CN112946094B - 一种养心安眠胶囊hplc特征图谱构建方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：A)取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50～70％乙醇；B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈0.05％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，以芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素为参照物，建立了养心安眠胶囊HPLC特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对养心安眠胶囊的质量进行控制。

Description

一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，尤其是涉及一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法。
背景技术
中成药养心安眠胶囊组方组成为鹿心(鲜)、鹿血(鲜)、茯苓、酸枣仁、龙眼肉、五味子等组成，其质量标准收载于WS-5740(B-0740)-2014Z中，包含五味子薄层鉴别、酸枣仁薄层鉴别、甘草薄层鉴别、水牛角浓缩粉薄层鉴别；五味子乙素双波长扫描含量测定。
中药复方是中医临床用药的主要形式，其质量是临床疗效的关键。如何建立科学合理的、体现中药复方特点的质量控制方法就显得尤为重要，而中药复方质量控制方法一直是中药科研领域热点研究方向之一。如何科学合理选定质量控制的特征有效指标性成分，对中药复方进行有效的质量控制，是建立中药复方质量控制方法的关键所在。
现有技术中对五味子、酸枣仁、甘草进行定性研究，含量测定方法专属性及重现性差，且检测设备的灵敏度低，操作繁琐。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，本发明构建的养心安眠胶囊HPLC特征图谱方法稳定，可靠，可以对养心安眠胶囊的质量进行控制。
本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：
A)取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50～70％乙醇；
B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；
所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。
优选的，还包括制备参照物溶液：分别取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素和五味子乙素，采用甲醇溶解，得到参照物溶液；
将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的成分进行定性。
优选的，所述参照物溶液的浓度具体为：芒果苷25～75μg/mL、五味子醇甲25～100μg/mL、甘草酸铵25～75μg/mL、五味子甲素25～75μg/mL和五味子乙素25～75μg/mL。
优选的，所述梯度洗脱具体为：
0～20min，A相：5～35％、B相：95～65％；
20～21min，A相：35～50％、B相：65～50％；
21～50min，A相：50～100％、B相：50～0％。
优选的，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，规格为5μm，4.6×250mm；
流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温30℃～40℃，检测波长为220nm～260nm；进样量为5～15μL。
优选的，所述流动相流速为1mL/min；柱温30℃，检测波长为230nm，进样量为5～10μL。
优选的，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的相似度进行评价，得到由10个特征峰构成的养心安眠胶囊HPLC标准特征图谱，其中峰2为芒果苷，峰3为甘草苷峰，峰4(S)为五味子醇甲峰，峰8为五味子甲素峰，峰10为五味子乙素峰。
优选的，在所述标准特征图谱中，以五味子醇甲峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±2％之内，所述规定值分别为：0.24-峰1、0.41-峰2、0.60-峰3、1.00-峰4、1.05-峰5、1.12-峰S、1.22-峰7、1.39-峰8、1.44-峰9、1.45-峰10。
优选的，步骤A)所述溶剂溶解后为超声处理，所述超声处理的时间为20～40min。
优选的，步骤A)所述养心安眠胶囊的质量g和溶剂的体积mL的比为(0.5～2)：(20～50)。
与现有技术相比，本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：A)取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50～70％乙醇；B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈0.05％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，以芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素为参照物，建立了养心安眠胶囊HPLC特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对养心安眠胶囊的质量进行控制。
附图说明
图1是本发明实施例2制备的养心安眠胶囊HPLC的特征图谱；
图2是本发明实施例5中10批次养心安眠胶囊的特征图谱叠加图；
图3是本发明对比例1流动相梯度条件1色谱图；
图4是本发明对比例1流动相梯度条件2色谱图；
图5是本发明对比例1流动相梯度条件3色谱图；
图6为本发明对比例2的色谱参数下的色谱图；
图7为本发明对比例3的色谱参数下的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：
A)取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50～70％乙醇；
B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；
所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。
