CN112920955A

CN112920955A - 一株可产生抗菌增效作用次级代谢产物的深海土曲霉b12及应用

Info

Publication number: CN112920955A
Application number: CN202110175323.4A
Authority: CN
Inventors: 金国虔; 王颖; 杜新阳
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2021-02-09
Filing date: 2021-02-09
Publication date: 2021-06-08
Anticipated expiration: 2041-02-09
Also published as: CN112920955B

Abstract

本发明提供了一株可产生抗菌增效作用次级代谢产物的深海土曲霉B12及应用，属于微生物技术领域。该土曲霉B12（Aspergillus terreus B12），保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2021041，保藏日期是2021年01月10日。以玉米固体培养基对该菌株进行发酵，经甲醇浸提、大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、重结晶的提取步骤获得化合物Butyrolactone I。Butyrolactone I与氨基糖苷类抗生素具有明显的协同抗MRSA的作用，且无明显的细胞毒活性，具有较强的开发为抗菌佐剂的潜力。

Description

一株可产生抗菌增效作用次级代谢产物的深海土曲霉B12及应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种可以作为抗菌佐剂的Aspergillusterreus次级代谢产物的提取、制备方法及用途。

背景技术

海洋环境具有高压、无光、低温、高盐、低氧的特殊性，海洋微生物进化形成了相应的机制来适应海洋环境，因此深海来源真菌具有产生结构新颖、活性较好的次生代谢产物的能力，为探寻新的功能活性分子和先导化合物的开发提供重要的资源。海洋微生物资源十分丰富，具备特殊的代谢特性和生理特性。海洋真菌是典型的微生物类别，例如木霉属、蓝状菌属、曲霉属、青霉属。近年来，海洋采样技术、海洋生物技术、化合物分离鉴定技术快速发展，加快了开发海洋天然产物的步伐。海洋微生物的次级代谢产物可以帮助微生物更好的适应恶劣的生存环境或者在某些特殊的生理生态过程中发挥作用。目前，已经从深海来源微生物的次级代谢产物当中分离得到了具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、免疫调节等具备较强生物活性的天然产物，这些天然产物的结构大多是新颖的。

曲霉属真菌是珊瑚、海绵、海底沉积物、红树林生态系统等海洋环境当中分布最为广泛的丝状真菌，意味着曲霉属真菌具有较强的适应极端环境的能力。海洋曲霉属真菌次级代谢产物主要包括糖苷类、肽类、脂肪酸类、甾体类、萜类、生物碱类等多种结构的化合物。目前，已经累积发现新型天然产物近千个，海洋曲霉属真菌成为天然产物的重要来源。土曲霉(Aspergillus terreus)是典型的曲霉属真菌，主要分布在动物粪便、海洋动物、土壤等。衣康酸、洛伐他汀都是土曲霉的关键次级代谢产物，被广泛的应用于工业和医疗产业当中。除此之外，土曲霉还能够合成结构复杂的次级代谢产物，例如丁内酯。有研究表明Butyrolactone I能够抑制M期促进因子(MPF)，防止减数分裂的恢复；是周期蛋白依赖性激酶(CDK)的选择性抑制剂，包括CDK1、CDK5；具有一定的抗氧化活性。海洋真菌的次级代谢产物的产量通常较低，但是生物活性较好、骨架多变、结构新颖。因此，优化培养条件和选择合适的培养，分离海洋来源土曲霉的次生代谢产物具有一定的研究价值。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一株深海来源的土曲霉B12次级代谢产物的制备方法，采用优化培养基和培养条件的方式来促进土曲霉活性次级代谢产物的合成，提高活性次级代谢产物的产量。

本发明的目的之二在于提供一种分离于土曲霉B12次级代谢产物中的γ-丁内酯类化合物Butyrolactone I及其协同氨基糖苷类抗生素的作用。

本发明为了实现以上两个目的采用的技术方案如下：

一种深海来源的土曲霉B12(Aspergillus terreus B12)，于2021年1月10保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC NO：M2021041，保藏地址：中国武汉武汉大学。

