CN112957286A - 一种重组角蛋白医用面膜及其制备方法 - Google Patents

一种重组角蛋白医用面膜及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液30～40份、透明质酸钠22～26份、壳聚糖18～22份、甘油12～15份、牛油果脂13～17份，双丙甘醇9～13份、烟酰胺2～4份、海藻提取物15～20份、黄原胶10～14份、去离子水20～25份、稳定剂2～6份、抗菌剂1～3份；面膜浸润在面膜纸上。本发明中采用重组角蛋白，使得角蛋白在医用面膜中应用的技术难度降低，并且保证了医用面膜抗氧化、快速修复和快速补水的效果更好，使得完全符合医用面膜和标准和医用面膜的安全性，也避免了面膜过敏的情形。

Description

一种重组角蛋白医用面膜及其制备方法
技术领域
本发明涉及医用面膜技术领域，尤其是涉及一种重组角蛋白医用面膜及其制备方法。
背景技术
角蛋白是纤维结构蛋白家族之一，它是构成头发、角、爪和人体皮肤外层的主要蛋白质，角蛋白可保护上皮组织细胞免受损伤或者压力；随着科技的发展，由于角蛋白具有高抗性的理化性质和特殊的生物学作用，在维持表皮正常的生理功能中起着重要的作用，因此，角蛋白常用于护肤品领域中。
随着人们爱美意识的提高，医美市场现在迅猛发展，光子嫩肤、皮秒、水光针以及热玛吉等医美项目深受人们喜爱，由于做完医美项目后都需要采用医用面膜对皮肤进行快速补水和快速修复等；由于角蛋白具有较强的皮肤修复功能，因此现在市场上逐步将角蛋白应用到医用面膜中；但是，现有的医用面膜中添加角蛋白存在较大的难题，首先，1)传统方法都是得到角蛋白和可以使用的小分子物质，先用强酸或者强碱将存在于人体毛发、羊毛或者羽绒等进行水解；但是该步骤同时会导致角蛋白中一些有益的理化特性和氨基酸排序会在水解过程中完全被破坏，包括角蛋白分子变小、氨基酸的无规则排序及半胱氨酸含量明显降低；使得角蛋白面膜的抗氧化、快速修复等功能大打折扣；2)通过强酸和强碱处理得到的角蛋白分离过程及其复杂，工艺繁冗，并且最后也无法得到纯度较高的角蛋白，不符合医用面膜的标准；3)另外就是通过复杂分离后的角蛋白中仍然残留强酸强碱或者其他分离残留的物质，导致传统方法提取的角蛋白在医用面膜中直接使用的安全性较低；4)传统的水解角蛋白大多数都来自于动物组织，水解之后是多肽和氨基酸的混合物，实质上对人体皮肤的修复效果甚微，并且还容易出现皮肤过敏的情形。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种重组角蛋白医用面膜及其制备方法，解决了角蛋白应用在医用面膜中技术难度大、修复、抗氧化和补水效果甚微、不符合医用面膜的标准、安全性低以及皮肤容易出现皮肤过敏等技术问题。
为了实现前述发明目的，本发明提供了一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液30～40份、透明质酸钠22～26份、壳聚糖18～22份、甘油12～15份、牛油果脂13～17份，双丙甘醇9～13份、烟酰胺2～4份、海藻提取物15～20份、黄原胶10～14份、去离子水20～25份、稳定剂2～6份、抗菌剂1～3份；面膜浸润在面膜纸上。
优选地，所述面膜液包括重组角蛋白原液34～36份、透明质酸钠23～25份、壳聚糖19～21份、甘油13～15份、牛油果脂14～16份，双丙甘醇10～12份、烟酰胺2～4份、海藻提取物16～18份、黄原胶11～13份、去离子水21～23份、稳定剂3～5份、抗菌剂1～3份。
优选地，所述稳定剂为羟乙基纤维素。
优选地，所述抗菌剂为羟苯甲酯或羟苯丁酯或羟苯异丁酯。
如权利要求1-4中任一所述的重组角蛋白医用面膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；这样可以获得纯度高，结构稳定的角蛋白。
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至60～70℃，匀速搅拌10～15min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；这样使得重组角蛋白在医用面膜中存放时间长，并且重组角蛋白不会受到其他物质影响发生变质的情况，确保医用面膜的修复、抗氧化和补水效果。
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合5～10min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润70～80min得到医用面膜。
优选地，所述步骤S1中高压匀浆的压力为800～2000Bar，高压匀浆3～5次。
优选地，所述步骤S1中采用冷冻高速离心机收集上清液，所述冷冻高速离心机的分离转速为8000～12000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
1)本发明中研发了一种重组角蛋白的医用面膜，使得人们在做完皮秒、光子嫩肤、水光针等项目后，使用本发明的医用面膜能够对受损的皮肤进行快速修复和补水，加快皮肤的新陈代谢，能够快速修复针孔，消除红肿，避免感染，并且能够快速代谢黑色素，使得将医美的恢复周期从9-12天缩短到5-7天。
2)本发明在医用面膜中采用人源性重组角蛋白，重组蛋白原液分离提取过程较为简单，更重要的是在分离过程中不存在采用强酸和强碱水解人体毛发、羊毛或者羽绒等，从根本上避免了角蛋白提取过程中对一些有益的理化特性和氨基酸排序造成破坏，避免了角蛋白分子变小、氨基酸排序无规则和半胱氨酸含量明显降低的情形；因此，本发明中得到的角蛋白纯度高，角蛋白的结构稳定对皮肤的修复效果明显，还不会出现皮肤过敏的情形；使得制备得到医用面膜的抗氧化、快速修复和补水效果明显提升。
3)本发明中重组角蛋白的分离得到的重组角蛋白原液中重组角蛋白的含量能够达到90％以上，并且分离过程中不会残留强酸、强碱等有害物质，使得重组角蛋白原液复合医用面膜的标准，并且确保医用面膜的安全性高。
具体实施方式
下面对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本发明的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
实施例1
一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液30份、透明质酸钠22份、壳聚糖18份、甘油12份、牛油果脂13份，双丙甘醇9份、烟酰胺2份、海藻提取物15份、黄原胶10份、去离子水20份、羟乙基纤维素2份、羟苯甲酯1份；面膜浸润在面膜纸上。
采用如下的重组角蛋白医用面膜的制备方法，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，高压匀浆的压力为800Bar，高压匀浆3次；再采用冷冻高速离心机收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，所述冷冻高速离心机的分离转速为8000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min；最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；Ni亲和层析柱中的介质为Ni SMartBeads 6FF；
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；阴离子层析柱中的介质为Q Bestarose HighPerformance；
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至60℃，匀速搅拌10min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合5min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润70min得到医用面膜。
实施例2
