CN108017600B - 六种来源于荔枝草的萜类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及五个二萜(1‑5)与一个倍半萜(6)类化合物的结构、制备方法及其在抗炎、治疗神经退行性疾病药物中的应用，所述的化合物1‑6，具有如下结构。本发明的六个化合物有NO抑制、促进神经轴生长的活性，可用于抗炎、治疗神经退行性疾病药物的开发和应用。
Figure DSB0000195139750000011

Description

六种来源于荔枝草的萜类化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及荔枝草中萜类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
Nitric oxide(NO)是一重要的信使分子，在各种生理生化过程中，起着关键的作用，具有神奇的生理调节功能。在许多组织中，尽管其真正的释放量目前尚难于检测，但已明确释放不同浓度的NO，且浓度的变化与机体的生理机能紧密相关。许多疾病，包括炎症、神经退行性疾病、癌症等，可能是NO的释放或调节不正常引起的。
炎症反应时，炎症介质或致炎物可诱导或增加局部NO的合成及释放，而NO的释放又可诱导促炎症细胞因子产生，如IL-1、TNF-α等。过量的NO可促进血管扩张，增强血管通透性和渗漏，产生细胞毒性。过多的NO的细胞毒性是非特异性的，不仅针对微生物，而且导致细胞周围组织和细胞损害。鉴于炎症与NO的密切关系，抑制NO的生成，已成为抗炎药物的靶标之一。
在中枢神经系统中，NO是神经炎症反应的一个信号。炎症反应伴随着小胶质细胞的活化，并释放大量的NO，产生神经毒性，导致神经元的退化与死亡，进而引起神经退行性疾病。因此，抑制中枢神经系统NO的产生，在治疗神经炎症的同时，对与神经炎症相关的神经退行性疾病，如阿尔兹海默症、帕金森症等有潜在的治疗作用。
植物为我们提供了结构与生物活性多样性的天然产物。为了寻找新的NO抑制剂、进而开发抗炎、以及治疗神经退行性疾病的药物，我们建立了BV-2细胞筛选模型。此细胞在脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)的刺激下，产生NO；在LPS刺激的同时，加入受试药物(化合物或植物提取物)，评价药物抑制NO活性，从而发现抗炎以及治疗神经退行性疾病的药物。
同时，为了进一步评价化合物在治疗神经退行性疾病药物中的潜在应用价值，结合神经退行性疾病的病理特征之一——神经元的进行性退化，我们对荔枝草中得到的化合物1-6的促进神经轴突生长的活性进行了研究。经研究发现，化合物1-6具有显著的抑制NO与促进神经轴突生长的活性，具有开发成为抗炎、治疗阿尔兹海默症等相关神经退行性疾病药物的前景。
发明内容
本发明的目的在于提供荔枝草中6个萜类化合物及其制备方法和应用。
本发明提供的化合物1-5属于松香烷型二萜，化合物6为倍半萜，其具有如下结构。
Figure GSB0000195139740000021
本发明还提供了所述化合物1-6的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)荔枝草(Salvia plebeia)全草用溶剂提取，回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，回收溶剂得到萃取物；
(3)步骤(2)所得萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得流份经MPLC(中压液相色谱，色谱填料为ODS)分离，以甲醇/水，或乙腈/水混合溶剂为流动相梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得流份经HPLC-RI(高效液相-示差检测)色谱分离，以甲醇/水为流动相洗脱，或以乙腈/水为流动相梯度洗脱，得到化合物1-6。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，所述荔枝草为唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)全草的提取物。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，步骤(1)所述的提取方法为加热回流提取或超声提取，所用溶剂为二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的至少一种，药材：溶剂的重量体积比为1∶5～1：15。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，步骤(2)所述的萃取方法，所用有机溶剂为石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的任意一种，水溶液和有机溶剂体积比1∶1～1∶2。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，步骤(3)中，洗脱溶剂为石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂，其比例为100∶2～100∶25。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，步骤(4)中，所述甲醇/水混合溶剂的比例为6∶4～9∶1，优选7∶3～8∶2，或乙腈/水混合溶剂比例为6∶4～8∶1，优选7∶3～8∶2。
本发明提供的化合物1-6的制备方法，步骤(5)中所述流动相甲醇和水混合溶剂、或乙腈和水混合溶剂的体积比例为3∶7～9∶1，优选7∶3～9∶1。流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物1；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物2；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物3；流动相中混合溶剂的比例为5∶1～11∶2得化合物4；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物5；流动相中混合溶剂的比例为5∶2～9∶1得化合物6。
本发明提供的六个萜类化合物具有NO抑制活性与促进神经轴突生长活性。用于制备抗炎、治疗神经退行性疾病药物。
附图说明
图1本发明化合物1的1H NMR谱；
图2本发明化合物1的13C NMR谱；
图3本发明化物1的DEPT135谱；
图4本发明化合物1的HMQC谱；
图5本发明化合物1的HMBC谱；
图6本发明化合物1的1H-1HCOSY谱；
图7本发明化合物2的1H NMR谱；
图8本发明化合物2的13C NMR谱；
图9本发明化合物2的HMQC谱；
图10本发明化合物2的HMBC谱；
图11本发明化合物3的1H NMR谱；
图12本发明化合物3的13C NMR谱；
图13本发明化合物3的HMQC谱；
图14本发明化合物3的HMBC谱；
图15本发明化合物4的1H NMR谱；
图16本发明化合物4的13C NMR谱；
图17本发明化合物4的HMQC谱；
图18本发明化合物4的HMBC谱；
图19本发明化合物5的1H NMR谱；
图20本发明化合物5的13C NMR谱；
图21本发明化合物5的HMQC谱；
图22本发明化合物5的HMBC谱；
图23本发明化合物6的1H NMR谱；
图24本发明化合物6的13C NMR谱；
图25本发明化合物6的HMQC谱；
图26本发明化合物6的HMBC谱；
图27本发明化合物1，3-6的HMBC与1H-1H COSY相关信号图；
图28本发明化合物1-6的实验和(或)计算ECD谱。
图29本发明化合物1-6的结构式
具体实施方式
下面的实施例将对本发明予以进一步的说明，但并不因此而限制本发明。
实施例1
(1)荔枝草全草10kg用甲醇加提取3次(用量3×60L)，减压回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得甲醇提取物，加水制成混悬液，用石油醚萃取，得石油醚萃取物；
(3)步骤(2)经硅胶柱色谱法分离，依次以石油醚∶丙酮100∶0，100∶2，100∶3，100∶5，100∶7，100∶10，100∶15，100∶25洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚∶丙酮100∶2～100∶15流份经中压液相色谱(MPLC)分离，以甲醇/水7∶3～9∶1为流动相梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇/水(8∶2)流份经HPLC-RI分离，以甲醇/水70∶30～90∶10为流动相洗脱得到化合物1(收率0.002％)，2(收率0.003％)，3(收率0.003％)，4(收率0.002％)，5(收率0.001％)，和6(收率0.001％)。
根据化合物1-6的理化性质和波谱数据鉴定了其结构(化合物1-6的波谱图见图1-图26)。
化合物1的结构鉴定数据如下：
无色结晶(甲醇)；mp 123-124℃；
Figure GSB0000195139740000061
