CN106794205A - 益生菌的抗菌裂解物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及益生菌，并且特别地，但不排外地，涉及衍生自益生菌的抗菌组合物。公开了包含由益生菌分泌的物质的组合物，其用途和使用所述组合物的方法。特别考虑的是包含由鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)分泌的物质的组合物及其用途。

Description

益生菌的抗菌裂解物

技术领域

本发明涉及益生菌，特别地，但不排外地，涉及衍生自益生菌的抗菌组合物。

背景技术

对益生菌有益于肠道健康的概念的研究已有多年。研究已经证明益生菌通过若干机制潜在地改善肠道功能，包括增加上皮屏障功能(40)和调节免疫应答(6,51)。还有证据表明益生菌可以防止病原体对肠道的定殖。这可以通过如下的机制：比如毒力因子的下调和病原体对上皮的粘附的抑制(2)。例如，乳杆菌通过竞争性排除抑制阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)对肠粘液的粘附(32)。其它研究表明，一些益生菌增加肠粘蛋白的产量，从而抑制病原体对肠上皮细胞的粘附(31)。益生菌还能够产生抗菌肽(细菌素)和酸。总的来说，存在许多益生菌介导的机制，限制病原体殖民化(33)。

由于益生菌对肠道有积极的影响，益生菌对其它系统，比如口腔(18)和泌尿生殖道(44)的潜在影响也已经开始研究。2001年的研究，调查乳杆菌口服给药对患有细菌性阴道病的妇女的临床试验的影响，其表明乳杆菌确实可以抑制病原体对尿路上皮细胞的定殖(44)。最近，在有限数量的研究中已经调查了益生菌在皮肤的局部应用。将超声处理的唾液链球菌(Streptococcus salivarius)菌株局部应用于患有特异性皮炎的患者的结果是通过提高角质层中的神经酰胺水平显然改善屏障功能(13)。局部应用植物乳杆菌以治疗感染的伤口的结果是改善小鼠烧伤模型中的组织修复并预防慢性下肢溃疡和人烧伤感染(41,42)。然而，一般来说，尚未很好地了解这些影响隐藏的机制。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是皮肤的临时殖民者和主要的机会性皮肤病原体，其引起的疾病从脓疱病至危及生命的病症比如败血症(25)。以前，我们的实验室证明了益生菌罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)通过将病原体从角质形成细胞结合位点竞争性排除可以保护表皮角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌(S.aureus)的毒性作用(43)。发明人现在将鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)GG识别为第二益生菌，其具有保护皮肤细胞免受金黄色葡萄球菌的影响的能力。然而，鼠李糖乳杆菌GG使用多种机制来抵抗感染，包括抑制金黄色葡萄球菌生长、竞争性排斥和从角质形成细胞置换病原体。

发明内容

少有研究评价局部应用益生菌或源自它们的物质的潜在益处。发明人研究了益生菌、鼠李糖乳杆菌GG是否能抑制培养物中人原代角质形成细胞的金黄色葡萄球菌感染。当人原代角质形成细胞暴露于金黄色葡萄球菌时，仅25％的角质形成细胞在24小时后保持存活。然而，在存在10⁸CFU/ml活鼠李糖乳杆菌GG时，感染的角质形成细胞的存活率增加至57％(P＝0.01)。有趣的是，鼠李糖乳杆菌GG裂解物和用过的培养液也为角质形成细胞提供了显著的保护作用，分别有65％(P＝0.006)和57％(P＝0.01)的细胞在24小时孵育后是活的。在金黄色葡萄球菌感染2小时前或同时(P＝0.005)或12小时后(P＝0.01)，无论益生菌是以活体形式还是作为裂解物应用，角质形成细胞存活明显提高。然而，用过的培养液只有在金黄色葡萄球菌之前或同时加入时才具有保护作用。关于机制，鼠李糖乳杆菌GG裂解物或用过的培养液显然通过竞争性排除抑制金黄色葡萄球菌对角质形成细胞的粘附，但是只有活细菌或裂解物可以置换金黄色葡萄球菌(分别为P＝0.04和0.01)。此外，活细菌或裂解物而不是用过的培养液抑制金黄色葡萄球菌的生长。这些数据一起表明鼠李糖乳杆菌GG针对金黄色葡萄球菌的保护作用、生长抑制和细菌减少粘附中涉及至少两种独立的活性。

发明人先前已证明益生菌及其裂解物保护细胞免受病原菌比如金黄色葡萄球菌的感染(参见WO2013/153358)。他们现在已经证明，其中先前已培养益生菌的无细胞的培养物上清液还能够防止病原菌粘附或感染细胞。因此，益生菌能够通过至少两种机制保护细胞免受感染。首先，益生菌可能能够通过包含在益生菌中、能够直接抑制病原菌的生长和/或存活率的一种或多种试剂减少或抑制病原菌的生长。其次，如本文所述，由益生菌分泌(并因此存在于培养基中)的一种或多种试剂可能通过防止病原菌对细胞的粘附从而能够抑制病原菌感染细胞的能力。因此，由益生菌分泌的物质对病原菌感染具有保护作用。因此，分泌物质具有抗菌或抗感染性质，该性能可以用于本文所述的各种抗细菌组合物中。

说明

本发明包括描述的方面和优选特征的组合，除非这样的组合是明显不允许或明确避免的。

本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不应被解释为限制所描述的主题。

益生菌

本发明涉及益生菌的用途。益生菌通常被定义为“当足量施用时给予宿主健康益处的活微生物”。肠道研究已经证明益生菌通过包括排除、竞争和置换附着于宿主组织的病原体的机制抑制病原体定殖的能力。本文所使用的术语“益生菌”还可以指其不再存活时的细菌，例如在通过加热或辐射灭活后。

鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)

本发明特别涉及鼠李糖乳杆菌的益生菌。这样的细菌原本被认为是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的亚种，但后来的遗传研究发现它是自己的物种。已知有若干鼠李糖乳杆菌菌株。例如，菌株1-1720(Pasteur collection Nationale de Cultures deMicroorganismes)、AC413、GR-1(Karlsson et al.,BMC microbiology 2012,12:15)、JB-1(Bravo et al.,PNAS 2011 108(38)16050-16055)GG和LC705(Savijok et al.,J.Proteome Research 2011 10(8)3460-3474)。可以轻易分离鼠李糖乳杆菌的其它菌株。

