CN112834628A - 一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法。该方法的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为乙腈，通过采用梯度洗脱方式，可在高效液相色谱图中将雷贝拉唑钠及其九个杂质进行有效分离，且专属性好，灵敏度高，便于对雷贝拉唑钠及其制剂的质量检测与监控。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法。
背景技术
雷贝拉唑钠(Sodium Reheprazole)，是日本卫材公司开发的新一代质子泵抑制剂，是作为继兰索拉唑、奥美拉唑后最新的苯并咪唑取代剂，其对壁细胞分泌膜内质泵具有强抑制作用。最早于1997年首先在日本上市，剂型为口服固体制剂。该药临床适用于胃溃疡、十二指肠溃疡、胃-食管反流性疾病、幽门螺旋杆菌、卓-艾综合征等，而注射用雷贝拉唑钠适用于无法以口服药物治疗时之取代疗法。
雷贝拉唑钠化学名为：2-[[[4-(3-甲氧丙氧基)-3-甲基-2-吡啶基]甲基]亚磺酰基]-1H-苯并咪唑钠盐，分子式：C18H20N3NaO3S，结构式如下：
雷贝拉唑钠的常见不良反应为皮疹、便秘、腹泻、头痛。雷贝拉唑钠在制备和贮存过程中可能会产生一些有机杂质，这些杂质会影响到药品的纯度和质量。为有效控制雷贝拉唑钠原料药及制剂的质量，急需建立一种灵敏可靠的杂质测定方法。
专利申请CN201410210229.8公开了以醋酸铵溶液-甲醇体系为流动相用高效液相色谱法分离测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法；专利申请 CN201210433342.3公开了以磷酸盐缓冲液-甲醇体系为流动相用高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠冻干粉针制剂中有关物质的方法。
文献“注射用雷贝拉唑钠有关物质的HPLC法优化检测”(《药学与临床研究》，2011,19(1)：26-28)公开了磷酸二氢钾缓冲液-甲醇-乙腈为流动相，通过HPLC法对雷贝拉唑钠及其杂质进行了有效分离。
发明内容
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制本发明的保护范围。
雷贝拉唑钠相关的杂质包括：雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质C、雷贝拉唑钠杂质D、雷贝拉唑钠杂质E、雷贝拉唑钠杂质F、雷贝拉唑钠杂质a、雷贝拉唑钠杂质b、雷贝拉唑钠杂质c，其结构式和化学式等信息如下表所示：
雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质E、雷贝拉唑钠杂质F、雷贝拉唑钠杂质b及雷贝拉唑钠杂质c为原料工艺杂质，雷贝拉唑钠杂质a为工艺杂质，雷贝拉唑钠杂质C为合成雷贝拉唑钠的起始原料，雷贝拉唑钠杂质D及雷贝拉唑钠杂质E为常见的降解杂质。因此，对这九个杂质的质量控制具有重要意义。
目前现有技术公开有雷贝拉唑钠及其有关物质的测定方法，但上述公开的方法不能实现关于雷贝拉唑钠及其九个杂质的分离测定，因此需要提供一种雷贝拉唑钠及其九个杂质的分析方法。
本发明提供了一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，可以对雷贝拉唑钠及其相关的九个杂质进行有效的分离测定；
所述的九个杂质分别为：雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质C、雷贝拉唑钠杂质D、雷贝拉唑钠杂质E、雷贝拉唑钠杂质F、雷贝拉唑钠杂质a、雷贝拉唑钠杂质b、雷贝拉唑钠杂质c，其具体的化学结构如前所述。
本发明提供了一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，所述的方法包括如下方式：
(1)设置高效液相色谱法的色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相A：磷酸盐缓冲液，该缓冲液的pH值为6.8～7.2；
流动相B：乙腈；
采用梯度洗脱，流动相中流动相A与流动相B的初始体积比为：(71:29) ～(73:27)；
检测波长：284nm～288nm；
柱温：25℃～35℃；
流速：0.8ml/min～1.2ml/min；
(2)样品溶液配制
取雷贝拉唑钠或者注射用雷贝拉唑钠及其杂质，加稀释液制成含雷贝拉唑钠及其杂质各0.001～1mg/ml的溶液；这里，所述稀释液为：取用体积比为 1:1的乙腈与氢氧化钠水溶液的混合溶液作为稀释液；或者，
取雷贝拉唑钠肠溶片，研细，精密称取适量，置量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜；或者
取雷贝拉唑钠胶囊的内容物，研细，精密称取适量，置量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜；
(3)测定