本发明提供的一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法首先将取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液。所述溶剂优选为甲醇或50～70％乙醇；更优选为50～70％乙醇。
具体为将养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，超声处理，放冷，用溶剂补足减少的重量，摇匀，滤过，即得。
所述溶剂溶解后为超声处理，所述超声处理的时间优选为20～40min；更优选为20～30min；最优选为20～25min。
其中，所述养心安眠胶囊的质量g和溶剂的体积mL的比优选为(0.5～2)：(20～50)；更优选为(0.8～1.8)：(25～45)；最优选为1：25。
本发明还包括制备参照物溶液：分别取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素和五味子乙素，采用甲醇溶解，得到参照物溶液；
其中，所述参照物溶液的浓度优选具体为：芒果苷25～75μg/mL、五味子醇甲25～100μg/mL、甘草酸铵25～75μg/mL、五味子甲素25～75μg/mL和五味子乙素25～75μg/mL；更优选的，芒果苷50μg/mL、五味子醇甲100μg/mL、甘草酸铵50μg/mL、五味子甲素50μg/mL和五味子乙素30μg/mL。
将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱。
将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，分别得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的成分进行定性。
本发明所述流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。
本发明所述梯度洗脱优选具体为：
0～20min，A相：5～35％、B相：95～65％；
20～21min，A相：35～50％、B相：65～50％；
21～50min，A相：50～100％、B相：50～0％。
本发明在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。
本发明所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，规格为5μm，4.6×250mm；
流动相流速优选为0.8～1.2mL/min；更优选为0.9～1.1mL/min；最优选为1mL/min。
本发明发现流速1ml/min下各色谱峰分离较好，峰形较对称，作为最优选方案。
本发明柱温优选为30℃～40℃，更优选为30℃。
本发明考察了不同柱温下色谱峰的分离效果。30℃为最优选方案。
本发明检测波长优选为220nm～260nm；更优选为230nm。
本发明人发现，在230nm处色谱信息丰富，各成分均有较好吸收，响应值适中，各峰分离度较好，基线平稳。
本发明进样量为5～15μL；优选为5～10μL。
本发明的有益效果是，一个液相色谱条件下，以指纹图谱控制养心安眠胶囊的物质群，以取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素和五味子乙素对照品对指纹图谱进行定位；能够大大降低检测的成本，实现定性检测。
本发明采用国家药典委员会的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的相似度进行评价，得到由10个特征峰构成的养心安眠胶囊HPLC标准特征图谱。其中峰2为芒果苷，峰3为甘草苷峰，峰4(S)为五味子醇甲峰，峰8为五味子甲素峰，峰10为五味子乙素峰。
在所述标准特征图谱中，以五味子醇甲峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±2％之内，所述规定值分别为：0.24-峰1、0.41-峰2、0.60-峰3、1.00-峰4、1.05-峰5、1.12-峰S、1.22-峰7、1.39-峰8、1.44-峰9、1.45-峰10。
质量判断标准：取养心安眠胶囊样品，按上述同法操作，得到养心安眠胶囊特征图谱，采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2012版对养心安眠胶囊标准特征图谱和样品特征图谱进行分析，相似度大于0.90。
采用本发明所提供的方法能有效的监控不同批次养心安眠胶囊的质量，使其质量稳定，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。
本发明建立的养心安眠胶囊特征图谱以芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素为参照物，注重各个特征峰的顺序和与药材及中间产品的相关性，能全面评价产品的整体质量面貌特征，方法科学可靠。
采用本发明中方法用DAD检测器对养心安眠胶囊进行测定，根据三维扫描图中所有色谱峰出现最大吸收的检测波长结果分别调取各波长下色谱图，当检测波长为230nm时，特征峰数目较多，基线平稳，峰面积适中，且各特征峰之间分离效果也最好。
本发明提供了一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：A)取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50～70％乙醇；B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％磷酸溶液，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈0.05％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱，以芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素为参照物，建立了养心安眠胶囊HPLC特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对养心安眠胶囊的质量进行控制。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法进行详细描述。
实施例1：一种养心安眠胶囊HPlC特征图谱的构建方法
仪器：UltiMate 3000高效液相色谱仪，紫外DAD检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂：甲醇等为分析纯，磷酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
