CN112851660A - 含有小檗碱的酸-碱加成盐、其制备方法及其作为药物的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一类小檗碱和具有药理活性的有机酸组成的新型酸‑碱加成盐、其制备方法及作为制备预防或/和治疗多种疾病或功能障碍，如糖尿病、糖尿病并发症、血脂异常、他汀类非耐受患者的血脂异常、高血脂、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病合并血脂异常、肥胖、代谢综合症、前驱糖尿病、炎症、癌症以及各种肝脏疾病或功能障碍，如脂肪肝、非酒精脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、胆汁淤积性肝病、肝移植抗宿主病、病毒引起的慢性肝病及酒精性肝病等，具有广阔的应用前景。

Description

含有小檗碱的酸-碱加成盐、其制备方法及其作为药物的用途

技术领域

本发明涉及新型治疗性化合物、药物组合物，及其制备方法和在治疗中的应用，属于医药技术领域。本发明中涉及的小檗碱和具有药理活性的有机酸组成的新型酸-碱加成盐在该领域具有独特性和新颖性。

背景技术

代谢综合症是以葡萄糖与脂质代谢异常为特征的常见病，伴有低密度脂蛋白升高和高密度脂蛋白胆固醇降低，其常见的病症为肥胖病、糖尿病、高血脂症、动脉粥样硬化和脂肪肝等，其中，糖尿病患者还常并发有高脂血症、心血管病、糖尿病肾病、糖尿病神经病变等疾病。

据世界卫生组织公布，目前世界范围内超过2.2亿人患糖尿病，其中，中国已成为全球糖尿病人最多的国家，超过9200万糖尿病患者，而且我国目前的糖尿病发病率还处于上升期，据估算中国目前糖尿病前期患者约为1.5亿。持续扩大的糖尿病人群已给社会带来了巨大的经济与医疗负担。世界卫生组织指出，如果不采取有效措施来应对糖尿病的发展，预计在未来10年内，仅心脏病、中风和糖尿病就将给中国带来至少5500亿美元的经济损失。因此，以糖尿病为典型的代谢综合症已成为威胁人类健康的一类严重疾病。代谢综合征可以通过饮食调节和锻炼治疗，当这些不能缓解症状时，需要进行药物治疗。在代谢综合症的药物治疗方面，目前临床使用的降糖药或降脂药等作用单一，均不同时具备较理想的改善代谢综合征各项病理指标的作用，因此，针对多个领域的改善代谢综合征药物研究正在进行，以期为代谢综合征患者带来更安全有效的新型药物。

癌症是涉及细胞异常生长的一类疾病，这些细胞具有入侵或扩散至人体其他部位的潜在能力。最常见的癌症包括肺癌、前列腺癌、结肠癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌等。尽管对癌症有多种治疗手段选择，如手术、放化疗、内分泌治疗、靶向治疗和姑息疗法，但癌症依旧是人类健康的最大威胁，亟需相关药物或辅助疗法用于改善癌症患者生活质量及控制癌症进展。

器官纤维化是指由于微生物、化学物质、免疫反应等活体内的反应、饮食习惯、环境、遗传背景等各种原因(也包括原因不明)引起的感染、炎症、脂肪等活体内物质的蓄积、组织或细胞的变性等导致器官受到损伤、发生坏死等之后，无法充分再生，发生结缔组织增生形成纤维化。已知在肝、肺、心脏、肾脏、脑神经系统等各种器官，以及肌肉、骨骼、皮肤等众多器官、组织中均可发生。肝硬化是肝脏中发生纤维化的典型病理状态，是各种原因(如药物性肝损伤，脂肪肝，慢性肝炎等)导致的肝病慢性发展到最终的病态，由于功能性的肝细胞减少和纤维组织增生，肝功能显著降低。全球有约2000万肝硬化患者，但目前尚无有效的治疗药物。当前，主要预防手段是如何通过各种对症疗法来延缓慢性肝病向肝硬化的发展。肺纤维化中，除了由间质性肺炎等肺炎伴随的肺损伤引起的纤维化以外，还存在原因不明的特发性肺纤维化，该疾病出现咳嗽、胸痛、呼吸困难等症状，严重影响患者生活质量，且预后不良。心肌纤维化为心肌、心脏瓣膜的组织发生纤维化的疾病，其以由冠状动脉循环功能衰竭、感染或免疫反应等引起的心肌病及瓣膜病等为原发病，可发展至心力衰竭状态。在肾脏中，如果伴随慢性肾病的发展而在肾脏组织内造成纤维化，会导致肾功能急剧恶化而到达不可恢复的状态。总之，器官纤维化的发展是引起该器官、组织的功能的不可逆的恶化而预后极其不良的严重病情，但目前尚缺乏有效药物。作为对肝硬化唯一有效的治疗方法是肝移植，但肝移植存在器官供体不足、医疗成本高、在活体肝移植的情况下具有对供体的健康风险等众多问题。因此，针对器官纤维化药物的开发成为该领域的研究热点，以期为器官纤维化患者带来更经济、安全、有效的新型药物。

脂肪肝主要是由肝细胞脂肪变性，经炎症或者其他损伤“二次打击”形成脂肪肝炎。尽管脂肪肝的产生有多种原因，脂肪肝可以被视为因过度饮酒和肥胖而引起疾病。非酒精脂肪性肝病(NAFLD)是其中一种类型，指在没有过度饮酒的情况下，过多的脂肪沉积在肝脏所引发的脂肪肝。非酒精脂肪肝通常被认为是与代谢综合征相关，例如胰岛素抵抗、高血压和肥胖。非酒精性脂肪肝在发达国家影响了约三分之一的成年人。非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是一种非酒精性脂肪肝的极端形式，其引起慢性炎症从而导致渐进性纤维化，肝硬化，并且最终导致肝衰竭和死亡。目前，没有药物被批准用于NASH的治疗，有大约四分之一的NAFLD病人会发展到NASH阶段，当前对NASH的标准治疗手段包括减肥和增加体育锻炼。

目前可用于治疗疾病或功能紊乱的方法及手段仍未达期望标准，所述疾病或功能紊乱包括脂肪肝、胆汁淤积性肝病、肝移植物抗宿主病、病毒引起的慢性肝病、酒精性肝病、药物性肝损伤、糖尿病、糖尿病并发症、前驱糖尿病、高脂血症、肥胖、代谢综合征、动脉粥样硬化、器官纤维化、炎症及癌症。迫切需要创新优化的治疗方法来治疗这些疾病和功能紊乱。

小檗碱，其盐酸盐形式(盐酸小檗碱，Berberine Hydrochloride，简称BBR)，是一种重要的生物碱，具有显著的抑菌作用，包括对多种病原细菌都有抑制作用，其中对痢疾杆菌作用最强，临床常用来治疗细菌性胃肠炎、痢疾等消化道疾病。现代药理学研究证实盐酸小檗碱除具有调节消化道菌群失调作用外，还具有降血糖、降血脂、抗血小板聚集、抗心律失常、改善充血性心力衰竭等药理作用。各种临床的II型糖尿病及高脂血症病例治疗报告显示，盐酸小檗碱具有显著的降血糖、改善糖尿病并发症及降血脂的药理作用和确切的临床疗效。但盐酸小檗碱溶出度差，生物利用度极低，导致临床需要使用高剂量的盐酸小檗碱才能达到预期疗效。

