CN112931225B - 一种棱果花组培快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种棱果花组培快速繁殖方法，步骤为：S1.选择棱果花优树嫩枝并剪成带芽小段；S2.将茎段消毒处理后接种于1/2MS+0.5mg/L6‑BA培养基中，设置室温及光照强度，30天后获得腋芽；S3.待腋芽生长至2‑3cm时，将单芽转入WPM+0.5mg/L6‑BA培养基中进行增殖培养，获得丛芽；S4.将丛芽切成单芽，转入1/2MS+IBA 1.0mg/L培养基中培养30天，获得组培生根苗；S5.组培生根苗炼苗10‑15天后进行移栽，将根系发育良好的生根苗洗净并用500倍多菌灵消毒后，采用轻基质无纺布袋进行移栽。本发明方法的繁殖效率高且存活率高，获得的棱果花苗整齐一致且维持母株优良性状。

Description

一种棱果花组培快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及棱果花繁殖技术领域，尤其是一种棱果花组培快速繁殖方法。
背景技术
棱果花(Barthea barthei)属野牡丹科(Melastomataceae)棱果花属(Barthea)灌木，产自湖南、广西、广东、福建和台湾等地。花期1月-4月或10月-12月，聚伞花序，顶生，有花3朵，常仅1朵成熟。花梗四棱形,花瓣白色至粉红色或紫红色。棱果花因其清秀美丽具有较高观赏性，且棱果花属仅此一种，特产中国，目前国内园林还没有引种，具有经济价值和科学研究价值。现国内外关于棱果花的研究仅限于植物系统分类和种质资源分布调查研究(彭东辉等，2007；白岳峰等，2015；敬小丽，2015；Huang et al 2017；He et al 2017)。
目前野牡丹科植物主要采用种子、扦插和组培三种繁殖方法。野牡丹(陈妙贤等，2007；唐行等，2009；杨利平等，2008)、地稔(漆萍等，2005)、紫毛野牡丹(熊兆成等，2011)均有种子繁殖的研究报道，结果表明采种时期、发芽温度、光照、种皮处理方法和外源激素浓度与发芽率密切。季节、基质、生根粉浓度和光质均可影响野牡丹的扦插成活率(马国华等，2001；林秀香等，2009；赖菊云等，2011；宋小军等，2007；陈鹏飞等，2014)，金红等已提供一种白花野牡丹高效快速繁殖方法(CN 103931473 B)，梁勇诗等提供一种展毛野牡丹扦插繁殖方法(CN105766243A)。野牡丹和地菍已通过幼嫩茎尖或腋芽诱导成功建立组培体系(马国华等，2000；张朝阳等，2004；戴小英等，2004；蒋道松等，2007；唐淑玲等，2015)。前述繁殖方法中，种子繁殖所获得的常规苗木往往因其基因组杂合度高而造成分化大，苗木品质参差不齐，扦插繁殖因所需插穗多易受优良母株限制。
综上所述，现有技术中尚未有棱果花人工引种和栽培的相关研究报道；关于棱果花优良种质资源繁育方面研究尚属空白，因此总结一套优良种质资源扩繁和培育方法，可解决种苗短缺问题，满足花卉市场多样化需求，为优良特色景观树种的推广应用提供保障，对加快推进花卉产业发展具有重要作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种棱果花组培快速繁殖方法，运用组织培养技术进行苗木快速繁殖，具有整齐一致和维持母株优良性状的特点，且组织培养具有高效和周年生产的优势。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：S1.材料选择：选择生长健壮、洁净且无病虫害的棱果花优树嫩枝为材料，清洗后将枝条剪成约3-4cm的带芽小段；S2.无菌系的建立：在超净工作台内将茎段经75％无水乙醇处理10s和0.1％升汞灭菌5min，接种于1/2MS+0.5mg/L6-BA培养基中，设置培养室温度为25℃，光照强度为2500lux，30天后获得鲜绿健壮的腋芽；S3.增殖培养：待腋芽生长至2-3cm时，将单芽转入WPM+0.5mg/L 6-BA培养基中进行增殖培养，获得丛芽；S4.生根培养:将丛芽切成单芽，转入1/2MS+IBA 1.0mg/L培养基中培养30天，获得组培生根苗；S5.驯化与移栽：组培生根苗炼苗10-15天后进行移栽，将根系发育良好的生根苗从组培瓶中取出，洗净培养基，用500倍多菌灵消毒后，采用椰糠：泥炭土：珍珠岩＝3：3：1的轻基质无纺布袋进行移栽。