所述的土曲霉B12在制备抗菌佐剂的应用。

所述的应用，其特征在于：所述菌株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。

所述的应用，其特征在于所述的抗菌佐剂为Butyrolactone I。

依据本发明的第一方面，提供土曲霉次级代谢产物的制备方法，具体方法如下：

(1)孢子制备：

将保存在-80℃超低温冰箱的土曲霉B12的甘油管接种在PDA平板上，置于28℃、黑暗培养3天。

(2)种子液制备：

在PDA平板上长出单菌落之后，用无菌接种环将孢子和菌丝刮至200ml PDB液体培养基中，200rpm，28℃，培养3-4天。

(3)菌株发酵

按照1ml种子液/10g培养基的比例将种子液接种到固体发酵培养基中，静置培养。

(4)次级代谢产物提取

按照10L/1kg的比例用乙醇浸泡固体发酵产物，超声浸提30分钟，减压抽滤得到浸提液。浸提三次。38℃减压旋蒸除去液体，即可获得发酵浸膏。

(5)分离纯化

最终发酵浸膏依次经过大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、重结晶进行分离纯化，即能够获得Butyrolactone I。

作为优选，在菌株发酵步骤中，选择的发酵培养基是玉米+1固体培养基，配方：1000.0g玉米，33g海水晶，20.0g麦芽糖，20.0g山梨醇，3.0g酵母，0.5g色氨酸，10.0g谷氨酸钠，0.5gK2HPO4，0.3g MgSO4.7H2O，1000.0ml H2O，调节PH＝7.0-7.5。

作为优选，在菌株发酵步骤中，选择的发酵周期是15天。

作为优选，在菌株发酵步骤中，选择的发酵条件是黑暗、28℃。

作为优选，在次级代谢产物提取步骤中，使用乙醇或者甲醇作为浸提溶液，甲醇或者乙醇能够破坏细胞壁，有利于次级代谢产物的浸提；优选地，超声提取更加有利于破坏细胞壁，加快了次级代谢产物的提取。

作为优选，在分离纯化步骤，选择重结晶的方式纯化目标化合物，重结晶的溶剂为氯仿和甲醇。

依据本发明的第二方面，提供了一种由以上土曲霉次级代谢产物当中分离获得的化合物Butyrolactone I，该化合物是白色固体，分子式是C₂₄H₂₄O₇。该化合物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌无明显的抑菌作用，但能够与氨基糖苷类抗生素具有协同作用。

作为优选，该化合物与几种氨基糖苷类抗生素具有明显的协同作用，降低氨基糖苷类抗生素的MIC。

有益效果：

(1)本发明首次发现一种深海来源的土曲霉B12(Aspergillus terreus B12)，其为新的菌株，属于真菌门(Eumycota)、半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Moniliales)、丝孢科(Hyphomycetaceae)、曲霉属(Aspergillus)，并于2021年1月10保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC NO：M2021041，保藏地址：中国武汉武汉大学。

(2)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA的毒力和流行性较强，可引起软组织感染、皮肤感染、坏死性肺炎、败血症等。传统抗生素对MRSA引起的感染治疗效果不理想，且由于抗生素耐药性常规抗生素的效价贬低，亟待开发新型的抗生素来应对耐药性病原体引起的感染。通常而言，开发新型抗生素需要几十年的时间，而病原体仅仅在两周时间内就能够获得耐药性。因此，细菌感染的治疗仍旧依赖于传统抗生素。这就需要开发可以延长传统抗生素的寿命、使病原体对传统抗生素重新敏感的病原体耐药性抑制剂类药物。本发明从深海来源土曲霉的次级代谢产物当中分离纯化得到Butyrolactone I，该化合物虽然无明显的抑菌作用，但是能与氨基糖苷类抗生素具有明显的协同作用，具备开发成为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌佐剂的潜力。

(3)本发明在大量发酵之前，优化培养基和培养条件，选择Butyrolactone I产量较高的培养基和培养条件进行发酵，旨在获得更多的目标产物，操作简单，成本低廉。