一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液34份、透明质酸钠23份、壳聚糖19份、甘油13份、牛油果脂14份，双丙甘醇10份、烟酰胺2份、海藻提取物16份、黄原胶11份、去离子水21份、稳定剂3份、抗菌剂1份；面膜浸润在面膜纸上。
采用如下的重组角蛋白医用面膜的制备方法，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，高压匀浆的压力为1000Bar，高压匀浆4次；再采用冷冻高速离心机收集上清液，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，所述冷冻高速离心机的分离转速为9000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；Ni亲和层析柱中的介质为Ni NTA Beads 6FF；
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；阴离子层析柱中的介质为Q Sepharose HighPerformance；
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至62℃，匀速搅拌11min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合6min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润72min得到医用面膜。
实施例3
一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液35份、透明质酸钠24份、壳聚糖20份、甘油14、牛油果脂15份，双丙甘醇11份、烟酰胺3份、海藻提取物17份、黄原胶12份、去离子水22份、稳定剂4份、抗菌剂2份；面膜浸润在面膜纸上。
采用如下的重组角蛋白医用面膜的制备方法，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，高压匀浆的压力为1500Bar，高压匀浆4次；再采用冷冻高速离心机收集上清液，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，所述冷冻高速离心机的分离转速为10000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；Ni亲和层析柱中的介质为Ni-TED Purose 6Fast Flow。
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；阴离子层析柱中的介质为Q Beads6FF。
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至65℃，匀速搅拌12min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合7min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润75min得到医用面膜。
实施例4
一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液36份、透明质酸钠25份、壳聚糖21份、甘油15份、牛油果脂16份，双丙甘醇12份、烟酰胺4份、海藻提取物18份、黄原胶13份、去离子水23份、稳定剂5份、抗菌剂3份；面膜浸润在面膜纸上。
采用如下的重组角蛋白医用面膜的制备方法，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，高压匀浆的压力为1800Bar，高压匀浆4次；再采用冷冻高速离心机收集上清液，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，所述冷冻高速离心机的分离转速为11000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；Ni亲和层析柱中的介质为Ni-TED Purose 6FF。
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；阴离子层析柱中的介质为DEAE Bestarose HighPerformance。
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至68℃，匀速搅拌14min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合8min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润68min得到医用面膜。
实施例5
一种重组角蛋白医用面膜，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液40份、透明质酸钠26份、壳聚糖22份、甘油15份、牛油果脂17份，双丙甘醇13份、烟酰胺4份、海藻提取物20份、黄原胶14份、去离子水25份、羟乙基纤维素6份、羟苯甲酯3份；面膜浸润在面膜纸上。
采用如下的重组角蛋白医用面膜的制备方法，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，高压匀浆的压力为2000Bar，高压匀浆5次；再采用冷冻高速离心机收集上清液，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，所述冷冻高速离心机的分离转速为12000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min；最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；Ni亲和层析柱中的介质为Ni Sepharose 6Fast Flow。
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；阴离子层析柱中的介质为Q Bestarose Big Beads。
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至70℃，匀速搅拌15min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合10min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润80min得到医用面膜。
通过实施例1-5制备的出样品1、2、3、4、5，分别找10位刚做完光子嫩肤和水光针的1-10号患者，1、2号患者试用样品1，3、4号患者试用样品2，5、6号患者试用样品3，7、8号患者试用样品4，9、10号患者试用样品5，做完医美之后6h分别清洁面部后，分别敷上医用面膜，15min后取下面膜进行清洗，观察发现：1-10号患者的针孔和毛孔都有明显收缩，针孔周围的泛红症状明显改善，敷完面膜后基本无明显可见的泛红症状，并且面部颜色稍微加深，斑点明显加深；第二天继续早晚各敷一次，第二天晚上继续观察，5、6号的针孔完全闭合，7、8号患者的针孔也基本闭合，1、2、3、4和9、10还有少量针孔未完全闭合；第三天继续早晚各敷一次，第三天晚上继续观察，1-10号患者的针孔完全恢复，毛孔明显缩小，浅层斑代谢出来的细小斑点开始脱落，5、6号患者脸部的细小斑点脱落最明显，第四天继续早晚各敷一次，第四天晚上继续观察，1-10号患者脸部表层的斑点大部分脱落，5、6、7、8号医美患者脸部只能看到颜色较深的少量斑点；继续每天早晚各敷一次面膜，晚上继续观察，5、6、7、8号医美患者脸部的斑点基本在第5天完全脱落，皮肤状态恢复正常，皮肤光泽度较好；9、10号医美患者在第6天斑点基本完全脱落，皮肤恢复正常；1、2、3、4号医美患者在第低7天斑点基本完全脱落，皮肤恢复正常。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。