特别地，本发明涉及鼠李糖乳杆菌GG。鼠李糖乳杆菌GG(本文中也称为LGG)保藏于ATCC(美国组织培养物保藏中心)，保藏号为ATCC 53103。1983年Gorbach和Goldin从健康人类的肠道中分离出LGG。

组合物

根据本发明的组合物包含来自益生菌的分泌物质或由来自益生菌的分泌物质组成。

分泌物质是指由益生菌分泌的物质。分泌物质可以是单一试剂。其可以是一种以上试剂的混合物。分泌物质可以包括蛋白质、碳水化合物、核酸或脂质。分泌物质可以包括分泌组(secretome)，分泌组是益生菌的所有分泌蛋白和分泌机构。其可以另外包括不是蛋白质的分子，比如碳水化合物、脂质和核酸。

本文所述的一些组合物包含在载体中的分泌物质。载体通常是分泌物质溶解、悬浮、稀释或混合于其中的溶液。

在一些情况下，载体可以是在培养期间与益生菌接触的培养基。在培养期间培养基的组成会改变，例如，被益生菌分泌物质改变。组合物可以构成或包含益生菌已经在其中生长的培养基。

本领域技术人员熟知适于培养益生菌的培养基。本文所用的术语“培养基”和“培养介质”包括任何含养分的液体，其中微生物，比如细菌，可以得到支持、存活、生长和/或扩增。培养基可以含有支持细菌生命的最少养分，和任选的其它养分。包含在肉汤中的典型养分包括糖、镁、磷酸盐、磷和硫。培养基可以由本领域熟知的养分组合(比如Wilkins-Chalgren肉汤)制成或改变而来。培养基可以预混合商业来源而获得，或者可以自制。

益生菌可以与培养基接触至少6小时、至少12小时、至少18小时、至少24小时、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少2周或更长。

益生菌可以在需氧或厌氧条件下在培养基中培养，或与培养基接触。优选地，益生菌在厌氧条件下培养。例如，培养可以在10％H₂、10％C0₂、80％N₂下进行。

益生菌可以在促进益生菌生长和扩增的条件下在培养基中培养。本领域技术人员熟知这些条件。例如，培养物可以在37℃下孵育。

优选地，组合物不含任何益生菌。可以从培养基中除去益生菌，例如通过离心和/或过滤。例如，通过在离心机中以15,000×g使细菌在培养基中沉淀足以使基本上所有细菌从培养基中沉淀出来的一段时间，从而可以除去细菌。可以使用具有合适尺寸的孔的微孔过滤器过滤培养基，以从培养基中除去基本所有的细菌。这些方法可以除去完整的细菌，并且还可以除去细菌碎片，比如，已经经历细胞裂解(例如通过凋亡)的任何细菌的残余物。含有分泌物质的培养基并非从已经经历裂解过程的培养物获得，因此不是并且并非已经从裂解物获得。

组合物可以是无菌的。也就是说，分泌物质已经经过灭菌过程，比如照射、加热、化学品、压力或过滤，或其任何组合。这可以包括高压灭菌、x射线灭菌或紫外线灭菌。在培养基含有分泌物质的情况下，可以在引入和培养益生菌之前，和在细菌从培养基中除去之后将培养基灭菌。

在一些情况下，包含分泌物质的组合物基本上不含完整细菌。该组合物还可以基本上不含裂解的细菌或细菌片段，例如已经历细胞凋亡的细菌。完整的细菌和/或裂解的细菌或细菌片段可能已从分泌物质中分离。分离可以通过本领域已知的任何合适的方法进行，例如离心或过滤。“基本上不含”是指分泌物质不包含非分泌细菌组分，比如全细菌、裂解的细菌，或细菌片段的污染或其污染最小化。因此，组合物可含有100％分泌物质、至少99％分泌物质、至少95％分泌物质、至少90％分泌物质、至少85％分泌物质、至少80％分泌物质、至少75％分泌物质或至少70％分泌物质。如本文所述，分泌物质可以包含非细菌来源的另外的组分，例如载体溶液，其它活性剂或防腐剂。

本文所述的组合物可以通过在培养基中培养益生菌，从培养基中分离益生菌，以及从培养基制备组合物来制备。益生菌可以在厌氧条件下培养。益生菌可以在高于人体正常温度的温度下培养。益生菌可以在30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃或41℃培养。优选地，益生菌在37℃培养。益生菌可以在培养基中培养1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。益生菌或裂解的细菌或细菌碎片可通过离心例如15000x g离心从培养基中分离。可以通过过滤将培养基与益生菌、裂解的细菌或细菌碎片分离。可以通过过滤和离心的组合来分离培养基。可以在除去益生菌之前或之后对培养基进行灭菌。例如，在从全细菌、裂解的细菌或细菌碎片中分离培养基后，可以对培养基进行灭菌。可以对培养基进行浓缩，使得分泌物质的比例相对于培养基的总体积增加。可以通过本领域已知的任何方法，比如蒸发，进行浓缩。分泌物质可以从培养基分离。可以使用从载体溶液中分离物质的任何方法。例如，分泌物质可以通过色谱、结晶、蒸馏、干燥、电泳或沉淀从培养基中分离。一旦从培养基分离或在培养基中浓缩，分泌物质可以溶解或稀释于载体中，或者以其它方式配制成本文公开的组合物。

治疗应用

本发明的化合物和组合物可用于多种疾病和病症的治疗。特别地，本发明的化合物和组合物可用于治疗和预防皮肤感染，包括细菌感染。特别地，所述化合物和组合物可用于治疗或预防金黄色葡萄球菌感染。所述化合物和组合物可特别用于治疗软组织细菌感染，例如皮肤感染。本发明的化合物和组合物可特别用于预防或治疗金黄色葡萄球菌皮肤感染。

本发明涉及感染的预防或治疗。本发明的益生菌组合物表现出抗感染活性。例如，抗粘附活性，包括防止金黄色葡萄球菌粘附于细胞。因此，所述组合物可用于预防或治疗感染，包括细菌感染，比如，预防或治疗耐多药细菌的感染、医院获得性细菌感染、耐抗生素细菌感染，革兰氏阴性和/或革兰氏阳性细菌感染引起的感染。