附图说明

图1是土曲霉B12在MEA培养基上生长5天的图片，其中A为培养基背面，B为培养基正面；

图2是土曲霉B12菌丝棉兰染色地显微图片(放大倍数为40倍)；

图3是土曲霉B12的进化树；

图4是土曲霉B12抑菌实验中在不同培养基和培养条件下的不同菌株的抑菌结果，其中A为Acinetobacter baumannii；B为Escherichia coli、C为Klebsiella aerogenes、D为Pseudomonas aeruginosa、E为Micrococcus luteus、F为Staphylococcus aureus、G为MRSE、H为MRSA；

图5是Butyrolactone I的HPLC色谱图；

图6是Butyrolactone I的¹H-NMR；

图7是Butyrolactone I的¹³C-NMR；

图8是Butyrolactone I与不同浓度庆大霉素联合抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；

图9是不同浓度Butyrolactone I与庆大霉素联合抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；

图10是Butyrolactone I与其他氨基糖苷类抗生素联合抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的棋盘试验结果，其中A为卡那霉素与butyrolactone I的fici；B为新霉素与butyrolactone I的fici。

具体实施方式

本实施例中的菌种培养基和发酵培养基均为按说明书配制，若无特殊说明则均为市售的普通商品，所述提及菌株购自北京中源合聚生物科技公司。

实施例1：菌株形态鉴定和分子生物学鉴定

(1)种子液制备：将保存在-80℃超低温冰箱的分离于南海来源海绵样品的菌株B12的甘油管接种至PDA平板上，28℃静置培养3天。待PDA平板(真菌培养基：5.0g马铃薯浸粉；20.0g葡萄糖；20.0g琼脂；海水晶33.0g；H2O 1L；调整PH至6.0)上由明显的菌丝长出之后，加入适量的无菌水，用无菌的接种环将菌丝洗下，将孢子悬液接种至200ml PDB液体培养基(真菌培养基：10.0g马铃薯浸粉；20.0g葡萄糖；海水晶33.0g；H2O 1L；调整PH至6.0)中，28℃，200rpm，3天。

(2)形态鉴定：采用三点法将种子液以2ul/点接种在MEA平板上(20.0g麦芽糖提取物；1.0g蛋白胨；20.0g葡萄糖；0.005g CuSO4.5H2O；0.01g ZnSO4.7H2O；20.0g琼脂；海水晶33.0g；H2O 1L；调节PH至7.0-7.5)。待种子液被MEA培养基完全吸收之后，在恒温培养箱中28℃倒置培养5天。制备菌丝玻片：采用插片法，将1.0cm×1.0cm的盖玻片高压灭菌，以45°插入至接种点附近，恒温培养箱中28℃倒置培养5天。

所述菌株的形态特征是：在MEA培养基上28℃倒置培养5天之后，菌落直径是0.8cm。菌落表面呈致密丝绒状或者絮状，菌丝体颜色为白色，中心区域轻微隆起，边缘区域颜色为白色，有色素生成，无渗出液，孢子产量较少，菌落反面近于无色(见图1)。菌丝玻片经棉兰染色之后，用显微镜观察(放大倍数为40倍)，菌丝有隔菌丝，分生孢子头致密直柱状，顶囊呈半球形，分生孢子较小。形态特征与土曲霉属真菌相近(见图2)。

(3)分子生物学鉴定：挑取MEA平板上的菌丝，使用南京擎科植物基因组DNA提取试剂盒提取DNA，并以此为模板扩增管家基因5.8S rDNA和28S rDNA的基因间隔序列(Thenuclear ribosomal internal transcribed spacer region，ITS)。

