CN101564010A

CN101564010A - 一种蓝果树的快速繁殖方法

Info

Publication number: CN101564010A
Application number: CNA2009100742481A
Authority: CN
Inventors: 王春荣; 曹福亮; 毕君
Original assignee: Hebei Academy of Forestry Sciences
Current assignee: Hebei Academy of Forestry Sciences
Priority date: 2009-04-29
Filing date: 2009-04-29
Publication date: 2009-10-28
Anticipated expiration: 2029-04-29
Also published as: CN101564010B

Abstract

本发明公开了一种蓝果树的快速繁殖方法，它包括以下步骤：a.外植体接种；b.增殖培养；c.根诱导；d.炼苗移栽。本发明方法有利于保存种源与变异，并保持了蓝果树的优良性状以及苗木的一致性。具有快速、大量繁殖优系品种的优势。本发明方法在6－7个月内，即可大批量生产出整齐一致的蓝果树苗木。

Description

一种蓝果树的快速繁殖方法

技术领域

本发明涉及树木的育苗造林技术，具体地说是蓝果树的组织培养无性繁殖方法。

背景技术

蓝果树(Nyssa sinensis)别名紫树，为蓝果树科蓝果树属高大落叶乔木。因其核果成熟时果皮呈深蓝色而得名。蓝果树喜光、喜酸性土壤，适应性强。其树干通直，枝叶稠密，叶片宽大、艳丽，成熟果实呈美丽的深蓝色，是一种集观赏与实用为一体的优良树种。目前该苗木的繁殖方法主要是种子繁殖。如《现代农业科技》·2008年第24期·丽水市蓝果树野生资源调查及育苗造林技术、《林业实用技术》2006年第4期·蓝果树及其栽培技术、《安徽林业》·2006年第1期·乡土树种——蓝果树及其栽培技术等对其繁殖方法均有基本相同的表述。即将果实采摘后用碱水浸泡数日，然后搓去果皮，用清水将种子冲洗干净，鲜果出籽率38％左右。蓝果树种壳十分坚硬，种子需用湿沙贮藏。蓝果树种子在15℃以上开始萌动，以20℃～30℃为好，播种方法采取点播为好，播种量40kg/667m²。蓝果树的种子出土很不整齐，播种前需用40℃～50℃的温水浸种2～4天，每天换水，以促进发芽整齐。蓝果树种子播后15d即开始发芽出土，50d左右基本出齐，种子发芽率约为25％～30％。1年生苗平均地径达1cm以上，苗高1.2～1.5m，每667m²出苗量约2万株。由此可见，现有方法存在繁育期长，种子发芽率低，繁殖后代变异大，繁殖受自然条件限制等诸多问题。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种蓝果树的快速繁育苗木的方法，以克服现有技术所存在的缺陷。

本发明的目的是这样实现的：

本发明所提供的蓝果树的快速繁殖方法，它包括以下步骤：

a、外植体接种：

取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，消毒处理5～8min，切成1.0～1.5cm的茎段，每段带1个腋芽(或顶芽)，接种在1/2MS+6-BA0.5～1.0mg.L^-1+IBA0.05～0.1mg.L^-1+蔗糖25g～30g.L^-1+琼脂6g.L^-1，PH6.0的培养基上；培养室温度为25～30℃。

取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，一般可于4～9月进行。但以6月中旬或9月中旬为优选时间段。在优选时间段进行采集，外植体成功率最高。

在消毒处理时，可采用84消毒液、HgCl₂消毒液，但以0.1％HgCl₂

效果最好。该浓度的消毒液既可防止外植体褐化、不萌芽，又可提高外植体的保存率。

经试验发现，蓝果树外植体萌发对CaCl₂较敏感，1/2MS(CaCl₂全量)较1/2MS(CaCl₂半量)外植体萌发率提高30％左右，因此，外植体的优选培养基为1/2MS(CaCl₂全量)+6-BA1.0mg.L^-1+IBA0.1mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

b、增殖培养：

接种后，腋芽萌芽高1.0-2.0cm时，切下0.3-0.5cm芽丛块转入分化培养基中进行增殖培养；培养温度25～30℃，光照时间10～12h，培养周期20～30d；

