CN112868794A - 一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包与其制备方法 - Google Patents

一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包与其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包与其制备方法，属于老年型营养补充食品技术领域。首次将12种营养素补充因子赋型于海洋源‑海参蛋白肽粉、陆生植物源‑大豆蛋白肽粉、陆生动物源优质蛋白‑脱脂乳粉三种低致敏性蛋白基载体，设计出营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护、赋型于低致敏性蛋白基载体的Ⅱ级稳态化保护和双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护技术，创制出富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经BALB/C小鼠致敏性评价模型、小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型及醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺衰减率三类指标检验确证其“低致敏性、高免疫活性、高稳定性”标志性特征，为系列化产品研制提供技术支撑。

Description

一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包与其 制备方法
技术领域
本发明属于老年型辅食营养补充品创制的技术领域，涉及一种12种营养素补充因子被稳定赋型于海洋源-海参免疫活性肽粉、陆生植物源-大豆免疫活性肽粉、陆生动物源优质蛋白-脱脂乳粉3种低致敏性蛋白肽基载体，创制出一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的品质调控技术。
背景技术
“营养包”是一种以大豆、乳类制品等为食物基料，添加多种微量营养素和其他辅料制成的辅食营养补充品。根据不同人群的营养需求特点通常分为孕产妇型辅食营养包、老年型辅食营养包、婴幼儿辅食营养包等。我国营养包每日推荐食用量在10.0～20.0g之间，其中蛋白质的含量应不低于25g/100g，且必须含有钙、铁、锌、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素D等。营养包中有关蛋白质含量、食品添加剂种类与其用量、营养强化剂种类与其用量必须对应满足 GB 5009.5-2016、GB 2760-2014、GB 14880-2012相关要求。
(一)营养素补充因子种类与其生理功能
1、醋酸维生素A
醋酸维生素A，又被称为乙酸维生素A、维生素A油醋酸酯、维生素A乙酸酯，视黄醇乙酸酯、维生素A醋酸酯。2012年颜景超发表的《婴幼儿配方奶粉中维生素A的稳定性研究》论文中表明：醋酸维生素A具有维持正常的视觉反应，促进眼内感光色素的形成，防止夜盲症和视力减退的生理功能；2005年张志波等人在《中国当代儿科》杂志上发表题为《维生素A在胚胎发育中的作用》中提到：维生素A及其活性代谢产物作为人类一种必需的营养物质，参与体内的许多生理过程，能够维持人体正常代谢，包括视力、生殖、生长、细胞分化、维持细胞膜的稳定和发育、免疫功能等。
2、胆钙化醇
维生素D通常有两种形式,即胆钙化醇(cholecalciferol,D3)和麦角骨化醇(ergocalciferol,D2)。2014年萌士安在《医学动物防制》杂志上发表题为《维生素D与人体健康关系》表明：当血中钙和磷两种离子水平较低时，维生素D在维持血钙和磷水平稳定中发挥重要作用，对骨骼正常矿化过程、肌肉收缩、神经传导以及体内所有细胞基本功能都是必需的。胆钙化醇具有维持血液钙和磷稳定、参与某些蛋白质转录的调节、发挥激素样作用、参与体内免疫调节、降低癌症风险等生理功能。
3、氰钴胺
氰钴胺常被称为维生素B12，是唯一含金属元素的维生素。2019年徐琼等人在《食品工业》杂志中发表《维生素B12生物合成及检测技术研究进展》论文中表明，天然维生素B12存在于动物产品中,包括鱼、肉、家禽、鸡蛋和牛奶。研究表明维生素B12对糖尿病视网膜神经细胞有一定的保护作用，其机制可能是维生素B12通过抗氧化作用抑制caspase-3的表达从而抑制神经细胞的凋亡。2002 年Allen,L.H发表在杂志《Advances in ExperimentalMedicine and Biology》上的文章《Impact of vitamin B-12deficiency duringlactation on maternal and infant health》研究表明，母亲的维生素B12缺乏或者摄入不足，可能会因为乳汁中维生素B12含量低导致婴儿的维生素B12缺乏，不仅引起母亲恶性贫血，亦将导致婴儿患有继发性甲基丙二酸尿症。2017年邱峰等人在《南京医科大学学报》上发表文章《帕金森病患者外周神经病变与维生素B12水平的相关性》表明，维生素B12浓度还与帕金森病患者周围神经损害程度呈负相关性。
4、核黄素
核黄素是一种水溶性B族维生素。2004年戴传云等人在《食品研究与开发》杂志上发表的《核黄素生理生化特征及其功能》论文中陈述到：核黄素为机体健康和正常生长所必需，其形成的辅酶是许多氧化酶系统不可缺少的组成部分，在生物氧化过程中参与氢的传递，促进碳水化合物，蛋白质，脂肪，核酸的代谢； 1986年DelaneAA在《British JournalofNutrition》杂志中发表《The influence of riboflavin deficiency onabsorptionand liver storage ofiron in the growth rat》论文中表明：核黄素缺乏可能通过影响小肠中NADH-FMN氧化还原酶(即铁蛋白还原酶)活力而参与铁代谢，即核黄素缺乏可能影响到体内铁的吸收，从而导致缺铁性贫血(I-DA)发生率的增加。
(二)营养素补充因子的稳定性与其衰减问题
基于不同营养素补充剂的稳定性存在显著性差异问题(如表1所示)，我们研发适合于不同消费群体的辅食营养包的核心生产技术时务必高度重视在生产、贮藏、销售环节中各类营养素的稳定性与其衰减情况，以确保各类型辅食营养包产品的品质可控。如朱瑞玉在2019年发表论文《辅食营养补充品货架期内营养素的稳定性及叠加风险研究》明确指出：在不同婴幼儿辅食营养包不同种类维生素的衰减率(AAR)差异比较显著，尤其是维生素A、B1、B2、D、B6与B12等不稳定性(如表2所示)与其衰减率是与营养包产品配方、生产工艺、操作技术人员、设备运行状态等因素直接相关。
表1不同营养素补充剂的稳定性
Figure BDA0002940155890000031
表2辅食营养素(6～36月龄)加速试验检测分析结果表
Figure BDA0002940155890000032
综上，我们需要全面攻克老年型辅食营养包在生产、贮藏、销售环节中因维生素、矿物质等营养素衰减问题、蛋白与脂肪被氧化与其哈败味问题，营养粉吸湿诱导微生物滋生伴随异味物质产生问题等诸多技术瓶颈问题，满足高品质老年型辅食营养包国内外市场需求量，创造更高的经济效益和社会效益。
