CN110229861A - 一种改善脱发的动物胶制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：⑴将新鲜带毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，经紫外灯照射，得到辐照后的牦牛皮；⑵辐照后的牦牛皮切块，沸水提取后取出，用多刺板刺穿牦牛皮；⑶牦牛皮放入0.5%~10%的酶解液中酶解，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液；⑷酶解后的牦牛皮中加入水煮沸，得到滤液；⑸滤液中加入活性炭，充分搅拌后静置、过滤，得到滤渣；⑹滤渣放入0.5%~8%的酶解液中酶解，过滤，得到第二次酶解溶液；⑺将两次酶解溶液合并后煮沸、分离，得到上清液；⑻上清液采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，经冷冻干燥，即得牦牛胶。本发明方法简单、易于实施。
Description
技术领域
本发明涉及一种小分子肽和角蛋白的制备工艺，尤其涉及一种改善脱发的动物胶制备方法。
背景技术
毛发是身体状况的外在表现，按照中医理论，肾藏精，肝主血，其华在发，机体营养不良和新陈代谢异常，毛囊得不到充足的营养，造成脱发。毛发主要成份是角蛋白，由蛋白质、铁质、胱氨酸和半胱氨酸等物质构成及几十种微量元素。头发的营养来自毛囊组织，胶原蛋白能改善毛囊细胞生存环境和促进新发组织的新陈代谢，增加微循环，增加发质弹性、减少头发断裂等目的。
2019年1月31日日本研究人员在《Cell Stem cell》杂志上报告，动物实验证实毛根缺乏一种胶原蛋白可同时导致脱发和白发。
目前，对于牦牛皮的研究一直是以脱毛后的皮进行，忽略了牦牛毛的作用。牛毛主要是由角蛋白组成，具有氨基酸长链，角蛋白类似于胶原，有两种主要蛋白，一种为含硫元素较多的细胞间质蛋白，含有胱氨酸，而胱氨酸是一种含硫氨基酸，多含于角蛋白中，是人体必需的氨基酸之一，其具有促进细胞氧化还原、细胞增殖的功能，对人体没有不良效果。医药上有促进机体细胞氧化和还原机能，增加白血球和阻止病原菌发育等作用，并有维持蛋白质构型的作用。另一种为含硫较少的纤维质蛋白。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种方法简单、易于实施的改善脱发的动物胶制备方法。
为解决上述问题，本发明所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，经紫外灯照射，得到辐照后的牦牛皮；
⑵所述辐照后的牦牛皮切割成1~3cm的块，沸水中提取5~30分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮；
⑶将所述步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为0.5%~10%的酶解液中酶解，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液；所述牦牛皮与所述酶解液的质量比为1：10~1：20；
⑷所述酶解后的牦牛皮中加入其质量5~15倍的水煮沸5~40分钟，得到滤液；
⑸所述滤液中加入其质量3~10%的活性炭，充分搅拌后静置0.5~4小时，过滤，得到滤渣；
⑹所述滤渣放入质量浓度为0.5%~8%的酶解液中酶解，过滤，得到第二次酶解溶液；所述滤渣与所述酶解液的质量比为1：8~1：15；
⑺将所述第一次酶解溶液与所述第二次酶解溶液合并后煮沸5~40分钟，经离心分离，得到上清液；
⑻所述上清液采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后经冷冻干燥，即得牦牛胶。
所述步骤⑴中紫外灯照射条件是指辐射波长为200nm~275nm，照射时间为0.3~2.0小时。
所述步骤⑶中质量浓度为0.5%~10%的酶解液是指在1L去离子水中加入5~100g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
所述步骤⑶中酶解条件是指温度为30~65℃，时间为0.5~36小时。
所述步骤⑹中质量浓度为0.5%~8%的酶解液是指在1L去离子水中加入5~80g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
所述步骤⑹中酶解条件是指温度为30~45℃，时间为0.5~12小时。
所述蛋白酶是指菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、巯基蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶、链霉菌角质蛋白酶、酵母菌酶中的一种或两种及以上的复合物。
所述步骤⑺中离心分离的条件是指速率为15000~25000rpm，时间为5~60min。
所述步骤⑻中聚醚砜膜过滤的条件是指压力为0.08~0.2MPa，滤膜孔径为0.3~0.01μm。
所述步骤⑻中冷冻干燥的条件是指温度为-10~-50℃，时间为2~48小时。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明以青藏高原特有的优势畜种牦牛带毛的皮为原料，从带毛牦牛皮中提取纯天然的小分子肽和角蛋白，该牦牛皮小分子肽与头发具有良好的亲和力，能渗透头皮表皮，起到营养作用
2、本发明方法简单、易于实施，所得的动物胶可用于治疗继发性和产后性脱发。
具体实施方式
实施例1 一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，以275nm的波长经紫外灯照射2.0小时，得到辐照后的牦牛皮。
⑵辐照后的牦牛皮切割成3cm的块，沸水中提取30分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮。
⑶将步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为10%的酶解液中，于65℃酶解36小时，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液。
其中：质量浓度为10%的酶解液是指在1L去离子水中加入100g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指5g巯基蛋白酶、15g碱性蛋白酶、35g复合蛋白酶、35g链霉菌角质蛋白酶、10g酵母菌酶混合均匀所得的混合物。