ITS PCR扩增引物序列如下所示：

ITS1：5′-tccgtaggtgaacctgcgc-3′

ITS4：5′-tcctccgcttattgatatgc-3′

PCR条件：98℃预变性3min；98℃变性10s，55℃退火10s，72℃延伸10s，30个循环；72℃延伸10min。菌株B12经ITS1和ITS4引物扩增产物，由南京擎科生物科技有限公司完成测序，扩增产物长度为579bp，序列如下所示：

tcgagtgcggatctttatggcccaacctcccacccgtgactattgtaccttgttgcttcggcgggcccgccagcgttgctggccgccggggggcgactcgcccccgggcccgtgcccgccggagaccccaacatgaaccctgttctgaaagcttgcagtctgagtgtgattctttgcaatcagttaaaactttcaacaatggatctcttggttccggcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataactaatgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgagtctttgaacgcacattgcgccccctggtattccggggggcatgcctgtccgagcgtcattgctgccctcaagcccggcttgtgtgttgggccctcgtcccccggctcccgggggacgggcccgaaaggcagcggcggcaccgcgtccggtcctcgagcgtatggggcttcgtcttccgctccgtaggcccggccggcgcccgccgacgcatttatttgcaacttgtttttttccaggttgacctcggatcaggtagggatacccgctgaacttaagcatatcaaaaagcggaggaa

将测序结果通过NCBI网站的BLAST，序列比对结果中相似性最大的即为菌株的相似种属。该菌株经序列比对，最相似种属为Aspergillusterreus。在NCBI数据库中下载不同种属的ITS序列，利用MEGA 7.0构建菌株B12的系统发育进化树(见图3)，深海来源的土曲霉B12鉴定为真菌门(Eumycota)、半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes)、丝孢目(Moniliales)、丝孢科(Hyphomycetaceae)、曲霉属(Aspergillus)。

实施例2：菌株发酵

(1)种子液制备：制备方法同实施例1(1)

(2)小批量发酵：将种子液按照1ml/10g的比例接种到大米固体培养基、玉米固体培养基、大米+1固体培养基、玉米+1固体培养基中；培养时间分别为15天和30天；培养条件分别为光照和黑暗；培养温度均为28℃。每组设置两个平行。

大米固体培养基：1000.0g大米，33g海水晶，0.15g MgSO4.7H2O，1000.0ml H2O；

玉米固体培养基：1000.0g玉米，33g海水晶，0.15g MgSO4.7H2O，1000.0ml H2O；

大米+1固体培养基：1000.0g大米，33g海水晶，20.0g麦芽糖，20.0g山梨醇，3.0g酵母，0.5g色氨酸，10.0g谷氨酸钠，0.5gK2HPO4，0.3g MgSO4.7H2O，1000.0ml H2O，调节PH＝7.0-7.5；

玉米+1固体培养基：1000.0g玉米，33g海水晶，20.0g麦芽糖，20.0g山梨醇，3.0g酵母，0.5g色氨酸，10.0g谷氨酸钠，0.5gK2HPO4，0.3g MgSO4.7H2O，1000.0ml H2O，调节PH＝7.0-7.5。

对小批量发酵产物，用3倍体积的乙醇浸泡过夜，次日超声浸提30min，减压抽滤得到滤液。重复此步骤三次。合并所得滤液，减压旋蒸得发酵浸膏，加入3ml甲醇溶解浸膏即可获得发酵粗提物，用于抑菌实验。

抑菌实验选择的指示菌是大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella aerogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus aureus，MRSA)、耐甲氧西林表皮葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcus epidermidis,MRSE)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。指示菌活化：将保存在-80℃的指示菌的甘油管接种至20mlMHB液体培养基中(2.0g牛肉粉；1.5g可溶性淀粉；17.5g酸水解酪蛋白，调节PH至7.5)，37℃，200rpm，过夜培养。将活化后的指示菌接种到20ml MHB液体培养基中，37℃，200rpm，培养至OD600nm≈0.08～0.1，按照100μL/皿接种并均匀的涂布在MHB培养平板上；使用直径约为6mm的无菌打孔器在涂布了指示菌的MHB平板上打孔，每孔中加入30μL的发酵粗提物；以100μg/ml的氯霉素作为阳性对照，以甲醇为阴性对照。在37℃的恒温培养箱中培养18h。采用十字法测量发酵粗提物的抑菌圈(见图4)。