在25～30℃条件下进行培养，可保证试管苗良好的生长态势和增殖率。

本发明发现，蓝果树较适宜基本培养基为MS培养基。附加适当浓度的6-BA、IBA、KT、GA₃可更有利于提高分化率，以及促进试管苗的生长。

分化培养基的优选配方为：MS+6-BA(1.0～2.0)mg.L^-1+KT1.0mg.L^-1+IBA(0.1～0.3)mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

在该浓度范围内，6-BA、KT、IBA的相互作用，既可促进蓝果树试管苗高生长，又可提高其增殖率；

在增殖培养中，光照强度可控制在1500Lx～4000Lx。但优选的光照强度为2000Lx。该光照强度既有利于试管苗长势好、叶色绿、苗高生长量大，有利于提高增殖系数。

在增殖培养连续继代15代后，进行需复壮；复壮培养基为MS+6-BA(0.5～1.0)mg.L^-1+IBA(0.2～0.5)mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

c、根诱导：

取生长健壮、高1～3cm的试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培养基，附加不同浓度及其配比的NAA、IBA、IAA，进行蓝果树试管苗根诱导，培养室温度为20-25℃，光照强度为2000lx--3000lx，光照时间为10-12h/d；

优选的根诱导培养基为：1/2MS+NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IAA0.5mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1或1/2MS+NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IBA0.2mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

d、炼苗移栽：

待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3～5d，取出苗后清洗、消毒，移植到栽培基质中，上罩塑料薄膜3-5d后，撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18～25℃，相对湿度80％～90％。

上述培养基中6-BA为细胞分裂素卞氨基嘌呤，IBA为生长素吲哚丁酸，NAA为生长素萘乙酸，IAA为生长素吲哚乙酸，KT为细胞分裂素6-糠氨基嘌呤。

本发明方法具有以下有益效果：

(1)本发明方法有利于保存种源与变异，并保持了蓝果树的优良性状以及苗木的一致性。

(2)本发明方法实现了工厂化育苗。具有快速、大量繁殖优系品种的优势。

试验表明，本发明方法在6～7个月内，即可大批量生产出整齐一致的蓝果树苗木。本发明方法一年除去外植体启动和生根炼苗85天，每年可增殖周期数为(365-85)/28＝10，按每周期不定芽最低增值芽数为4计算，一个营养芽年可繁殖苗木4¹⁰＝105万株。

(3)本发明方法的繁殖系数达5倍以上，远远高于播种繁殖方法，且能保持苗木的整齐一致性。

以下通过具体实施例对本发明作进一步的详述，但并不以此对本发明进行任何限制。

具体实施方式

实施例

(一)外植体接种

于4-9月每月中旬进行一次以带腋芽嫩茎段、半木质化茎段为外植体的接种试验，采用20％84消毒液处理10～30min、75％酒精10～30s+0.1％HgCl₂浸消毒处理5～8分钟或0.1％HgCl₂浸消毒处理5～8分钟；培养基为1/2MS+6-BA1.0mg.L^-1+IBA0.1mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。PH值6.0。

结果表明：

嫩茎段、半木质化茎段芽萌发率可达81.8％～100％。其中以6月中旬和9月中旬接种的外植体成功率最高。

20％ 84消毒液对蓝果树外植体消毒效果相对较差，外植体保存率为76.9％；75％酒精不利于芽萌发；0.1％HgCl₂灭菌效果相对最好，其外植体保存率可达91.7％。