试药：芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素(均来自中国食品药品鉴定研究院)。
方法与结果
(1)取养心安眠胶囊内容物约1g，精密称定，精密加入70％乙醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
(2)参照物溶液的制备：取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含芒果苷50μg、五味子醇甲100μg、甘草酸苷50μg、五味子甲素50μg、五味子乙素30μg的溶液，即得。
(3)测定：以Agilent ZORBAX SB-C18柱为色谱柱；紫外检测波长为230nm；流速为0.8ml/min；柱温为30℃。以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱的时间及流动相比例如表2所示：
表2养心安眠胶囊特征图谱流动相时间及梯度
Figure BDA0002803733500000071
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊的HPLC特征图谱。
实施例2：一种养心安眠胶囊HPlC特征图谱的构建方法
仪器：UltiMate 3000高效液相色谱仪，紫外DAD检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂：甲醇等为分析纯，磷酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
试药：芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素(均来自中国食品药品鉴定研究院)。
方法与结果
(1)供试品溶液的制备：取养心安眠胶囊内容物约2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
(2)参照物溶液的制备：取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含芒果苷50μg、五味子醇甲100μg、甘草酸苷50μg、五味子甲素50μg、五味子乙素30μg的溶液，即得。
(3)测定：以Agilent ZORBAX SB-C18柱为色谱柱；紫外检测波长为230nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱的时间及流动相比例如表3所示：
表3养心安眠胶囊特征图谱流动相时间及梯度
Figure BDA0002803733500000081
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊的HPLC特征图谱，如图1所示。
实施例3：一种养心安眠胶囊HPlC特征图谱的构建方法
仪器：UltiMate 3000高效液相色谱仪，紫外DAD检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂：甲醇等为分析纯，磷酸、乙腈为色谱纯，水为超纯水。
试药：芒果苷、甘草苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素(均来自中国食品药品鉴定研究院)。
方法与结果
(1)供试品溶液的制备：取养心安眠胶囊内容物约3g，精密称定，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得；
(2)参照物溶液的制备：取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含芒果苷50μg、五味子醇甲100μg、甘草酸苷50μg、五味子甲素50μg、五味子乙素30μg的溶液，即得。
(3)测定：以Agilent ZORBAX SB-C18柱为色谱柱；紫外检测波长为258nm；流速为1.0ml/min；柱温为40℃。以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱的时间及流动相比例如表4所示：
表4养心安眠胶囊特征图谱流动相时间及梯度
Figure BDA0002803733500000091
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊的HPLC的特征图谱。
实施例4：养心安眠胶囊特征图谱测定方法学考察
精密度试验：取养心安眠胶囊，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，连续进样6次，依法检测。结果：6次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2％，表明仪器精密度良好。
稳定性试验：取养心安眠胶囊，按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，分别在0、2、4、8、12小时依法进行检测。结果：5次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2％，表明供试品溶液在12小时之内稳定。
重复性试验：取同一批养心安眠胶囊，按供试品溶液制备方法制成制备6份供试品溶液，依法测定。结果：6次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2％，表明方法的重复性较好。
实施例5：构建养心安眠胶囊的对照特征图谱
取养心安眠胶囊10批，按实施例2的条件进行测定，得到10批次样品HPLC特征图谱，如图2所示。采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对10批特征图谱进行比较，确定共有特征峰，生成由10个共有峰构成的对照特征图谱，如图3所示。其中参照峰为五味子醇甲峰(4号峰)。
相似度分析:计算10批供试品特征图谱与生成的对照特征图谱的相似度，结果均大于0.90。相似度比较结果如表5所示。
表5养心安眠胶囊HPLC特征图谱相似度评价结果
Figure BDA0002803733500000092
Figure BDA0002803733500000101
对比例1：养心安眠胶囊特征图谱色谱条件及供试品溶液制备方法选择
仪器：UltiMate 3000高效液相色谱仪，紫外DAD检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂：甲醇等为分析纯，磷酸、乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水。
方法与结果