本发明的组合物可用于预防葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)的感染，比如腐生葡萄球菌(S.saprophytics)，木糖葡萄球菌(S.xylosus)，吕克杜纳西藏葡萄球菌(S.lugdenensis)，施氏葡萄球菌(S.schleiferi)，头状葡萄球菌(S.capitis)，表皮葡萄球菌(S.epidermidis)，腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)，华纳葡萄球菌(S.warneri)，金黄色葡萄球菌(S.aureus)、人型葡萄球菌(S.hominis)，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicilin resistant S.aureus(MRSA))，酿脓葡萄球菌(S.pyrogenes)、S.saiivariu、变形链球菌(S.mutans)和S.pneumonia。

特别地，本发明的组合物表现出抗葡萄球菌粘附活性，因此可用于预防或治疗葡萄球菌感染。例如，本发明的组合物表现出抗金黄色葡萄球菌活性，因此可用于预防或治疗金黄色葡萄球菌感染。

感染发生在疾病引起微生物侵入身体组织时。那些微生物的繁殖及其产生的毒素与身体组织反应，常常引起被感染的宿主的免疫反应。感染可能由细菌、病毒、类病毒、真菌和其它寄生物引起。感染可以通过身体的任何组织发生，比如皮肤、肠或膜。在本发明的一些实施例中，本发明的益生菌或裂解物用于治疗肠道以外的组织的感染，例如在一些实施例中，根据本发明的益生菌或裂解物不用于治疗消化道、食管、胃、小肠、直肠或肛门的感染。在特定方面，本发明涉及治疗或预防身体，特别是皮肤的外表面的感染。

根据本发明的组合物可用于预防或治疗皮肤感染。感染可以因细菌，例如葡萄球菌细菌，包括金黄色葡萄球菌而引起。组合物可以单独地、循序地或在暴露于传染物的同时应用。优选地，在暴露于传染物之前应用所述组合物。

本发明的组合物优选用于预防细菌感染。所述组合物优选在受试者暴露于传染物，比如金黄色葡萄球菌之前，给受试者施用。受试者可能已被鉴定为处于被传染物感染的风险中。受试者可以被鉴定为由于其环境，例如位于已知存在传染物的环境中，或者由于受试者的健康，例如存在开放性伤口或较差的免疫健康，而处于被传染物感染的风险中。例如，组合物可以用于医院或其中已知或怀疑存在病原菌的其它临床环境中。

在一些情况下，患者将要接受或最近已接受手术。本文所述的组合物可用于防止开放性伤口(比如，由病原菌引起的手术切口或移植物)的感染。

在一些情况下，确定受试者没有被传染物感染。例如，可以确定受试者没有被金黄色葡萄球菌感染。用于确定受试者是否感染的方法是本领域熟知的，并且可以包括对从受试者获得的样品分析传染物的存在。

组合物可以单独施用或与其它治疗组合，根据待治疗的病症同时或循序地施用。

分泌物质可以溶解于、悬浮于一种或多种其它药学上可接受的成分中或与一种或多种其它药学上可接受的成分混合。益生菌或其裂解物可以存在于脂质体或其它微粒中。

在一些实施例中，分泌物质可以作为药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体中的悬浮液提供。在一些实施例中，益生菌可以作为冻干物提供。

非治疗应用

本发明还提供清洁产品、洗涤剂、表面涂层或不用于人或动物体的医疗的其它组合物形式的抗菌组合物。

这样的试剂可用于除去、杀死或防止细菌在表面上的积累或抑制细菌的作用或生长。将分泌物质配制为抗菌组合物。

根据本发明的抗菌组合物可以用于在给患者或受试者施用、或治疗或使用之前处理生物物质、植入物和假体(包括支架、瓣膜、眼睛、助听器、胃束带、假牙、人工关节置换物等)，手术器械或其它医疗装置。抗菌组合物可用于处理易于定殖或暴露于细菌的表面，例如扶手、食物制备表面、厨房表面或设备、桌子、水槽、马桶或其它浴室五金件。

抗菌组合物可以包含除了裂解物之外的试剂，例如清洁剂、稳定剂、阴离子表面活性剂、香料、螯合剂、酸、碱、缓冲剂或洗涤剂。这些试剂可以促进或增强试剂的抗菌性质，比如杀死或抑制细菌，或防止已清洁表面的再菌落化。

本发明还产生一种制备表面的方法，包括将分泌物质应用于表面。该方法可以导致病原微生物对表面的定殖减少。

制剂

尽管分泌物质可以单独使用，但优选将其作为包含所述物质和载体的制剂提供。分泌物质可以溶解于、悬浮于一种或多种其它成分中或与一种或多种其它成分混合。在一些情况下，分泌物质存在于脂质体或其它微粒中。

本文公开的制剂包括皮肤护理、伤口护理、呼吸护理和口腔护理制剂，包括医疗、个人护理和消费品。

制剂可以适当地为液体、溶液(例如水性的、非水性的)、悬浮液(例如，水性的、非水性的)、乳液(例如水包油、油包水)、酏剂、糖浆、药糖剂、漱口剂、滴剂、片剂(包括，例如，包衣片剂)、颗粒、粉末、糖锭、锭剂、胶囊(包括，例如，硬和软明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、安瓿、大片剂、塞剂、阴道栓、酊剂、凝胶、糊剂、软膏、霜剂、洗剂、油、泡沫、喷雾、薄雾或气溶胶的形式。

制剂可适当地提供为用一种或多种活性化合物和任选的一种或多种其它药学上可接受的成分(包括，例如穿透、渗透和吸收增强剂)浸渍的贴剂、胶布、绷带、敷料等。制剂也可适当地以长效制剂和贮存囊的形式提供。

在一些制剂中，分泌物质与一种或多种药学上可接受的成分一起配制。药学上可接受的成分是本领域技术人员熟知的，包括但不限于药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂(solubiliser)、表面活性剂(例如，润湿剂、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。制剂还可以包含其它活性剂，例如，其它治疗剂或预防剂。

本文的某些产品和制剂适于皮肤护理或伤口护理。“护肤”是指个人局部护理和/或卫生保健产品，包括用于治疗成人或婴儿皮肤，以维持或改善皮肤健康或改善皮肤外观的产品。“伤口护理”包括用于治疗伤口，以协助伤口的闭合或愈合，和/或减少与伤口有关的疼痛或疤痕，保持或改善这种组织或皮肤健康，修复这类组织或皮肤，并且减少这种组织或皮肤刺激、瘙痒和/或发红的产品。

在一些实施例中，根据本发明的分泌物质配制用于局部给药，特别是用于或应用于皮肤或皮肤上。

适于局部给药的制剂包括凝胶，糊剂，软膏，霜剂，洗剂和油，以及贴剂，胶布，绷带，敷料，长效制剂，接合剂，胶和贮存囊。

软膏通常由分泌物质和石蜡或水混溶性软膏基质制备。

霜剂通常由益生菌或裂解物和水包油霜底制备。如果需要，霜底的水相可以包括例如，至少约30％w/w的多元醇，即，具有两个或更多个羟基的醇，例如丙二醇，丁-1,3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可期望地包括增强活性化合物经由皮肤或其它受影响区域的吸收或渗透的化合物。这种真皮渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关的类似物。

乳液通常由益生菌或裂解物和油相制备，所述油相可以仅任选地包含乳化剂(或者称为乳剂)，或者其可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油，或与两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂与作为稳定剂的亲脂性乳化剂包含在一起。还优选包括油和脂肪两者。具有或不具有稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且该蜡与油和/或脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，乳化软膏基质形成霜剂制剂的油性分散相。

合适的乳化剂和乳液稳定剂包括Tween 60、Span 80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。用于制剂的合适的油或脂肪的选择是基于实现所需的化妆品性质，因为活性化合物在可能用于药物乳液制剂中的大多数油中的溶解度可能非常低。因此，霜剂应该优选为具有合适稠度的不油腻、非染色和可洗涤的产品，以避免从管或其它容器中泄漏。可以使用直链或支链的一元或二元烷基酯如二异己二酸酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、2-棕榈酸乙基己酯或称为Crodamol CAP的支链酯的掺合物，最后三种为优选的酯。取决于所需性能，可以单独使用或组合使用这些物质。可替换地，可以使用高熔点脂质如白色软石蜡和/或液体石蜡或其它矿物油。

本文所述的一些产品和制剂适于口腔护理。“口腔护理”是指在口腔或其任何部分中使用和/或使用物质的产品，包括在牙齿、粘膜、舌头等上使用的产品。口腔护理领域中的产品和用途包括那些意图用于牙齿美容，包括例如牙齿美白、防止污染等，以及抗牙斑、抗牙龈炎、抗过敏、抗龋、口气清新、干口缓解、侵蚀修复和预防、活性递送和保留，知觉增强和口感改变等。

用于口腔护理的制剂包括牙科用喷雾、漱口剂、牙膏、糖锭、抗菌洗涤剂、饮料(例如牛奶、酸奶)、食品(例如酸奶、冰淇淋、糖果棒)或粉末食品(例如奶粉)。适于口腔护理的制剂包括适于口服和/或口腔给药的制剂。

适于口服给药(例如通过摄取)的制剂包括液体、溶液(例如，水性的、非水性的)，混悬剂(例如水性，非水性)、乳液(例如水包油、油包水)、酏剂，糖浆、药糖剂、片剂、颗粒、粉末、胶囊、扁囊剂、丸剂、安瓿、大片剂。

适于口腔给药的制剂包括漱口剂、糖锭、锭剂、以及贴剂、胶布、长效制剂和贮存囊。糖锭通常在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性化合物。锭剂通常在惰性基体(例如，明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性化合物。漱口剂通常在合适的液体载体中包含活性化合物。

本文公开的一些制剂适当地作为贴剂、胶布、绷带、敷料等提供，其用根据本发明的一种或多种分泌物质和任选的一种或多种其它药学上可接受的成分浸渍或涂布，所述其它药学上可接受的成分包括，例如，穿透、渗透和吸收增强剂。益生菌、裂解物或培养基也可以以涂层的形式提供用于医疗装置比如植入物、假肢、外科器械、手套、导管、瓣膜、起搏器等。

本文公开的一些组合物和制剂适于呼吸护理。“呼吸护理”是指用于治疗病症，包括预防和治疗鼻炎、窦炎、季节性过敏、鼻塞和感冒，的产品。所述组合物可用于预防呼吸道，包括鼻窦、气道、咽喉或肺，的细菌感染。在一些情况下，将这种制剂配制用于鼻内给药或肺部给药。

适于鼻内给药的制剂(其中载体为液体)包括，例如，鼻喷雾剂、滴鼻剂或经由喷雾器的气雾剂给药，包括活性化合物的水性或油性溶液。

适于鼻内给药的制剂(其中载体为固体)包括，例如，以粒径范围为例如约20至约500微米的粗粉末呈现的那些制剂，其以吸取鼻烟的方式给药，即，通过从靠近鼻子的粉末容器经由鼻道快速吸入。

适于肺部给药(例如通过吸入或吹入疗法)的制剂包括呈现为来自加压包的气溶胶喷雾的那些制剂，并且使用合适的推进剂，比如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体。

根据本发明的组合物和制剂还可以包含其它活性剂，例如，其它抗菌剂，比如，杀菌剂。

在一些实施例中，根据本发明使用的制剂可以包含至少约0.01wt％、约0.05wt％、约0.1wt％、约0.2wt％、约0.3wt％、约0.4wt％、约0.5wt％、约0.6wt％、约0.7wt％、约0.8wt％、约0.9wt％、约1.0wt％、约1.5wt％、约2.0wt％、约3.0wt％、约4.0wt％、约5.0wt％、约6.0wt％、约7.0wt％、约8.0wt％、约9.0wt％、约1 0.0wt％、约11.0wt％、约12.0wt％、约13.0wt％、约14.0wt％、约15.0wt％、约16.0wt％、约17.0wt％、约18.0wt％、约19.0wt％、约20.0wt％、约25.0wt％、约30.0wt％、约35.0wt％、约40.0wt％、约45.0wt％、约50.0wt％的分泌物质。

在一些实施例中，制剂可以包含约0.01wt％至约30wt％，约0.01wt％至约20wt％，约0.01wt％至约5wt％，约0.1wt％至约30wt％，约0.1wt％至约20wt％约0.1wt％至约15wt％，约0.1wt％至约10wt％，约0.1wt％至约5wt％，约0.2wt％至约5wt％，约0.3wt％至约5wt％，约0.4wt％至约5wt％，约0.5wt％至约5wt％，约1wt％至10约5wt％中至少一个的分泌物质。

