CN112946110A - 一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法及其应用，属于食品检测技术领域。所述的快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：将肉制品搅碎后与乙腈和氢氧化钠溶液混合，加入氯化钠和无水硫酸钠，收集上清液；加入PSA和C18，充分混合，收集上层清液；将收集的上层清液于水浴中在氮气下吹干得到提取物，将所得提取物复溶，过滤后收集待测样品溶液，将待测样品溶液进行液相色谱‑质谱检测。本发明所述方法操作简便，能够大大减少实验操作时间，检出限和定量限低，减少有机试剂的使用，减少污染，并且价格低廉。

Description

一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法及其应用
技术领域
本发明属于食品检测技术领域，特别涉及一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法及其应用。
背景技术
杂环胺(HeterocyclicAmines，HAs)，存在于高温加热的含有蛋白质食物中。杂环胺主要分为两类，氨基咪唑并氮杂芳烃(AIA)和氨基咔啉(M.
Figure BDA0002923209420000011
K.Skog,P.Arvidsson,et al.Chemistry,formation and occurrence of genotoxicheterocyclic amines identified in model systems and cooked foods.1998,207(6):419-427.)。AIA是由肌酐、葡萄糖和氨基酸在150-250℃下经过美拉德反应生成。咔啉类杂环胺是在高于250℃下(Harman和Norharman除外)，经由氨基酸和蛋白质裂解生成。
国际癌症研究机构(IARC)将2-氨基-3-甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(IQ)定为2A级致癌物，即对人致癌性证据有限，但对动物致癌性证据充分的等级；并将2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑并[4,5-b]吡啶(PhIP)、2-氨基-3,4-二甲基咪唑并[4,5-f]喹啉(MeIQ)、2-氨基-3,8-二甲基咪唑并[4,5-f]喹喔啉(MeIQx)定为2B级致癌物，即可能致癌物(IARC(1993).Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans(Vol.56,pp.163–242).lyon:World Health Organization；International Agency for Research onCancer(IARC))。癌症是威胁国人健康的一大杀手。研究表明，杂环胺可能诱发食道癌、胃癌和前列腺等癌症。
目前国内尚未对杂环胺建立限量标准，且已有的杂环胺分离检测方法较为复杂，因此，建立一种快速分析检测杂环胺的方法非常有必要。
发明内容
本发明的首要目的在于提供一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法。
本发明的另一目的是提供上述快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法的应用。
本发明的上述目的通过以下方案予以实现：
一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)将肉制品搅碎后与乙腈和氢氧化钠溶液混合，涡旋，超声，加入氯化钠和无水硫酸钠，混匀，离心，收集上清液，重复上述操作，收集上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)和十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，充分混合，涡旋，离心，弃去固体，收集上层清液；
(3)将收集的上层清液于水浴中在氮气下吹干得到提取物，将所得提取物复溶，过滤后收集待测样品溶液，将待测样品溶液进行液相色谱-质谱检测。
步骤(1)中所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.5～2.5mol/mL；更优选为1mol/mL。
步骤(1)中所述的乙腈与氢氧化钠优选按体积比6:4计算。乙腈作为提取溶剂，与杂环胺具有很好的溶解性，同时乙腈能沉淀蛋白质，不溶于油脂，避免了肉制品组分中蛋白质和脂肪的干扰；相比于其他有机溶剂如乙酸乙酯和二氯甲烷，乙腈提高了杂环胺的提取效率和回收率。
步骤(1)中所述的肉制品与乙腈优选按质量(g)与体积(mL)比2:4～8计算；更优选按2:6计算。
步骤(1)中所述的涡旋优选通过涡旋振荡器进行；所述的涡旋的时间为1～40min；更优选为5min。
上述涡旋条件和氢氧化钠溶液浓度条件下，氢氧化钠和鸡肉能够充分接触，从而提高杂环胺类化合物的提取效率和回收率，同时使液体呈碱性，碱性条件下有利于杂环胺类化合物更好地从肉制品里溶解释放出来。
步骤(1)中所述的超声的时间优选为1～40min；更优选为30min。该超声条件能够提升杂环胺类化合物的提取效率，同时提高杂环胺类化合物的回收率；超声后的离心操作能让固体杂质从提取液中分离出去，从而减少后续检测过程中基质对检测杂环胺类化合物的影响。
步骤(1)中所述的肉制品、氯化钠和无水硫酸钠优选按质量比1～50:1～10:1～10计算；更优选按1:1:2计算。
本发明中，乙腈和水互溶，氯化钠和无水硫酸钠能吸收提取溶剂中的多余的水分，从而减少了氮气下吹干过程中所需要的时间，同时氯化钠和无水硫酸钠能吸附提取物中的蛋白质、碳水化合物和色素等杂质，使提取液更澄清，从而减少提取液中的杂质对后续检测步骤的干扰。
步骤(1)中所述的离心的转速优选为8489～15832g，时间为1～80min；更优选为8489g离心3min。
步骤(1)中所述的重复的次数优选为至少2次；更优选为2次。