本发明的技术优势：
主要体现在以下三个方面：
第一，申请专利首次将12种营养素补充因子赋型于以海洋源-海参免疫活性肽粉、陆生植物源-大豆免疫活性肽粉、陆生动物源优质蛋白-脱脂乳粉为营养包的低致敏性蛋白肽基载体，研制出富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，且经BALB/C小鼠致敏性评价模型、小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型及醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR三类指标确证创制的高品质营养包产品具有“低致敏性、高免疫活性、高稳定性”标志性特征；
第二，申请专利是基于醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的稳定性偏低问题，设计出营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护、赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护和双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护技术，经检测分析营养包产品中被三级稳态化保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的稳态化保护效果显著(P <0.01)；
第三，申请专利核心技术中，首次以海洋源优质蛋白-海参干粉、陆生植物源优质蛋白-大豆分离蛋白粉为原料，利用高压脉冲电场物理变性、碱性蛋白酶酶解、超滤、低温喷雾干燥的技术手段制备出经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标和经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α(pg/mL)、IL-6(pg/mL)四项指标确证所制备的低致敏性海参源免疫活性肽粉和低致敏性大豆源免疫活性肽粉的预期目标特性。
发明内容
本发明首次将12种营养素补充因子赋型于以海洋源-海参免疫活性肽粉、陆生植物源-大豆免疫活性肽粉、陆生动物源优质蛋白-脱脂乳粉为营养包的低致敏性蛋白肽基载体，设计出营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护、赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护和双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护技术，研制出富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经BALB/C小鼠致敏性评价模型、小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型及醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR三类约束性指标确证研制的高品质营养包产品具有“低致敏性、高免疫活性、高稳定性”标志性特征，为后续高品质系列化辅食营养包产品设计提供技术支撑。
申请发明的技术方案：
一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，以0.0236～0.0350kg醋酸维生素A、0.0224～0.0336kg胆钙化醇、0.0072 ～0.0108kg氰钴胺、0.0063～0.0094kg盐酸硫胺素、0.0052～0.0078kg核黄素、 0.0298～0.045kg D-泛酸钙、10.475～20.949kg L-乳酸钙、0.4000～0.5182kg焦磷酸铁、0.1659～0.21549kg乙二胺四乙酸铁钠、0.233～0.488kg柠檬酸锌、0.0672 ～0.132kg硒蛋白、8.512～11.356kg葡萄糖酸镁为12种营养素补充因子，以 18.600～25.000kg麦芽糊精为营养素补充因子稳定性保护载体，以8.600～17.200 kg低致敏性海参免疫活性肽粉、15.000～22.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、 15.000～22.000kg的脱脂乳粉为营养包中3种低致敏性蛋白肽基载体，经蛋白基载体的振动过筛、营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护、赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护、双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护的工艺过程，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经检测所制得的营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；且以相同基质内添加同质量海参干粉和同质量大豆分离蛋白粉的、且未经三级稳态化保护制得的对照组样品，经BALB/C小鼠致敏性评价模型血清中IgE和IgG1水平值变化情况确证营养包产品的致敏性显著低于对照组(P<0.05)；经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型的中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1 三项指标确证其提高免疫活性均显著高于对照组(P<0.05)；经贮藏温度为37± 2℃、相对湿度为75±5％，避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)；
1)所述的蛋白基载体的振动过筛，是将低致敏性海参免疫活性肽粉、低致敏性大豆免疫活性肽粉、脱脂乳粉3种营养包低致敏性蛋白肽基载体依次在氮气介导下进行振动筛过筛处理使其颗粒均匀一致，振动筛筛网目数控制在40～60 目，氮气纯度为99.00～99.99％、通氮气量为200～400L/h，通氮气压力为0.2～ 0.4MPa；
2)所述的营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护，是先将0.0236～0.0350kg醋酸维生素A、0.0224～0.0336kg胆钙化醇、0.0072～0.0108kg氰钴胺3种必须添加且稳定性较低的营养素补充因子和营养素补充因子稳定性保护载体18.600～ 25.000kg麦芽糊精置于混料机内避光混合10～15分钟后，再继续将0.0063～ 0.0094kg盐酸硫胺素、0.0052～0.0078kg核黄素、0.0298～0.045kg D-泛酸钙、 10.475～20.949kg L-乳酸钙、0.4000～0.5182kg焦磷酸铁、0.1659～0.21549kg 乙二胺四乙酸铁钠、0.233～0.488kg柠檬酸锌、0.0672～0.132kg硒蛋白、 8.512～11.356kg葡萄糖酸镁9种必须添加且稳定性较好的营养素补充因子装入混料机内进行避光混合10～15分钟，制得Ⅰ级稳态化的营养素粉；
