CN112831447B

CN112831447B - 皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用

Info

Publication number: CN112831447B
Application number: CN202110282535.2A
Authority: CN
Inventors: 朱英芝; 卢杰; 姜明国; 黄艺燕; 万艳芳; 黄文善
Original assignee: Guangxi Lvyounong Biotechnology Co ltd; Guangxi University for Nationalities
Current assignee: Guangxi Lvyounong Biotechnology Co ltd; Guangxi University for Nationalities
Priority date: 2021-03-16
Filing date: 2021-03-16
Publication date: 2022-07-08
Anticipated expiration: 2041-03-16
Also published as: CN112831447A

Abstract

本发明公开了两株功能微生物皮尔瑞俄芽孢杆菌，保藏编号分别为GDMCC NO:61542、GDMCC NO:61541，名称分别为Paenibacillus peoriae GXMD‑hs‑28或Paenibacillus peoriae GXMD‑hs‑35。该菌株筛选简单、容易培养，发明人还建立了相应培养方法。研究表明，GXMD‑hs‑28或GXMD‑hs‑35菌株发酵液对柑橘溃疡病具有很好的防治作用效果，它对地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌抑制效果与常规化学农药的抑制效果相当。该菌株的发现丰富了我国的可利用微生物资源，其抑菌效果稳定、高效、环境友好的优势，在防治柑橘溃疡病方面具有很好的应用前景。

Description

皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用。

背景技术

柑橘溃疡病是由地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonasaxonopodispv.citri,Xac)引起的一种细菌性病害，可影响大部分的柑橘栽培品种，是一种国内外重大植物检疫性病害，在中国柑橘种植区普遍发生，以广东、广西、江西、湖南和福建等地发生较重，主要危害柑橘叶片、枝梢和果实，产生溃疡病斑。该病可使柑橘叶片、枝梢和果实受害。叶片受害时，开始于叶背出现黄色或黄绿色针头大小的油渍状斑点，继而在叶片两面逐渐隆起，成为近圆形、米黄色病斑，不久病部表皮破裂，呈海绵状，隆起显着，木栓化，表面粗糙，灰白色或灰褐色；随后病部中央凹陷并呈火山口状开裂，且有微细轮纹，周围有黄晕，病斑直径一般为3-5mm，有时几个病斑聚合呈不规则形大斑；枝梢受害以夏梢为重，病斑形状与叶上相似，但突起明显，周围无黄晕，严重时引起落叶、枯梢；果实受害后果实上的病斑与叶片相似，但病斑较大，木栓化程度比叶部更为坚实，火山口开裂更为显著，病斑限于果皮外，发生严重时引起早期落果。苗木和幼树受害严重时导致树体死亡。

近年来，由于苗木的盲目调运引种和生产上的疏忽，各地柑橘产区的溃疡病有上升蔓延趋势，严重影响到我国柑橘产业的发展。该病的防治以预防为主，选择无病植株，尽量避免将病菌带入园区，加强田间管理，提高柑橘的抗病能力，做到发病前或发病初期及时进行药剂防治。长期以来，植物病害的防治主要以化学农药为主，化学农药对农业生产上防治病害起十分重要的作用，但长期不合理使用化学农药不仅对人畜健康造成危害，而且对土壤、水体、大气造成严重污染，破坏了生态平衡。化学防治转向生物防治是大势所趋，微生物菌剂对植物病害有拮抗作用，还能改良土壤和减少化学肥料的使用而促进作物生长，减少果实农药残留，符合现代人们对健康、环境保护和无公害概念的追求。

尽管人们已开始对柑橘溃疡病进行积极防治，但柑橘溃疡病防治措施的研究工作还比较薄弱，进展比较缓慢，生产上主要依赖的化学防治，依然是使用几种常见药剂，缺乏推陈出新。迄今为止，柑橘溃疡病仍然无法根治，局部地区有蔓延趋势。生物防治以其高效、安全、环保受到研究工作者们的青睐，利用微生物技术防治溃疡病具有很大的潜力和市场前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用，为有效防治柑橘溃疡病提供微生物防治资源，以便更好建设绿色友好型农业。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

皮尔瑞俄芽孢杆菌，保藏编号为GDMCC NO:61542，名称为Paenibacillus peoriaeGXMD-hs-28，分类命名为Paenibacillus peoriae。

