CN112898261A - 一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体提供了一种预防及治疗炎症的化合物，具有式Ⅰ～Ⅷ所示结构，属2‑(2‑苯乙基)色酮类化合物。以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性评价，式I～Ⅷ所示的化合物能够抑制NO的产生，体现抗炎活性。因此表明上述化合物能够用于制备预防、治疗和/或缓解炎症的食品和/或药品。

Description

一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及天然药物技术领域，尤其涉及一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用。
背景技术
炎症本身是一种生物防御反应，为了消除有害刺激、清除坏死的细胞、并修复受损的组织而产生的一系列生理反应，例如红肿、发热、疼痛以及功能障碍等等，这些反应是免疫系统在感染和组织损伤过程中维持正常组织稳态的基本行为。炎症在分子水平上是一个复杂的过程，炎症期间由巨噬细胞促进产生促炎因子，所述促炎因子包括肿瘤坏死因子(TNF-α)，各种白细胞介素，前列腺素(PG)，一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)等。研究表明哮喘，癌症，关节炎和其他相关的慢性退行性疾病均与这些促炎介质的过量产生有关。为了治愈炎症性疾病，需要调节整个过程中分泌的各种化学介质的产生。世界范围内，最常见的用于炎症和相关疾病的药物代表有阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬、酮洛芬、氟比洛芬等。然而，现有的炎症药物并非在所有病例中都有效，而且长期服用这些药物会引起一些不良反应，如失眠、呕吐、头痛、高血压等。因此，有必要寻找新的抗炎活性物质，为新型抗炎药物的研发提供先导物。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用，能够抑制NO的产生，具有抗炎活性。
为达到上述目的，本发明提供了一种预防及治疗炎症的化合物，具有式Ⅰ～Ⅷ所示结构：
Figure BDA0002919717160000021
本发明提供的上述化合物分离自丝沉香。丝沉香的基源植物为Aquilariafilaria，主要产于菲律宾、印度尼西亚、巴布亚新几内亚等地。我国每年从印度尼西亚进口大量的丝沉香，然而丝沉香的化学成分和生物活性目前未见报道，且没有抗炎活性的报道。本发明首次从丝沉香中分离得到上述化合物，并报道了其抗炎活性。
本发明提供了上述式I～Ⅷ所示化合物的制备方法，包括：
步骤1：将丝沉香粉碎后，以体积分数不低于95％的乙醇水溶液超声提取(优选提取6次)，所得浸提液过滤后合并浓缩得浸膏A；
步骤2：将所述浸膏A加水制成混悬液，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B，正丁醇萃取液浓缩制成浸膏C；
步骤3：取浸膏B，过减压柱(优选硅胶H)，经石油醚、乙酸乙酯(优选1:0→5:1,V/V)以及氯仿、甲醇(优选1:0→0:1,V/V)的混合液梯度洗脱，获得19个流分，记为Fr.1～Fr.19；
步骤4：取Fr.11，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.11-1～Fr.11-3；
步骤5：取Fr.11-2，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到30个流份，记为Fr.11-2-1～Fr.11-2-30；
步骤6：取Fr.11-2-1，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，60％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅷ化合物；
步骤7：取Fr.13，过MCI柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1～Fr.13-4；
步骤8：取Fr.13-1，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到15个流份，记为Fr.13-1-1～Fr.13-1-15；
步骤9：取Fr.13-1-8，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-8-1～Fr.13-1-8-4；
步骤10：取Fr.13-1-8-4，过硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯梯度洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-8-4-1～Fr.13-1-8-4-5；
步骤11：取Fr.13-1-8-4-1，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，34％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅴ化合物；
步骤12：取Fr.13-1-8-4-2，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，36％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅲ化合物；