蓝果树外植体萌发对CaCl₂较敏感，1/2MS(CaCl₂全量)较1/2MS(CaCl₂半量)外植体萌发率提高30％左右。外植体启动培养以1/2MS(CaCl₂全量)+6-BA1.0mg.L^-1+IBA0.1mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1，PH值6.0的培养基最为适宜。

外植体接种较为优选的实施例为：

采带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，剪去叶片，先在自来水下用毛刷洗去表面尘土，再切成长约2cm的茎段，每个茎段带1-2个腋芽。然后用流水冲洗2-3h，放在超净工作台上，先用无菌水冲洗3次，再用0.1％HgCl₂溶液消毒5-8min，无菌水冲洗6-8次后，用无菌纸吸干材料表面的水分，切成1.0-1.5cm的茎段，每段带1个腋芽(或顶芽)，接种在1/2MS(CaCl₂全量)+6-BA1.0mg.L^-1+IBA0.1mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1，PH6.0的培养基上。培养室温度为23-25℃，光照强度为2000Lx，光照时间为12h/d(7:00-19:00)。

该实施例的外植体保存率为91.1％，芽萌发率为100％。

(二)增殖培养

茎段接种7-14天后腋芽萌发，约20～25天，萌芽高1.0～2.0cm时，切下转入分化培养基中进行增殖培养。

增殖培养初试培养基采用MS、WPM和B5三种基础培养基，附加1.0mg.L^-16-BA+0.2mg.L^-1IBA。实验表明，蓝果树较适宜于MS培养基。以MS培养基为基础培养基，附加不同浓度的6-BA、IBA、KT、GA₃等进行增殖培养试验。在光照强度分别为1500Lx、2000Lx、3000Lx、4000Lx，光照时间分别为10h、12h、14h、16h；培养温度分别为20±2℃、23±2℃、25±2℃、28±2℃，每处理7～10瓶，每瓶接种6块，25～30d继代一次。用同一种培养基连续继代培养5代，调查每一代的苗高、分化率、苗长势等。

试验结果表明：生长素与细胞分裂素的用量配比对蓝果树试管苗增殖有显著影响。KT与6-BA配合使用，可促进蓝果树试管苗生长点增殖，增殖率可比单独使用6-BA提高21.2％；试管苗在6-BA(1.0～2.0)mg.L^-1+KT1.0mg.L^-1+IBA(0.1～0.3)mg.L^-1的培养基中平均增殖率为5.23倍。连续继代10代试管苗仍保持4.5倍以上的增殖率，且生长正常。

蓝果树试管苗对光照非常敏感，其适宜光强和光照时间范围很窄，在光照条件为光强2000Lx～3000Lx，光照时间12h/d时，增殖系数在4～6倍，单块芽丛约30个单株，生长正常；当光强过弱时，长势弱，矮小，生长点呈丛生状，叶色淡绿，且有玻璃苗现象，连续继代有芽丛枯萎死亡现象。当光强＞3000Lx，虽然试管苗长势良好，叶色浓绿，苗高生长量大，但试管苗平均增殖系数仅为2倍左右。

蓝果树试管苗在高温(25～30℃)条件下生长正常，增殖率高。当温度过低时，其叶片卷曲，生长缓慢。

接种0.3～0.5cm芽丛块，生长分化良好；当芽丛块过小时，试管苗枯死率高，存活者生长缓慢，增殖率低；当芽丛块过大时，接种后芽丛有枯死腐烂现象。

增殖培养较为优选的实施例为：

切取0.3-0.5cm大小的芽丛块，将生长旺盛的芽丛接种于MS+6-BA(1.0～2.0)mg.L^-1+KT1.0mg.L^-1+IBA(0.1～0.3)mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1培养基上，在光强2000Lx，光照时间12h条件下，培养25d左右，增殖率达5倍以上，连续继代10代，试管苗均生长正常，保持较高增殖率。连续继代15代后试管苗长势变弱，甚至有枯死现象，需复壮，复壮适宜培养基为MS+6-BA(0.5～1.0)mg.L^-1+IBA(0.2～0.5)mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