药物制剂

根据本发明的益生菌制剂可以配制成用于临床应用的药物组合物，并且可以包含药学上可接受的载体、稀释剂或佐剂。其可以配制用于局部给药。

优选以预防或治疗有效量给药，这是足以显示对个体有益的量。实际施用量、给药速率和时间进程将取决于所治疗的疾病的性质和严重性。治疗处方，例如，剂量等的决定在普通医生和其他医生的责任范围内，并且通常考虑待治疗或预防的疾病、个体患者的状况、递送位点、给药方法和从业者所知的其它因素。上述技术和方案的实例可见于Remington'sPharmaceutical Sciences,20^th Edition,2000,pub.Lippincott,Williams&Wilkins。本领域技术人员会理解，活性化合物和包含该活性化合物的组合物的合适剂量可随患者而变化。

本发明的组合物可以配制成药剂，即，配制成药物。药剂可包括本领域技术人员熟知的其它药学上可接受的成分，包括但不限于药学上可接受的载体、佐剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如，润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。该制剂还可以包含其它活性剂，例如，其它治疗剂或预防剂。

现在将参考附图通过实例来说明本发明的方面和实施例。其它方面和实施例对于本领域技术人员将是显而易见的。本文中提及的所有文件通过引用并入本文。

附图说明

现在将参考附图来讨论说明本发明的原理的实施例和实验，其中：

图1：鼠李糖乳杆菌GG保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的毒性作用。未感染的细胞平均存活率为90％。金黄色葡萄球菌感染的细胞的平均存活率为25％±3.4。在用金黄色葡萄球菌和鼠李糖乳杆菌GG(LGG+SA)的组合感染的角质形成细胞中，24小时后的存活率为57％±2.7(P＝0.01，n＝3)。

图2：来自鼠李糖乳杆菌GG的裂解物和用过的培养液(CM)保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的影响。相比单独用金黄色葡萄球菌(SA)感染的角质形成细胞的存活率25％±3.1，以鼠李糖乳杆菌GG裂解物和金黄色葡萄球菌(LGGLYS+SA)感染的角质形成细胞的存活率为65％±2.4，并且以用过的培养液和金黄色葡萄球菌(LGGCM+SA)感染的角质形成细胞的存活率为57％±1.5(分别为P＝0.006，P＝0.01，n＝3)。

图3：鼠李糖乳杆菌GG保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌感染。角质形成细胞的存活率百分比在预先暴露于鼠李糖乳杆菌GG(LGG+SA)、裂解物(LGG LYS+SA)或用过的培养液(LGG CM+SA)(58％±1.4,57％±1.9,55％±0.5,P＝0.006,P＝0.005,P＝0.004)的细胞中明显比金黄色葡萄球菌感染的细胞(25％±1.3)高(n＝3)。

图4：鼠李糖乳杆菌GG，但不是其用过的培养液，从金黄色葡萄球菌介导的毒性中解救角质形成细胞。A)将未感染的角质形成细胞孵育过夜；大约90％的细胞在24小时后存活。在用鼠李糖乳杆菌GG(P＝0.003，n＝3)暴露2h(52％±1.6)、4h(54％±1.4)、6h(57％±1.3)、8h(58％±1.3)或12h(58％±1.5)后的细胞中金黄色葡萄球菌感染的角质形成细胞的存活率明显较高。B)在感染开始后，用鼠李糖乳杆菌GG裂解物处理2h(574％±3.1)、4h(58％±2.1)、6h(63％±1.2)、8h(63％±1.3)或12h(55％±2.4)的细胞存活率(P＝0.01,n＝3)之间的差异显著，而已被金黄色葡萄球菌(SA)单独感染的角质形成细胞的存活率为25％±1.7。C)用鼠李糖乳杆菌GG用过的培养液(CM)暴露后的细胞没有明显的保护作用(P＝0.15,n＝3)，2h(32％±2.6)、4h(39％±2.4)、6h(37％±1.8)、8h(36％±1.3)或12h(35％±3.5)，而共同暴露的细胞对金黄色葡萄球菌感染具有显著的保护作用(56％±2.1,P＝0.01,n＝3)。

图5：鼠李糖乳杆菌GG裂解物，但不是用过的培养液降低葡萄球菌的存活率。A)在每小时测定在角质形成细胞存在下生长并用鼠李糖乳杆菌GG裂解物(LGG LYS)或用过的培养液(LGG CM)处理的金黄色葡萄球菌(SA)培养物的光密度以监测该细菌的生长。在益生菌裂解物存在下金黄色葡萄球菌的生长明显低于金黄色葡萄球菌培养物(P＝0.02，n＝3)，而用过的培养液没有作用。B)单独的角质形成细胞培养物中活金黄色葡萄球菌(SA)的数量为8log CFU/ml或在角质形成细胞培养物和用过的培养液(LGG CM)中活金黄色葡萄球菌(SA)的数量为7.87log CFU/ml，而在鼠李糖乳杆菌GG裂解物存在下，活金黄色葡萄球菌为5logCFU/ml。C)在感染后测定(2-4-6-8和12小时)中，鼠李糖乳杆菌GG裂解物使角质形成细胞培养物中活葡萄球菌的总数减小，还表明在2小时孵育后金黄色葡萄球菌的存活率相比单独的金黄色葡萄球菌的存活率明显降低(P＝0.05,n＝3)。

图6：活鼠李糖乳杆菌GG、裂解物或用过的培养液通过从结合位点竞争性排除抑制金黄色葡萄球菌附着于角质形成细胞。细菌粘附于角质形成细胞的能力，当应用于角质形成细胞1小时时，约7.5±0.6log CFU/ml的金黄色葡萄球菌(SA)(10⁶)附着于细胞，而鼠李糖乳杆菌GG(LGG)(10⁸)为约7.9±0.5log CFU/ml。相比单独用金黄色葡萄球菌(SA)感染的细胞(7.9±0.6log CFU/ml)，用鼠李糖乳杆菌GG(LGG+SA)、裂解物(LGGLYS+SA)或用过的培养液(LGG CM+SA)预暴露的细胞具有明显较少的葡萄球菌粘附于该细胞(分别为5.83±0.2log CFU/ml、5.9±0.6log CFU/ml和6.4±0.7log CFU/ml)(P＝0.04,n＝3)。