(3)大批量发酵：种子液制备同实施例1(1)。根据实施例2(2)的小批量发酵产物的抑菌活性，选择玉米+1固体培养基进行大量发酵。配制2kg的玉米+1固体发酵培养基，50g/罐，分装在40个发酵罐中，121℃高压灭菌备用。将种子液以5ml/罐进行接种，28℃，黑暗，静置培养15天。对大批量发酵产物，用3倍体积的乙醇浸泡过夜，次日超声浸提30min，减压抽滤得到滤液。重复此步骤三次。合并所得滤液，减压旋蒸得发酵浸膏，用于后续分离纯化。

实施例3：目标化合物的分离纯化

(1)将实施例2(3)得到的发酵浸膏首先用大孔树脂柱色谱进行洗脱(大孔树脂型号为D101，柱体积约为4L)洗脱剂选择水和乙醇，分别用3倍柱体积的去离子水(组分1)、20％乙醇(组分2)、40％乙醇(组分3)、60％乙醇(组分4)、80％乙醇(组分5)和100％乙醇(组分6)进行洗脱。每个洗脱梯度的流出液分3段进行收集。

(2)对于实施例3(1)获得的组分6，减压浓缩至重量不再减少，过硅胶柱色谱(硅胶柱体积约为300ml，硅胶G规格是100-200目)，得到组分6.4。

(3)对于实施例3(2)获得组分6.4，使用氯仿和甲醇进行重结晶即可获得目标化合物Butyrolactone I，其结构式如下，该化合物的液相图(见图5)、核磁图(见图6、图7)。

实施例4：与氨基糖苷类抗生素的协同作用

(1)配制Butyrolactone I和抗生素母液：称取100mg Butyrolactone I，加入5mlDMSO，配成终浓度为20mg/ml的母液；称取100mg庆大霉素，加入10ml纯净水，配成终浓度为10mg/ml的母液；称取100mg新霉素，加入10ml纯净水，配成终浓度为10mg/ml的母液；称取100mg卡那霉素，加入10ml纯净水，配成终浓度为10mg/ml的母液。

(2)MRSA菌株培养：将MRSA菌株(菌株编号是：USA300)划线接种在MHB平板上，放置在37℃恒温培养箱中过夜培养。挑取单菌落至20ml MHB液体培养基中，37℃，200rpm，培养至对数生长期。

(3)Butyrolactone I与不同浓度庆大霉素联合抗MRSA：MRSA菌株培养同实施例4(2)，将对数生长期的菌体用空白MHB培养基稀释至OD600nm＝0.3，在稀释1000倍加至96孔板中，每孔体积为200ul；向每个孔中加入0.3μL的Butyrolactone I母液，使终浓度为30μg/ml；稀释庆大霉素使其浓度依次为160μg/ml、120μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、30μg/ml、0μg/ml，向每孔中依次加入2μl庆大霉素稀释液，使孔内终浓度依次为1.6μg/ml、1.2μg/ml、0.8μg/ml、0.6μg/ml、0.3μg/ml、0μg/ml；37℃恒温培养箱中培养18h，测量OD600nm，以此作为菌密度指标(见图8)。

结果表明在Butyrolactone I的浓度为30ug/ml时，能够协同庆大霉素对抗MRSA，将庆大霉素对MRSA的MIC由1.2μg/ml降低至0.3μg/ml.