中国专利申请201580041177.9和201680032575.9分别公开了小檗碱和熊去氧胆酸的酸-碱加成盐及熊去氧胆酸与小檗碱或左旋肉碱的共轭化合物，减少了小檗碱的用药剂量，但并未启示小檗碱与非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物所成的酸-碱加成盐的应用。中国专利申请201510740833.6公开了奥贝胆酸和小檗碱的复方组合物，其仍然采用溶出度差的盐酸小檗碱。中国专利申请201510986009.9公开了小檗碱与非诺贝特的药物组合物及其在预防或治疗糖尿病方面的应用，其同样也是采用溶出度差、生物利用度差的盐酸小檗碱作为成分，本身存在极大缺陷，同时采用非诺贝特，与本专利发明所涉及的非诺贝特酸有本质区别，且本发明涉及的非诺贝特酸与小檗碱组成的酸-碱加成盐特殊形式，与专利申请201510986009.9公开的简单物理混合方式对药物的溶出度、生物利用度影响完全不同，因此现有技术并未启示任何有关非诺贝特酸与小檗碱的酸-碱加成盐的有益作用。

在现有技术没有启示小檗碱与非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物所成的酸-碱加成盐的情况下，本发明人完全通过自身大量研究、实践和经验，优选得到小檗碱与非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor的几种酸-碱加成盐，不但能够增加(甚至协同增加)两者改善血脂、血糖和/或肝功能的作用，而且能有效减少小檗碱与有机酸的用药量。

发明内容

针对现有技术存在的问题和未满足的临床需求，本发明的目的是提供一类小檗碱与非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物所成的酸-碱加成盐，为预防或/和治疗脂肪肝、胆汁淤积性肝病、肝移植物抗宿主病、病毒引起的慢性肝病、酒精性肝病、药物性肝损伤、糖尿病、糖尿病并发症、前驱糖尿病、高脂血症、肥胖、代谢综合征、动脉粥样硬化、器官纤维化、炎症及癌症等疾病提供一类新的潜在药物。

本发明所述的一种酸-碱加成盐，具有以下的分子式：

(X⁺)_m(Y^-)_n (I)

其中，X⁺是小檗碱的阳离子部分；

Y^-是有机酸的阴离子部分，其中有机酸选自非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物；m和n是分别独立选自1和2的整数，从而得到电荷中性盐。所述的非诺贝特酸衍生物或结构类似物包括但不限于吉非贝齐、氯贝丁酸、苯扎贝特等，Elafibranor衍生物或结构类似物包括但不限于常见的PPAR受体激动剂如Bezafibrate、Lanifibranor、Seladelpar、Saroglitazar、Naveglitazar等。

本发明主要涉及的一种酸-碱加成盐，其特征在于，

(X⁺)_m(Y^-)_n (I)

其中，X⁺是小檗碱的阳离子部分；

Y^-是有机酸的阴离子部分，当有机酸选自非诺贝特酸、丁酸、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物时，m＝1，n＝1；当有机酸选自Gemcabene或其衍生物或结构类似物时，m＝2，n＝1。

本发明还提供了药物制剂，其包括药物组合物和药学上可接受的辅剂。药学上可接受的辅剂包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与活性成分相容。运用药学上可接受的辅剂制备药物制剂对本领域普通技术人员来说是公知的。本发明的药物制剂将活性成分(小檗碱的酸-碱加成盐)和药学上可接受的辅剂组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂。本发明的制剂可以为单位剂量形式，如片剂、丸剂、胶囊(包括持续释放或延迟释释放形式)、粉剂、混悬剂、颗粒剂、酊剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液、针剂、等剂型以及各种缓释剂型，从而适合各种给药方式，例如口服、非肠道注射、粘膜、肌肉、静脉内、皮下、眼内、皮内或经过皮肤等的给药形式。优选本发明的药物制剂是口服药物制剂。

本发明的酸-碱加成盐可用来治疗多种疾病或功能障碍，如糖尿病、糖尿病并发症、血脂异常、他汀类非耐受患者的血脂异常、高血脂、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病合并血脂异常、肥胖、代谢综合症、痛风、前驱糖尿病、炎症、癌症以及各种肝脏疾病或功能障碍，如脂肪肝、非酒精脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、胆汁淤积性肝病、肝移植抗宿主病、病毒引起的慢性肝病及酒精性肝病等。