步骤13：取Fr.13-1-7，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-7-1～Fr.13-1-7-4；
步骤14：取Fr.13-1-7-4，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，得到6个流份，记为Fr.13-1-7-4-1～Fr.13-1-7-4-6；
步骤15：取Fr.13-1-7-4-1，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，47％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅳ化合物；
步骤16：取Fr.13-1-10，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-10-1～Fr.13-1-10-5；
步骤17：取Fr.13-1-10-5，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱得到22个流份，记为Fr.13-1-10-5-1～Fr.13-1-10-5-22；
步骤18：取Fr.13-1-10-5-16，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，33％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅶ化合物；
步骤19：取Fr.13-1-10-4，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.13-1-10-4-1～Fr.13-1-10-4-3；
步骤20：取Fr.13-1-10-4-2，过硅胶柱，以氯仿：甲醇梯度洗脱得到15个流份，记为Fr.13-1-10-4-2-1～Fr.13-1-10-4-2-15；
步骤21：取Fr.13-1-10-4-2-7，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，50％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅰ化合物；
步骤22：取Fr.15，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到45个流份，记为Fr.15-1～Fr.15-45；
步骤23：取Fr.15-20，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.15-20-1～Fr.15-20-3；
步骤24：取Fr.15-20-3，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，25％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅵ化合物；
步骤25：取Fr.15-17，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到2个流份，记为Fr.15-17-1～Fr.15-17-2；
步骤26：取Fr.15-17-2，经硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯梯度洗脱，得到7个流份，记为Fr.15-17-2-1～Fr.15-17-2-7；
步骤27：取Fr.15-17-2-5，经半制备HPLC(优选C18色谱柱，36％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅱ化合物。
本发明以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性评价，结果表明，式I-Ⅷ所示的化合物可有效抑制NO的产生，体现抗炎活性。
本发明中，所述RAW264.7为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞。
所述LPS为脂多糖，是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。
基于此，本发明提供了上述化合物或上述制备方法制备的化合物抑制产生促炎因子的应用。
本发明优选的，所述促炎因子包括肿瘤坏死因子(TNF-α)、各种白细胞介素、前列腺素(PG)、一氧化氮(NO)、活性氧(ROS)等中的一种或多种。
本发明提供了上述化合物或上述制备方法制备的化合物作为NO生成抑制剂的应用。
本发明提供了上述化合物或上述制备方法制备的化合物在制备预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的药物中的应用。
本发明优选的，所述炎症反应包括：机体发红、肿胀、发热、疼痛中的一种或多种。
本发明提供了一种预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的药物，包括式Ⅰ～Ⅷ所示化合物中的一个或多个，以及药学上可接受的辅剂；
Figure BDA0002919717160000051
本发明优选的，所述药学上可接受的辅料包括水果粉、食用香精、甜味剂、酸味剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂等中的一种或两者以上的混合物。
本发明优选的，所述药物的剂型为口服制剂，更优选为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。