进一步地，所述步骤S1中枝条的清洗过程为：先用小刷子蘸取洗洁精水轻刷，自来水冲洗10min。
本发明的有益效果是：采用本发明的繁殖方法，运用组织培养技术，繁殖效率高且存活率高，快速繁殖获得的棱果花苗，具有整齐一致和维持母株优良性状的特点，且组织培养具有高效和周年生产的优势。
附图说明
下面结合附图对本发明作进一步的详细说明。
图1为本发明中棱果花优良母株的结果示意图；
图2为本发明中茎段诱导实验的状态示意图；
图3为本发明中单芽培养实验的状态示意图；
图4为本发明中增殖培养实验的状态示意图；
图5为本发明中生根培养实验的状态示意图；
图6为本发明中驯化移栽培养实验的状态示意图；
图7为本发明中不同留叶方式和消毒处理对茎段存活的影响实验数据图；
图8为本发明中不同浓度植物调节剂对萌芽率的影响实验数据图。
具体实施方式
本发明一种棱果花组培快速繁殖方法，包括以下步骤。
S1.材料选择：选择生长健壮、洁净且无病虫害的棱果花优树嫩枝为材料(附图1)，穗条剪取后用冰袋和干净的湿毛巾低温保存并立即带回实验室；清洗后将枝条剪成约3-4cm的带芽小段。其中，枝条的清洗过程为：先用小刷子蘸取洗洁精水轻刷，自来水冲洗10min。
S2.无菌系的建立：在超净工作台内将茎段经75％无水乙醇处理10s和0.1％升汞灭菌5min，接种于1/2MS+0.5mg/L6-BA培养基中(附图2)，设置培养室温度为25℃，光照强度为2500lux，30天后可获得鲜绿健壮的腋芽(附图3)。此培养过程中，诱导率可达80％以上。
S3.增殖培养：待腋芽生长至2-3cm时，将单芽转入WPM+0.5mg/L 6-BA培养基中进行增殖培养(附图4)，获得丛芽。在WPM+0.5mg/L 6-BA培养基中进行培养，增殖系数可达3.0，丛芽增殖效率高。
S4.生根培养:将丛芽切成单芽，转入1/2MS+IBA 1.0mg/L培养基中培养30天，获得组培生根苗；采用1/2MS+1.0mg/L IBA培养基进行培养，生根率可达95％以上，且植株长势良好，根系发达(附图5)。
S5.驯化与移栽：组培生根苗炼苗10-15天后进行移栽，将根系发育良好的生根苗从组培瓶中取出，洗净培养基，用500倍多菌灵消毒后，采用轻基质无纺布袋进行移栽(附图6)。其中，轻基质的组分配比为椰糠∶泥炭土：珍珠岩＝3：3：1，采用该轻基质培养，成活率可达85％以上。
具体的实施方案过程：
1、消毒方法。
以优树嫩枝为外植体，在超净工作台内将茎段经75％无水乙醇处理10s和0.1％升汞灭菌，无菌水冲洗3-5次后接入培养基中。设置全叶、半叶和无叶三种方式，升汞1min，3min，5min三个水平，共9个处理，筛选最佳消毒方法。如图7可知，处理3保留全叶下升汞处理5min时保存率最高，可达90％以上。
2、诱导培养。
以1/2MS为基础培养基，附加不同浓度6-BA，设置0.5，1.0，2.0mg/L三个梯度，探究不同基础培养基对外植体萌芽率的影响。图8表明，茎段在1/2MS+0.5mg/L6-BA培养基中腋芽生长鲜绿健壮，叶片舒展，附加1.0和2.0mg/L 6-BA培养基中腋芽易玻化，叶片部分皱卷，可能外源激素浓度过高不利于幼芽的生长发育。因此可选择1/2MS+0.5mg/L6-BA作为棱果花茎段诱导培养基。
4、增殖培养。
选择WPM、1/2MS和MS作为基础培养基，分别附加0.3，0.5，1.0mg/L 6-BA。共9个处理。探究不同培养基和植物激素浓度对增殖率的影响。由表1可知WPM、1/2M培养中棱果花丛芽长势较MS好，基本上生长良好，在MS中植物玻化现象明显，可能由于无机盐浓度过高不利于棱果花丛芽的生长发育。处理2WPM+0.5mg/L 6-BA中增殖系数最高，可达3.0，因此可作为适宜的培养基进行继代培养。
Figure GDA0003743261560000041