3)所述的赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护，是将制得的Ⅰ级稳态化的营养素粉与预先振动过筛的8.600～17.200kg低致敏性的海参蛋白肽粉、15.000～22.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、15.000～22.000kg的脱脂乳粉3种低致敏性蛋白肽基载体在氮气介导下进行低温气力均衡混合，氮气纯度为 99.00～99.99％、通氮气量为200～1500L/h，通氮气压力为0.4～0.9MPa，气力混合温度为15～20℃，气力混合时间为100～300秒，混吹时间为1～6秒，混吹间隔为1～3秒，制得Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉；
4)所述的双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护，是将制得的Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉置于装有氮气注风口的的定量下料斗中，定量下料斗的承载量为 5～10kg，氮气纯度为99.00～99.99％、氮气通气量为500～800L/h，氮气通气压力为0.1～0.3Mpa；经过全自动条形袋包定量灌装和高温热熔封合，灌装剂量要求为20±0.3g/袋，定量灌装精准度为99.9％以上，热融合温度为125～225℃，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包产品，经检测所制得营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；经BALB/C小鼠致敏性评价模型确证其低致敏特性(P<0.05)，经小鼠巨噬细胞 RAW264.7细胞模型确证其高免疫活性(P<0.05)，经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％、避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)；
所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性海参免疫活性肽粉，是以蛋白质含量≥30％的海参干粉为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、离心、超滤、低温喷雾干燥制得，其分子量≤3kDa、蛋白质含量≥92％、灰分≤4％、含水量≤3％；再以相同基质内添加同质量海参干粉且未经三级稳态化保护制得样品为对照组，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(P< 0.05)，经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、 TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均显著高于对照组(P<0.05)，确证所制得的海参活性肽粉具有低致敏性与提高免疫活性；
所述的高速剪切调浆，是以蛋白质含量≥30％的海参干粉用去离子水调配为蛋白质浓度为5～8％为海参蛋白初始溶液，利用转速为3000～6000转/分钟的高速匀浆机调浆处理5～15分钟后，剔除海参蛋白浆料液表面气泡后备用；
所述的高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、浓缩、低温喷雾干燥，将海参蛋白浆料液置于高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为5～15kV/cm，脉冲频率为1000～2000Hz，脉宽为20～50μs，流速设定为1.0～2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部海参蛋白浆料处理2～6个循环后制得海参蛋白变性浆料液；再将高压脉冲电场出料罐中的海参蛋白变性浆料液导入酶解罐，边搅拌边升温至50～55℃，调整pH值为9.5～10.5，按照海参干粉添加总量的2～ 4％比例加入碱性蛋白酶后酶解2～3小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10 分钟处理，再调整pH7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000～6000转/分钟，取上清即为海参蛋白肽酶解物；再将上清液进行超滤处理，设定膜通量为5～10 L/m2·h，回流阀压力为10～15PSI，超滤温度为10～15℃，收集分子量为3kDa 的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性海参免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥92％，灰分≤ 4％，含水量≤3％；经致敏性BALB/C小鼠评价模型的IgE和IgG1两项指标和 RAW264.7小鼠巨噬细胞模型中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量 /pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均确证所制得的海参活性肽粉具有低致敏性和提高免疫活性(P<0.05)；
所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性大豆免疫活性肽粉，是以蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、离心、超滤、低温喷雾干燥制得分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤4％，含水量≤3％的大豆蛋白肽粉；以相同基质内添加同质量大豆分离蛋白粉、且未经三级稳态化保护制得的对照组，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(P<0.05)；经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率/％、 NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均显著高于对照组(P<0.05)，确证所制得的大豆活性肽粉具有低致敏性与提高免疫活性；
所述的高速剪切调浆，是将蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉用去离子水调配为蛋白质浓度为4～6％为大豆蛋白初始溶液，利用转速为3000～4000转/分钟的高速匀浆机调浆处理5～10分钟后，剔除大豆蛋白浆料液表面气泡后备用；
