温下，提取36-48h，期间搅拌3-4次。提取结束后，过滤去除残渣，获得提取混合液，混合液减压浓缩至浓度为1g/ml，分别得到橄榄叶和桑叶浸提液。
高山茶叶发酵液：取高山茶叶500kg，按25：1(茶叶：麦麸)比例加入麦麸20kg，混合均匀，获得茶麦混合体系，按1％接种量向体系中喷洒菌液浓度为109cfu/ml乳酸片球菌，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵5d，再按1％接种量向体系中喷洒菌液浓度为(3-10)*108cfu/ml混合菌液(黑曲霉≥108cfu/ml，产朊假丝酵母≥108cfu/ml和酿酒酵母≥108cfu/ml)，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵7d。发酵结束后，发酵茶叶用45℃-55℃烘干，水分含量为8.0％-12.0％，常温密封保存备用。
实例1：
陈皮柑果肉提取物30份、油甘果提取物15份、红毛丹果皮提取物10份、乳酸链球菌发酵裂解液7份、高山茶叶发酵液5份、橄榄叶浸提液3份及桑叶浸提液1份。其中，高山茶叶发酵液中所用的混合菌液中含黑曲霉108cfu/ml，产朊假丝酵母108cfu/ml和酿酒酵母108cfu/ml。
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物30份、油甘果提取物15份及红毛丹果皮提取物10份，按比例加入浓度为55％乙醇495份，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度为10％(重量:体积)复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液7份、高山茶叶发酵液5份、橄榄叶浸提液3份及桑叶浸提液1份缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌10分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；
每100ml55％乙醇溶液中，各提取物以及发酵裂解液的总重量为12.5g。
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为35℃下均质处理5min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：500mL；灌装速度：20瓶/min；精度：±1％。
技术参数：
(1)性状：浅黄色澄清溶液，无杂质，无沉淀，分布均匀。
(2)气味：淡清香味。
(3)pH值：5.5
(4)吸收光度值：在270.5nm、330、490nm、400nm及510.5nm处均有最大吸收值。
实例2：
陈皮柑果肉提取物35份、油甘果提取物20份、红毛丹果皮提取物12份、乳酸链球菌发酵裂解液8份、高山茶叶发酵液6份、橄榄叶浸提液4份及桑叶浸提液2份。其中，高山茶叶发酵液中所用的混合菌液中含黑曲霉2*108cfu/ml，产朊假丝酵母108cfu/ml和酿酒酵母108cfu/ml。
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物35份、油甘果提取物20份及红毛丹果皮提取物12份，按比例加入浓度为55％乙醇380份，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度约为15％(重量:体积)复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液8份、高山茶叶发酵液6份、橄榄叶浸提液4份及桑叶浸提液2份缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌11分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；
每100ml55％乙醇溶液中，各提取物以及发酵裂解液的总重量为18.6g。
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为40℃下均质处理6min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：500mL；灌装速度：20瓶/min；精度：±1％。
技术参数：
(1)性状：黄色澄清溶液，无杂质，无沉淀，分布均匀。
(2)气味：淡清香味。
(3)pH值：5.3
(4)吸收光度值：在270.5nm、330、490nm、400nm及510.5nm处均有最大吸收值。
实例3：
陈皮柑果肉提取物40份、油甘果提取物25份、红毛丹果皮提取物16份、乳酸链球菌发酵裂解液10份、高山茶叶发酵液8份、橄榄叶浸提液5份及桑叶浸提液3份；其中，高山茶叶发酵液中所用的混合菌液中含黑曲霉108cfu/ml，产朊假丝酵母2*108cfu/ml和酿酒酵母2*108cfu/ml。
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物40份、油甘果提取物25份及红毛丹果皮提取物16份，按比例加入浓度为55％乙醇268份，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度约为20％(重量:体积)复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液10份、高山茶叶发酵液8份、橄榄叶浸提液5份及桑叶浸提液3份缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌12分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；每100ml55％乙醇溶液中，各提取物以及发酵裂解液的总重量为28.5g。
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为45℃下均质处理8min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：1000mL；灌装速度：15瓶/min；精度：±1％。
技术参数：
(1)性状：亮黄色澄清溶液，无杂质，无沉淀，分布均匀。
(2)气味：清香味。
(3)pH值：5.0
(4)吸收光度值：在270.5nm、330、490nm、400nm及510.5nm处均有最大吸收值。
实例4：
陈皮柑果肉提取物45份、油甘果提取物28份、红毛丹果皮提取物18份、乳酸链球菌发酵裂解液11份、高山茶叶发酵液9份、橄榄叶浸提液6份及桑叶浸提液4份；其中，高山茶叶发酵液中所用的混合菌液中含黑曲霉108cfu/ml，产朊假丝酵母2*108cfu/ml和酿酒酵母2*108cfu/ml。
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物45份、油甘果提取物28份及红毛丹果皮提取物18份，按比例加入浓度为55％乙醇273份，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度约为25％(重量:体积)复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液11份、高山茶叶发酵液9份、橄榄叶浸提液6份及桑叶浸提液4份缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌14分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；每100ml55％乙醇溶液中，各提取物以及发酵裂解液的总重量为30.7g。
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为48℃下均质处理9min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：1000mL；灌装速度：15瓶/min；精度：±1％。
技术参数：
(1)性状：黄色澄清溶液，无杂质，无沉淀，分布均匀。
(2)气味：浓清香味。
(3)pH值：4.8
(4)吸收光度值：在270.5nm、330、490nm、400nm及510.5nm处均有最大吸收值。
实例5：
陈皮柑果肉提取物50份、油甘果提取物30份、红毛丹果皮提取物20份、乳酸链球菌发酵裂解液12份、高山茶叶发酵液10份、橄榄叶浸提液7份及桑叶浸提液5份；其中，高山茶叶发酵液中所用的混合菌液中含黑曲霉108cfu/ml，产朊假丝酵母2*108cfu/ml和酿酒酵母2*108cfu/ml。
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物50份、油甘果提取物30份及红毛丹果皮提取物20份，按比例加入浓度为55％乙醇200份，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度约为30％(重量:体积)复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液12份、高山茶叶发酵液10份、橄榄叶浸提液7份及桑叶浸提液5份缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌15分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；每100ml55％乙醇溶液中，各提取物以及发酵裂解液的总重量为40.1g。
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为50℃下均质处理10min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：1000mL；灌装速度：15瓶/min；精度：±1％。
技术参数：
(1)性状：黄色澄清溶液，无杂质，无沉淀，分布均匀。
(2)气味：浓清香味。
(3)pH值：4.5
(4)吸收光度值：在270.5nm、330、490nm、400nm及510.5nm处均有最大吸收值。
对比例1-15
对比例1-15的制备工艺参考实施例3。
对比例1-15的配方参考下表1的样品2-样品16。
表1样品1-16的配方表
单一菌种抗菌实验
体外抑菌试验：
参考依据：《中华人民共和国兽药典》2015年版一部中生物活性测定法(附录208)和NCCLS药敏试验标准。质控菌株(大肠杆菌(ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923)购于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)；目标菌株(大肠杆菌、铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌、嗜水气单胞菌及葡萄球菌分离株)甘油保种的菌株均来源于广东省农业科学院动物科学研究所。
采用管碟法进行细菌敏感性测定。吸取M-H固体培养基(含2％兔血清)20ml倒入培养皿(直径：9.0cm±0.1cm)，待凝固；滴加一定量(比例：3滴/100ml)质控菌株和目标菌株菌悬液(菌浓：OD600值2.0)，加到预热50-60℃的M-H培养基中充分摇匀后，吸取10ml倒入盛有已凝固培养基底层的平皿中，静置10-15min；然后用无菌镊子将标准牛津杯均匀放置制好的平板上。每个组设10个重复，每个重复1个平板，分别吸取样品1至样品16的样品各240ul；设空白对照：生理盐水组和75％乙醇组。将平板置于(36.9±0.1)℃培养箱中培养18-24h观察结果，用游标卡尺测量抑菌圈直径大小(mm)。
结果表明，由表1可知，与其他组相比，样品1优于其他样品(样品2至样品16)，组合1对目标菌株有显著抑菌效果。
表1组合1至组合13体外抑菌试验结果
注：抑菌圈直径为0标记0(代表无抑菌效果)；抑菌圈直径为9.0-10.0mm标记+；直径为11.0-15.0mm标记++；直径为16-20.0mm标记+++；直径为21.0-25.0mm标记++++；直径＞25.0mm标记+++++。
离体样本抗菌实验
试验二：
采集30头患有子宫内膜炎母猪阴道分泌物共30g，装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，用已灭菌的M-H液体培养基稀释至1000ml，其浓度为3％，用已灭菌好带有塞头的试管分装，2ml/管。将样品1至样品16分组，每个组合有3个重复，每个重复10支管，分别吸取组合1至组合16浓度为1g/ml的清洗液2ml，加入到已盛有2ml试管中，即4ml/管，将全部管移至摇床中，转速为180r/min，36.9±0.1℃培养24h；同时设空白对照：生理盐水组和75％乙醇组。培养结束后，将各个重复组的试管液体，合成相应的三角锥瓶中，标记瓶1至瓶16。观察培养液浊度、絮状物、有无生长菌落及检测总菌量。
结果表明，由表2可知，与其他组相比，样品1优于其他组合(样品2至样品16)，组合1对患有子宫内膜炎母猪阴道分泌物有显著抑菌效果。
表2组合1至组合13体外检测结果
注：瓶1对应组合1，依此类推。“+”表示有絮状物，有生长细菌；“-”表示无絮状物，无生长细菌。
动物实验
案例1
在本公司(广东广汇农牧有限公司)的规模化种猪场进行应用效果评价，分别从5栋母猪舍的各个单元经产母猪和后备母猪挑选有阴道炎症和疑似阴道疾病的母猪55头，以耳标方式标记为处理组45头和阳性对照组15头，以健康母猪群作为空白组。应用浓度为10％环保型清洗液对25头母猪进行清洗，每天2次，连用5天，于第6天上午用棉签采集空白组、处理组1(样品1)、处理组2(样品2)、处理组3(样品3)、及阳性对照组中母猪阴道分泌物各25头，分别装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，带回公司做检测分析。试验期间，观察母猪精神状态、食欲及阴道情况，做好记录。检测方法：分别取各组装有棉签的三角锥瓶，加入50ml无菌生理盐水反复振摇，使棉签上的分泌物充分溶解在生理盐水中，观察生理盐水浊度和絮状物形态；按自动细菌鉴定测试仪(ATB)鉴定，采用ID32 STAPH(葡萄球菌鉴定系统)G+球菌，G-杆菌采用ID 32E系统鉴定；采用MRS固体培养基对各组母猪阴道分泌物中乳杆菌的株数进行统计分析。
结果表明，由表3可知，处理组中母猪阴道分泌物的有害细菌种类和数量明显少于阳性对照组，益生菌乳杆菌的数量远高于阳性对照组，显示了应用清洗液的治疗效果明显。
表3各组母猪阴道分泌物的细菌种类和数量
注：“—”表示无絮状物或未成形态；“+”表示有絮状物或成形态。
案例2
在清远英德市某一种猪场进行应用效果评价，分别从4栋母猪舍的各个单元经产母猪和后备母猪挑选有阴道炎症和疑似阴道疾病的母猪40头，以耳标方式标记处理组和阳性对照组，每组各20头，以健康母猪群作为空白组。应用浓度为15％环保型清洗液对20头母猪进行清洗，每天2次，连用5天，于第6天上午用棉签采集空白组、处理组1(样品1)、处理组2(样品2)、处理组3(样品3)及阳性对照组中母猪阴道分泌物各20头，分别装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，带回公司做检测分析。试验期间，观察母猪精神状态、食欲及阴道情况，做好记录。分别取各组装有棉签的三角锥瓶，加入50ml无菌生理盐水反复振摇，使棉签上的分泌物充分溶解在生理盐水中，观察生理盐水浊度和絮状物形态；按自动细菌鉴定测试仪(ATB)鉴定，采用ID32 STAPH(葡萄球菌鉴定系统)G+球菌，G-杆菌采用ID 32E系统鉴定；采用MRS鉴定培养基对各组母猪阴道分泌物中乳杆菌的株数进行统计分析。
结果表明，由表4可知，处理组中母猪阴道分泌物的有害细菌种类和数量明显少于阳性对照组，益生菌乳杆菌的数量远高于阳性对照组，显示了应用清洗液的治疗效果明显。
表4各组母猪阴道分泌物的细菌种类和数量
注：“—”表示无絮状物或未成形态；“+”表示有絮状物或成形态。
案例3
在河源市某一种猪场进行应用效果评价，分别从2栋母猪的各个单元经产母猪和后备母猪挑选有阴道炎症和疑似阴道疾病的母猪30头，以耳标方式标记处理组和阳性对照组，每组各15头，以健康母猪群作为空白组。应用浓度为20％环保型清洗液对15头母猪进行清洗，每天2次，连用5天，于第6天上午用棉签采集空白组、处理组1(样品1)、处理组2(样品2)、处理组3(样品3)、及阳性对照组中母猪阴道分泌物各15头，分别装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，带回公司做检测分析。试验期间，观察母猪精神状态、食欲及阴道情况，做好记录。检测方法：分别取各组装有棉签的三角锥瓶，加入50ml无菌生理盐水反复振摇，使棉签上的分泌物充分溶解在生理盐水中，观察生理盐水浊度和絮状物形态；按自动细菌鉴定测试仪(ATB)鉴定，采用ID32 STAPH(葡萄球菌鉴定系统)G+球菌，G-杆菌采用ID 32E系统鉴定；采用MRS鉴定培养基对各组母猪阴道分泌物中乳杆菌的株数进行统计分析。
结果表明，由表5可知，处理组中母猪阴道分泌物的有害细菌种类和数量明显少于阳性对照组，益生菌乳杆菌的数量远高于阳性对照组，显示了应用清洗液的治疗效果明显。
表5各组母猪阴道分泌物的细菌种类和数量
注：“—”表示无絮状物或未成形态；“+”表示有絮状物或成形态。
案例4
在广州市从化区鳌头镇某一种猪场进行应用效果评价，分别从3栋母猪的各个单元经产母猪和后备母猪挑选有阴道炎症和疑似阴道疾病的母猪36头，以耳标方式标记处理组和阳性对照组，每组各18头，以健康母猪群作为空白组。应用浓度为25％环保型清洗液对18头母猪进行清洗，每天2次，连用5天，于第6天上午用棉签采集空白组、处理组1(样品1)、处理组2(样品2)、处理组3(样品3)及阳性对照组中母猪阴道分泌物各18头，分别装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，带回公司做检测分析。试验期间，观察母猪精神状态、食欲及阴道情况，做好记录。检测方法：分别取各组装有棉签的三角锥瓶，加入50ml无菌生理盐水反复振摇，使棉签上的分泌物充分溶解在生理盐水中，观察生理盐水浊度和絮状物形态；按自动细菌鉴定测试仪(ATB)鉴定，采用ID32 STAPH(葡萄球菌鉴定系统)G+球菌，G-杆菌采用ID32E系统鉴定；采用MRS鉴定培养基对各组母猪阴道分泌物中乳杆菌的株数进行统计分析。
结果表明，由表6可知，处理组中母猪阴道分泌物的有害细菌种类和数量明显少于阳性对照组，益生菌乳杆菌的数量远高于阳性对照组，显示了应用清洗液的治疗效果明显。
表6各组母猪阴道分泌物的细菌种类和数量
注：“—”表示无絮状物或未成形态；“+”表示有絮状物或成形态。
案例5
在韶关市某一种猪场进行应用效果评价，分别从4栋母猪的各个单元经产母猪和后备母猪挑选有阴道炎症和疑似阴道疾病的母猪44头，以耳标方式标记处理组和阳性对照组，每组各22头，以健康母猪群作为空白组。应用浓度为30％环保型清洗液对22头母猪进行清洗，每天2次，连用5天，于第6天上午用棉签采集空白组、处理组1(样品1)、处理组2(样品2)、处理组3(样品3)、及阳性对照组中母猪阴道分泌物各22头，分别装入已灭菌带有塞头的三角锥瓶，带回公司做检测分析。试验期间，观察母猪精神状态、食欲及阴道情况，做好记录。检测方法：分别取各组装有棉签的三角锥瓶，加入50ml无菌生理盐水反复振摇，使棉签上的分泌物充分溶解在生理盐水中，观察生理盐水浊度和絮状物形态；按自动细菌鉴定测试仪(ATB)鉴定，采用ID32 STAPH(葡萄球菌鉴定系统)G+球菌，G-杆菌采用ID 32E系统鉴定；采用MRS鉴定培养基对各组母猪阴道分泌物中乳杆菌的株数进行统计分析。
结果表明，由表7可知，处理组中母猪阴道分泌物的有害细菌种类和数量明显少于阳性对照组，益生菌乳杆菌的数量远高于阳性对照组，显示了应用清洗液的治疗效果明显。
表7各组母猪阴道分泌物的细菌种类和数量
注：“—”表示无絮状物或未成形态；“+”表示有絮状物或成形态。
本文所呈现的实施例仅是根据所有可能的实施例的组合选择的实施方式。所附的权利要求不应受说明本发明的实施方式所限制。在权利要求中所用的一些数值范围包括在其之内的子范围，这些范围中的变化也应为所附的权利要求覆盖。
Claims (9)
1.一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物，其特征在于，包括如下组分：
陈皮柑果肉提取物30份-50份
油甘果提取物15份-30份
红毛丹果皮提取物10份-20份
乳酸链球菌发酵裂解液7份-12份
高山茶叶发酵液5份-10份
橄榄叶浸提液3份-7份
桑叶浸提液1份-5份。
2.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，所述陈皮柑肉提取物中总黄酮含量为1.8％-2.2％；总酸≥4.8％。
3.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，所述红毛丹果皮提取物中总浸提物≥35％，总酸≥1.5％。
4.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，油甘果提取物中总浸提物≥30％，总酸≥8.8％。
5.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，所述高山茶叶发酵液的制备方法为：
取高山茶叶500kg，按25：1比例加入麦麸20kg，混合均匀，获得茶麦混合体系，按1wt％接种量向体系中喷洒菌液浓度为109cfu/ml乳酸片球菌，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵5d，再按1wt％接种量向体系中喷洒菌液浓度为(3-10)*108cfu/ml混合菌液，其中，混合菌液中含黑曲霉≥108cfu/ml，产朊假丝酵母≥108cfu/ml和酿酒酵母≥108cfu/ml，搅拌均匀后装入发酵袋厌氧发酵7d；发酵结束后，发酵茶叶用45℃-55℃烘干，水分含量为8.0％-12.0％，常温密封保存备用。
6.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，所述乳酸链球菌发酵裂解液的制备方法为：取嗜热乳酸链球菌冻干粉用MRS琼脂培养基平板活化，刮下菌泥制备获得种子液，将种子液进行规模化发酵3-5d，即获得发酵液，发酵液的菌落数为10^10cfu/ml，发酵液经超声破碎细胞仪，超声10-15分钟，经0.22um超滤，获得乳酸链球菌发酵裂解液。
7.根据权利要求1所述的环保型清洗液组合物，其特征在于，所述橄榄叶浸提液的制备方法为：取60-80目橄榄叶5份，加入50℃-60℃水醇混合液1份。水醇混合液的体积比为2：1，充分混合均匀，在常温下，提取36-48h，期间搅拌3-4次；提取结束后，过滤去除残渣，获得提取混合液，混合液减压浓缩至浓度为1g/ml，分别得到橄榄叶浸提液；
所述桑叶浸提液的制备方法同橄榄叶浸提液，原料为桑叶。
8.一种如权利要求1-7任一所述的环保型清洗液组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物、油甘果提取物及红毛丹果皮提取物，加入乙醇溶液，搅拌，获得终浓度为10％w/v-30％w/v复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液、高山茶叶、发酵橄榄叶浸提液液及桑叶浸提液缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌，获得混合溶液；
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机均质处理，获得清洗液组合物；
(4)分装。
9.根据权利要求8所述的环保型清洗液组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)溶解：准确称取各重量份数的陈皮柑果肉提取物、油甘果提取物及红毛丹果皮提取物，按一定比例加入浓度为55％v/v乙醇，充分搅拌，混合均匀，获得终浓度为10％w/v-30％w/v复合溶液；
(2)混合：准确称取各重量份数的乳酸链球菌发酵裂解液、高山茶叶、发酵橄榄叶浸提液液及桑叶浸提液缓慢加入(1)复合溶液，移至搅拌机中，搅拌10-15分钟，充分混合均匀，获得混合溶液；
(3)超声匀质：将(2)混合溶液缓慢加入超声波均质机，在功率为250W、温度为35℃-50℃下均质处理5～10min，获得清洗液组合物；
(4)分装：将均质后的溶液(清洗液组合物)移入液体自动定量分装机，设定好参数，自动灌入塑料瓶；自动定量分装机参数：液量范围：500-1000mL；灌装速度：15-20瓶/min；精度：±1％。
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| CN202110172104.0A CN112957404A (zh) | 2021-02-08 | 2021-02-08 | 一种用于母猪阴道护理的环保型清洗液组合物及其制备方法 |
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| CN106794205A (zh) * | 2014-05-29 | 2017-05-31 | 皮肤生物素有限公司 | 益生菌的抗菌裂解物 |
| CN109966357A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-05 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一种中药微生态复方制剂及其制备方法和应用 |
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| CN109966357A (zh) * | 2019-05-10 | 2019-07-05 | 山东宝来利来生物工程股份有限公司 | 一种中药微生态复方制剂及其制备方法和应用 |
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