(三)根诱导

取生长健壮、高2cm左右的蓝果树试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培养基，附加不同浓度、不同配比的NAA、IBA、IAA，进行蓝果树试管苗生根培养试验，每处理接种10瓶，每瓶接6株。随时观察生根情况，并统计培养30d后的根量、根长(统计0.5cm以上所有根的数量、长度，取平均值)。培养室温度为20～25℃，光照强度为2000lx，光照时间为10～12h/d。接种10d时，试管苗开始生根，15～20d时根长约2～3cm，有侧根生出，30d时形成较发达根系。

试验表明，单纯使用IBA、NAA或IAA效果均不理想，其或生根率低；或生根率虽理想，但根系不发达。

本发明采用以1/2MS培养基为基础培养基，附加NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IAA0.5mg.L^-1和NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IBA0.2mg.L^-1进行根诱导处理，其生根率达100％，且根系发达。平均根数8.6～9.7条，平均根长6.5～7.0cm，侧根量多，试管苗生长良好，基部愈伤块较小，非常有利于试管苗移栽成活。

根诱导较为优选的实施例为：

待诱导芽在培养基上长到2cm左右时，从基部切下，接种于1/2MS+NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IAA0.5mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1或1/2MS+NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IBA0.2mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1培养基上。培养室温度为20～25℃，光照强度为2000lx，日照时间为10～12h/d条件下，接种30d后可形成发达根系。

(四)炼苗移栽

待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3～5天，取出苗后用自来水把培养基冲洗干净，用多菌灵1000倍液浸泡0.5h，取出移植到用蛭石、珍珠岩、草炭等复配的基质中，上罩塑料薄膜，5d后撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18～25℃，相对湿度80％-90％，7～10d喷一次杀菌剂。20d后成活率在95％以上，可移入营养杯或大田。

Claims

1、一种蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于它包括以下步骤：

a、外植体接种：

取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，消毒处理5～8min，切成1.0～1.5cm的茎段，每段带1个腋芽或顶芽，接种在1/2MS+6-BA0.5～1.0mg.L^-1+IBA0.05～0.1mg.L^-1+蔗糖25～30g.L^-1+琼脂6g.L^-1，PH6.0的培养基上；培养室温度为23～25℃；

b、增殖培养：

接种后，腋芽萌芽高1.0～2.0cm时，切下芽丛块接种于分化培养基中进行增殖培养；光照时间12h，培养周期20～30d；

c、根诱导：

取生长健壮、高1～3cm的试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培养基，附加NAA、IBA、IAA混合液，进行蓝果树试管苗根诱导，培养室温度为20～25℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为10～12h/d；

d、炼苗移栽：

待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3～5d，取出苗后清洗、消毒，移植到栽培基质中，上罩塑料薄膜3～5d后，撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18～25℃，相对湿度80％～90％。

2、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的外植体接种的培养基为的1/2MS，其中的CaCl₂全量，+6-BA1.0mg.L^-1+IBA0.1mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

3、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养的光照强度为2000Lx～3000Lx。

4、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养的培养基为：MS+6-BA1.0～2.0mg.L^-1+KT1.0mg.L^-1+IBA0.1～0.3mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

5、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养，切下0.3～0.5cm芽丛块接种于分化培养基中进行增殖培养。

6、根据权利要求4所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养其连续继代15代后，进行复壮；复壮培养基为MS+6-BA0.5～1.0mg.L^-1+IBA0.2～0.5mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

7、根据权利要求1或2所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的根诱导培养基为：1/2MS+NAA(0.2～0.5)mg.L^-1+IAA0.5mg.L^-1或IBA0.2mg.L^-1+蔗糖30g.L^-1+琼脂6g.L^-1。

8、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段的采集时间为6月中旬或9月中旬。

9、根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于外植体接种中的消毒方式为0.1％HgCl₂浸5～8min。