所述的高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、浓缩、低温喷雾干燥，将剔除气泡的大豆蛋白浆料液置于高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为5 ～25kV/cm，脉冲频率为1000～4000Hz，脉宽为20～150μs，流速设定为1.0～ 2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部大豆蛋白浆料处理2～6个循环后获得大豆蛋白变性浆料液；将高压脉冲电场出料罐内的大豆蛋白变性浆料液导入酶解罐，边搅拌边升温至50～55℃，调整pH值为9.5～10.5，按照大豆分离蛋白粉添加总量的4～6％比例加入碱性蛋白酶后酶解1～2小时后，迅速升温至 90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH 7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000～4000转/分钟，上清液即为大豆蛋白肽酶解物；再进行超滤处理，设定膜通量为5～10L/m2·h，回流阀压力为5～15PSI，超滤温度为10～15℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性大豆免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥ 90％，灰分≤3％，含水量≤3％，经致敏性BALB/C小鼠评价模型的IgE和IgG1 两项指标和RAW264.7小鼠巨噬细胞模型中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、 TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均确证所制得的大豆蛋白肽粉具有低致敏性和提高免疫活性(P<0.05)；
所述的低致敏性大豆免疫活性肽粉，其特征在于，还可以选用大豆浓缩蛋白粉、大豆速溶粉、大豆蛋白粕中的1种或几种为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、低温喷雾干燥的工艺过程制得低致敏性大豆源免疫活性肽粉；
所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性异源免疫活性肽，还可以将蛋白质含量≥30％的海参干粉和蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉按照比例混合后，再经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、低温喷雾干燥的工艺过程制得低致敏性异源免疫活性肽粉。
具体实施方式
实施例1：
(1)低致敏性海参免疫活性肽粉的制备：以蛋白质含量≥30％的海参干粉用去离子水调配为蛋白质浓度为8％为海参蛋白初始溶液，利用转速为3000转 /分钟的高速匀浆机调浆处理15分钟后，剔除海参蛋白浆料液表面气泡后倒入高压脉冲电场进料罐内，设定高压脉冲电场场强为15kV/cm，脉冲频率为2000 Hz，脉宽为50μs，流速设定为2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部海参蛋白浆料处理6个循环后制得海参蛋白变性浆料液，再导入酶解罐内，边搅拌边加热使其升温至50℃，调整pH值为9.5，按照海参干粉添加量的2％加入碱性蛋白酶后酶解2小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000转/分钟，制得海参蛋白肽酶解物即刻进行超滤处理，设定膜通量为5L/m2·h，回流阀压力为10PSI，超滤温度为10℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性海参免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa、蛋白质含量≥92％、灰分≤4％、含水量≤3％，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量海参干粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经 RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α (pg/mL)、IL-6(pg/mL)四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(2)低致敏性大豆免疫活性肽粉的制备：将蛋白含量为90％以上的大豆分离蛋白粉用去离子水调配为蛋白质浓度为5％为大豆蛋白初始溶液，利用转速为3500转/分钟的高速匀浆机调浆处理7.5分钟后，剔除大豆蛋白浆料液表面气泡后导入高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为25kV/cm，脉冲频率为4000Hz，脉宽为150μs，流速设定为2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部大豆蛋白浆料处理6个循环后制得大豆蛋白变性浆料液；再将其导入酶解罐，边搅拌边加热至浆料液50℃，再调整pH值为9.5，按照大豆分离蛋白粉添加量的4％加入碱性蛋白酶后酶解1小时后，迅速升温至90± 2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH 7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000 转/分钟，制得大豆蛋白肽酶解物；进行超滤处理，设定膜通量为5L/m2·h，回流阀压力为5PSI，超滤温度为10℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，在进口温度为进行喷雾干燥制得低致敏性大豆免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤4％，含水量≤3％的大豆蛋白肽粉，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量大豆分离蛋白粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α(pg/mL)、IL-6(pg/mL) 四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(3)富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备：首先将低致敏性海参免疫活性肽粉、低致敏性大豆免疫活性肽粉、脱脂乳粉3种营养包低致敏性蛋白肽基载体依次在氮气纯度为99.00％、通氮气量为300L/h，通氮气压力为0.2MPa的环境下进行振动筛过筛处理，振动筛筛网目数控制在60目；其次将3种稳定性较低的营养素补充因子(即0.0236kg醋酸维生素A、0.0224 kg胆钙化醇、0.009kg氰钴胺)和营养素补充因子稳定性保护载体(23.95985kg 麦芽糊精)置于混料机内避光混合10分钟后，将0.00785kg盐酸硫胺素、 0.0052kg核黄素、0.045kg D-泛酸钙、20.949kg L-乳酸钙、0.4000kg焦磷酸铁、0.1659kg乙二胺四乙酸铁钠、0.233kg柠檬酸锌、0.0672kg硒蛋白、8.512 kg葡萄糖酸镁装入混料机内进行避光混合15分钟，制得Ⅰ级稳态化的营养素粉；再次将Ⅰ级稳态化的营养素粉与预先振动过筛60目的3种低致敏性蛋白肽基载体(即8.600kg低致敏性的海参免疫活性肽粉、42.