更优选的，所述胶囊剂为硬胶囊剂或软胶囊剂。更优选的，所述片剂为口服片剂或口腔片剂。更优选的，所述口服片剂指供口服的片剂，多数此类片剂中的药物是经胃肠道吸收而发挥作用，也有的片剂中的药物是在胃肠道局部发挥作用。在本发明提供的一些实施例中，口服片剂为普通压制片、分散片、泡腾片、咀嚼片、包衣片或缓控释片。
本发明还提供了一种治疗炎症的方法，其为给予本发明所述的药物。
本发明还提供了一种预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的食品，包括式Ⅰ～Ⅷ所示化合物中的一个或多个；
Figure BDA0002919717160000061
与现有技术相比，本发明提供了一种预防及治疗炎症的化合物，具有式Ⅰ～Ⅷ所示结构，属2-(2-苯乙基)色酮类化合物。以LPS诱导RAW264.7产生NO为模型进行抗炎活性评价，式I～Ⅷ所示的化合物能够抑制NO的产生，体现抗炎活性。因此表明上述化合物能够用于制备预防、治疗和/或缓解炎症的食品和/或药品。
附图说明
图1是式(Ⅰ)所示化合物的1H NMR图谱；
图2是式(Ⅰ)所示化合物的13C NMR图谱；
图3是式(Ⅰ)所示化合物的HSQC图谱；
图4是式(Ⅰ)所示化合物的1H-13C HMBC图谱；
图5是式(Ⅰ)所示化合物的1H-1H COSY图谱；
图6是式(Ⅰ)所示化合物的ROESY图谱；
图7是式(Ⅱ)所示化合物的1H NMR图谱；
图8是式(Ⅱ)所示化合物的13C NMR图谱；
图9是式(Ⅱ)所示化合物的HSQC图谱；
图10是式(Ⅱ)所示化合物的1H-13C HMBC图谱；
图11是式(Ⅱ)所示化合物的1H-1H COSY图谱；
图12是式(Ⅱ)所示化合物的ROESY图谱；
图13是式(Ⅲ)所示化合物的1H NMR图谱；
图14是式(Ⅲ)所示化合物的13C NMR图谱；
图15是式(Ⅲ)所示化合物的HSQC图谱；
图16是式(Ⅲ)所示化合物的1H-13C HMBC图谱；
图17是式(Ⅲ)所示化合物的1H-1H COSY图谱；
图18是式(Ⅲ)所示化合物的ROESY图谱；
图19是式(Ⅳ)所示化合物的1H NMR图谱；
图20是式(Ⅳ)所示化合物的13C NMR图谱；
图21是式(Ⅳ)所示化合物的HSQC图谱；
图22是式(Ⅳ)所示化合物的1H-13C HMBC图谱；
图23是式(Ⅳ)所示化合物的1H-1H COSY图谱；
图24是式(Ⅳ)所示化合物的ROESY图谱；
图25是式(Ⅴ)所示化合物的1H NMR图谱；
图26是式(Ⅴ)所示化合物的13C NMR图谱；
图27是式(Ⅴ)所示化合物的HSQC图谱；
图28是式(Ⅵ)所示化合物的1H NMR图谱；
图29是式(Ⅵ)所示化合物的13C NMR图谱；
图30是式(Ⅵ)所示化合物的HSQC图谱；
图31是式(Ⅶ)所示化合物的1H NMR图谱；
图32是式(Ⅶ)所示化合物的13C NMR图谱；
图33是式(Ⅶ)所示化合物的HSQC图谱；
图34是式(Ⅷ)所示化合物的1H NMR图谱；
图35是式(Ⅷ)所示化合物的13C NMR图谱；
图36是式(Ⅷ)所示化合物的HSQC图谱；
图37是本发明提供的化合物的1H-1H COSY和关键的1H-13C HMBC示意图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的领域，尤其涉及一种预防及治疗炎症的化合物及其制备方法和应用进行详细描述。
本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
实施例1
1.1仪器与试剂
Bruker AV-500型超导核磁共振波谱仪(瑞士Bruker公司)；
Autospec300质谱仪(英国VG公司)；
分析型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；
半制备高效液相色谱仪(美国Dionex公司)；
N-1000(2L)立式旋转蒸发仪和CA-1111冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)；
SHZ-D(Ⅲ)循环真空泵(上海隆拓仪器设备有限公司)；
AS 220.R2万分之一电子秤(RADWAG Wagi Elektroniczne)；
Sephadex LH-20凝胶(Merck Co.Ltd)；
C18反相硅胶(20～45μm，日本Fuji Silysia Chemical Ltd公司)；
柱层析用硅胶和薄层层析硅胶板(青岛海洋化工厂)；
氘代试剂和色谱甲醇(德国Merck公司)；
95％乙醇、重蒸甲醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚、丙酮等常用有机试剂(天津科密欧、天津福晨、广州光华等公司)。
1.2化合物的制备和结构鉴定
取丝沉香粉碎成粉末后，采用95％以上的乙醇水溶液超声提取6次，所得浸提液过滤后合并浓缩成浸膏。之后加水搅拌制成混悬液，依次用乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，各萃取层萃取至萃取液无色。各萃取层蒸发浓缩制成浸膏待用。
取乙酸乙酯层浸膏，过减压柱(硅胶H)，采用石油醚：乙酸乙酯(1:0→5:1,V/V)和氯仿：甲醇(1:0→0:1,V/V)系统梯度洗脱，并将所得馏分分别点板浓缩合并，得到19个流分(Fr.1～Fr.19)。