皮尔瑞俄芽孢杆菌，保藏编号为GDMCC NO61541，名称为Paenibacillus peoriaeGXMD-hs-35，分类命名为Paenibacillus peoriae。

上述皮尔瑞俄芽孢杆菌，其16S rRNA基因具有序列表SEQ.ID.NO.1或SEQ.ID.NO.2的碱基序列。

上述皮尔瑞俄芽孢杆菌用于抑制地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌。

上述皮尔瑞俄芽孢杆菌在防治柑橘溃疡病中的应用。

上述应用在于使用皮尔瑞俄芽孢杆菌的发酵液喷洒柑橘叶片。

上述皮尔瑞俄芽孢杆菌的发酵液用于制备地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌抑菌剂或防治柑橘溃疡病药剂。

发明人在广西弄岗国家级自然保护区的土壤中分离得到本发明的两株功能微生物皮尔瑞俄芽孢杆菌，保藏编号分别为GDMCC NO:61542、GDMCC NO:61541，名称分别为Paenibacillus peoriae GXMD-hs-28或Paenibacillus peoriae GXMD-hs-35。该菌株筛选简单、容易培养，发明人还建立了相应培养方法。研究表明，GXMD-hs-28或GXMD-hs-35菌株发酵液对柑橘溃疡病具有很好的防治作用效果，它对地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌抑制效果与常规化学农药的抑制效果相当。该菌株的发现丰富了我国的可利用微生物资源，其抑菌效果稳定、高效、环境友好的优势，在防治柑橘溃疡病方面具有很好的应用前景。

附图说明

图1是皮尔瑞俄芽孢杆菌在LB固体培养基上的生长形态图，图中：28为GXMD-hs-28菌株、35为GXMD-hs-35。

图2是皮尔瑞俄芽孢杆菌在LB液体培养基的生长曲线图(左边是菌株GXMD-hs-28，右边是菌株GXMD-hs-35)。

图3是皮尔瑞俄芽孢杆菌与地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌平板初筛抑制效果图。

图4是第一次叶片离体实验图，图中各处理组分别为：

水+kY：指清水对照。

LB(10)+KY：指空白LB培养基稀释10倍的对照。

先农药(1500)，后KY：指先用稀释1500倍的农药喷湿叶面，两天后再接种溃疡病菌。

农药(1500)+KY：指用稀释1500倍的农药喷湿叶面后立即接种溃疡病菌。

先KY，后农药(1500)：指先接种溃疡病菌，两天后再用稀释1500倍的农药喷湿叶面。

先28(10)，后KY：指先用稀释10倍的28号菌株菌剂喷湿叶面，两天后再接种溃疡病菌。

28(10)+KY：指用稀释10倍的28号菌株菌剂喷湿叶面后，立即接种溃疡病菌。

先KY，后28(10)：指先接种溃疡病菌，两天后再用稀释10倍的28号菌株菌剂喷湿叶面。

先28(100)，后KY：指先用稀释100倍的28号菌株菌剂喷湿叶面，两天后再接种溃疡病菌。

28(100)+KY：指用稀释100倍的28号菌株菌剂喷湿叶面后，立即接种溃疡病菌。

先KY，后28(100)：指先接种溃疡病菌，两天后再用稀释100倍的28号菌株菌剂喷湿叶面。

先35(10)，后KY：指先用稀释10倍的35号菌株菌剂喷湿叶面，两天后再接种溃疡病菌。

35(10)+KY：指用稀释10倍的35号菌株菌剂喷湿叶面后，立即接种溃疡病菌。

先KY，后35(10)：指先接种溃疡病菌，两天后再用稀释10倍的35号菌株菌剂喷湿叶面。

先35(100)，后KY：指先用稀释100倍的35号菌株菌剂喷湿叶面，两天后再接种溃疡病菌。

35(100)+KY：指用稀释100倍的35号菌株菌剂喷湿叶面后，立即接种溃疡病菌。

先KY，后35(100)：指先接种溃疡病菌，两天后再用稀释100倍的35号菌株菌剂喷湿叶面。

图5是第一次叶片离体实验拮抗效果图，图中各处理组如图上所述。

图6是第二次叶片离体实验图，图中各处理组如图上所述。

图7是第二次叶片离体实验拮抗效果图，图中各处理组如图上所述。

图8是盆栽实验图，图中各处理组如图上所述。

图9是盆栽实验拮抗效果图，图中各处理组如图上所述。

图10是自然带病实验拮抗效果图，图中各处理组分别为：

菌28(10)喷：指用稀释10倍的28号菌株菌剂喷湿叶面。

菌28(100)喷：指用稀释100倍的28号菌株菌剂喷湿叶面。

菌35(10)喷：指用稀释10倍的35号菌株菌剂喷湿叶面。

菌35(100)喷：指用稀释100倍的35号菌株菌剂喷湿叶面。

对照(LB)喷：指用稀释10倍的空白LB培养基喷湿叶面。

对照(清水)喷：指用清水喷湿叶面。

图11是菌种电泳结果图，图中：左起第一条带为菌株GXMD-hs-28；第二条带为菌株GXMD-hs-35。

保藏信息说明

皮尔瑞俄芽孢杆菌，名称为Paenibacillus peoriae GXMD-hs-28，分类命名为Paenibacillus peoriae，保藏编号为GDMCC NO:61542，保藏日期：2021年3月1日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心。

皮尔瑞俄芽孢杆菌，名称为Paenibacillus peoriae GXMD-hs-35，分类命名为Paenibacillus peoriae，保藏编号为GDMCC NO:61541，保藏日期：2021年3月1日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心。

菌株保存和培养条件：

培养基为LB培养基。

菌株保存方法为加入60％甘油，冰箱-80°冷冻保存。

菌株特性：

如图1所示，菌株GXMD-hs-28，于30℃在LB固体培养基上生长，呈白色中间带点淡红色不透明、较小，呈不规则形状，表面干燥边缘规则，有异味。

如图1所示，菌株GXMD-hs-35，于30℃在LB固体培养基上生长，呈微红色，圆形，表面干燥边缘不规则，有异味。

如图2所示，菌株GXMD-hs-28和菌株GXMD-hs-35在LB液体培养基的生长曲线显示，菌株的迟缓期为0-5h，对数增长期为5-18h，也就是两种菌株在LB液体培养基中培养，18h后达到稳定期。

本发明两株皮尔瑞俄芽孢杆菌的最优氮源为酵母膏，最优碳源为壳聚糖。

具体实施方式

一、菌株的筛选

1.1材料准备

样品采样：采样土壤地点为广西弄岗国家级自然保护区，拨开表层土，采表层以下15cm深度的土样，保存于4℃培养箱中，带回实验室进行下一步处理。

分离纯化培养基：

LB液体培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，氯化钠5.0g，蒸馏水1000mL。

LB固体培养基：胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，氯化钠5.0g，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL。

PDA培养基：马铃薯200.0g，葡萄糖20.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1000mL。

1.2菌株的分离纯化筛选

1.2.1分离纯化

将2g土壤样品加入18ml无菌水中制备土壤悬液，摇床(180r/min)震荡30min后，用无菌水梯度稀释成10^-1-10^-6倍的样品，取10^-3、10^-4两个稀释倍数的样品0.1ml涂于PDA培养基平板上，用于分离真菌。取10^-5、10^-6两个稀释倍数的样品0.1ml涂于LB固体培养基上，用于分离细菌。将PDA平板置于28℃培养箱，经2d、7d、14d后挑取单菌落于固体培养基纯化。将LB平板置于37℃培养箱，36h后挑取形态特征明显不一样的菌落在新的平板上划线，获得单菌落。

1.2.2初筛

采用对峙培养法筛选，将培养好的柑桔溃疡病菌菌液与融化的LB培养基按1:1000均匀混合，倒入灭菌培养皿中。待上述培养基凝固，将平板划分4个区域，在其中间打一个圆孔，用移液枪取100uL配制好的待筛选菌剂到其中的3个圆孔中，另一个圆孔加LB培养基作为对照，设3个平行。将做好标记的平板置于30℃恒温培养箱中培养，每个12h观察一次抑菌圈直径，最后测量并记录抑菌圈直径。菌株初筛实验结果如表1和附图2所示。

表1皮尔瑞俄芽孢杆菌与柑橘溃疡病病菌抑菌圈直径数据表

	菌株28	菌株35
			抑菌圈平均直径(mm)	19.22	21.00

结果表明，所得两株皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘溃疡病病原菌地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌的抑制效果都很好。