Claims (7)

1.一种重组角蛋白医用面膜，其特征在于，包括面膜液和面膜纸，按照质量份数计，所述面膜液包括重组角蛋白原液30～40份、透明质酸钠22～26份、壳聚糖18～22份、甘油12～15份、牛油果脂13～17份，双丙甘醇9～13份、烟酰胺2～4份、海藻提取物15～20份、黄原胶10～14份、去离子水20～25份、稳定剂2～6份、抗菌剂1～3份；面膜浸润在面膜纸上。
2.根据权利要求1所述的重组角蛋白医用面膜，其特征在于，所述面膜液包括重组角蛋白原液34～36份、透明质酸钠23～25份、壳聚糖19～21份、甘油13～15份、牛油果脂14～16份，双丙甘醇10～12份、烟酰胺2～4份、海藻提取物16～18份、黄原胶11～13份、去离子水21～23份、稳定剂3～5份、抗菌剂1～3份。
3.根据权利要求2所述的重组角蛋白医用面膜，其特征在于，所述稳定剂为羟乙基纤维素。
4.根据权利要求3所述的重组角蛋白医用面膜，其特征在于，所述抗菌剂为羟苯甲酯或羟苯丁酯或羟苯异丁酯。
5.如权利要求1-4中任一所述的重组角蛋白医用面膜的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，
S1、重组角蛋白原液的制备：
将表达重组角蛋白的大肠杆菌进行发酵，然后再将发酵后的大肠杆菌菌液离心获得菌泥，再将菌泥溶解于缓冲液后进行高压匀浆后，再进行离心收集上清液，将离心收集的上清液沉淀后用8M尿素溶解，最后离心过滤得到含有重组角蛋白的滤液；
采用Ni亲和层析柱对得到含有重组角蛋白的滤液进行分离，收集含重组角蛋白的洗脱缓冲液；
采用阴离子层析柱对得到的含重组角蛋白的洗脱缓冲液进行二次分离，收集二次洗脱缓冲液得到重组角蛋白原液；
S2、将透明质酸钠、黄原胶、牛油果脂和去离子水加入到真空乳化装置内，加热至60～70℃，匀速搅拌10～15min后停止加热，继续匀速搅拌冷却至常温得到乳液；
S3、将壳聚糖和甘油加入到重组角蛋白原液中，真空搅拌至均匀得到重组角蛋白混合液；
S4、将乳液、海藻提取物、双丙甘醇加入到重组角蛋白混合液超声搅拌混合5～10min停止；继续加入稳定剂和抗菌剂真空搅拌均匀得到面膜液；
S5、将面膜纸在面膜液中浸润70～80min得到医用面膜。
6.根据权利要求5所述的重组角蛋白医用面膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中高压匀浆的压力为800～2000Bar，高压匀浆3～5次。
7.根据权利要求5所述的重组角蛋白医用面膜的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中采用冷冻高速离心机收集上清液，所述冷冻高速离心机的分离转速为8000～12000r/min，分离温度为4℃，分离时间为10min。
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