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、15.000kg的脱脂乳粉)在氮气环境下进行低温气力均衡混合，氮气纯度为99.00％、通氮气量为1500L/h，通氮气压力为0.9MPa，气力混合温度为15℃，气力混合时间为100秒，混吹时间为1秒，混吹间隔为3秒，制得Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉；最后将Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉置于装有氮气注风口的的定量下料斗中，定量下料斗的承载量为5kg，氮气纯度为 99.00％、氮气通气量为500L/h，氮气通气压力为0.3Mpa；经过全自动条形袋包定量灌装(20±0.3g/袋)和高温热熔封合，定量灌装精准度为99.9％以上，热融合温度为125℃，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经检测所制得的营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；且经BALB/C小鼠致敏性评价模型血清中IgE和IgG1 水平值变化情况确证其致敏性显著低于对照组(相同基质内添加同质量海参干粉和同质量大豆分离蛋白粉的、且未经三级稳态化保护制得的对照样品，P< 0.05)；经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型的中性红吞噬率(％)、分泌NO(μM) 和TNF-α(pg/mL)三项指标确证其提高免疫活性均显著高于对照组(P<0.05)；经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％，避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)；
实施例2：
(1)低致敏性海参免疫活性肽粉的制备：以蛋白质含量≥30％的海参干粉用去离子水调配为蛋白质浓度为5％为海参蛋白初始溶液，利用转速为4500转 /分钟的高速匀浆机调浆处理7.5分钟后，剔除海参蛋白浆料液表面气泡后倒入高压脉冲电场进料罐内，设定高压脉冲电场场强为5kV/cm，脉冲频率为1000 Hz，脉宽为20μs，流速设定为1.0L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部海参蛋白浆料处理2个循环后制得海参蛋白变性浆料液，再导入酶解罐内，边搅拌边加热使其升温至52℃，调整pH值为10.0，按照海参干粉添加量的3％加入碱性蛋白酶后酶解3小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH7.0后离心处理15分钟，离心转速为4500转/分钟，制得海参蛋白肽酶解物即刻进行超滤处理，设定膜通量为10L/m2·h，回流阀压力为15PSI，超滤温度为15℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性海参免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa、蛋白质含量≥92％、灰分≤4％、含水量≤3％，经致敏性BALB/C 小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量海参干粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经 RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α (pg/mL)、IL-6(pg/mL)四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(2)低致敏性大豆免疫活性肽粉的制备：将蛋白含量为90％以上的大豆分离蛋白粉用去离子水调配为蛋白质浓度为6％为大豆蛋白初始溶液，利用转速为4000转/分钟的高速匀浆机调浆处理10分钟后，剔除大豆蛋白浆料液表面气泡后导入高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为5kV/cm，脉冲频率为1000Hz，脉宽为20μs，流速设定为1.0L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部大豆蛋白浆料处理2个循环后制得大豆蛋白变性浆料液；再将其导入酶解罐，边搅拌边加热至浆料液55℃，再调整pH值为10.5，按照大豆分离蛋白粉添加量的6％加入碱性蛋白酶后酶解2小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH 7.0后离心处理15分钟，离心转速为4000转/ 分钟，制得大豆蛋白肽酶解物；进行超滤处理，设定膜通量为10L/m2·h，回流阀压力为15PSI，超滤温度为15℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，在进口温度为进行喷雾干燥制得低致敏性大豆免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤4％，含水量≤3％的大豆蛋白肽粉，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量大豆分离蛋白粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α(pg/mL)、IL-6(pg/mL) 四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(3)富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备：首先将低致敏性海参免疫活性肽粉、低致敏性大豆免疫活性肽粉、脱脂乳粉3种营养包低致敏性蛋白肽基载体依次在氮气纯度为99.99％、通氮气量为200L/h，通氮气压力为0.3MPa的环境下进行振动筛过筛处理，振动筛筛网目数控制在50目；其次将3种稳定性较低的营养素补充因子(即0.0293kg醋酸维生素A、0.028kg 胆钙化醇、0.0108kg氰钴胺)和营养素补充因子稳定性保护载体(18.600kg 麦芽糊精)置于混料机内避光混合15分钟后，将0.0094kg盐酸硫胺素、0.0065 kg核黄素、0.00298kg D-泛酸钙、10.475kg L-乳酸钙、0.4591kg焦磷酸铁、0.21549kg乙二胺四乙酸铁钠、0.488kg柠檬酸锌、0.0996kg硒蛋白、9.934kg 葡萄糖酸镁装入混料机内进行避光混合10分钟，制得Ⅰ级稳态化的营养素粉；再次将Ⅰ级稳态化的营养素粉与预先振动过筛50目的3种低致敏性蛋白肽基载体(即17.2kg低致敏性的海参免疫活性肽粉、40.