步骤(2)中所述的PSA和C18优选按质量比100～500:30～50计算；进一步优选按质量比200～300:30～50计算；更优选按质量比190～200:38～40计算。本发明以PSA和C18作为吸附剂，PSA能有效吸附极性干扰物质，如：脂肪酸、其他有机酸、糖和色素；C18能有效吸附脂肪，但两者并不会吸附杂环胺类化合物；而且，PSA和C18按质量比190～200:38～40加入时，杂环胺类化合物的回收率最高。
步骤(2)中所述的涡旋的时间优选为1～50min；更优选为4～5min。
步骤(2)中所述的离心的时间优选为1～80min；更优选为3min。
步骤(3)中所述的水浴的温度优选为30～50℃。水浴温度控制在30～50℃之间，既能加快提取液中乙腈的挥发，又不会影响到杂环胺类化合物的回收率。
步骤(3)中所述的复溶的溶剂优选为甲醇。
步骤(3)中所述的过滤优选通过微孔滤膜过滤；更优选通过0.2μm微孔滤膜过滤。
步骤(4)中所述的液相色谱-质谱检测的条件优选为采用Phenomena Kinetex C18柱，流动相A为添加0.1％甲酸的乙酸铵溶液，其中乙酸铵的浓度为1mmol/L；流动相B为乙腈，流速为0.3μL/min，进样量为5μL，采用MRM模式进行质谱检测；
所述的液相色谱柱的洗脱梯度为：
0～0.5min，95％流动相A，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％流动相A，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％流动相A，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％流动相A，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％流动相A，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％流动相A，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％流动相A，5％乙腈。
在上述洗脱梯度下，不同种类的杂环胺能很好的分离，特别是其中最难分离的同分异构体2-氨基-3,4,8-三甲基咪唑并[4,5-f]喹喔啉(4，8-DiMeIQx)和2-氨基-3,7,8-三甲基咪唑并[4,5-f]喹喔啉(7，8-DiMeIQx)都能实现很好的分离。
所述的液相色谱-质谱检测的质谱条件优选为：离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization，ESI)；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控(multiple reaction monitoring，MRM)；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
在上述质谱条件下，各杂环胺的质谱响应良好，检出限和定量限低，重现性好。
所述的快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法在食品检测中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的优点及有益效果：
(1)本发明使用乙腈与氢氧化钠体积比为6:4，避免了提取效率低的乙酸乙酯和二氯甲烷减少有机试剂的使用，减少污染。使用PSA添加量在100-500mg之间，C18添加量在30-50mg之间时，能够有效避免使用常规方法中的固相萃取柱，节约实验成本，提高回收效率。
(2)本发明所述方法操作简便，能够大大减少实验操作时间，检出限和定量限低，减少有机试剂的使用，减少污染，并且价格低廉。本发明所述方法能够满足国标要求，为肉制品中杂环胺的快速筛查和定量分析提供了新的理论和实践方法支持。
(3)本发明提供的杂环胺类物质检测方法与其他方法相比，具有操作简单、快速、回收率高和重现性好等特点。
附图说明
图1为实施例1中加杂环胺类化合物标准品溶液的猪肉样品中的液相色谱-质谱检测结果图；其中，其中，1代表IQ；2代表MeIQ；3代表DMIP；4代表Glu-p-2；5代表IQx；6代表Glu-p-1；7代表MeIQx；8代表Norharman；9代表7,8-DiMeIQx；10代表4,8-DiMeIQx；11代表Harman；12代表PhIP；13代表Trp-P-2；14代表AαC；15代表Trp-P-1；16代表MeAαC。
图2为实例2中烤鸡肉的杂环胺类化合物的液相色谱-质谱检测结果图；其中，2.33min时的峰代表DMIP；7.40min时的峰代表Harman；8.82min时的峰代表AαC；9.04min时的峰代表Trp-P-1。
图3为实施例2中烤猪肉样品中杂环胺类化合物的液相色谱-质谱检测结果图；其中，2.25min时的峰代表IQ；4.80min时的峰代表MeIQx；7.40min时的峰代表Harman；8.82min时的峰代表AαC。
图4为实施例3中鲳鱼烤肉的杂环胺类化合物的液相色谱-质谱检测结果图；其中，2.51min时的峰代表Glu-p-2；3.92min时的峰代表Glu-p-1；6.16min时的峰代表Norharman；8.63min时的峰代表PhIP。
图5为实施例4中加入4,8-DiMeIQx和7,8-DiMeIQx两种杂环胺标准品混合溶液的空白鸡肉样品的液相色谱-质谱检测结果图；其中6.45min时的峰代表7,8-DiMeIQx；6.63min时的峰代表4,8-DiMeIQx。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中所涉及的试剂、方法，如无特殊说明，均为本领域常用的试剂和方法，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
实施例1
液相色谱条件：色谱柱：Phenomena Kinetex C18柱(100mm*3mm 2.6μm)，进样量5μL，柱温40℃，流速为0.3mL/min。流动相A：添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液，流动相B：乙腈。流动相体系中添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的体积百分比随时间的变化(即洗脱梯度)如下：