(4)不同浓度Butyrolactone I与庆大霉素联合抗MRSA：MRSA菌株培养同实施例4(2)，将对数生长期的菌体用空白MHB培养基稀释至OD600nm＝0.3，在稀释1000倍加至96孔板中，每孔体积为200ul；稀释庆大霉素使其浓度为120μg/ml、30μg/ml、0μg/ml，依次向孔中加入2μl庆大霉素稀释液，使孔内终浓度依次为1.2μg/ml、0.3μg/ml、0μg/ml；用DMSO稀释Butyrolactone I母液，稀释液浓度以此为10000μg/ml、6000μg/ml、4000μg/ml、1200μg/ml、800μg/ml、600μg/ml、0μg/ml，向孔中依次加入2μl Butyrolactone I稀释液，使孔内终浓度以此为100μg/ml、60μg/ml、40μg/ml、12μg/ml、8μg/ml、6μg/ml、0μg/ml；37℃恒温培养箱中培养18h，测量OD600nm，以此作为菌密度指标(见图9)。结果表明，在Butyrolactone I浓度为15μg/ml-30μg/ml时，能够降低庆大霉素对MRSA的MIC，即可以将庆大霉素对MRSA的MIC由1.2μg/ml降低至0.3μg/ml。

(5)Butyrolactone I与五种氨基糖苷类抗生素的棋盘试验：MRSA菌株培养同实施例4(2)，将对数生长期的菌体用空白MHB培养基稀释至OD600nm＝0.3，在稀释1000倍加至96孔板中，每孔体积为200ul；向每个孔中加入0.3μL的Butyrolactone I母液，使终浓度为30μg/ml；向孔中卡那霉素母液或者新霉素母液，使卡那霉素终浓度依次为2048μg/ml、1024μg/ml、512μg/ml、256μg/ml、128μg/ml、0μg/ml，或者使新霉素终浓度依次为256μg/ml、128μg/ml、64μg/ml、32μg/ml、16μg/ml、0μg/ml；37℃恒温培养箱中培养18h，测量OD600nm，以此作为菌密度指标(见图10)。联合抑菌指数(Fractional inhibitory concentration index，FICI)可用于评价两种药物是否具有协同作用或者相加作用，FICI＝MIC_A药联用/MIC_A药单用+MIC_B药联用/MIC_B药单用，若FICI≤0.5表明两药具有协同作用，0.5＜FICI＜1表明两药具有部分协同作用，FICI＝1表明两药具有相加作用，1＜FICI＜4表明两药为无关效应，FICI≥表明两药具有拮抗作用。结果表明，在Butyrolactone I浓度为30ug/ml时，能够与卡那霉素和新霉素具有明显的协同作用，降低卡那霉素和新霉素对MRSA的MIC。

以上实施例当中所有的常规操均为本领域技术人员所熟知，此处不再详细描述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 中国药科大学

<120> 一株可产生抗菌增效作用次级代谢产物的深海土曲霉B12及应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> ITS1(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 1

tccgtaggtg aacctgcgc 19

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> ITS4(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 2

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 3

<211> 579

<212> DNA

<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 3

tcgagtgcgg atctttatgg cccaacctcc cacccgtgac tattgtacct tgttgcttcg 60

gcgggcccgc cagcgttgct ggccgccggg gggcgactcg cccccgggcc cgtgcccgcc 120

ggagacccca acatgaaccc tgttctgaaa gcttgcagtc tgagtgtgat tctttgcaat 180

cagttaaaac tttcaacaat ggatctcttg gttccggcat cgatgaagaa cgcagcgaaa 240

tgcgataact aatgtgaatt gcagaattca gtgaatcatc gagtctttga acgcacattg 300

cgccccctgg tattccgggg ggcatgcctg tccgagcgtc attgctgccc tcaagcccgg 360

cttgtgtgtt gggccctcgt cccccggctc ccgggggacg ggcccgaaag gcagcggcgg 420

caccgcgtcc ggtcctcgag cgtatggggc ttcgtcttcc gctccgtagg cccggccggc 480

gcccgccgac gcatttattt gcaacttgtt tttttccagg ttgacctcgg atcaggtagg 540

gatacccgct gaacttaagc atatcaaaaa gcggaggaa 579

Claims

1.一种深海来源的土曲霉B12（Aspergillus terreus B12），于2021年1月10保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是CCTCC NO：M2021041，保藏地址：中国武汉武汉大学。

2.根据权利要求1所述的土曲霉B12在制备抗菌佐剂的应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述菌株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于所述的抗菌佐剂为Butyrolactone I。