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、22.41501kg的脱脂乳粉)在氮气环境下进行低温气力均衡混合，氮气纯度为99.99％、通氮气量为200L/h，通氮气压力为0.6MPa，气力混合温度为 20℃，气力混合时间为300秒，混吹时间为6秒，混吹间隔为1秒，制得Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉；最后将Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉置于装有氮气注风口的的定量下料斗中，定量下料斗的承载量为10kg，氮气纯度为 99.99％、氮气通气量为800L/h，氮气通气压力为0.1Mpa；经过全自动条形袋包定量灌装(20±0.3g/袋)和高温热熔封合，定量灌装精准度为99.9％以上，热融合温度为225℃，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经检测所制得的营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；且经BALB/C小鼠致敏性评价模型血清中IgE和IgG1 水平值变化情况确证其致敏性显著低于对照组(相同基质内添加同质量海参干粉和同质量大豆分离蛋白粉的、且未经三级稳态化保护制得的对照样品，P< 0.05)；经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型的中性红吞噬率(％)、分泌NO(μM) 和TNF-α(pg/mL)三项指标确证其提高免疫活性均显著高于对照组(P<0.05)；经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％，避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)。
实施例3：
(1)低致敏性海参免疫活性肽粉的制备：以蛋白质含量≥30％的海参干粉用去离子水调配为蛋白质浓度为7％为海参蛋白初始溶液，利用转速为6000转 /分钟的高速匀浆机调浆处理5分钟后，剔除海参蛋白浆料液表面气泡后倒入高压脉冲电场进料罐内，设定高压脉冲电场场强为10kV/cm，脉冲频率为1500Hz，脉宽为35μs，流速设定为2.0L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部海参蛋白浆料处理4个循环后制得海参蛋白变性浆料液，再导入酶解罐内，边搅拌边加热使其升温至55℃，调整pH值为10.5，按照海参干粉添加量的4％加入碱性蛋白酶后酶解2.5小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH7.0后离心处理15分钟，离心转速为6000转/分钟，制得海参蛋白肽酶解物即刻进行超滤处理，设定膜通量为7.5L/m2·h，回流阀压力为12PSI，超滤温度为12℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性海参免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa、蛋白质含量≥92％、灰分≤4％、含水量≤3％，经致敏性BALB/C 小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量海参干粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经 RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α (pg/mL)、IL-6(pg/mL)四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(2)低致敏性大豆免疫活性肽粉的制备：将蛋白含量为90％以上的大豆分离蛋白粉用去离子水调配为蛋白质浓度为4％为大豆蛋白初始溶液，利用转速为3000转/分钟的高速匀浆机调浆处理5分钟后，剔除大豆蛋白浆料液表面气泡后导入高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为15kV/cm，脉冲频率为2500Hz，脉宽为80μs，流速设定为2.0L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部大豆蛋白浆料处理4个循环后制得大豆蛋白变性浆料液；再将其导入酶解罐，边搅拌边加热至浆料液53℃，再调整pH值为10.0，按照大豆分离蛋白粉添加量的5％加入碱性蛋白酶后酶解2小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH 7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000转/ 分钟，制得大豆蛋白肽酶解物；进行超滤处理，设定膜通量为8L/m2·h，回流阀压力为5PSI，超滤温度为12℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，在进口温度为进行喷雾干燥制得低致敏性大豆免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤4％，含水量≤3％的大豆蛋白肽粉，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(即为相同基质内添加同质量大豆分离蛋白粉、且未经三级稳态化保护制得的对照样品组，P<0.05)；经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率(％)、NO分泌量(μM)、TNF-α(pg/mL)、IL-6(pg/mL)四项指标均显著高于对照组(P<0.05)；
(3)富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备：首先将低致敏性海参免疫活性肽粉、低致敏性大豆免疫活性肽粉、脱脂乳粉3种营养包低致敏性蛋白肽基载体依次在氮气纯度为99.90％、通氮气量为400L/h，通氮气压力为0.4MPa的环境下进行振动筛过筛处理，振动筛筛网目数控制在60目；其次将3种稳定性较低的营养素补充因子(即0.0035kg醋酸维生素A、0.0336kg 胆钙化醇、0.0072kg氰钴胺)和营养素补充因子稳定性保护载体(25.000kg 麦芽糊精)置于混料机内避光混合13分钟后，将0.0063kg盐酸硫胺素、0.0078kg 核黄素、0.0374kg D-泛酸钙、11.000kg L-乳酸钙、0.5182kg焦磷酸铁、0.190695kg乙二胺四乙酸铁钠、0.3605kg柠檬酸锌、0.1320kg硒蛋白、11.356 kg葡萄糖酸镁装入混料机内进行避光混合13分钟，制得Ⅰ级稳态化的营养素粉；再次将Ⅰ级稳态化的营养素粉与预先振动过筛60目的3种低致敏性蛋白肽基载体(即14.31531kg低致敏性的海参免疫活性肽粉、15.