CN113881590B - 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 - Google Patents
一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113881590B CN113881590B CN202111071549.6A CN202111071549A CN113881590B CN 113881590 B CN113881590 B CN 113881590B CN 202111071549 A CN202111071549 A CN 202111071549A CN 113881590 B CN113881590 B CN 113881590B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- walnut
- endophytic
- biocontrol
- biocontrol bacteria
- walnut leaf
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 title claims abstract description 71
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 title claims abstract description 70
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 40
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- 240000007049 Juglans regia Species 0.000 title description 2
- 241000758789 Juglans Species 0.000 claims abstract description 69
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims abstract description 15
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 241001467578 Microbacterium Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000004763 spore germination Effects 0.000 description 10
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000131747 Exiguobacterium acetylicum Species 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 241001529387 Colletotrichum gloeosporioides Species 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 244000283763 Acetobacter aceti Species 0.000 description 1
- 235000007847 Acetobacter aceti Nutrition 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 description 1
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于微生物技术领域。一种核桃叶片内生生防细菌,所述核桃叶片内生生防细菌属于微小杆菌属,所述核桃叶片内生生防细菌的保藏号为CGNCC No:22703,其16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明核桃叶片内生生防细菌安全性高,能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病,生产使用成本低,无残留,安全性高,绿色环保,防治效果好。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,具体涉及一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用。
背景技术
核桃(Juglans regia)是我国重要的木本油料作物。由胶孢炭疽菌引起的炭疽病和层出镰刀菌引起的叶枯病侵染叶片会造成大面积叶片枯死,严重影响树体光合作用和树体营养的积累。目前对这两种病害的防治多集中在化学防治,本发明人在近期的研究中发现Exiguobacterium acetylicum对层出镰刀菌和胶孢炭疽菌孢子萌发和菌丝生长具有显著的抑制作用,而该菌在在抗真菌活性在核桃叶部病害中未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用,该细菌安全性高,能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病。
本发明的技术方案如下:
一种核桃叶片内生生防细菌,所述核桃叶片内生生防细菌属于微小杆菌属,所述核桃叶片内生生防细菌的保藏号为CGNCC No:22703。所述核桃叶片内生生防细菌作为一种微生物,能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病,无农药残留问题,安全性高。
一种核桃叶片内生生防细菌的制备方法,包括如下步骤:
S1.将核桃叶清洗除杂后进行表面消毒,在无菌研钵中研磨成匀浆;
S2.在匀浆中加入无菌生理盐水,取稀释液均匀涂布于无菌LB平板培养基上,重复多次后,于25-30℃的培养箱中倒置培养;
S3.待菌落长成后,选取大小、光泽、颜色、透明度、形状不同的单菌落,在无菌LB平板培养基上划线,于25-30℃的培养箱中倒置培养;
S4.观察菌落形态,继续挑选单菌落划线培养直至纯化。
进一步的,步骤S1中,表面消毒的具体操作为:用无菌水冲洗表面,无菌滤纸吸去水分,将叶片在75%的乙醇水溶液中浸泡5-10 s,晾干后浸入0.1%氯化钠溶液中表面消毒5-10 min,无菌水冲洗干净。
进一步的,所述LB平板培养基包括胰蛋白胨5-10 g、酵母粉5-10 g、氯化钠8-12g和琼脂18-20 g,蒸馏水定容至1000mL。
进一步的,步骤S2中,匀浆与生理盐水的体积比为1:9-10。
一种所述的核桃叶片内生生防细菌在制备防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病的药物中的应用。
进一步的,所述防治核桃炭疽病或核桃叶枯病为拮抗核桃炭疽病的病原菌或层出镰刀菌。
一种药物制剂,包括所述的核桃叶片内生生防细菌。
进一步的,所述药物制剂为所述核桃叶片内生生防细菌的发酵液。
进一步的,所述药物制剂在使用时,所述核桃叶片内生生防细菌的使用浓度为1×107CFU/mL-1×109CFU/mL。
一种药物制剂的制备方法,包括以下步骤:培养所述的核桃叶片内生生防细菌,收集培养液,得到药物制剂。
进一步的,所述药物制剂的制备方法具体为:挑纯培养的单菌落置于液体LB培养基中,在温度25-35℃、摇床条件下,黑白交替培养各12h,收集培养液即可。