将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
在本发明的实施方案中，所述雷贝拉唑钠的杂质为雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质C、雷贝拉唑钠杂质D、雷贝拉唑钠杂质 E、雷贝拉唑钠杂质F、雷贝拉唑钠杂质a、雷贝拉唑钠杂质b、雷贝拉唑钠杂质c。
本发明的一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法中，雷贝拉唑钠与各杂质的分离度均大于1.5，各杂质间的分离度均大于1.5。
在本发明的实施方案中，所述磷酸盐缓冲液任选地为磷酸钠盐(磷酸二氢钠或磷酸氢二钠)缓冲液或磷酸钾盐(磷酸二氢钾或磷酸氢二钾)缓冲液，任选地用氢氧化钠调节该缓冲液的pH值。
在上述的实施方案中，所述稀释液中氢氧化钠水溶液的浓度为0.001mol/L。
在上述的实施方案中，优选地，色谱柱的规格为Phenomenex Gemini C18， 4.6×250mm，5μm。
在上述的实施方案中，优选地，流动相A的pH值为7.0，流动相A与流动相B的初始体积比为72:28。
在上述的实施方案中，优选地，梯度洗脱如下：
在上述的实施方案中，优选地，检测波长为286nm。
在上述的实施方案中，优选地，柱温为30℃。
在上述的实施方案中，优选地，流速为1.0ml/min。
在上述的实施方案中，优选地，所述样品溶液包括供试品溶液，所述供试品溶液的配制为：取雷贝拉唑钠或注射用雷贝拉唑钠用稀释液溶解并制成每1ml稀释液中含雷贝拉唑钠1mg的溶液；这里，优选地，所述稀释液为：取用体积比为1:1的乙腈与0.001mol/L氢氧化钠水溶液的混合溶液作为稀释液。
在上述的实施方案中，优选地，所述样品溶液包括供试品溶液，所述供试品溶液的配制为：取雷贝拉唑钠肠溶片20片，研细，精密称取适量(约相当于雷贝拉唑钠20mg)，置20ml量瓶中，加适量乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜，作为雷贝拉唑钠肠溶片的供试品溶液；或者
取雷贝拉唑钠肠溶胶囊20粒的内容物，研细，精密称取适量(约相当于雷贝拉唑钠20mg)，置20ml量瓶中，加适量乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm 滤膜，作为雷贝拉唑钠肠溶胶囊的供试品溶液。
在上述的实施方案中，优选地，所述样品溶液还包括定位溶液，所述定位溶液的配制为：取各杂质对照品，分别用体积比为1:1的乙腈与0.001mol/L 氢氧化钠水溶液的混合溶液作为稀释液制成每1ml约含杂质125μg的溶液。
在上述的实施方案中，优选地，所述样品溶液还包括雷贝拉唑钠与杂质的混合溶液，所述雷贝拉唑钠与杂质的混合溶液的配制为：取雷贝拉唑钠对照品及各杂质对照品，加稀释液制成每1ml分别含雷贝拉唑钠1mg，各杂质 1.0μg的溶液；这里，所述稀释液为：取用体积比为1:1的乙腈与0.001mol/L 氢氧化钠水溶液的混合溶液作为稀释液。
本发明的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法可应用于，但不限于：雷贝拉唑钠原料药、右旋雷贝拉唑钠原料药、注射用雷贝拉唑钠、注射用右旋雷贝拉唑钠、雷贝拉唑钠肠溶片、雷贝拉唑钠肠溶胶囊、右旋雷贝拉唑钠肠溶片、右旋雷贝拉唑钠肠溶胶囊、或者包含至少另外一种治疗药物(例如阿莫西林等)的雷贝拉唑钠或右旋雷贝拉唑钠的复方制剂，进行雷贝拉唑钠及其杂质的检测。
本发明有益效果如下：本发明提供的方法可在高效液相色谱图中将雷贝拉唑钠有关物质(包含雷贝拉唑钠和9种常见杂质)分离开来：并且保证了对各组分检测的灵敏性及其含量的准确性。该方法专属性好、重现性高，便于对雷贝拉唑钠及其制剂的质量检测与监控，有利于雷贝拉唑钠原料药、注射用雷贝拉唑钠及它们固体口服制剂(如雷贝拉唑钠肠溶片等)的安全推广与应用。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在说明书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
附图说明
附图用来提供对本发明技术方案的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的实施例一起用于解释本发明的技术方案，并不构成对本发明技术方案的限制。
图1表示的是实施例1雷贝拉唑钠及其杂质分离的图谱；
图2表示的是实施例2注射用雷贝拉唑钠空白辅料图谱；
图3表示的是实施例2注射用雷贝拉唑钠供试品溶液图谱；
图4表示的是实施例2雷贝拉唑钠肠溶片供试品溶液图谱；
图5表示的是参考例1雷贝拉唑钠及其杂质分离的谱图；
图6表示的是参考例2雷贝拉唑钠及其杂质分离的谱图。
具体实施方式
为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将对本发明的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。