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、42.000kg的脱脂乳粉)在氮气环境下进行低温气力均衡混合，氮气纯度为99.90％、通氮气量为800L/h，通氮气压力为0.9MPa，气力混合温度为18℃，气力混合时间为150秒，混吹时间为3秒，混吹间隔为2秒，制得Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉；最后将Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉置于装有氮气注风口的的定量下料斗中，定量下料斗的承载量为7.5kg，氮气纯度为99.90％、氮气通气量为600L/h，氮气通气压力为0.2Mpa；经过全自动条形袋包定量灌装(20±0.3g/袋)和高温热熔封合，定量灌装精准度为99.9％以上，热融合温度为200℃，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经检测所制得的营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤ 0.25％，脲酶活性呈阴性；且经BALB/C小鼠致敏性评价模型血清中IgE和IgG1 水平值变化情况确证其致敏性显著低于对照组(相同基质内添加同质量海参干粉和同质量大豆分离蛋白粉的、且未经三级稳态化保护制得的对照样品，P< 0.05)；经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型的中性红吞噬率(％)、分泌NO(μM) 和TNF-α(pg/mL)三项指标确证其提高免疫活性均显著高于对照组(P<0.05)；经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％，避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)。

Claims (5)

1.一种富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，以0.0236～0.0350kg醋酸维生素A、0.0224～0.0336kg胆钙化醇、0.0072～0.0108kg氰钴胺、0.0063～0.0094kg盐酸硫胺素、0.0052～0.0078kg核黄素、0.0298～0.045kg D-泛酸钙、10.475～20.949kg L-乳酸钙、0.4000～0.5182kg焦磷酸铁、0.1659～0.21549kg乙二胺四乙酸铁钠、0.233～0.488kg柠檬酸锌、0.0672～0.132kg硒蛋白、8.512～11.356kg葡萄糖酸镁为12种营养素补充因子，以18.600～25.000kg麦芽糊精为营养素补充因子稳定性保护载体，以8.600～17.200kg低致敏性海参免疫活性肽粉、15.000～22.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、15.000～22.000kg的脱脂乳粉为营养包中3种低致敏性蛋白肽基载体，经蛋白基载体的振动过筛、营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护、赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护、双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护的工艺过程，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包，经检测所制得的营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；且以相同基质内添加同质量海参干粉和同质量大豆分离蛋白粉的、且未经三级稳态化保护制得的对照组样品，经BALB/C小鼠致敏性评价模型血清中IgE和IgG1水平值变化情况确证营养包产品的致敏性显著低于对照组(P<0.05)；经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型的中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1三项指标确证其提高免疫活性均显著高于对照组(P<0.05)；经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％，避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)；
1)所述的蛋白基载体的振动过筛，是将低致敏性海参免疫活性肽粉、低致敏性大豆免疫活性肽粉、脱脂乳粉3种营养包低致敏性蛋白肽基载体依次在氮气介导下进行振动筛过筛处理使其颗粒均匀一致，振动筛筛网目数控制在40～60目，氮气纯度为99.00～99.99％、通氮气量为200～400L/h，通氮气压力为0.2～0.4MPa；
2)所述的营养素补充因子的Ⅰ级稳态化保护，是先将0.0236～0.0350kg醋酸维生素A、0.0224～0.0336kg胆钙化醇、0.0072～0.0108kg氰钴胺3种必须添加且稳定性较低的营养素补充因子和营养素补充因子稳定性保护载体18.600～25.000kg麦芽糊精置于混料机内避光混合10～15分钟后，再继续将0.0063～0.0094kg盐酸硫胺素、0.0052～0.0078kg核黄素、0.0298～0.045kg D-泛酸钙、10.475～20.949kg L-乳酸钙、0.4000～0.5182kg焦磷酸铁、0.1659～0.21549kg乙二胺四乙酸铁钠、0.233～0.488kg柠檬酸锌、0.0672～0.132kg硒蛋白、8.512～11.356kg葡萄糖酸镁9种必须添加且稳定性较好的营养素补充因子装入混料机内进行避光混合10～15分钟，制得Ⅰ级稳态化的营养素粉；
3)所述的赋型于低致敏性蛋白肽基载体的Ⅱ级稳态化保护，是将制得的Ⅰ级稳态化的营养素粉与预先振动过筛的8.600～17.200kg低致敏性的海参蛋白肽粉、15.000～22.000kg低致敏性大豆免疫活性肽粉、15.000～22.000kg的脱脂乳粉3种低致敏性蛋白肽基载体在氮气介导下进行低温气力均衡混合，氮气纯度为99.00～99.99％、通氮气量为200～1500L/h，通氮气压力为0.4～0.9MPa，气力混合温度为15～20℃，气力混合时间为100～300秒，混吹时间为1～6秒，混吹间隔为1～3秒，制得Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉；