图7：活鼠李糖乳杆菌GG或裂解物通过竞争性取代至结合位点抑制金黄色葡萄球菌而粘附于角质形成细胞。与单独用金黄色葡萄球菌(SA)感染的细胞相比(7.95±0.6logCFU/ml)，用鼠李糖乳杆菌GG(LGG-12h)或裂解物(LGGLYS-12h)暴露后的细胞在12小时后具有明显较少的葡萄球菌粘附于该细胞(分别为5.8±0.7log CFU/ml，5.4±0.3log CFU/ml)(P＝0.01,n＝3)。然而，用鼠李糖乳酸GG用过的培养液(LGG CM-12h)暴露后的细胞并不降低金黄色葡萄球菌的粘附数(7±0.6log CFU/ml,P>0.05,n＝3)。

实施例

实施例1：材料和方法

哺乳动物细胞培养物

将在含有补充混合物(牛垂体提取物0.004mg/ml、表皮生长因子(重组人)0.125ng/ml、胰岛素(重组人)5μg/ml、氢化可的松0.33μg/ml、肾上腺素0.39μg/ml和转铁蛋白、全蛋白(人)10μg/ml)的角质形成细胞基础培养基(Promocell，Heidelberg，Germany)和0.06mM CaCh(Promocell,Heidelberg,Germany)中培养的正常人表皮角质形成细胞(NHEK)用作模型系统。如前所述(43)，将这些在37℃，5％CO₂的潮湿氛围中，于T-75培养烧瓶中进行常规培养。

细菌细胞培养

鼠李糖乳杆菌Goldin和Gorbach(L.rhamnosus GG)(ATCC 53103.ATCC，Middlesex，UK)在37℃，Wilkins-Chalgren Broth或Agar(Oxoid，Basingstoke，UK)于厌氧箱(氛围，0：10：80的H₂-CO₂-N₂)培养，使其常规生长。如先前所述(43)，在37℃，NutrientBroth(Oxoid，Basingstoke，UK)中使金黄色葡萄球菌进行有氧生长。

用细菌处理角质形成细胞

将细菌(10⁸CFU/ml益生菌和10⁶CFU/ml金黄色葡萄球菌)以15,000x g离心，在0.85％NaCI中洗涤两次，并重悬浮于角质形成细胞基础培养基中。将该悬浮液直接加到生长在24孔板中的5x10³个细胞/cm²的NHEK中。对于使用益生菌裂解物的实验，将10ml10⁸CFU/ml鼠李糖乳杆菌GG离心，洗涤，重悬于pH＝7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)(10mM)中，并使用MSE Soniprep 150裂解。使用0.22μm孔过滤器(Millipore，Billerica，USA)过滤样品以除去任何剩余的全细菌。

将约100μΙ的该裂解物用于处理角质形成细胞(5x10³个细胞/cm2)。在一些实验中，将细胞在离心机中以15,000×g沉降5分钟，收集无细胞的上清液(用过的培养液)，并使用0.22μm孔过滤器(Millipore，Billerica，USA)过滤以除去任何残留的全细菌。在其它实验中，角质形成细胞单层用病原体加益生菌或裂解物同时共同感染。在独立实验中，在金黄色葡萄球菌感染消耗后，将细胞暴露于鼠李糖乳杆菌GG裂解物2、4、6、8和12小时。在所有实验中，分离角质形成细胞，并且如(43)中所述使用台盼蓝排除测定法测定细胞存活率。

细胞培养物中的金黄色葡萄球菌存活率的测量

为了确定鼠李糖乳杆菌GG裂解物或角质形成细胞是否能够抑制金黄色葡萄球菌在细胞培养物中的生长，角质形成细胞在24孔板中生长至汇合。将它们暴露于单独的金黄色葡萄球菌，或金黄色葡萄球菌加鼠李糖乳杆菌GG裂解物或条件培养基。在独立实验中，在金黄色葡萄球菌感染后将细胞暴露于鼠李糖乳杆菌GG裂解物2、4、6、8和12小时。通过如先前(43)所述计算菌落来确定活葡萄球菌的总数。

细菌粘附于角质形成细胞的测量

将汇合的角质形成细胞暴露于细菌1小时。然后将细胞在pH＝7.4(10mM)的磷酸盐缓冲液(PBS)(Invitrogen，Life Technologies Ltd，Paisley，UK)中洗涤三次以除去非粘附细菌。细胞用胰蛋白酶处理，并进行系列稀释板计数以评估粘附细菌的数量。选择性琼脂用于葡萄球菌的生长。

细菌拮抗作用的测定

将金黄色葡萄球菌过夜培养物的10μΙ等份样品接种到7ml软琼脂培养基(0.7％琼脂)中，并直接加入预先倒有琼脂基的平板上。将100μΙ每种有机体或鼠李糖乳杆菌GG培养物的提取物点在金黄色葡萄球菌菌苔上。

共同培养的结果的测定(竞争性测定)

将鼠李糖乳杆菌GG裂解物和金黄色葡萄球菌的等分样品(100μΙ)接种到10ml WCB肉汤中。在0和24小时测量培养物的pH和光密度。以规律的间隔(在文中指示)，使用选择性琼脂通过连续稀释板计数来计算细菌。

统计分析

所有实验进行至少三次，在每个实验中有三次重复。使用SPSS(IBM SPSSStatistics版本16.0)程序通过单因素方差分析(one way ANOVA)和事后Tukey检验分析产生的数据。如果P<0.05，则认为结果是显著的。数据表示为平均值±平均值的标准误差(SEM)。

实施例2：结果

鼠李糖乳杆菌GG保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的致病作用。

最初，我们调查角质形成细胞的存活率是否受用鼠李糖乳杆菌GG孵育的影响。然而，在24小时孵育后，用益生菌孵育的角质形成细胞的存活率与未处理的角质形成细胞的对照相比没有差异(数据未显示)。接下来，研究鼠李糖乳杆菌GG保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的影响的能力。与我们以前的发现(43)一致，角质形成细胞暴露于10⁶CFU/ml金黄色葡萄球菌24小时导致角质形成细胞明显死亡。然而，与病原体和鼠李糖乳杆菌GG同时孵育的角质形成细胞的百分比存活率(57％P＝0.01)比单独用病原体感染的单层的百分比存活率明显更高(图1)。