0～0.5min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization，ESI)；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控(multiple reaction monitoring，MRM)；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
一种快速检测烤鸡肉粉末中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)准确称取不含杂环胺的空白猪肉(广东省广州市市售得到)样品2g，用移液枪准确加入浓度各为1ppm的16种杂环胺标准品混合溶液100μL，搅碎后加入4mL 1mol/mLNaOH溶液，6mL乙腈，利用涡旋振荡器涡旋5min，超声提取30min，得到提取混合物；向上述提取混合物中加入2g氯化钠和4g无水硫酸钠，充分混匀，8489g离心3min，取上层清液，重复以上提取步骤2次，合并上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入200mg乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)和40mg十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，充分混合，涡旋5min，离心3min，弃去固体，收集上层清液；
(3)将上层清液转移到氮吹管，并于40℃水浴吹干得到提取物，将所得提取物用1mL甲醇复溶，过0.2μm微孔滤膜到进样瓶，进行液相色谱-质谱检测。
检测结果如图1所示。从图1可知，本发明所述方法可以将猪肉样品中存在的16种加标杂环胺类化合物分离并检测出来。
杂环胺类化合物标准品的标准曲线方程和检测方法学参数分别如下表1和2所示。
杂环胺类化合物标准品的标准曲线方程如表1所示：
表1：
Figure BDA0002923209420000051
Figure BDA0002923209420000061
杂环胺类化合物的检测方法学参数如下表2所示。
表2：
Figure BDA0002923209420000062
实施例2
液相色谱条件：色谱柱：Phenomena Kinetex C18柱(100mm*3mm 2.6μm)，进样量5μL，柱温40℃，流速为0.3mL/min。流动相A：添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液，流动相B：乙腈。流动相体系中添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的体积百分比随时间的变化(即洗脱梯度)如下：
0～0.5min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization，ESI)；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控(multiple reaction monitoring，MRM)；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)分别准确称取2g烤肉(烤鸡肉和烤猪肉，二者均为广东省广州市市售得到)，搅碎后分别放入不同的容器中，加入4mL 1mol/mL NaOH溶液，6mL乙腈，涡旋5min，超声提取30min，得到提取混合物；向上述提取混合物中加入2g氯化钠和4g无水硫酸钠，充分混匀，8489g离心3min，取上层清液，重复以上提取步骤2次，合并上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入190mg乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)和38mg十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，充分混合，涡旋4min，离心3min，弃去固体，收集上层清液；
(3)将上层清液转移到氮吹管，并于40℃水浴吹干得到提取物，将所得提取物用1mL甲醇复溶，过0.2μm微孔滤膜到进样瓶，进行液相色谱-质谱检测。
检测结果如图图2和3所示。从图2可知，经检测该烤鸡肉样品中含有Trp-p-1、AαC、Harman和DMIP共计四种杂环胺类化合物。从图3可知，经检测该烤猪肉样品中含有AαC、Harman、MeIQx和IQ共计四种杂环胺类化合物。
实施例3
液相色谱条件：色谱柱：Phenomena Kinetex C18柱(100mm*3mm 2.6μm)，进样量5μL，柱温40℃，流速为0.3mL/min。流动相A：添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液，流动相B：乙腈。流动相体系中添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的体积百分比随时间的变化(即洗脱梯度)如下：
0～0.5min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization，ESI)；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控(multiple reaction monitoring，MRM)；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)取鲳鱼烤肉(广东省广州市市售得到)搅碎后，准确称取2g，加入4mL 1mol/mLNaOH溶液，6mL乙腈，涡旋5min，超声提取30min，得到提取混合物；向上述提取混合物中加入2g氯化钠和4g无水硫酸钠，充分混匀，8489g离心3min，取上层清液，重复以上提取步骤2次，合并上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入200mg乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)和40mg十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，充分混合，涡旋5min，离心3min，弃去固体，收集上层清液；