二、菌株的抑菌应用

2.1第一次叶片离体实验

将拮抗菌接种到LB液体培养基中培养，配制成菌株发酵液；在沃柑树上摘取长势一致的新鲜柑橘叶片，用无菌水清洗干净。作三组对照，分别为水、LB液体培养基、市场常用杀菌溃疡药(春雷·喹啉铜)稀释1500倍(推荐用量为稀释1000-1500倍)；每株拮抗菌制成的菌剂作稀释10倍、100倍两个浓度梯度，每张叶片用无菌接种针均匀刺6个孔，设3个平行。

为了探究本发明菌种对柑橘溃疡病的防治最佳时期，实验作3种不同的处理方式，分别为：

A在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，放入恒温培养箱，2天后用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，观察并记录至发病情况稳定。

B用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，2天后在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，放入恒温培养箱，观察并记录至发病情况稳定。

C用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，立即在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，放入恒温培养箱，观察并记录至发病情况稳定。

其中水对照、LB对照组只做C处理。

上述皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘叶片防治溃疡病防治效果的计算公式为：

如图4至图5所示，结果表明两株皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘溃疡病均有防治作用，先用稀释100倍的皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂喷湿叶面2d后，再接种柑橘溃疡病的处理组防治效果最好，达到90％以上；先用稀释10倍的皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂喷湿叶面2d后，再接种柑橘溃疡病的处理组的防治效果也达到77％；皮尔瑞俄芽孢杆菌的其他处理效果不理想。其中，水对照组以及LB培养基对照组的发病率为100％，农药对照处理组对柑橘叶片防治柑橘溃疡病的效果最佳处理为先用农药喷湿叶面，2d后接种柑橘溃疡病菌，该处理的防治效果仅达22.22％。由此可得出，本发明提供的皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂稀释10倍、100倍后，对柑橘叶片防治柑橘溃疡病的效果比市场上常用的柑橘溃疡杀菌剂稀释1500倍后的效果要好50％以上。

2.2第二次叶片离体实验

将拮抗菌接种到LB液体培养基中培养，配制成菌株发酵液；在沃柑树上摘取长势一致的新鲜柑橘叶片，用无菌水清洗干净。作三组对照，分别为水、LB液体培养基、市场常用杀菌溃疡药(同上)稀释1000倍(推荐用量为稀释1000-1500倍)；每株拮抗菌制成的菌剂作稀释10倍、100倍两个浓度梯度，每张叶片用无菌接种针均匀刺6个孔，设3个平行。

为了探究本发明菌株对柑橘溃疡病的防治最佳时期，实验作3种不同的处理方式，分别为：

其中水对照、LB对照组只做C处理。

如图6至图7所示，结果表明两株皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘溃疡病均有防治作用，先用稀释10、100倍的皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂喷湿叶面2d后，再接种柑橘溃疡病的处理组防治效果最好，达到100％以上；皮尔瑞俄芽孢杆菌的其他处理效果不理想。其中，水对照组以及LB培养基对照组的发病率为100％，农药对照处理组对柑橘叶片防治柑橘溃疡病的效果最佳处理为先用农药喷湿叶面，2d后接种柑橘溃疡病菌，该处理的防治效果为100％；先接种柑橘溃疡病病菌，2d后再用农药稀释叶面喷湿的防治效果为72.22％。

两次叶片离体实验结果说明，上述皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘溃疡病的防治最佳时间为预防期，也就是先用本发明皮尔瑞俄芽孢杆菌的菌剂先处理柑橘叶片，待菌株在叶片数定殖后，柑橘溃疡病病菌再去感染这些处理过的叶片就比较困难。

综上，本发明皮尔瑞俄芽孢杆菌在柑橘溃疡病的防治中起预防作用，而治疗效果不理想。

2.3人为接病盆栽实验

挑选长势一致的沃柑苗，每棵沃柑苗挑选10张刚成熟的叶片，每张叶片用无菌接种针均匀刺6个孔。作2组对照，分别为水、市场常用杀菌溃疡药(同上)稀释1000倍(推荐用量为稀释1000-1500倍)；每株拮抗菌制成的菌剂作稀释10倍。

A在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，2天后用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，1个月后观察并记录病记录发病情况。

B用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，2天后在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，1个月后观察并记录病记录发病情况。

C用喷雾法将拮抗菌或者农药喷湿叶面，立即在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌，1个月后观察并记录病记录发病情况。

其中水对照只做C处理。

如图8至图9所示，结果表明两株皮尔瑞俄芽孢杆菌对柑橘溃疡病均有防治作用，在3种不同处理方式中，C处理的防治效果是最理想的，皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂和农药对照都是如此。其中，水对照组的发病率为96.67％，农药对照组中，用喷雾法将农药喷湿叶面，立即在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌的防治效果为37.93％，其余两种处理的防治效果均低于7％。本发明提供的两株皮尔瑞俄芽孢杆菌，用喷雾法将稀释10倍的菌剂喷湿叶面，立即在叶片针刺处接种10ul溃疡病菌的防治效果分别高达24.14％和37.93％，达到了农药对照组的防治效果。

综上盆栽实验结果与叶片离体实验结果表明，本发明皮尔瑞俄芽孢杆菌需要在叶片定殖成功，才能起较为理想的作用。为此，在农业生产中，需要让皮尔瑞俄芽孢杆菌在柑橘叶片上存在的时间更久，在实际生产中，也要定期使用皮尔瑞俄芽孢杆菌菌剂以确保有效活菌数。

2.4自然带病盆栽实验

挑选叶片带有溃疡病的沃柑苗，做好标记，记录每棵试验苗的溃疡病等级，分级标准为：0级，无病；1级，每叶有病斑1-5个；3级，每叶有病斑6-10个；5级，每叶有病斑11-15个；7级，每叶有病斑16-20个；9级，每叶有病斑21个及以上。共设4个处理，2个对照：(1)菌株GXMD-hs-28菌剂10倍稀释液；(2)菌株GXMD-hs-28菌剂100倍稀释液；(3)菌株GXMD-hs-35菌剂10倍稀释液；(4)菌株GXMD-hs-35菌剂100倍稀释液；(5)LB液体培养基10倍稀释液对照；(6)清水对照。每个处理做5个重复。

上述两株皮尔瑞俄芽孢杆菌稀释菌剂对叶片已经有溃疡病的沃柑苗的病级减少作用结果如图10所示。在沃柑苗自然生理落叶情况下，实验结果表明，两个对照组的沃柑病级减少均为0.8级，而上述处理(1)、(3)的病级减少为1.2级，处理(4)的病级减少高达2级。这说明菌株GXMD-hs-28、菌株GXMD-hs-35的发酵液对已经染病的柑橘，仍具有良好的治疗效果，使相应柑橘溃疡病等级大幅度降低。

综合整个皮尔瑞俄芽孢杆菌菌株的抑菌实验，两株菌株对柑橘溃疡病均具有很好的市场开发前景，能达到市场上常规化学杀菌剂的效果。由于本发明菌株均是从自然环境的土壤中分离得到，对环境不会产生任何污染，为实现更绿色友好的农业生产提供了保障。

三、菌株基因鉴定

使用TSINGKE植物DNA提取试剂盒(通用型)提取菌株的基因组DNA，提取的DNA样品适量稀释后作为PCR模板，以擎科1×TSE101金牌mix进行扩增，扩增体系各组分如表2；通用引物序列如表3所示。

表2扩增体系

1×TSE101金牌mix	45ul
		27F/7F(10P)	2ul
1492R/1540R(10P)	2ul
		DNA模板	1ul

表3通用引物序列

以上扩增体系的扩增程序如表4。

表4扩增程序

16SrRNA扩增的产物用浓度为1％的琼脂凝胶做电泳检验，电泳结果如图11。合格的PCR产物交由北京擎科生物科技有限公司进行测序及鉴定，鉴定结果表明，本发明提供的对柑橘溃疡病有显著拮抗效果的两株菌株同属皮尔瑞俄芽孢杆菌(Paenibacilluspeoriae)，根据两株菌株在培养基上的形态表现，确定两株菌株同属但不是相同的菌株。

序列表

<110> 广西民族大学

广西绿友农生物科技股份有限公司

<120> 皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1335

<212> DNA

<213> 皮尔瑞俄芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae GXMD-hs-35)

<400> 1

ggcggacggg tgagtaacac gtaggcaacc tgcccacaag acagggataa ctaccggaaa 60

cggtagctaa tacccgatac atccttttcc tgcatgggag agggaggaaa gacggagcaa 120

tctgtcactt gtggatgggc ctgcggcgca ttagctagtt ggtggggtaa aggcctacca 180

aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca cactgggact gagacacggc 240

ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca atgggcgaaa gcctgacgga 300

gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtaaag ctctgttgcc agggaagaac 360

gtcttgtaga gtaactgcta caagagtgac ggtacctgag aagaaagccc cggctaacta 420

cgtgccagca gccgcggtaa tacgtagggg gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa 480

agcgcgcgca ggcggctctt taagtctggt gtttaatccc gaggctcaac ttcgggtcgc 540

actggaaact ggggagcttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt gtagcggtga 600

aatgcgtaga gatgtggagg aacaccagtg gcgaaggcga ctctctgggc tgtaactgac 660

gctgaggcgc gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt ccacgccgta 720

aacgatgaat gctaggtgtt aggggtttcg atacccttgg tgccgaagtt aacacattaa 780

gcattccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga cggggacccg 840

cacaagcagt ggagtatgtg gtttaattcg aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg 900

acatccctct gatcggtcta gagatagatc tttccttcgg gacagaggag acaggtggtg 960

catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 1020

cttatgctta gttgccagca ggtcaagctg ggcactctaa gcagactgcc ggtgacaaac 1080

cggaggaagg tggggatgac gtcaaatcat catgcccctt atgacctggg ctacacacgt 1140

actacaatgg ccggtacaac gggaagcgaa atcgcgaggt ggagccaatc ctagaaaagc 1200

cggtctcagt tcggattgta ggctgcaact cgcctacatg aagtcggaat tgctagtaat 1260

cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggtctt gtacacaccg cccgtcacac 1320

cacgagagtt tacaa 1335

<210> 2

<211> 1337

<212> DNA

<213> 皮尔瑞俄芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae GXMD-hs-28)

<400> 2

cctagcggcg gacgggtgag taacacgtag gcaacctgcc cacaagacag ggataactac 60

cggaaacggt agctaatacc cgatacatcc ttttcctgca tgggagaagg aggaaagacg 120

gagcaatctg tcacttgtgg atgggcctgc ggcgcattag ctagttggtg gggtaaaggc 180

ctaccaaggc gacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga 240

cacggcccag actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg gcgaaagcct 300

gacggagcaa cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct gttgccaggg 360

aagaacgtct tgtagagtaa ctgctacaag agtgacggta cctgagaaga aagccccggc 420

taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg tagggggcaa gcgttgtccg gaattattgg 480

gcgtaaagcg cgcgcaggcg gctctttaag tctggtgttt aatcccgagg ctcaacttcg 540

ggtcgcactg gaaactgggg agcttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccacgtgtag 600

cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca ccagtggcga aggcgactct ctgggctgta 660

actgacgctg aggcgcgaaa gcgtggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 720

gccgtaaacg atgaatgcta ggtgttaggg gtttcgatac ccttggtgcc gaagttaaca 780

cattaagcat tccgcctggg gagtacggtc gcaagactga aactcaaagg aattgacggg 840

gacccgcaca agcagtggag tatgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag 900

gtcttgacat ccctctgatc ggtctagaga tagacctttc cttcgggaca gaggagacag 960

gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc 1020

gcaaccctta tgcttagttg ccagcaggtc aagctgggca ctctaagcag actgccggtg 1080

acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac 1140

acacgtacta caatggccgg tacaacggga agcgaaatcg cgaggtggag ccaatcctag 1200

aaaagccggt ctcagttcgg attgtaggct gcaactcgcc tacatgaagt cggaattgct 1260

agtaatcgcg gatcagcatg ccgcggtgaa tacgttcccg ggtcttgtac acaccgcccg 1320

tcacaccacg agagttt 1337

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

agtttgatcm tggctcag 18

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggttaccttg ttacgactt 19

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cagagtttga tcctggct 18

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aggaggtgat ccagccgca 19

Claims

1.皮尔瑞俄芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)GXMD-hs-28，保藏编号为GDMCC NO:61542，分类命名为Paenibacillus peoriae。

2.皮尔瑞俄芽孢杆菌(Paenibacillus peoriae)GXMD-hs-35，保藏编号为GDMCCNO61541，分类命名为Paenibacillus peoriae。

3.权利要求1或2所述皮尔瑞俄芽孢杆菌用于抑制地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌(Xanthomonas axonopodispv.citri,Xac)。

4.权利要求1或2所述皮尔瑞俄芽孢杆菌在防治柑橘溃疡病中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于使用皮尔瑞俄芽孢杆菌的发酵液喷洒柑橘叶片。

6.权利要求1或2所述皮尔瑞俄芽孢杆菌的发酵液用于制备地毯草黄单胞杆菌柑橘致病变种病菌抑菌剂或防治柑橘溃疡病药剂。