鼠李糖乳杆菌GG裂解物和用过的培养液保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的影响。

我们通过调查益生菌裂解物和用过的培养液对金黄色葡萄球菌感染的角质形成细胞的影响，研究了活细菌对鼠李糖乳杆菌GG的保护作用是否是必需的。裂解物和用过的培养液都不会明显影响角质形成细胞的存活率(P>0.05)(数据未显示)。然而，相比单独用金黄色葡萄球菌感染的角质形成细胞的存活率25％，裂解物和用过的培养液都降低了金黄色葡萄球菌的毒性，使得经处理的角质形成细胞的存活率分别为65％和57.93％(分别为P＝0.006和P＝0.01)(图2)。

鼠李糖乳杆菌GG、裂解物，但不是用过的培养液从金黄色葡萄球菌毒性中解救角质形成细胞。

接下来，我们通过在金黄色葡萄球菌感染角质形成细胞前或后加入活细菌或裂解物来研究鼠李糖乳杆菌GG的保护作用的时机。在用金黄色葡萄球菌感染之前暴露于鼠李糖乳杆菌GG或用过的培养液2小时的单层中的角质形成细胞的存活率的百分比明显大于单独用金黄色葡萄球菌感染的单层中的角质形成细胞存活率的百分比(P＝0.006)。裂解物和用过的培养液都提供了类似的保护水平(P＝0.005，p＝0.004)(图3)。在感染后实验中，加入活鼠李糖乳杆菌GG、裂解物或用过的培养液之前，角质形成细胞暴露于金黄色葡萄球菌2h，4h，6h，8h和12h。然后在用金黄色葡萄球菌感染后24小时测量角质形成细胞的存活率。图4(A，B)中的数据显示，在金黄色葡萄球菌后添加时，活益生菌及其裂解物可以保护角质形成细胞。即使在金黄色葡萄球菌感染后的12小时，鼠李糖乳杆菌GG或裂解物仍然为角质形成细胞提供保护，使得分别有58％和55％的细胞保持存活，相比之下当暴露于单独的金黄色葡萄球菌时为25％(P＝0.003，P＝0.01)。然而，来自鼠李糖乳杆菌GG的用过的培养液在金黄色葡萄球菌后添加时对角质形成细胞没有保护作用(图4C)。

鼠李糖乳杆菌GG裂解物，但不是用过的废培养液，抑制金黄色葡萄球菌的生长。

探讨了鼠李糖乳杆菌GG裂解物发挥其保护作用的机制。我们调查益生菌裂解物是否通过使其在培养物中同时生长从而对病原体的生长具有直接影响。与未处理的培养物相比，竞争试验表明在角质形成细胞培养基中，在鼠李糖乳杆菌GG裂解物存在下，24小时后金黄色葡萄球菌的增长明显下降(P＝0.02)(图5A)。然而，来自鼠李糖乳杆菌GG的用过的培养液对金黄色葡萄球菌的生长没有影响(图5A)。相比单独生长的金黄色葡萄球菌(P＝0.02)的8log₁₀cfu/ml，在裂解物(但不是用过的培养液)存在下，活葡萄球菌的总数也明显减少至5log₁₀cfu/ml(图5B)。此外，活的葡萄球菌培养物的总数由于鼠李糖乳杆菌GG裂解物而随时间减少(图5C)。由于乳杆菌可以产生有机酸，我们测量了用金黄色葡萄球菌、鼠李糖乳杆菌GG裂解物或两者同时感染24小时的角质形成细胞培养基的pH。然而，处理组之间的pH没有显著差异(数据未显示)。我们还测量了单独的裂解物的pH，发现其为pH＝7.2，因此消除了酸介导作用的可能性。

鼠李糖乳杆菌GG抑制金黄色葡萄球菌对角质形成细胞的粘附。

鼠李糖乳杆菌GG的活细菌、裂解物或用过的培养液可以保护角质形成细胞的另一机制是通过抑制病原粘附。以前，我们展示了粘附是金黄色葡萄球菌的毒性作用和特定益生菌(如罗伊氏乳杆菌)通过将病原体从角质形成细胞结合位点竞争性排除(43)保护角质形成细胞的要求。因此，我们认为抑制粘附也是鼠李糖乳杆菌GG、裂解物或用过的培养液的保护机制的一部分。进行粘附测定以确定抑制是否是由于从角质形成细胞上的结合位点竞争，排除或置换病原体引起的(图6A&B和图7)。我们的结果表明，如果角质形成细胞被共感染(竞争，P＝0.03)，预暴露(排除，P＝0.04)或甚至在用金黄色葡萄球菌感染开始后12小时应用(置换，P＝0.01)，活鼠李糖乳杆菌GG或裂解物能够抑制病原体粘附。然而，如果在加入病原体之前或与病原体同时将用过的培养液加入角质形成细胞，则用过的培养液仅抑制病原体粘附(图7)。

讨论

本研究探讨肠道益生菌、鼠李糖乳杆菌GG是否可以保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌的致病作用。确定同时添加金黄色葡萄球菌和鼠李糖乳杆菌GG对角质形成细胞存活率的影响的初步实验表明，相比单独用金黄色葡萄球菌感染的角质形成细胞，在益生菌存在下，活角质形成细胞数量增加，可见保护作用显著(图1)。此外，鼠李糖乳杆菌GG的保护作用不需要活细菌，因为来自益生菌的裂解物和用过的培养液也保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌之害。

鼠李糖乳杆菌GG或裂解物的应用时间不影响益生菌或裂解物赋予的保护角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌诱导的细胞死亡之害的保护程度(图3)。数据表明，预先、过后或共同暴露于鼠李糖乳杆菌GG或裂解物的角质形成细胞免受金黄色葡萄球菌诱导的细胞死亡之害。然而，益生菌用过的培养液只有当其在病原体之前或同时加入时才保护角质形成细胞。这些数据表明，鼠李糖乳杆菌GG抵抗金黄色葡萄球菌的保护作用涉及至少两种独立的活性，一种包含在用过的培养液中，一种包含在裂解物中。

我们的数据表明，用过的培养液中含有的活性可能具有抗粘附作用。这是基于以下观察结果：A)鼠李糖乳杆菌GG-用过的培养液仅当其在金黄色葡萄球菌感染之前或同时加入才抑制病原体对角质形成细胞的粘附。B)我们以前已经表明，金黄色葡萄球菌必须粘附至角质形成细胞，以对该细胞产生毒性，并且抑制粘附的试剂保护角质形成细胞免受这种病原体之害(43)。C)与此相一致，用过的培养液仅在加入金黄色葡萄球菌前或共感染时才具有保护作用。其它体外研究证明来自推定的益生菌(乳杆菌、双歧杆菌属、乳球菌、链球菌链球菌)的无细胞的培养物上清液(CFCS)能够抑制几种病原体如鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对Caco-2细胞的粘附(11)。