牦牛皮与酶解液的质量比（g/g）为1：10。
⑷酶解后的牦牛皮中加入其质量5倍的水煮沸40分钟，得到滤液。
⑸滤液中加入其质量3%的活性炭，充分搅拌后静置4小时，过滤，得到滤渣。
⑹滤渣放入质量浓度为8%的酶解液中，于45℃酶解12小时，过滤，得到第二次酶解溶液。
其中：质量浓度为8%的酶解液是指在1L去离子水中加入80g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指19g菠萝蛋白酶、21g胃蛋白酶、5g胰蛋白酶、20g组织蛋白酶、2g木瓜蛋白酶、13g枯草杆菌蛋白酶混合均匀所得的混合物。
滤渣与酶解液的质量比（g/g）为1：15。
⑺将第一次酶解溶液与第二次酶解溶液合并后煮沸40分钟，以25000rpm速率离心分离60min，得到上清液。
⑻上清液在压力为0.2MPa、滤膜孔径为0.3~0.01μm的条件下，采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后于-10℃冷冻干燥2小时，即得牦牛胶。
实施例2 一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，以200nm的波长经紫外灯照射0.3小时，得到辐照后的牦牛皮。
⑵辐照后的牦牛皮切割成1cm的块，沸水中提取5分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮。
⑶将步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为0.5%的酶解液中，于30℃酶解0.5小时，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液。
其中：质量浓度为0.5%的酶解液是指在1L去离子水中加入5g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指0.3g菠萝蛋白酶、2.4g胃蛋白酶、0.5g胰蛋白酶、0.8g组织蛋白酶、0.6g木瓜蛋白酶、0.4g枯草杆菌蛋白酶混合均匀所得的混合物。
牦牛皮与酶解液的质量比（g/g）为1：20。
⑷酶解后的牦牛皮中加入其质量15倍的水煮沸5分钟，得到滤液。
⑸滤液中加入其质量10%的活性炭，充分搅拌后静置2小时，过滤，得到滤渣。
⑹滤渣放入质量浓度为0.5%的酶解液中，于30℃酶解0.5小时，过滤，得到第二次酶解溶液。
其中：质量浓度为0.5%的酶解液是指在1L去离子水中加入5g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指1g巯基蛋白酶、0.2g碱性蛋白酶、0.1g复合蛋白酶、2.4g链霉菌角质蛋白酶、1.3g酵母菌酶混合均匀所得的混合物。
滤渣与酶解液的质量比（g/g）为1：8。
⑺将第一次酶解溶液与第二次酶解溶液合并后煮沸5分钟，以15000rpm速率离心分离5min，得到上清液。
⑻上清液在压力为0.08MPa、滤膜孔径为0.3~0.01μm的条件下，采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后于-50℃冷冻干燥48小时，即得牦牛胶。
实施例3 一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，以223nm的波长经紫外灯照射1.0小时，得到辐照后的牦牛皮。
⑵辐照后的牦牛皮切割成2cm的块，沸水中提取15分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮。
⑶将步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为5%的酶解液中，于40℃酶解4小时，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液。
其中：质量浓度为5%的酶解液是指在1L去离子水中加入50g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指23g枯草杆菌蛋白酶、14g巯基蛋白酶、13g碱性蛋白酶混合均匀所得的混合物。
牦牛皮与酶解液的质量比（g/g）为1：15。
⑷酶解后的牦牛皮中加入其质量10倍的水煮沸20分钟，得到滤液。
⑸滤液中加入其质量5%的活性炭，充分搅拌后静置1.5小时，过滤，得到滤渣。
⑹滤渣放入质量浓度为6%的酶解液中，于40℃酶解6小时，过滤，得到第二次酶解溶液。
其中：质量浓度为6%的酶解液是指在1L去离子水中加入60g复合蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
滤渣与酶解液的质量比（g/g）为1：12。
⑺将第一次酶解溶液与第二次酶解溶液合并后煮沸30分钟，以23000rpm速率离心分离30min，得到上清液。
⑻上清液在压力为0.1MPa、滤膜孔径为0.3~0.01μm的条件下，采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后于-30℃冷冻干燥28小时，即得牦牛胶。
实施例4 一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，以245nm的波长经紫外灯照射0.5小时，得到辐照后的牦牛皮。
⑵辐照后的牦牛皮切割成3cm的块，沸水中提取10分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮。
⑶将步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为4%的酶解液中，于45℃酶解7小时，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液。
其中：质量浓度为4%的酶解液是指在1L去离子水中加入40g巯基蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
牦牛皮与酶解液的质量比（g/g）为1：16。
⑷酶解后的牦牛皮中加入其质量10倍的水煮沸10分钟，得到滤液。
⑸滤液中加入其质量8%的活性炭，充分搅拌后静置3小时，过滤，得到滤渣。
⑹滤渣放入质量浓度为7%的酶解液中，于45℃酶解8小时，过滤，得到第二次酶解溶液。
其中：质量浓度为7%的酶解液是指在1L去离子水中加入70g菠萝蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
滤渣与酶解液的质量比（g/g）为1：13。