(c 0.1，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)211(Δε-5.6)，250(Δε+1.8)，341(Δε-4.3)nm；IR(KBr)vmax3436，2959，2921，1742，1708，1646，1463，1241，756cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)and 13C NMR(100MHz，CDCl3)数据见表1和表2；ESIMS m/z 375[M+H]+；HRESIMS m/z 375.2174[M+H]+(calcd for C22H31O5，375.2171)。化合物的HMBC相关信号见图27。该化合物的绝对构型通过运用TDDFT(时间密度泛函理论)方法进行ECD(电子圆二色谱)计算确定，将实验测出的ECD谱图与计算得到的对映异构体的ECD图谱进行比较，确定了该化合物的绝对构型为2S，5S，8R，10R，ECD图谱见图28。
化合物2的结构鉴定数据如下：
无色油状；
Figure GSB0000195139740000062
(c 0.1，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)213(Δε-5.2)，249(Δε+2.3)，342(Δε-5.2)nm；IR(KBr)vmax3453，2922，2860，1638，1461，1273，1009，750cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)and 13C NMR(100MHz，CDCl3)数据见表1和表2；ESIMS m/z 333；HRESIMS m/z 333.2069[M+H]+(calcd for C20H29O4，333.2066)。该化合物的绝对构型通过ECD确定。化合物2具有与化合物1相同的母核与同样的相对构型，且化合物1和2的ECD光谱中的Cotton效应几乎一致，从而确定该化合物的绝对构型为确定了该化合物的绝对构型为2S，5S，8R，10R，ECD图谱见图28。
化合物3的结构鉴定数据如下：
无色油状；
Figure GSB0000195139740000071
(c 0.1，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)205(Δε-1.4)，216(Δε+3.2)，241(Δε-0.3)，257(Δε-0.02)，286(Δε-0.6)nm；IR(KBr)vmax3446，2959，2919，1742，1647，1463，1291，1039，753cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)and13C NMR(100MHz，CDCl3)数据见表1和表2；ESIMS m/z 369[M+Na]+；HRESIMS m/z 369.2030[M+Na]+(calcd for C21H30NaO4，369.2042)。化合物的HMBC相关信号见图27。该化合物的绝对构型通过ECD确定。该化合物的绝对构型通过运用TDDFT(时间密度泛函理论)方法进行ECD计算确定，将实验测出的ECD谱图与计算得到的对映异构体的ECD图谱进行比较，确定了该化合物的绝对构型为3S，5S，10R，20S，ECD图谱见图28。
化合物4的结构鉴定数据如下：
无色油状；
Figure GSB0000195139740000072
(c 0.1，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)204(Δε-2.3)nm；IR(KBr)vmax3426，2957，2869，1732，1707，1647，1449，1390，1024，750cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)and13C NMR(100MHz，CDCl3)数据见表1和表2；ESIMS m/z 375[M+H]+；HRESIMS m/z375.2184[M+H]+(calcd for C22H31O5，375.2171)。化合物的HMBC相关信号见图27。该化合物的绝对构型通过ECD确定。该化合物的绝对构型通过运用TDDFT(时间密度泛函理论)方法进行ECD计算确定，将实验测出的ECD谱图与计算得到的对映异构体的ECD图谱进行比较，确定了该化合物的绝对构型为2S，5S，7S，10R，ECD图谱见图28。
化合物5的结构鉴定数据如下：
白色无定型粉末；
Figure GSB0000195139740000073
(c 0.2，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)197(Δε-6.8)，214(Δε+1.3)，279(Δε+4.0)，338(Δε-1.8)nm；IR(KBr)vmax3447，2958，2923，1707，1642，1461，1261，752cm-1；1H NMR(400MHz，CDCl3)and13C NMR(100MHz，CDCl3)数据见表1和表2；ESIMSm/z 389[M+H]+；HRESIMS m/z 389.1967[M+H]+(calcd for C22H29O6，389.1964)。化合物的HMBC相关信号见图27。该化合物的绝对构型通过ECD(电子圆二色谱)确定。该化合物的绝对构型通过运用TDDFT(时间密度泛函理论)方法进行ECD计算确定，将实验测出的ECD谱图与计算得到的对映异构体的ECD图谱进行比较，确定了该化合物的绝对构型为2S，10R，ECD图谱见图28。