将其中Fr.11，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.11-1～Fr.11-3；取Fr.11-2，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到30个流份，记为Fr.11-2-1～Fr.11-2-30；取Fr.11-2-1，经半制备HPLC(C18色谱柱，60％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅷ化合物(tR＝15.0min)。
将其中的Fr.13，过MCI柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1～Fr.13-4。取Fr.13-1，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到15个流份，记为Fr.13-1-1～Fr.13-1-15。取Fr.13-1-8，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-8-1～Fr.13-1-8-4；取Fr.13-1-8-4，过硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯(60：1)梯度洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-8-4-1～Fr.13-1-8-4-5；取Fr.13-1-8-4-1，经半制备HPLC(C18色谱柱，34％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅴ化合物(tR＝16.5min)。
取Fr.13-1-8-4-2，经半制备HPLC(C18色谱柱，36％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅲ化合物(tR＝10.0min)。
取Fr.13-1-7，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-7-1～Fr.13-1-7-4；取Fr.13-1-7-4，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯(10：1)梯度洗脱，得到6个流份，记为Fr.13-1-7-4-1～Fr.13-1-7-4-6；取Fr.13-1-7-4-1，经半制备HPLC(C18色谱柱，47％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅳ化合物(tR＝26min)。
取Fr.13-1-10，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-10-1～Fr.13-1-10-5；取Fr.13-1-10-5，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯(12：1)梯度洗脱得到22个流份，记为Fr.13-1-10-5-1～Fr.13-1-10-5-22；取Fr.13-1-10-5-16，经半制备HPLC(C18色谱柱，33％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅶ化合物(tR＝53.2min)；
取Fr.13-1-10-4，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.13-1-10-4-1～Fr.13-1-10-4-3；取Fr.13-1-10-4-2，过硅胶柱，以氯仿：甲醇(1：0–0：1)梯度洗脱得到15个流份，记为Fr.13-1-10-4-2-1～Fr.13-1-10-4-2-15；取Fr.13-1-10-4-2-7，经半制备HPLC(C18色谱柱，50％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅰ化合物(tR＝35.5min)。
将其中的Fr.15，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到45个流份，记为Fr.15-1～Fr.15-45；取Fr.15-20，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.15-20-1～Fr.15-20-3；取Fr.15-20-3，经半制备HPLC(C18色谱柱，25％乙腈-水洗脱)纯化，得到式Ⅵ化合物(tR＝25.0min)。
取Fr.15-17，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到2个流份，记为Fr.15-17-1～Fr.15-17-2；取Fr.15-17-2，经硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯(10:1–1:1体积比)梯度洗脱，得到7个流份，记为Fr.15-17-2-1～Fr.15-17-2-7；取Fr.15-17-2-5，经半制备HPLC(C18色谱柱，36％甲醇-水洗脱)纯化，得到式Ⅱ化合物(tR＝42.5min)。
化合物结构如下：
Figure BDA0002919717160000111
式I-Ⅷ所示结构鉴定图谱如图1～图37所示。
式I-Ⅷ所示结构鉴定数据如表1、表2所示：
表1.式I-Ⅷ所示化合物的质谱和分子式
化合物 质谱 分子式
Ⅰ 581.1824[M–H]<sup>–</sup> C<sub>34</sub>H<sub>30</sub>O<sub>9</sub>
Ⅱ 405.0688[M+Na]<sup>+</sup> C<sub>18</sub>H<sub>19</sub>ClO<sub>7</sub>