乳杆菌裂解物保护角质形成细胞可能涉及至少两种机制。首先，裂解物可能能够降低金黄色葡萄球菌的增长。竞争测定表明鼠李糖乳杆菌GG裂解物降低活葡萄球菌的总数(图5A、B、C)。此外，在抑制测定中，当用来自厌氧生长的益生菌的裂解物挑战金黄色葡萄球菌时观察到抑制区(表1)。这些数据表明鼠李糖乳杆菌GG裂解物抑制金黄色葡萄球菌生长的能力。这可能是由于在益生菌内存在能够直接抑制金黄色葡萄球菌生长和/或存活率的有毒分子。这种分子可能是合成的，但不是分泌的，因为鼠李糖乳杆菌GG用过的培养液对金黄色葡萄球菌的存活率没有影响。如果鼠李糖乳杆菌GG含有抑菌物质，则这也可以至少部分地解释益生菌在角质形成细胞存活测定中的保护作用。益生菌，特别是乳杆菌，先前已显示对金黄色葡萄球菌生长发挥强抑制作用。据报道，某些乳杆菌菌株对形成生物膜的金黄色葡萄球菌具有高度拮抗作用(28,30)。其它研究报道，益生菌可以通过产生细菌素，抑制病原体的生长来改善肠道健康(16,48)。此外，鼠李糖乳杆菌GG已显示通过产生乳酸抑制肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)的生长(29)。然而，在本研究中，我们没有发现酸生产作为鼠李糖乳杆菌GG的保护作用的一部分的参与证据。实际上，来自该生物的裂解物是中性的(pH 7.2)，但仍然能够抑制金黄色葡萄球菌的生长。

表1：菌苔上的菌斑的测定中的金黄色葡萄球菌的抑制区(ZOI)(n＝3)。菌苔上的菌斑的测定显示在厌氧条件下但不在有氧条件下由鼠李糖乳杆菌(LGG)和裂解物(LGGLYS)产生的抑制区。结果表示为平均值±SEM。

鼠李糖乳杆菌GG的活细菌或裂解物可以保护角质形成细胞的第二种机制是通过抑制病原粘附。实际上，我们的数据证明了在鼠李糖乳杆菌GG或其裂解物存在下，金黄色葡萄球菌对角质形成细胞的粘附减少。这个数据暗示了排除机制，如我们以前所观察到的罗伊氏乳杆菌那样(43)。然而，有趣的是，当添加到现有的感染时，活鼠李糖乳杆菌GG或其裂解物也抑制金黄色葡萄球菌的粘附，这证明了另一种保护机制，即，鼠李糖乳杆菌GG可以从角质形成细胞中置换病原体(图7)。类似地，活鼠李糖乳杆菌GG已经显示从肠道的肠细胞中置换病原体(47)。然而，我们的数据表明活细菌的存在对于从角质形成细胞置换金黄色葡萄球菌不是必需的。重要的是，我们的数据表明乳杆菌用于降低病原体毒性的机制中的物种依赖差异。我们以前的工作强调罗伊氏乳杆菌作为一种有机体，能够排除金黄色葡萄球菌形成角质形成细胞结合位点(43)。在这项研究中，我们已经表明鼠李糖乳杆菌GG可以，不仅排除病原体，还可以降低病原体的增长和从角质形成细胞置换病原体。当然，这种置换活性可能与鼠李糖乳杆菌GG抑制生长的能力相关，这是可能的，并且需要进一步研究来澄清这一点。

总之，我们报道鼠李糖乳杆菌GG是抑制金黄色葡萄球菌的致病性的潜在的新试剂。此外，我们的数据显示鼠李糖乳杆菌GG在皮肤上的效用不受其是否能在皮肤上生长和存活的限制，因为有机体的裂解物在防止金黄色葡萄球菌定殖上如活细菌一样有效。此外，裂解物可用作预防剂，例如，用于洗手液，但是可能作为现有传染物的抗生素的辅助剂或甚至替代物。

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Claims (27)

1.一种组合物，其包含由益生菌分泌的物质。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含位于载体中的分泌物质。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述载体包含从含益生菌的培养物中获得的培养基。

4.权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物基本上不包含完整的益生菌、裂解的细菌或细菌片段。

5.根据前面权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述益生菌是乳杆菌属细菌。

6.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌为鼠李糖乳杆菌。

7.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述乳杆菌为鼠李糖乳杆菌GG。

8.根据前面权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物被配制用作抗菌组合物。

9.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述组合物被配制用作霜剂、凝胶或喷雾。

10.根据前面权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述益生菌在厌氧条件下培养。

11.一种根据前面权利要求中任一项所述的药物组合物。

12.根据前面权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物被配制用于局部给药。

13.根据前面权利要求中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于药物中。

14.根据权利要求13所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于预防细菌感染的方法中。

15.根据权利要求14使用的组合物，其特征在于，所述感染为葡萄球菌感染。

16.根据权利要求15使用的组合物，其特征在于，所述感染为金黄色葡萄球菌感染。

17.根据权利要求14至16使用的组合物，其特征在于，所述感染为皮肤感染。

18.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物在制备用于预防细菌感染的药剂中的用途。

19.根据权利要求18所述的用途，其特征在于，所述细菌感染为葡萄球菌感染。

20.根据权利要求19所述的用途，其特征在于，所述感染为金黄色葡萄球菌感染。

21.一种预防细菌感染的方法，其包括施用根据权利要求1所述的组合物。

22.根据权利要求21所述的预防感染的方法，其特征在于，所述感染为葡萄球菌感染。

23.根据权利要求22所述的预防感染的方法，其特征在于，所述感染为金黄色葡萄球菌感染。

24.根据权利要求21所述的预防感染的方法，其特征在于，所述感染为皮肤感染。

25.根据权利要求21所述的预防感染的方法，其特征在于，所述治疗包括将所述组合物施用于皮肤。

26.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，所述患者已被鉴定为皮肤没有被细菌感染。

27.一种制备表面的方法，其包括将根据权利要求1至10中任一项所述的组合物应用于所述表面。