(1)流动相的选择：分别采用①乙腈-水、②甲醇-水、③乙腈-0.05％磷酸溶液作为流动相进行测定。结果，以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相时，色谱图中各色谱峰分离度、不对称度均较好，基线平稳，如图4、图5和图6所示。
(2)流动相比例选择：为达到最佳分离效果，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，对不同流动相比例进行考察，洗脱过程中流动相A、B的比例变化分别为：
①0～60min，A相：5～100％、B相：95～0％；
②0～20min，A相：5～50％、B相：95～50％；20～50min，A相：50～100％、B相：50～0％；
③0～20min，A相：5～35％、B相：95～65％；20～21min，A相：35～50％、B相：65～50％；21～50min，A相：50～100％、B相：50～0％；
结果表明，采用乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相，按比例③进行梯度洗脱所得色谱图中各色谱峰分离度优于①和②，结果如图3、4、5所示。
(3)供试品提取溶剂的选择：取养心安眠胶囊样品，分别以甲醇、50％乙醇、70％乙醇为提取溶剂，考察3种不同溶剂对提取结果的影响。结果表明，以50％乙醇与70％乙醇为溶剂时，各色谱峰分离效果较好。
(4)供试品提取溶剂加入量选择：取养心安眠胶囊样品，分别加入甲醇25ml、50ml，考察不同溶剂量对提取结果的影响。结果，溶剂量为25ml和50ml提取供试品中色谱峰数目及分离效果无差异，故确定最优溶剂加入量为25ml。
(6)供试品提取时间考察：取养心安眠胶囊样品，分别超声处理15、20、25分钟，考察不同提取时间对提取结果的影响。结果，超声处理15、20、25分钟的供试品色谱图中，峰数目和分离效果无差异，超声处理20和25分钟提取效率无明显差异但色谱峰大小均高于超声处理15分钟，故确定最优超声时间为20分钟。
对比例2(方法为专利号CN105535395A梯度条件)
以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，梯度条件为0～7min，A相为10～17％，B相为90～83％；7～8min A相为17～20％，B相为83～80％；8～23min A相为20％，B相为80％；23～30min A相为20～25％，B相为80～75％；30～50min A相为25～30％，B相为75～70％。检测波长为230nm，流速为1.0ml/min；柱温30℃。
结果，色谱峰个数较少，且主要集中在后端，采用此流动相，基线陡度较大，分离效果也不好。不能较好的表征养心安眠胶囊的成分。见图6，图6为本发明对比例2的色谱参数下的色谱图。
对比例3(方法为专利号CN 110045039 A梯度条件)
以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，梯度洗脱条件为0～16min，A相为16％，B相为84％；16～30min A相为16～25％，B相为84～75％；30～40min A相为25％，B相为75％；40～41min A相为25～48％，B相为75～52％；41～60min A相为48～35％，B相为52～65％。检测波长为230nm，流速为1.0ml/min；柱温30℃。
结果，色谱峰个数较少，不能较好的表征养心安眠胶囊的成分。见图7，图7为本发明对比例3的色谱参数下的色谱图。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种养心安眠胶囊HPLC特征图谱构建方法，包括：
A )取养心安眠胶囊内容物，溶剂溶解，得到待测液；所述溶剂为甲醇或50~70%乙醇；
B）将待测液采用高效液相色谱法测定，得到养心安眠胶囊HPLC特征图谱；还包括制备参照物溶液：分别取芒果苷、五味子醇甲、甘草酸铵、五味子甲素和五味子乙素，采用甲醇溶解，得到参照物溶液；
将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的成分进行定性；
所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；检测波长为230nm，流动相A为乙腈，流动相B为0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：
0～20min，A相：5～35%、B相：95～65%；
20～21min，A相：35～50%、B相：65～50%；
21～50min，A相：50～100%、B相：50～0%。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述参照物溶液的浓度具体为：芒果苷25~75μg/mL、五味子醇甲25~100μg/mL、甘草酸铵25~75μg/mL、五味子甲素25~75μg/mL和五味子乙素25~75μg/mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱，规格为5μm，4.6×250mm；
流动相流速为0.8～1.2mL/min；柱温30℃～40℃，进样量为5~15μL。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为1mL/min；柱温30℃，进样量为5~10μL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对养心安眠胶囊HPLC特征图谱的相似度进行评价，得到由10个特征峰构成的养心安眠胶囊HPLC标准特征图谱，其中峰2为芒果苷，峰3为甘草酸铵峰，峰4（S）为五味子醇甲峰，峰8为五味子甲素峰，峰10为五味子乙素峰。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在所述标准特征图谱中，以五味子醇甲峰为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±2％之内，所述规定值分别为：0.24-峰1、0.41-峰2、0.60-峰3、1.00-峰4、1.05-峰5、1.12-峰S、1.22-峰7、1.39-峰8、1.44-峰9、1.45-峰10。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A）所述溶剂溶解后为超声处理，所述超声处理的时间为20~40min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A）所述养心安眠胶囊的质量g和溶剂的体积mL的比为（0.5~2）：（20~50）。
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