注：数据为平均值±标准差；表中同列数据后不同小写字母表示各处理间在α＝0.05水平差异显著(下同)。
5、生根培养。
为探讨不同激素浓度对生根效果的影响，本试验以1/2MS作为基础培养基，设置IBA0.5，1.0，2.0,5.0mg/L四个水平，切取芽长2cm左右的增殖苗接入生根培养基中，培养30d可进行数据统计。由表2可知，棱果花组培无性系在附加0.5-5.0mg/L IBA的培养中均能顺利生根，但在低浓度中根系较为细弱，高浓度中根系较为粗短，根数量随IBA浓度升高而增加。当IBA浓度低于5.0mg/L时，植株生长良好，当达到5.0mg/L时植株生长差，有黄叶和枯叶。综上所述，处理2 1/2MS+IBA 1.0mg/L中生根率可达95.24％，且植株长势良好，根系发达，可作为理想的生根培养基。
Figure GDA0003743261560000042
6、驯化与移栽。
组培生根苗植株幼嫩，应待其根系发育良好后方可进行移栽。根系过嫩或过老都会影响成活率。取发育30-40d的生根苗进行移栽，将根系发育良好的生根苗取出，洗净培养基，用500倍多菌灵消毒备用。栽培基质是影响移栽能否成功的重要因素，疏松通气、保水性和清洁卫生均可产生影响。采用椰糠：泥炭土：珍珠岩＝3：3：1的轻基质无纺布袋进行移栽，成活率可达85％以上。苗木移栽初期应覆盖一层白色透明农膜进行保温保湿，膜外覆盖一层75％-80％的遮阳网，1-2周后幼苗发育新根，苗龄3-4周时幼苗生长粗壮，应适时淋水和通风。移栽中期，苗龄1-2个月，苗木高度达3-5cm时去除保温膜，适时施用0.1％稀肥，待苗木生长至5-10cm时更换遮阳网，遮阳率40％-60％为宜。移栽后期待苗木高度生长至20cm以上时苗木可在自然环境条件下生长。
最后应当说明的是，以上内容仅使用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行简单修改或者等同替换，均在本发明技术方案的实质和范围内。

Claims (2)

1.一种棱果花组培快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.材料选择：选择生长健壮、洁净且无病虫害的棱果花优树嫩枝为材料，清洗后将枝条剪成3-4cm的带芽小段；
S2.无菌系的建立：在超净工作台内将茎段经75％无水乙醇处理10s和0.1％升汞灭菌5min，接种于1/2MS+0.5mg/L6-BA培养基中，设置培养室温度为25℃，光照强度为2500lux，30天后获得鲜绿健壮的腋芽；
S3.增殖培养：待腋芽生长至2-3cm时，将单芽转入WPM+0.5mg/L 6-BA培养基中进行增殖培养，获得丛芽；
S4.生根培养:将丛芽切成单芽，转入1/2MS+IBA 1.0mg/L培养基中培养30天，获得组培生根苗；
S5.驯化与移栽：取发育30-40d的生根苗进行移栽，将根系发育良好的生根苗从组培瓶中取出，洗净培养基，用500倍多菌灵消毒后，采用椰糠：泥炭土：珍珠岩＝3：3：1的轻基质无纺布袋进行移栽。
2.根据权利要求1所述的棱果花组培快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤S1中枝条的清洗过程为：先用小刷子蘸取洗洁精水轻刷，自来水冲洗10min。
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CN108142295B (zh) * 2018-01-16 2019-03-29 浙江省萧山棉麻研究所 中华野海棠的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法
JP7020288B2 (ja) * 2018-05-16 2022-02-16 王子ホールディングス株式会社 イソプレノイド含有植物の組織培養用培地、及びそれを用いた発根促進方法、並びにイソプレノイド含有植物の植物体の生産方法
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