⑺将第一次酶解溶液与第二次酶解溶液合并后煮沸15分钟，以19000rpm速率离心分离35min，得到上清液。
⑻上清液在压力为0.15MPa、滤膜孔径为0.3~0.01μm的条件下，采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后于-15℃冷冻干燥6小时，即得牦牛胶。
实施例5 一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，以225nm的波长经紫外灯照射1.5小时，得到辐照后的牦牛皮。
⑵辐照后的牦牛皮切割成1cm的块，沸水中提取25分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮。
⑶将步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为5.5%的酶解液中，于60℃酶解0.5小时，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液。
其中：质量浓度为5.5%的酶解液是指在1L去离子水中加入55g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指5g菠萝蛋白酶、8g链霉菌角质蛋白酶、12g酵母菌酶、2g胃蛋白酶、13g胰蛋白酶、10g组织蛋白酶、2g木瓜蛋白酶、3g枯草杆菌蛋白酶混合均匀所得的混合物。
牦牛皮与酶解液的质量比（g/g）为1：14。
⑷酶解后的牦牛皮中加入其质量8倍的水煮沸10分钟，得到滤液。
⑸滤液中加入其质量7.5%的活性炭，充分搅拌后静置2.5小时，过滤，得到滤渣。
⑹滤渣放入质量浓度为2%的酶解液中，于35℃酶解12小时，过滤，得到第二次酶解溶液。
其中：质量浓度为2%的酶解液是指在1L去离子水中加入20g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。蛋白酶是指9g巯基蛋白酶、3g碱性蛋白酶、8g复合蛋白酶混合均匀所得的混合物。
滤渣与酶解液的质量比（g/g）为1：13。
⑺将第一次酶解溶液与第二次酶解溶液合并后煮沸20分钟，以24500rpm速率离心分离10min，得到上清液。
⑻上清液在压力为0.16MPa、滤膜孔径为0.3~0.01μm的条件下，采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5 kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后于-25℃冷冻干燥18小时，即得牦牛胶。
上述实施例1~5中，蛋白酶还可以是菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、巯基蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶、链霉菌角质蛋白酶、酵母菌酶中的一种或两种及以上的复合物。
Claims (10)
1.一种改善脱发的动物胶制备方法，包括以下步骤：
⑴将新鲜带离皮1~2厘米毛的青藏高原牦牛皮清洗干净，经紫外灯照射，得到辐照后的牦牛皮；
⑵所述辐照后的牦牛皮切割成1~3cm的块，沸水中提取5~30分钟后取出，用多刺板刺穿牦牛皮；
⑶将所述步骤⑵所得的牦牛皮放入质量浓度为0.5%~10%的酶解液中酶解，过滤，分别得到酶解后的牦牛皮和第一次酶解溶液；所述牦牛皮与所述酶解液的质量比为1：10~1：20；
⑷所述酶解后的牦牛皮中加入其质量5~15倍的水煮沸5~40分钟，得到滤液；
⑸所述滤液中加入其质量3~10%的活性炭，充分搅拌后静置0.5~4小时，过滤，得到滤渣；
⑹所述滤渣放入质量浓度为0.5%~8%的酶解液中酶解，过滤，得到第二次酶解溶液；所述滤渣与所述酶解液的质量比为1：8~1：15；
⑺将所述第一次酶解溶液与所述第二次酶解溶液合并后煮沸5~40分钟，经离心分离，得到上清液；
⑻所述上清液采用聚醚砜膜过滤，截取分子量为40~75kDa的角蛋白液和分子量在5kDa以下的牦牛皮小分子肽，该角蛋白液和牦牛皮小分子肽合并后经冷冻干燥，即得牦牛胶。
2.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中紫外灯照射条件是指辐射波长为200nm~275nm，照射时间为0.3~2.0小时。
3.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中质量浓度为0.5%~10%的酶解液是指在1L去离子水中加入5~100g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
4.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中酶解条件是指温度为30~65℃，时间为0.5~36小时。
5.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑹中质量浓度为0.5%~8%的酶解液是指在1L去离子水中加入5~80g蛋白酶，混合均匀而得的溶液。
6.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑹中酶解条件是指温度为30~45℃，时间为0.5~12小时。
7.如权利要求3或5所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述蛋白酶是指菠萝蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、巯基蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶、链霉菌角质蛋白酶、酵母菌酶中的一种或两种及以上的复合物。
8.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑺中离心分离的条件是指速率为15000~25000rpm，时间为5~60min。
9.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑻中聚醚砜膜过滤的条件是指压力为0.08~0.2MPa，滤膜孔径为0.3~0.01μm。
10.如权利要求1所述的一种改善脱发的动物胶制备方法，其特征在于：所述步骤⑻中冷冻干燥的条件是指温度为-10~-50℃，时间为2~48小时。
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