(3)将上层清液转移到氮吹管，并于40℃水浴吹干得到提取物，将所得提取物用1mL甲醇复溶，过0.2μm微孔滤膜到进样瓶，进行液相色谱-质谱检测。
检测结果如图4所示。从图4可知，经检测该鲳鱼烤肉中含有Glu-p-1、Norharman、PhIP和Glu-p-2共计4种杂环胺类化合物。
实施例4
液相色谱条件：色谱柱：Phenomena Kinetex C18柱(100mm*3mm 2.6μm)，进样量5μL，柱温40℃，流速为0.3mL/min。流动相A：添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液，流动相B：乙腈。流动相体系中添加0.1％甲酸的1mmol/L乙酸铵溶液和乙腈的体积百分比随时间的变化(即洗脱梯度)如下：
0～0.5min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％含0.1％甲酸的乙酸铵溶液，5％乙腈。
质谱条件：离子源：电喷雾离子源(Electrospray ionization，ESI)；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控(multiple reaction monitoring，MRM)；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，包括如下步骤：
(1)准确称取不含杂环胺的空白猪肉(广东省广州市市售得到)样品2g，搅碎后，用移液枪准确加入浓度各为1ppm的4,8-DiMeIQx和7,8-DiMeIQx两种杂环胺标准品混合溶液100μL，加入4mL 1mol/mL NaOH溶液，6mL乙腈，涡旋5min，超声提取30min，得到提取混合物；向上述提取混合物中加入2g氯化钠和4g无水硫酸钠，充分混匀，8489g离心3min，取上层清液，重复以上提取步骤2次，合并上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入200mg乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)和40mg十八烷基硅烷键合硅胶(C18)，充分混合，涡旋5min，离心3min，弃去固体，收集上层清液；
(3)将上层清液转移到氮吹管，并于40℃水浴吹干得到提取物，将所得提取物用1mL甲醇复溶，过0.2μm微孔滤膜到进样瓶，进行液相色谱-质谱检测。
检测结果如图5所示。从图可知，4,8-DiMeIQx和7,8-DiMeIQx出峰不重叠，说明本方法能很好的分离4,8-DiMeIQx和7,8-DiMeIQx两种同分异构体杂环胺类化合物。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将肉制品搅碎后与乙腈和氢氧化钠溶液混合，涡旋，超声，加入氯化钠和无水硫酸钠，混匀，离心，收集上清液，重复上述操作，收集上清液；
(2)向步骤(1)的上清液中加入PSA和C18，充分混合，涡旋，离心，弃去固体，收集上层清液；
(3)将收集的上层清液于水浴中在氮气下吹干得到提取物，将所得提取物复溶，过滤后收集待测样品溶液，将待测样品溶液进行液相色谱-质谱检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(1)中所述的氢氧化钠溶液的浓度为0.5～2.5mol/mL；
步骤(1)中所述的乙腈与氢氧化钠按体积比6:4计算；
步骤(1)中所述的肉制品与乙腈按质量g与体积mL比2:4～8计算；
步骤(1)中所述的涡旋的时间为1～40min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的超声的时间为1～40min；
步骤(1)中所述的肉制品、氯化钠和无水硫酸钠按质量比1～50:1～10:1～10计算；
步骤(1)中所述的离心的转速为8489～15832g，时间为1～80min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(2)中所述的PSA和C18按质量比100～500:30～50计算；
步骤(2)中所述的涡旋的时间为1～50min；
步骤(2)中所述的离心的时间为1～80min。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的PSA和C18按质量比200～300:30～50计算。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的PSA和C18按质量比190～200:38～40计算。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的水浴的温度为30～50℃；
步骤(3)中所述的复溶的溶剂为甲醇；
步骤(3)中所述的过滤通过微孔滤膜过滤。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的液相色谱-质谱检测的条件为采用Phenomena Kinetex C18柱，流动相A为添加0.1％甲酸的乙酸铵溶液，其中乙酸铵的浓度为1mmol/L；流动相B为乙腈，流速为0.3μL/min，进样量为5μL，采用MRM模式进行质谱检测；
所述的液相色谱柱的洗脱梯度为：
0～0.5min，95％流动相A，5％乙腈；
0.5～7min，95％～85％流动相A，5％～15％乙腈；
7～9.5min，85％～40％流动相A，15％～60％乙腈；
9.5～9.6min，40％～5％流动相A，60％～95％乙腈；
9.6～11min，5％流动相A，95％乙腈；
11～11.5min，5％～95％流动相A，95％～5％乙腈；
11.5～13min，95％流动相A，5％乙腈。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
所述的液相色谱-质谱检测的质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式；监测方式：多反应监控；气帘气：40psi；针电流：3mA；离子化温度：500℃；喷雾电压：5KV；碰撞气：中等。
10.权利要求1～9任一所述的快速检测肉制品中的杂环胺类化合物的方法在食品检测中的应用。
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