化合物6的结构鉴定数据如下：
无色油状；
Figure GSB0000195139740000081
(c 0.3，CH2Cl2)；ECD(CH3CN)192(Δε+2.3)，217(Δε-1.0)nm；IR(KBr)vmax3446，2921，2872，1648，1463，1368，1024，749cm-1；1H NMR(400MHz，pyridine-d5)δ2.04(1H，m，H-1)，2.25(1H，m，H-2α)，2.31(1H，m，H-2β)，5.34(1H，br s，H-3)，2.54(1H，dd，J＝6.3，0.8Hz，H-5)，1.86(1H，overlapped，H-6)，1.97(1H，m，H-7)，1.90(1H，m，H-8α)，1.96(1H，m，H-8β)，4.24(1H，dd，J＝5.3，1.4Hz，H-9)，1.49(1H，sept，J＝6.6Hz，H-11)，0.82(1H，d，J＝6.9Hz，H-12)，0.84(1H，d，J＝6.9Hz，H-13)，0.91(1H，s，H-14)，1.71(1H，br d，J＝1.8Hz，H-15)；13C NMR(100MHz，pyridine-d5)δ38.1(C-1)，30.2(C-2)，116.9(C-3)，143.9(C-4)，47.1(C-5)，44.8(C-6)，41.8(C-7)，32.1(C-8)，74.5(C-9)，45.2(C-10)，32.1(C-11)，19.8(C-12)，19.4(C-13)，16.5(C-14)，23.0(C-15)；ESIMS m/z 221[M+H]+；HRESIMSm/z 221.1897[M+H]+(calcd for C15H25O，221.1905)。化合物的HMBC相关信号见图27。该化合物的绝对构型通过ECD确定。该化合物的绝对构型通过运用TDDFT(时间密度泛函理论)方法进行ECD计算确定，将实验测出的ECD谱图与计算得到的对映异构体的ECD图谱进行比较，确定了该化合物的绝对构型为1R，5R，6R，7R，9S，10S，ECD图谱见图28。
表1 化合物1-5的13C NMR数据
Figure GSB0000195139740000082
Figure GSB0000195139740000091
表2 化合物1-5的1H NMR数据
Figure GSB0000195139740000092
a重叠的信号。
实施例2
(1)荔枝草全草8.0kg用乙醇加提取3次(用量3×48L)，减压回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得乙醇提取物，加水制成混悬液，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯萃取物；
(3)步骤(2)经硅胶柱色谱法分离，依次以石油醚∶丙酮100∶0，100∶2，100∶3，100∶5，100∶7，100∶10，100∶15，100∶25洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚∶乙酸乙酯100∶2～100∶20流份经中压液相色谱(MPLC)分离，以甲醇/水7∶3～9∶1为流动相梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇/水(8∶2)流份经HPLC-RI分离，以甲醇/水70∶30～90∶10为流动相洗脱得到化合物1(收率0.002％)，2(收率0.003％)，3(收率0.003％)，4(收率0.002％)，5(收率0.001％)，和6(收率0.001％)。
化合物1-6的结构鉴定方法见实施例1。
实施例3
(1)荔枝草全草8.0kg用丙酮提取3次(用量3×48L)，减压回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得丙酮提取物，加水制成混悬液，用二氯甲烷萃取，得二氯甲烷萃取物；
(3)步骤(2)经硅胶柱色谱法分离，依次以石油醚∶丙酮100∶0，100∶2，100∶3，100∶5，100∶7，100∶10，100∶15，100∶25洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得的石油醚∶丙酮100∶2～100∶20流份经中压液相色谱(MPLC)分离，以甲醇/水7∶3～9∶1为流动相梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得甲醇/水(8∶2)流份经HPLC-RI分离，以乙腈/水70∶30～90∶10为流动相洗脱得到化合物1(收率0.002％)，2(收率0.003％)，3(收率0.003％)，4(收率0.002％)，5(收率0.001％)，和6(收率0.001％)。