一种所述的药物制剂或者由所述的制备方法制备而成的药物制剂在防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病中的应用。
进一步的,所述核桃叶片内生生防细菌的使用方法为:将所述核桃叶片内生生防细菌制成菌悬液后喷施于植物叶片上。
进一步的,所述核桃叶片内生生防细菌的使用方法为:将所述药物制剂喷施于植物叶片上。
本发明具有如下有益效果:
本发明核桃叶片内生生防细菌作为一种微生物,能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病,生产使用成本低,无残留,安全性高,绿色环保,防治效果好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细的说明,实施例仅是本发明的优选实施方式,不是对本发明的限定。
在一具体实施方式中,核桃叶片内生生防细菌Exiguobacterium acetylicum(TL1)菌株已于2021年6月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏单位地址:中国.北京.中国科学院微生物研究所;保藏号为CGNCC No:22703。
上述核桃叶片内生生防细菌Exiguobacterium acetylicum(TL1),能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病。
TL1菌株的制备方法包括以下步骤:
S1.将核桃叶清洗除杂后进行表面消毒,消毒后在无菌研钵中研磨成匀浆;表面消毒的具体操作为:用无菌水冲洗表面,无菌滤纸吸去水分,将叶片在75%的乙醇水溶液中浸泡10 s,晾干后浸入0.1%氯化钠溶液中表面消毒5 min,无菌水冲洗5次;
S2.在10mL匀浆中加入90mL无菌生理盐水,取稀释液均匀涂布于无菌LB平板培养基上,重复3次后,于28℃的培养箱中倒置培养;LB平板培养基包括蛋白胨10 g、酵母粉5 g、氯化钠10 g和琼脂20 g,蒸馏水定容至1000 mL;
S3.待菌落长成后,选取大小、光泽、颜色、透明度、形状不同的单菌落,在无菌LB平板培养基上划线,于28℃的培养箱中倒置培养;
S4.观察菌落形态,继续挑选单菌落划线培养直至纯化,菌落形态如图1所示。
Exiguobacterium acetylicum在LB培养基在27℃下培养3天,在27℃下培养3天,颜色为橙粉色,细胞圆球状,在直角两个平面交替分裂形成四联状,一般细胞成对生,单生者罕见,不成链状排列。革兰氏阳性,不运动,兼性厌氧。利用Its1/Its4扩增TL1菌株的16SrRNA基因获得的序列在NCBI公共数据库的序列号为MZ350224此序列是鉴定该菌株的分子特征依据,TL1菌株的16S rDNA核苷酸序列长度为1448bp,具体序列如下:
GCTATACATGCAAGTCGAGCGCAGGAAGCTGACGGAACTCTTCGGAGGGAAGGCAGTGGA
ATGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAAGGAACCTGCCTCAAGGATTGGGATAACTCC
GAGAAATCGGAGCTAATACCGGATAGTTCAACGGACCGCATGGTCCGCTGATGAAAGGCG
CTCCGGCGTCACCTTGAGATGGCCTTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCC
ACCAAGGCGACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACA
CGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGA
TGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTAAGGGAA
GAACACGTACGAGAGGAAATGCTCGTACCTTGACGGTACCTTACGAGAAAGCCACGGCTA
ACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGC
GTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGA
GGGCCATTGGAAACTGGAAGGCTTGAGTACAGAAGAGAAGAGTGGAATTCCACGTGTAGC
GGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTTTGGTCTGTAA
CTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCAC
GCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGGGGGTTTCCGCCCCTCAGTGCTGAAGCTAACG
CATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGG
GACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAA
CTCTTGACATCCCATTGACCGCTTGAGAGATCAAGTTTTCCCTTCGGGGACAATGGTGAC
AGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGA
GCGCAACCCCTATCCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGGGAGACTGCCGGTG
ACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGAGTTGGGCTAC
ACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGGGCAGCGAGACCGCGAGGTGGAGCCAATCCCAT
AAAGCCGTTCCCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATCGCTA
GTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGT
CACACCACGAGAGTTTGCAACACCCGAAGCCGGTGAGGTAACCGTAAGGAGCCAGCCGTC
GAAGGTGG
将测序获得的序列在GenBank中进行BLAST序列相似性比对,结果与乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)的16S rDNA核苷酸序列同源性最高。
将上述核桃叶片内生生防细菌应用于制备防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病的药物制剂;药物制剂的制备方法,包括以下步骤:将TL1菌株置于液体LB培养基中,在温度30℃、摇床条件下,黑白交替培养各12h,收集培养液,即得药物制剂。
一.测试拮抗细菌对孢子萌发的影响