Ⅲ 297.0733[M–H]<sup>–</sup> C<sub>17</sub>H<sub>14</sub>O<sub>5</sub>
Ⅳ 297.0767[M–H]<sup>–</sup> C<sub>17</sub>H<sub>14</sub>O<sub>5</sub>
Ⅴ 351.1[M+Na]<sup>+</sup> C<sub>18</sub>H<sub>16</sub>O<sub>6</sub>
Ⅵ 289.1[M+Na]<sup>+</sup> C<sub>17</sub>H<sub>14</sub>O<sub>3</sub>
Ⅶ 319.4[M+Na]<sup>+</sup> C<sub>18</sub>H<sub>16</sub>O<sub>4</sub>
Ⅷ 333.2[M+Na]<sup>+</sup> C<sub>19</sub>H<sub>18</sub>O<sub>4</sub>
1H NMR(500MHz)和13C NMR(125MHz)数据如表2所示：
表2.式I-Ⅳ所示化合物的NMR数据(溶剂为氘代甲醇)
Figure BDA0002919717160000112
Figure BDA0002919717160000121
以上数据以及图谱验证了上述化合物结构。
实施例2：式I-Ⅷ化合物抗炎活性评价
2.1仪器与材料
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)、非洲绿猴肾细胞(Vero)由中国科学院干细胞库提供；
SW-40超净工作台(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)；
CO2培养箱(英国RS Biotech公司)；
ELX-800酶标仪(美国宝特公司)；
胎牛血清FBS，DMEM培养液购自Gibco，USA；
3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)购自amresco，USA；
吲哚美辛购自Sigma公司。
2.2抗炎活性评价
选取RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)，在96孔平底细胞培养板上接种100μL浓度为5×104个/mL的细胞，培养于37℃，5％CO2，90％以上湿度的条件下，24h后加入50μL配制好的待测化合物溶液，继续在该条件下培养，1h后加入50μL配制的LPS(终浓度500ng/mL)溶液，24h后每孔取上清100μL于新的96孔板中，之后向每孔加入100μL(40mg/mL)的Griess试剂，十字交叉法混匀。于酶标仪540nm波长下测定并记录每孔的吸光度，按下面公式计算NO抑制率。对照组为吲哚美辛，阴性对照组为DMSO，把待测化合物倍半稀释5个浓度梯度。用横坐标表示待测化合物浓度，纵坐标表示抑制率，作图求出待测化合物的IC50值。
抑制率(％)＝(C2-C1)/(C2-C0)×100％；
式中：C0、C1、C2分别为540nm下测得的空白对照组(不加LPS)、实验组、阴性(加LPS)对照组的吸光值。计算各浓度下的抑制率并绘制化合物浓度—抑制率曲线图，计算得到化合物对LPS诱导RAW264.7产生NO的半抑制浓度(IC50值)。结果如表3所示，可以看出，上述化合物能有效抑制RAW264.7细胞NO的产生量，表现出一定的抗炎活性且效果显著，优于阳性对照吲哚美辛。
表3化合物对RAW264.7产生NO的抑制作用
测试样品 IC<sub>50</sub>±SD(μM)
吲哚美辛(阳性对照) 52.30±2.11
化合物I 19.60±0.48
化合物Ⅱ 28.19±0.85
化合物Ⅲ 12.82±0.86
化合物Ⅳ 7.09±0.79
化合物Ⅴ 22.53±1.91
化合物Ⅵ 23.48±0.71
化合物Ⅶ 21.48±0.74
化合物Ⅷ 57.59±2.88
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种预防及治疗炎症的化合物，具有式Ⅰ～Ⅷ所示结构：
Figure FDA0002919717150000011
2.式I～Ⅷ所示化合物的制备方法，包括：
步骤1：将丝沉香粉碎后，以体积分数不低于95％的乙醇水溶液超声提取，所得浸提液过滤后合并浓缩得浸膏A；
步骤2：将所述浸膏A加水制成混悬液，依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩制成浸膏B，正丁醇萃取液浓缩制成浸膏C；
步骤3：取浸膏B，过减压柱，经石油醚、乙酸乙酯以及氯仿、甲醇的混合液梯度洗脱，获得19个流分，记为Fr.1～Fr.19；
步骤4：取Fr.11，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.11-1～Fr.11-3；
步骤5：取Fr.11-2，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到30个流份，记为Fr.11-2-1～Fr.11-2-30；
步骤6：取Fr.11-2-1，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅷ化合物；
步骤7：取Fr.13，过MCI柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1～Fr.13-4；
步骤8：取Fr.13-1，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到15个流份，记为Fr.13-1-1～Fr.13-1-15；
步骤9：取Fr.13-1-8，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-8-1～Fr.13-1-8-4；
步骤10：取Fr.13-1-8-4，过硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯梯度洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-8-4-1～Fr.13-1-8-4-5；
步骤11：取Fr.13-1-8-4-1，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅴ化合物；
步骤12：取Fr.13-1-8-4-2，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅲ化合物；
步骤13：取Fr.13-1-7，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到4个流份，记为Fr.13-1-7-1～Fr.13-1-7-4；
步骤14：取Fr.13-1-7-4，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱，得到6个流份，记为Fr.13-1-7-4-1～Fr.13-1-7-4-6；
步骤15：取Fr.13-1-7-4-1，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅳ化合物；
步骤16：取Fr.13-1-10，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇：氯仿＝1：1的混合液进行洗脱，得到5个流份，记为Fr.13-1-10-1～Fr.13-1-10-5；
步骤17：取Fr.13-1-10-5，过硅胶柱，以石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱得到22个流份，记为Fr.13-1-10-5-1～Fr.13-1-10-5-22；
步骤18：取Fr.13-1-10-5-16，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅶ化合物；
步骤19：取Fr.13-1-10-4，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.13-1-10-4-1～Fr.13-1-10-4-3；
步骤20：取Fr.13-1-10-4-2，过硅胶柱，以氯仿：甲醇梯度洗脱得到15个流份，记为Fr.13-1-10-4-2-1～Fr.13-1-10-4-2-15；
步骤21：取Fr.13-1-10-4-2-7，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅰ化合物；
步骤22：取Fr.15，过反相柱，以30％～100％甲醇水溶液梯度洗脱，得到45个流份，记为Fr.15-1～Fr.15-45；
步骤23：取Fr.15-20，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到3个流份，记为Fr.15-20-1～Fr.15-20-3；
步骤24：取Fr.15-20-3，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅵ化合物；
步骤25：取Fr.15-17，过葡聚糖凝胶柱，以甲醇进行洗脱，得到2个流份，记为Fr.15-17-1～Fr.15-17-2；
步骤26：取Fr.15-17-2，经硅胶柱，以氯仿：乙酸乙酯梯度洗脱，得到7个流份，记为Fr.15-17-2-1～Fr.15-17-2-7；
步骤27：取Fr.15-17-2-5，经半制备HPLC纯化，得到式Ⅱ化合物。
3.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的制备方法制备的化合物抑制产生促炎因子的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述促炎因子包括肿瘤坏死因子、白细胞介素、前列腺素、一氧化氮、活性氧中的一种或多种。
5.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的制备方法制备的化合物作为NO生成抑制剂的应用。
6.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的制备方法制备的化合物在制备预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述炎症反应包括：机体发红、肿胀、发热、疼痛中的一种或多种。
8.一种预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的药物，包括式Ⅰ～Ⅷ所示化合物中的一个或多个，以及药学上可接受的辅剂；
Figure FDA0002919717150000031
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、汤剂、膏剂、露剂、口服液剂、滴丸剂或糖浆剂。
10.一种预防、治疗或缓解炎症或炎症反应的食品，包括式Ⅰ～Ⅷ所示化合物中的一个或多个；
Figure FDA0002919717150000041
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