附图说明

图1：ob/ob小鼠肝切片HE染色结果

图2：NASH模型肝组织外观结果

图3：NASH模型肝切片HE染色和马松染色结果

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。需要说明的是，下述实施例仅是用于说明，而并非用于限制本发明。本领域技术人员根据本发明教导所做的各种变化均应在本申请权利要求所要求的保护范围之内。

实施例1 小檗碱的酸-碱加成盐通用合成方法

将盐酸小檗碱(1.0当量)溶解在热的纯水中，降至室温。同时，将有机酸(0.6-1.2当量)溶解在无水乙醇中，并向其中滴加碳酸钠(0.6-1.2当量)水溶液，滴加完成后，搅拌反应体系30-60分钟，获得有机酸钠盐溶液。在60-80℃的温度下，将盐酸小檗碱溶液滴加到制备的有机酸钠盐溶液中，搅拌反应2小时，冷却，过滤收集反应体系中的固体沉淀，少量冷水洗涤，干燥，以乙醇和乙酸乙酯混合溶剂进行重结晶得到小檗碱的酸-碱加成盐纯品，经核磁共振氢谱可鉴定酸碱加成盐中有机酸与小檗碱的组成比例(小檗碱与非诺贝特酸、丁酸、Elafibranor组成的酸碱加成盐比例为1∶1；Gemcabene与小檗碱组成的酸碱加成盐比例为1∶2)，以质谱阴离子模式可检测到有机酸的[M-H]^-峰，以质谱阳离子模式检测到小檗碱[M+H]⁺峰，经上述合成方法可获得如下小檗碱的酸-碱加成盐。

实施例2 小檗碱的酸-碱加成盐降脂活性筛选

八周龄雄性ICR小鼠，适应性饲养5天，随机分组，每组6只。空白组和模型组小鼠每天一次灌胃给予0.5％CMC-Na溶液；给药组小鼠每天一次灌胃受试药物，给药剂量均为30μM/kg，连续给药7天。于末次给药前16小时，空白组小鼠腹腔注射生理盐水，其余各组小鼠腹腔注射400mg/kg Triton-WR1339造模。末次给药1h后，眼眶取血，静置1h，离心分离血清，测定血清中TC和TG水平，实验结果见表1。

表1：小檗碱的酸-碱加成盐对血脂的影响(

n＝6，mmol/L)

注：^*P≤0.05为相对于模型对照组，^#P≤0.05为相对于非诺贝特+盐酸小檗碱组的Student’s t检验结果。

结果表明，所有实施例中小檗碱的酸-碱加成盐均具有明显的降血脂活性，且明显优于盐酸小檗碱或有机酸单独给药，表明小檗碱的酸-碱加成盐在体内具有协同增效的作用。特别地，相同剂量的非诺贝特酸-小檗碱盐降脂活性明显强于非诺贝特+盐酸小檗碱混合给药，证实了本发明专利中非诺贝特酸-小檗碱盐具有明显优于专利申请201510986009.9中公开的盐酸小檗碱与非诺贝特的药物组合物，因此，本发明专利中小檗碱的酸-碱加成盐相比于现有技术具有明显的新颖性和创造性。

实施例3 小檗碱的酸-碱加成盐体内改善代谢综合征研究

八周龄ob/ob小鼠，雄性，随机分组，每组6只，空白对照组(空白溶媒：0.5％的羧甲基纤维素钠溶液)，受试药物组每天一次分别灌胃给予受试化合物(30mg/kg)，连续给药30天后，小鼠空腹状态下采血，以全自动生化分析仪测定小鼠糖化血红蛋白、血脂、肝功能水平，结果见表2。取小鼠肝组织进行切片，以HE染色观察肝组织病理变化，结果见附图1。

表2：小檗碱的酸-碱加成盐对ob/ob小鼠糖化血红蛋白、血脂、肝功能水平的影响(

n＝6)

注：^*P≤0.05为相对于对照组的Student’s t检验结果。

结果表明：优选的几种小檗碱的酸-碱加成盐能够明显改善ob/ob小鼠的糖化血红蛋白、血脂、肝功能水平，具有改善糖脂代谢和肝功能的作用。附图1肝切片HE染色结果表明，ob/ob模型组小鼠肝脏存在明显的脂肪变性堆积和少量气球样病变，而小檗碱的酸-碱加成盐长期给药后能够明显改善ob/ob小鼠的肝脂肪变性和气球样变，在一定程度上改善小鼠肝功能。综上所述，小檗碱的酸-碱加成盐能够改善糖脂代谢，具备治疗糖尿病、血脂紊乱及脂肪肝等代谢综合征的潜力。

实施例4 小檗碱的酸-碱加成盐体内抗脂肪肝和肝纤维化研究

八周龄db/db小鼠，雄性，随机分组，每组6只，空白对照组(空白溶媒：0.5％的羧甲基纤维素钠溶液)，受试化合物组，给予MCD饲料造模成非酒精性脂肪肝炎模型，同时每天一次分别灌胃给予空白溶媒及受试化合物(30mg/kg)，连续造模的同时给受试化合物持续7周，结束后小鼠采血，以全自动生化分析仪测定小鼠肝功能水平，结果见表3；肝组织外观结果见附图2；取肝脏组织分别以HE染色和马松染色观察脂肪肝和肝纤维化改善情况，染色结果见附图3。

表3：对非酒精性脂肪肝模型小鼠肝功能水平的影响(

n＝6)

注：^*P≤0.05为相对于模型对照组的Student’s t检验结果。

非酒精性脂肪肝(NASH)模型小鼠长期给药后肝功能得到明显改善；肝脏外观观察显示模型组肝脏脂肪含量较高，呈现体积肥大，泛黄，边缘钝，弹性差，可见黄色脂肪斑，与周围组织粘连等典型脂肪肝特征，而治疗组肝脏偏深褐色，体积缩小，与周围组织无粘连，接近正常小鼠的肝脏形态(附图2)，肝脏组织HE染色(附图3)结果表明给药组的肝脂肪变性程度、炎症浸润和气球样病变得到明显改善；肝组织马松染色(附图3)结果表明给药组的肝纤维化程度得到明显改善。

Claims (5)

1.一种酸-碱加成盐，其通式为：

(X⁺)_m(Y^-)_n (I)

其中，

X⁺是小檗碱的阳离子部分；

Y^-是有机酸的阴离子部分，其中有机酸选自非诺贝特酸、丁酸、Gemcabene、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物，其中，所述衍生物或结构类似物包括吉非贝齐、氯贝丁酸、苯扎贝特、Lanifibranor、Seladelpar、Saroglitazar、Naveglitazar；

以及m和n是分别独立选自1和2的整数，从而得到电荷中性盐。

2.权利要求1所述的酸-碱加成盐，其特征在于，

当有机酸选自非诺贝特酸、丁酸、Elafibranor、或其衍生物或结构类似物时，m＝1，n＝1；

当有机酸选自Gemcabene或其衍生物或结构类似物时，m＝2，n＝1。

3.一种药物组合物，其包含权利要求1-2中任一项所述的酸-碱加成盐，以及药学上可接受的辅料、载体或稀释剂。

4.权利要求1-2中任一项所述的酸-碱加成盐用于制备药物的用途，其中所述药物用于治疗、预防或缓解一种或多种疾病或功能障碍，所述一种或多种疾病或功能障碍选自脂肪肝、胆汁淤积性肝病、肝移植物抗宿主病、病毒引起的慢性肝病、酒精性肝病、药物性肝损伤、糖尿病、糖尿病并发症、前驱糖尿病、高脂血症、肥胖、代谢综合征、痛风、动脉粥样硬化、器官纤维化、炎症及癌症。

5.权利要求4所述的用途，其中所述一种或多种疾病或功能障碍包含非酒精性脂肪性肝病、原发性胆汁性胆管炎、原发性硬化性胆管炎、酒精性脂肪肝。

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