化合物1-6的结构鉴定方法见实施例1。
实施例4
荔枝草中化合物1-6的NO抑制活性测试。
(1)实验原理
NO与炎症、神经退行性疾病等密切相关，具有NO抑制活性的化合物，是潜在的治疗炎症、阿尔兹海默症、帕金森症等神经退行性疾病的药物。本实验通过建立BV-2细胞模型，此细胞在LPS的刺激下，产生NO；在LPS刺激的同时，加入受试化合物，评价化合物1-2的抑制NO活性，从而发现抗炎以及治疗神经退行性疾病的潜在药物。
(2)实验方法
①小鼠小胶质细胞BV-2的培养
以DMEM高糖培养基作为基础配制成内含10％胎牛血清及1％双抗(青霉素∶链霉素＝1∶1)细胞培养液，37℃，5％CO2培养箱培养，2～3天换液一次，至细胞基本铺满培养瓶瓶底，传代或实验处理。
②化合物的配制方法
待测化合物用DMSO溶解，配成母液，浓度为30mM，储存于-20℃。临用时用DMEM培养液将其进行稀释，依次稀释为10mM、5mM、3mM、1mM、0.1mM、0.01mM。
③待测化合物的细胞毒性
将对数生长期的细胞，调细胞密度为1×105个/mL，接种于96孔板，置于37℃，5％的培养箱中，培养24小时后，加不同浓度的待测化合物，20h后，观察细胞的存活情况，并用MTT法定量检测化合物对细胞的毒性，以确定化合物的测试浓度。
④化合物的NO抑制活性
将处于对数生长期的BV-2细胞，调细胞密度接种于96孔板(5×104细胞/孔)，培养24小时，待细胞完全贴壁后，加入不同浓度的待处理化合物，预处理30min后，加入LPS至终浓度为0.2μg/mL，继续培养24小时后，取50μL细胞培养上清液，分别加入50μL Griess试剂(A液∶B液＝1∶1，A液含有1％的磺胺，5％的磷酸，B液为0.1％的α-萘乙二胺二盐酸盐，A，B液需要避光保存)，按Griess法，于550nm波长下测吸光度值，根据吸光度值和标准曲线计算各化合物对NO的抑制率。
⑤统计方法
全部资料采用SPSS(13.0)统计软件包进行检验分析。结果用平均值±标准误表示，评价整体性差异，组间均数采用One-Way ANOVA分析法进行方差齐性分析，并结合Dunnett’s test分析方法进行组间比较。多样本方差齐性检验采用Levene检验，当p＞0.05，方差是齐的，采用Dunnett’s双侧T检验多组间均数的差异，当p＜0.05，方差不齐，采用Dunnett T3检验多组间均数的差异。
⑥IC50的计算方法
将各剂量和抑制率等参数用非线性回归拟合计算化合物抑制NO的IC50值。
(3)实验结果：化合物抑制NO的IC50值见表3。
表3 化合物1-6抑制NO的IC50值
Figure GSB0000195139740000121
a2-Methyl-2-thiopseudourea，sulfate(SMT)为阳性对照药物。
结果表明实施例1-3中所制备得到的化合物1-6具有NO抑制活性。
实施例5
荔枝草中化合物1-6促进神经轴突生长活性测试
(1)实验原理
在神经退行性疾病的进程中伴随着神经元的进行性退化和缺失，神经元退化的一个显著标志是神经突触(包括轴突和树突)的萎缩和消失。因此，阻止神经元退化-促进神经突触(轴突和树突)的生长/恢复，成为治疗神经退行性疾病的策略之一。本实验建立PC12细胞模型，通过体外培养，此细胞在一定浓度的神经生长因子(nerve growth factor，NGF)或受试药物(化合物)的作用下，经过一定的时间，PC12细胞发生形态学的改变，即没有神经轴突的PC12细胞长出神经轴突(Figure 2)，通过在相差显微镜下观察有神经轴突长出的细胞占细胞总数的比例，判断化合物活性的强弱，从而发现促进神经轴突生长的活性化合物以及治疗神经退行性疾病的潜在药物。
(2)实验方法
①PC12细胞的培养
以DMEM高糖培养基作为基础配制成内含5％胎牛血清，5％马血清及1％双抗(青霉素∶链霉素＝1∶1)细胞培养液，37℃，5％CO2培养箱培养，2～3天换液一次，至细胞基本铺满培养瓶瓶底，传代或实验处理。
②化合物的配制方法见实施例6
③待测化合物的细胞毒性
将对数生长期的细胞，调细胞密度为5×104个/mL，接种于96孔板，置于37℃，5％的培养箱中，培养24小时后，加不同浓度的待测化合物，20h后，观察细胞的存活情况，并用MTT法定量检测化合物对细胞的毒性，以确定化合物的测试浓度。
④化合物促进神经轴突生长的活性
将处于对数生长期的PC12细胞，调细胞密度接种于24孔板(3×104细胞/孔)，培养24小时后，将培养液换为含有不同浓度的NGF，1％胎牛血清，1％马血清的培养液，同时加不同浓度的受试药物(设阳性对照以及空白对照)，37℃培养96小时后，在相差显微镜下观察细胞的神经轴突长出情况，计算有神经轴突长出的细胞(神经轴突长度等于或大于细胞直径)占细胞总数的比例，最后对所得数据进行统计分析，从而确定受试药物的作用强度，即我们所要研究的植物提取物、各萃取层以及分离所得的单体化合物的活性强度。
⑤统计方法
全部资料采用SPSS(13.0)统计软件包进行检验分析。结果用平均值±标准误表示，评价整体性差异，组间均数采用One-WayANOVA分析法进行方差齐性分析，并结合Dunnett’s test分析方法进行组间比较。多样本方差齐性检验采用Levene检验，当p＞0.05，方差是齐的，采用Dunnett’s双侧T检验多组间均数的差异，当p＜0.05，方差不齐，采用Dunnett T3检验多组间均数的差异。
⑥EC50的计算方法
将各剂量和有神经轴突长出的细胞百分比等参数用非线性回归拟合计算化合物促进神经轴突生长的EC50值。
(3)实验结果：化合物促进神经轴突生长的EC50值见表4。
表4 化合物2，4，5，和6促进神经轴突生长的的EC50值
Figure GSB0000195139740000141
aNGF(nerve growth factor)作为阳性对照，EC50值，5.3×10-2μg/mL。
结果表明实施例1-3中所制备得到的化合物2，4，5，和6具有促进神经轴突生长活性。

Claims (10)

1.荔枝草中二萜与倍半萜类化合物，其特征在于：具有如下结构：
Figure FSB0000195139730000011
2.一种权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)用溶剂提取，回收提取液得粗提物；
(2)步骤(1)所得粗提物溶解于水中，采用与水不相混溶的有机溶剂萃取，减压回收溶剂得到萃取物；
(3)步骤(2)所得萃取物经硅胶柱色谱法分离，以石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱；
(4)上述步骤(3)中所得流份经色谱填料为ODS的MPLC分离，以甲醇/水，或乙腈/水混合溶剂为流动相梯度洗脱；
(5)上述步骤(4)中所得流份经HPLC-RI色谱分离，以甲醇/水为流动相洗脱，或以乙腈/水为流动相梯度洗脱，得到化合物1-3，5-6。
3.按照权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于：所述荔枝草为唇形科(Labiatae)鼠尾草属荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)全草。
4.按照权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的提取方法为加热回流提取或超声提取1～3次，所用溶剂为石油醚、环己烷、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇中的至少一种，药材：溶剂的重量体积比为1∶5～1∶15。
5.按照权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的萃取方法，水溶液和有机溶剂体积比1∶1～1∶2，所用的萃取溶剂为石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯中的一种。
6.按照权利要求2所述的化合物制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述洗脱溶剂石油醚/丙酮或石油醚/乙酸乙酯混合溶剂的比例为100∶2～100∶25。
7.按照权利要求2所述的化合物制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述甲醇/水混合溶剂的比例为7∶3～9∶1，或乙腈/水混合溶剂比例为6∶4～9∶1。
8.按照权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于：步骤(5)中所述流动相甲醇/水或乙腈/水混合溶剂为流动相，流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物1；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物2；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物3；流动相中混合溶剂的比例为3∶2～9∶1得化合物5；流动相中混合溶剂的比例为5∶2～9∶1得化合物6。
9.一种药物制剂，其包含有如权利要求1中所述的化合物或药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
10.权利要求1所述的二萜与倍半萜类化合物在制备预防和治疗炎症、神经退行性疾病药物中的应用。
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