参考方中达《植病研究方法》,在“U”形载玻片中央滴20 μL浓度为1×107 CFU/mL的TL1菌株的孢子悬浮液,孢子悬浮液和拮抗细菌菌悬液按1:1的比例混合为处理,以加无菌水为对照,盖好盖玻片,底部保湿,放置在28 ℃人工培养箱中培养,24 h后检查孢子萌发情况;
孢子萌发率=(萌发孢子个数/总孢子个数)×100%;
孢子萌发抑制率=(对照孢子萌发数-处理孢子萌发数)/对照孢子萌发数×100%;
测试结果见表1。
二.测试拮抗细菌对病原菌菌丝生长的影响
涂布平板法:在PDA平板上均匀涂布TL1菌株悬浮液,平板中央接入直径为8 mm的已活化5 d的病原菌菌饼,28 ℃培养箱中培养7 d,用十字交叉法测得其病原菌菌落直径,以涂布无菌水为对照,对照和处理各5个重复;
菌丝生长抑制率=(对照组病原菌菌落直径-处理组病原菌菌落直径)/对照组病原菌菌落直径×100%;
测试结果见表1。
表1:
可见,TL1对层出镰刀菌和胶孢炭疽菌分离株具有较强的抑制活性,菌丝生长抑菌率达到50.51%和52.70%,说明TL1对层出镰刀菌分离株病原菌有明显抑制菌丝生长的作用。孢子萌发率分别为32.58和33.61,TL1对两种病原菌孢子萌发具有明显抑制率。
三.测试TL1菌株对叶片的影响
每组选用长势一致的10株核桃苗,每株5个重复共50片叶进行实验。叶片消毒:75%的酒精棉球擦拭叶片,后用无菌水冲洗叶片直至叶尖有水珠流下,待叶面水分干后采用针刺法对叶片造成伤口便于菌体进入组织。病原菌采用平板培养五天的新鲜菌盘(直径0.5cm)接菌后进行保湿,拮抗菌悬浮液560nm处OD值为1.014,于病原菌侵入24h后喷于接菌部位,七天后调查发病率及病情指数。
活体叶片抑菌试验结果见下表:
可见,TL1对层出镰刀菌发病率与对照组相比降低了13.51%,防治效果为55.2%。
本发明核桃叶片内生生防细菌安全性高,能够有效防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病,生产使用成本低,无残留,安全性高,绿色环保,防治效果好。
序列表
<110> 河北农业大学
<120> 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1448
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gctatacatg caagtcgagc gcaggaagct gacggaactc ttcggaggga aggcagtgga 60
atgagcggcg gacgggtgag taacacgtaa ggaacctgcc tcaaggattg ggataactcc 120
gagaaatcgg agctaatacc ggatagttca acggaccgca tggtccgctg atgaaaggcg 180
ctccggcgtc accttgagat ggccttgcgg tgcattagct agttggtggg gtaacggccc 240
accaaggcga cgatgcatag ccgacctgag agggtgatcg gccacactgg gactgagaca 300
cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac gaaagtctga 360
tggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt aaaactctgt tgtaagggaa 420
gaacacgtac gagaggaaat gctcgtacct tgacggtacc ttacgagaaa gccacggcta 480
actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga attattgggc 540
gtaaagcgcg cgcaggcggc cttttaagtc tgatgtgaaa gcccccggct caaccgggga 600
gggccattgg aaactggaag gcttgagtac agaagagaag agtggaattc cacgtgtagc 660
ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa ggcgactctt tggtctgtaa 720
ctgacgctga ggcgcgaaag cgtgggggag caaacaggat tagataccct ggtagtccac 780
gccgtaaacg atgagtgcta ggtgttgggg ggtttccgcc cctcagtgct gaagctaacg 840
cattaagcac tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga aactcaaagg aattgacggg 900
gacccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc aacgcgaaga accttaccaa 960
ctcttgacat cccattgacc gcttgagaga tcaagttttc ccttcgggga caatggtgac 1020
aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga 1080
gcgcaacccc tatccttagt tgccagcatt cagttgggca ctctagggag actgccggtg 1140
acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga gttgggctac 1200
acacgtgcta caatggacgg tacaaagggc agcgagaccg cgaggtggag ccaatcccat 1260
aaagccgttc ccagttcgga ttgcaggctg caactcgcct gcatgaagtc ggaatcgcta 1320
gtaatcgcag gtcagcatac tgcggtgaat acgttcccgg gtcttgtaca caccgcccgt 1380
cacaccacga gagtttgcaa cacccgaagc cggtgaggta accgtaagga gccagccgtc 1440
gaaggtgg 1448
Claims (8)
1.一种核桃叶片内生生防细菌在制备防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病的药物中的应用,其特征在于,所述核桃叶片内生生防细菌属于微小杆菌属,所述核桃叶片内生生防细菌的保藏号为CGNCC No:22703,其16S rDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述防治核桃炭疽病或核桃叶枯病为拮抗核桃炭疽病的病原菌或层出镰刀菌。
3.一种药物制剂在制备防治核桃炭疽病或层出镰刀菌引起的核桃叶枯病的药物中的应用,其特征在于,所述药物制剂包括权利要求1所述的核桃叶片内生生防细菌。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述药物制剂为所述核桃叶片内生生防细菌的发酵液。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述药物制剂在使用时,所述核桃叶片内生生防细菌的使用浓度为1×10 7 CFU/mL-1×10 9 CFU/mL。