4)所述的双重定量精准灌装的Ⅲ级稳态保护，是将制得的Ⅱ级稳态化的老年型辅食营养粉置于装有氮气注风口的的定量下料斗中，定量下料斗的承载量为5～10kg，氮气纯度为99.00～99.99％、氮气通气量为500～800L/h，氮气通气压力为0.1～0.3Mpa；经过全自动条形袋包定量灌装和高温热熔封合，灌装剂量要求为20±0.3g/袋，定量灌装精准度为99.9％以上，热融合温度为125～225℃，制得富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包产品，经检测所制得营养包优品率≥99.99％，氮气残留量≥99.00％，残氧量≤0.25％，脲酶活性呈阴性；经BALB/C小鼠致敏性评价模型确证其低致敏特性(P<0.05)，经小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型确证其高免疫活性(P<0.05)，经贮藏温度为37±2℃、相对湿度为75±5％、避免光线直射的条件下加速试验90天确证被赋型于低致敏性蛋白肽基载体和被Ⅲ级稳态保护的醋酸维生素A、胆钙化醇、氰钴胺的平均衰减率AAR均显著低于对照组(P<0.01)。
2.根据权利要求1所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性海参免疫活性肽粉，是以蛋白质含量≥30％的海参干粉为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、离心、超滤、低温喷雾干燥制得，其分子量≤3kDa、蛋白质含量≥92％、灰分≤4％、含水量≤3％；再以相同基质内添加同质量海参干粉且未经三级稳态化保护制得样品为对照组，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(P<0.05)，经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均显著高于对照组(P<0.05)，确证所制得的海参活性肽粉具有低致敏性与提高免疫活性；
所述的高速剪切调浆，是以蛋白质含量≥30％的海参干粉用去离子水调配为蛋白质浓度为5～8％为海参蛋白初始溶液，利用转速为3000～6000转/分钟的高速匀浆机调浆处理5～15分钟后，剔除海参蛋白浆料液表面气泡后备用；
所述的高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、浓缩、低温喷雾干燥，将海参蛋白浆料液置于高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为5～15kV/cm，脉冲频率为1000～2000Hz，脉宽为20～50μs，流速设定为1.0～2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部海参蛋白浆料处理2～6个循环后制得海参蛋白变性浆料液；再将高压脉冲电场出料罐中的海参蛋白变性浆料液导入酶解罐，边搅拌边升温至50～55℃，调整pH值为9.5～10.5，按照海参干粉添加总量的2～4％比例加入碱性蛋白酶后酶解2～3小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000～6000转/分钟，取上清即为海参蛋白肽酶解物；再将上清液进行超滤处理，设定膜通量为5～10L/m2·h，回流阀压力为10～15PSI，超滤温度为10～15℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性海参免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥92％，灰分≤4％，含水量≤3％；经致敏性BALB/C小鼠评价模型的IgE和IgG1两项指标和RAW264.7小鼠巨噬细胞模型中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均确证所制得的海参活性肽粉具有低致敏性和提高免疫活性(P<0.05)。
3.根据权利要求1所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性大豆免疫活性肽粉，是以蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、离心、超滤、低温喷雾干燥制得分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤4％，含水量≤3％的大豆蛋白肽粉；以相同基质内添加同质量大豆分离蛋白粉、且未经三级稳态化保护制得的对照组，经致敏性BALB/C小鼠评价模型血清IgE和IgG1指标值均显著高于对照组(P<0.05)；经RAW264.7小鼠巨噬细胞模型的中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均显著高于对照组(P<0.05)，确证所制得的大豆活性肽粉具有低致敏性与提高免疫活性；
所述的高速剪切调浆，是将蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉用去离子水调配为蛋白质浓度为4～6％为大豆蛋白初始溶液，利用转速为3000～4000转/分钟的高速匀浆机调浆处理5～10分钟后，剔除大豆蛋白浆料液表面气泡后备用；
所述的高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、浓缩、低温喷雾干燥，将剔除气泡的大豆蛋白浆料液置于高压脉冲电场进料罐中，设定高压脉冲电场场强为5～25kV/cm，脉冲频率为1000～4000Hz，脉宽为20～150μs，流速设定为1.0～2.5L/h处理条件下，开启高压脉冲电场将全部大豆蛋白浆料处理2～6个循环后获得大豆蛋白变性浆料液；将高压脉冲电场出料罐内的大豆蛋白变性浆料液导入酶解罐，边搅拌边升温至50～55℃，调整pH值为9.5～10.5，按照大豆分离蛋白粉添加总量的4～6％比例加入碱性蛋白酶后酶解1～2小时后，迅速升温至90±2℃进行灭酶10分钟处理，再调整pH 7.0后离心处理15分钟，离心转速为3000～4000转/分钟，上清液即为大豆蛋白肽酶解物；再进行超滤处理，设定膜通量为5～10L/m2·h，回流阀压力为5～15PSI，超滤温度为10～15℃，收集分子量为3kDa的超滤截留膜下液，并进行蒸发浓缩至初始体积的1/5，再进行低温喷雾干燥制得低致敏性大豆免疫活性肽粉，其分子量≤3kDa，蛋白质含量≥90％，灰分≤3％，含水量≤3％，经致敏性BALB/C小鼠评价模型的IgE和IgG1两项指标和RAW264.7小鼠巨噬细胞模型中性红吞噬率/％、NO分泌量/Μm、TNF-α量/pg·mL-1、IL-6量/pg·mL-1四项指标均确证所制得的大豆蛋白肽粉具有低致敏性和提高免疫活性(P<0.05)。
4.根据权利要求1或3任意一项所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性大豆免疫活性肽粉，其特征在于，还可以选用大豆浓缩蛋白粉、大豆速溶粉、大豆蛋白粕中的1种或几种为原料，经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、低温喷雾干燥的工艺过程制得低致敏性大豆源免疫活性肽粉。
5.根据权利要求1所述的富含低致敏性异源免疫活性肽的老年型辅食营养包的制备方法，其特征在于，所述的低致敏性异源免疫活性肽，还可以将蛋白质含量≥30％的海参干粉和蛋白含量≥90％的大豆分离蛋白粉按照比例混合后，再经高速剪切调浆、高压脉冲电场物理变性、酶解、超滤、低温喷雾干燥的工艺过程制得低致敏性异源免疫活性肽粉。
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