以下实施例所用的雷贝拉唑钠购自中国食品药品检定研究院，注射用雷贝拉唑钠冻干粉针剂为自制(规格：20mg，处方包括：雷贝拉唑钠20mg、依地酸二钠1.5mg、甘露醇50mg)，雷贝拉唑钠肠溶片购自山东新华制药股份有限公司(批号：1906251)，雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质C、雷贝拉唑钠杂质D、雷贝拉唑钠杂质E、雷贝拉唑钠杂质F均购自USP，雷贝拉唑钠杂质a购自LGC，雷贝拉唑钠杂质b、雷贝拉唑钠杂质c购自TRC。
实施例1
色谱柱：Phenomenex Gemini C18，4.6×250mm，5μm
流动相：流动相A：磷酸盐缓冲液(pH7.0)[取磷酸二氢钾6.8g，氢氧化钠1.164g，再加水溶解并稀释至1000ml]
流动相B：乙腈
按下表进行梯度洗脱
柱温：30℃流速：1.0ml/min
检测波长：286nm
稀释液：0.001mol/L氢氧化钠溶液-乙腈(体积比1:1)。
定位溶液的配制：取各杂质对照品，分别用稀释液制成每1ml约含杂质 125μg的溶液，作为各杂质定位溶液。
雷贝拉唑钠与杂质混合溶液的配制：取雷贝拉唑钠对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入上述各杂质定位溶液200μl，加稀释液稀释至刻度，摇匀，即得。
测定：取雷贝拉唑钠与杂质混合溶液20μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，结果见图1，详细结果如下表：
雷贝拉唑钠峰与相邻杂质峰的分离度及各杂质之间的分离度均大于1.5，系统适用性良好。所以本法可以用于雷贝拉唑钠原料的质量控制。
在以上测定方法以及测定条件的实验过程中，进行了以下条件范围内的试验：流动相为初始体积比为71:29～73:27的磷酸盐缓冲液-乙腈，其中磷酸盐用氢氧化钠调节pH值至6.8～7.2；柱温为25～35℃；流动相速度为 0.8～1.2ml/min；检测波长284～288nm；
结果如下表
试验结果表明，色谱条件发生微小变化，杂质峰与主峰均能有效分离，各杂质之间分离度满足要求，各成分相对保留时间基本无变化，仅峰保留时间有较小差异，分离度及理论板数均能通过系统适用性试验。因此进一步增加了检测方法及条件的稳定性以及可应用性。
实施例2样品检测
本发明人对注射用雷贝拉唑钠及雷贝拉唑钠肠溶片进行试验，考察方法的实际样品检测能力。
注射用雷贝拉唑钠空白辅料溶液：取甘露醇、依地酸二钠混合辅料，精密称定，加稀释液溶解并制成0.8mg/ml的溶液。
供试品溶液：取注射用雷贝拉唑钠内容物适量，精密称定，加稀释液溶解并稀释制成1mg/ml的溶液。
雷贝拉唑钠肠溶片供试品溶液：取样品20片，研细，精密称取适量(约相当于雷贝拉唑钠20mg)，置20ml量瓶中，加适量乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜，作为供试品溶液。
精密取量取上述溶液各20μl注入高效液相色谱仪中，同时使用DAD检测器对各溶液进行190nm～400nm的UV波长扫描。
结果显示，空白辅料无干扰，注射用雷贝拉唑钠和雷贝拉唑钠肠溶片的主成分峰与其杂质峰均能较好地分离，该方法针对不同剂型适用性良好。
实施例3定量限和检测限试验
将各杂质定位液和雷贝拉唑钠对照品溶液(即，精密称取雷贝拉唑钠对照品适量，加稀释液溶解并稀释制成1mg/ml的溶液)用稀释液逐级稀释，精密量取不同浓度溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，信噪比约为10:1时浓度为定量限浓度；信噪比约为3:1时浓度为检测限浓度。
结果见下表
参考例1
色谱柱：Phenomenex Gemini C18，4.6×250mm，5μm
流动相：流动相A：磷酸盐缓冲液(pH7.8)[取磷酸二氢钾6.8g，用氢氧化钠调pH至7.8，再加水溶解并稀释至1000ml]
流动相B：乙腈
按下表进行梯度洗脱
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测波长：286nm
溶液配制方法及测定方法照实施例1进行，雷贝拉唑钠与杂质混合溶液的图谱见图5，从图中可以看出，雷贝拉唑钠与杂质F完全重合，说明流动相的pH值对分离效果影响很大。
参考例2
色谱柱：Phenomenex Gemini C18，4.6×250mm，5μm
流动相A：0.05mol/L磷酸盐溶液(0.05mol/L磷酸氢二钠溶液用 0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节pH至7.0，即得)
流动相B：甲醇
按下表进行梯度洗脱
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测波长：286nm
溶液配制方法及测定方法按照实施例1进行，雷贝拉唑钠与杂质混合溶液的图谱见图6，从图中可以看出，雷贝拉唑钠杂质A与杂质a完全重合，说明流动相的选择对分离效果影响很大。
虽然本申请所揭露的实施方式如上，但所述的内容仅为便于理解本申请而采用的实施方式，并非用以限定本申请。任何本申请所属领域内的技术人员，在不脱离本申请所揭露的精神和范围的前提下，可以在实施的形式及细节上进行任何的修改与变化，但本申请的专利保护范围，仍须以所附的权利要求书所界定的范围为准。
Claims (10)
1.一种高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，包括如下步骤：
(1)设置高效液相色谱法的色谱条件
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相A：磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.8～7.2；
流动相B：乙腈；
采用梯度洗脱，流动相中流动相A与流动相B的初始体积比为：(71:29)～(73:27)；
检测波长：284nm～288nm；
柱温：25℃～35℃；
流速：0.8ml/min～1.2ml/min；
(2)样品溶液配制
取雷贝拉唑钠及各杂质，加稀释液制成含雷贝拉唑钠及其杂质各0.001～1mg/ml的溶液；这里，所述稀释液为：取用体积比为1:1的乙腈与氢氧化钠水溶液的混合溶液作为稀释液；或者，
取注射用雷贝拉唑钠适量，置量瓶中，加稀释液溶解并定容；
取雷贝拉唑钠肠溶片，研细，精密称取适量，置量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜；或者
取雷贝拉唑钠胶囊的内容物，研细，精密称取适量，置量瓶中，加乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜；
(3)测定
将所述样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析；
优选地，雷贝拉唑钠的杂质为雷贝拉唑钠杂质A、雷贝拉唑钠杂质B、雷贝拉唑钠杂质C、雷贝拉唑钠杂质D、雷贝拉唑钠杂质E、雷贝拉唑钠杂质F、雷贝拉唑钠杂质a、雷贝拉唑钠杂质b、雷贝拉唑钠杂质c；
优选地，雷贝拉唑钠与各杂质的分离度均大于1.5，各杂质间的分离度均大于1.5。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，色谱柱的规格为Phenomenex Gemini C18，4.6×250mm，5μm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述流动相A磷酸盐缓冲液的pH值为7.0；流动相A与流动相B的初始体积比为72:28。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述的梯度洗脱的条件如下：
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述检测波长为286nm；
任选地，所述柱温为30℃；
任选地，所述流速为1.0ml/min。
6.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述稀释液中氢氧化钠水溶液的浓度为0.001mol/L。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的分析方法，其中，所述样品溶液包括供试品溶液，所述供试品溶液的配制为：取雷贝拉唑钠或注射用雷贝拉唑钠用稀释液溶解并制成每1ml稀释液中含雷贝拉唑钠1mg的溶液；或者
取雷贝拉唑钠肠溶片20片，研细，精密称取适量，约相当于雷贝拉唑钠20mg，置20ml量瓶中，加适量乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜，作为供试品溶液；
取雷贝拉唑钠肠溶胶囊20粒的内容物，研细，精密称取适量，约相当于雷贝拉唑钠20mg，置20ml量瓶中，加适量乙腈溶解并定容，摇匀，过0.45μm滤膜，作为供试品溶液。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述样品溶液还包括定位溶液，所述定位溶液的配制为：取各杂质对照品，分别用稀释液制成每1ml约含杂质125μg的溶液。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法，其中，所述样品溶液还包括雷贝拉唑钠与杂质混合溶液，所述雷贝拉唑钠与杂质混合溶液的配制为：取雷贝拉唑钠对照品及各杂质对照品，加稀释液制成每1ml分别含雷贝拉唑钠1mg，各杂质1.0μg的溶液。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的高效液相色谱法测定雷贝拉唑钠及其杂质的方法在雷贝拉唑钠原料药、右旋雷贝拉唑钠原料药、注射用雷贝拉唑钠、注射用右旋雷贝拉唑钠、雷贝拉唑钠肠溶片、雷贝拉唑钠肠溶胶囊、右旋雷贝拉唑钠肠溶片、右旋雷贝拉唑钠肠溶胶囊、或者包含至少另外一种治疗药物的雷贝拉唑钠或右旋雷贝拉唑钠的复方制剂的检测中的用途。
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