6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,制备方法包括以下步骤:培养权利要求1所述的核桃叶片内生生防细菌,收集培养液,得到药物制剂。
7.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述核桃叶片内生生防细菌的使用方法为:将所述核桃叶片内生生防细菌制成菌悬液后喷施于植物叶片上。
8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述核桃叶片内生生防细菌的使用方法为:将所述药物制剂喷施于植物叶片上。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111071549.6A CN113881590B (zh) | 2021-09-14 | 2021-09-14 | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202111071549.6A CN113881590B (zh) | 2021-09-14 | 2021-09-14 | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113881590A CN113881590A (zh) | 2022-01-04 |
CN113881590B true CN113881590B (zh) | 2023-12-29 |
Family
ID=79009266
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202111071549.6A Active CN113881590B (zh) | 2021-09-14 | 2021-09-14 | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113881590B (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104195071A (zh) * | 2014-08-06 | 2014-12-10 | 江苏农林职业技术学院 | 一种枯草芽孢杆菌b33及其应用 |
CN110669702A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-01-10 | 山东省果树研究所 | 一种防治核桃炭疽病的生防菌株jk17及其筛选方法、应用 |
-
2021
- 2021-09-14 CN CN202111071549.6A patent/CN113881590B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104195071A (zh) * | 2014-08-06 | 2014-12-10 | 江苏农林职业技术学院 | 一种枯草芽孢杆菌b33及其应用 |
CN110669702A (zh) * | 2019-11-15 | 2020-01-10 | 山东省果树研究所 | 一种防治核桃炭疽病的生防菌株jk17及其筛选方法、应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Exiguobacterium acetylicum strain TL1 16s ribosomal RNA gene, partial sequence;YAN, A.等;《GENBANK:MZ350224.1》;ORIGIN * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113881590A (zh) | 2022-01-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112458012B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及其应用 | |
CN112175888B (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌Hsg1949及其应用 | |
CN112899171B (zh) | 白囊耙齿菌ll210及其应用、生防菌剂 | |
CN113549578B (zh) | 一株抑制稻瘟病菌和促进种子发芽的暹罗芽孢杆菌BsNlG13及其应用 | |
CN112342173B (zh) | 贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN113005056A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌hy19及其应用 | |
CN109112069B (zh) | 一种生防内生真菌及其应用 | |
CN114231444A (zh) | 一株耐盐芽孢杆菌及其应用 | |
CN110317747B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用 | |
CN112831447B (zh) | 皮尔瑞俄芽孢杆菌及其在防治柑橘溃疡病中的应用 | |
CN113755389A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN117165494A (zh) | 一种猕猴桃溃疡病生防菌株Wq-1及其应用 | |
CN115960777B (zh) | 一株假真菌样芽孢杆菌及其在蔬菜疫病防治中的应用 | |
CN113881590B (zh) | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 | |
CN113832071B (zh) | Brevibacillus halotolerans菌及其制备生防菌剂中的应用 | |
CN115747093A (zh) | 一株耐盐芽胞杆菌及其应用 | |
CN113897307B (zh) | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 | |
CN112646752B (zh) | 微生物制剂的制备方法 | |
CN113755375B (zh) | 一种核桃叶片内生生防细菌及其制备方法和应用 | |
CN113684158A (zh) | 一种暹罗芽孢杆菌jy-1及其制剂和应用 | |
CN116286536B (zh) | 一种芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌yz-228及其应用 | |
CN116218742B (zh) | 一株拮抗掘氏疫霉菌的地衣芽孢杆菌及其应用 | |
CN117327618B (zh) | 一株苏云金芽孢杆菌及其应用、复合生物菌剂及其制备方法和应用 | |
CN111808785B (zh) | 红花龙胆内生贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
CN116987648B (zh) | 一株短小芽孢杆菌及其在猕猴桃溃疡病防治中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |