CN112830970B - 一种cd22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用 - Google Patents

一种cd22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用。本发明通过人源CD22重组蛋白免疫羊驼后从羊驼外周血中筛选获得具有特定序列信息的纳米抗体，并通过特定核苷酸突变修饰的人源化处理，筛选获得具有高的特异性和安全性的人源化纳米抗体。本发明纳米抗体能够作为活性成分制备药物，用于治疗B细胞肿瘤或其他以CD22为治疗靶标的疾病，也能够用于制备诊断试剂，同时也可以作为抗原结合结构域序列，制备嵌合抗原结合受体、载体和免疫效应细胞，对表达CD22蛋白的细胞产生靶向裂解作用。

Description

一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用。
背景技术
纳米抗体最早在1993年由Hamers等报道，羊驼血液中存在一种天然缺失轻链和重链恒定区1(CH1)的重链抗体，克隆其可变区得到只有一个重链可变区组成的单域抗体，称其为VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)。VHH晶体为2.5nm,长4nm,分子量只有15KDa，如今称为“纳米抗体”（Nanobody,Nb）。该抗体只包含一个重链可变区(VHH)和两个常规的CH2与CH3区，但却不像人工改造的单链抗体片段(scFv)那样容易相互沾粘，甚至聚集成块。更重要的是单独克隆并表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性，是目前已知的具有完整功能的最小抗原单位。基于其独特的空间结构，纳米抗体具有许多优异的特性，易于获得和表达、高稳定性、高水溶性、高特异性强的抗原表位等，此外还具有相对分子质量小、与人源IgG序列同源、亲和力高、免疫原性低、穿透力强、人源化简单以及可在细菌中大量表达等优点。不仅如此，纳米抗体VHH的结构仅由重链可变区构成，缺乏Fc片段，便可以利用不同标签来表达纳米抗体，并方便收集。与传统单克隆抗体相比，VHH在疾病的诊断治疗及药物开发等医学领域具有更广阔的应用前景。
CD22 是唾液酸结合受体蛋白超家族 (Siglec,sialic acid binding receptorprotein superfamily) 的一员，且其是一种B系分化抗原，表达于B细胞发育的各个阶段，B细胞分化为浆细胞后不再表达CD22。在体内，B 细胞代表 CD22的主要来源。60％～80％的B细胞恶性肿瘤表达CD22。几乎所有的B前体细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)表达CD22；90％以上的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCLs)和滤泡淋巴瘤(FLs)为CD22阳性；慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)、毛细胞白血病(HCL)也具有高水平的CD22表达。目前已有许多临床试验研究证实了靶向CD22的药物的有效性。CD22单克隆抗体——依他珠单抗(Epratuzumab)，在治疗成人和儿童B-ALL中具有一定的效果；CD22免疫毒素对HCL和B-ALL有一定的治疗作用，但是现有的市售CD22抗体类药物在结合亲和力上仍然存在一定的缺陷，研究开发出相比现有CD22抗体更高亲和力的纳米抗体，对相关肿瘤疾病的治疗具有重要的前景意义。
发明内容
为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种CD22纳米抗体，对靶向抗原CD22具有高的结合特异性、稳定性和安全性。
本发明的目的之二在于提供一种分离的核酸分子，用于编码本发明CD22纳米抗体。
本发明的目的还在于提供本发明抗体和核酸分子的应用，制备药物、诊断试剂、多特异性抗体、抗原结合受体、载体或免疫效应细胞，用于诊断或治疗与CD22相关的疾病。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种CD22纳米抗体，包括重链可变区，其中重链互补决定区CDR1的氨基酸序列为GFTLDHYH，如SEQ NO：1所示；CDR2的氨基酸序列为ISNSGGST，如SEQ NO：2所示；CD3氨基酸序列为AAGRWYYDGSRYCPPGAMDY，如SEQ NO：3所示。
上述纳米抗体的重链可变区还包括四个框架区域，其中FR1氨基酸序列为AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS，如SEQ NO：4所示；FR2氨基酸序列为IGWFRQAPGKEREGVSC，如SEQ NO：5所示；FR3氨基酸序列为NYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYC，如SEQ NO：6所示；FR4氨基酸序列为WGKGTLVTVSS，如SEQ NO：7所示。
可选的，为了降低上述CD22纳米抗体的免疫抗性，提高抗体的稳定性，对上述CD22纳米抗体进行人源化处理，具体的人源化后的纳米抗体重链框架区包括氨基酸残基1E、37V、44G、45 L、119 Q。进一步的，抗体的重链框架区还包括氨基酸残基47W。
在本发明实施例中，通过人源化CD22重组蛋白免疫羊驼后从羊驼外周血中筛选获得具有上述序列信息的纳米抗体，并通过特定核苷酸突变修饰的人源化处理，具有高的特异性和安全性。
在本发明的一些实施例中，上述抗体可以作为活性成分结合药物上可接受的赋形剂或者添加剂制备成药物，该药物可以用于治疗B细胞肿瘤，或者其他可以以CD22为靶标治疗的疾病，例如治疗急性淋巴目细胞性白血病、慢性淋巴性白血病或非霍奇金氏淋巴瘤的药物，或复发性肿瘤等。
在本发明的一些实施例中，上述抗体也可以作为目标物特异性结合试剂制备成以CD22蛋白为目标物的诊断试剂，用于疾病体外检测或者体内无创诊断。
在本发明的另一些实施例中还提供能够编码上述纳米抗体的核酸分子，包括如SEQ NO：8、或SEQ NO：12、或SEQ NO：13所示的核苷酸序列。该核酸序列可以作为抗原结合结构域序列用于制备嵌合抗原结合受体，进而制备载体和免疫效应细胞，也可以作为功能性序列制备多特异性抗体。
在本发明实施例中，以本发明纳米抗体序列为抗原结合结构域序列，构建抗原结合受体CAR，同过直接电转，或者构建慢病毒表达载体、逆转病毒载体、腺病毒载体，转染T细胞后制备CAR-T细胞，靶向作用表达CD22蛋白的肿瘤细胞，对该肿瘤细胞具有高的裂解能力，能够应用于治疗相关疾病。
附图说明
图1为实施例1中流式分选FITC和APC双阳性的单个细胞检测结果示意图；
图2为实施例1中流式检测结果示意图；其中CHO-K1为不表达CD22蛋白的原始细胞，CHO-K1-CD22为表达CD22蛋白的细胞；
图3为实施例2中不同人源化CD22纳米抗体的流式检测结果对比图；其中H10-2-1为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q的人源化CD22纳米抗体；H10-2-2为氨基酸替换设计为1E、34M、35S、37V、44G、45L、47W、119Q的人源化CD22纳米抗体；H10-2-3为氨基酸替换设计为1E、34M、35S、37V、44G、45L、47W、50A、119Q的人源化CD22纳米抗体；H10-2-4为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q、47W的人源化CD22纳米抗体；H10抗体为未做人源化处理的原始CD22纳米抗体；
图4为未人源化处理的原始CD22纳米抗体H10与靶蛋白亲和力检测结果示意图；
图5为人源化CD22纳米抗体H10-2-1与靶蛋白亲和力检测结果示意图；其中H10-2-1为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q的人源化CD22纳米抗体；
图6为人源化CD22纳米抗体H10-2-4与靶蛋白亲和力检测结果示意图；其中H10-2-4为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q、47W的人源化CD22纳米抗体。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。除特殊说明的之外，各实施例及试验例中所用的设备和试剂均可从商业途径得到。
实施例1 CD22单域抗体筛选
1.1人CD22重组蛋白制备：
1）CD22重组蛋白序列构建：
从NCBI及Uniprot数据库获取到human CD22胞外段氨基酸序列后，进行人工基因合成，构建真核表达载体；
2）22序列载体转染表达
将上述构建的CD22序列的真核表达载体转染CHO-S细胞并表达CD22重组蛋白；
3）鉴定
将产物通过亲和柱纯化，并纯化后进行蛋白活性鉴定。
1.2单细胞分选
1）羊驼免疫
用上述制备的人CD22重组蛋白对前期经过四次免疫的羊驼进行冲击免疫；
2）采血及ELISA分析
冲击免疫10天后，采集部分外周血，分离得到血清，鉴定CD22免疫羊驼效价检测；若ELISA免疫效价达到1:160000以上，进行外周血大量采集；
3）从上述步骤2）免疫过的羊驼采集50mL外周血，采用淋巴细胞分离液分离PBMC细胞；
4）使用Biotin偶联的CD22重组蛋白孵育PBMC细胞，冰上孵育1小时，使用预冷的PBS清洗3次后，同时孵育APC-Streptavidn以及FITC-Anti-Camelid VHH抗体，冰上孵育1小时，使用预冷的PBS清洗3次，采用流式分选FITC和APC双阳性的单个细胞至96孔板中（预先加入裂解液），如图1所示；共分离2~3块96孔板，用于单域抗体的克隆。
1.3 驼源单域抗体制备
1）单域抗体克隆及测序
克隆上述1.2步骤4）培养后的96孔板，从每孔中的单个B细胞提取RNA，逆转为cDNA后，使用单域抗体扩增引物进行PCR，产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，分离400bp左右的PCR产物进行Sanger测序，获取单域抗体编码区序列信息。将测序获得的序列进行基因合成，亚克隆至带有Fc标签的单域抗体表达载体中；
2）单域抗体表达载体构建
根据上述获取的单域抗体编码区序列信息，对所得的所有单域抗体序列进行比对分析，从不同的lineage中选择30个候选抗体序列（亲和力范围介于10-8～10-9M），对其基因合成；并构建在带有Fc标签的单域抗体表达载体中；
3）单域抗体表达验证
将上述构建的单域抗体表达载体转染至293F细胞中，从上清中纯化单域抗体，将CD22抗原包被至96孔板上，采用ELISA及流式细胞验证候选单域抗体与靶蛋白的结合；根据FACS及ELISA结果，从中挑选流式检测信号值最高（亲和力10-9M））的1个克隆（如图2所示），表达纯化抗体。
筛选的单域抗体的氨基酸序列如SEQ NO：9所示，编码该单域抗体的核苷酸序列如SEQ NO：8所示；其中重链互补决定区CDR1的氨基酸序列为GFTLDHYH，如SEQ NO：1所示；CDR2的氨基酸序列为ISNSGGST，如SEQ NO：2所示；CD3氨基酸序列为AAGRWYYDGSRYCPPGAMDY，如SEQ NO：3所示；重链可变区还包括四个框架区域，其中FR1氨基酸序列为AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS，如SEQ NO：4所示；FR2氨基酸序列为IGWFRQAPGKEREGVSC，如SEQ NO：5所示；FR3氨基酸序列为NYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYC，如SEQ NO：6所示；FR4氨基酸序列为WGKGTLVTVSS，如SEQ NO：7所示。
实施例2 人源化单域抗体制备
2.1人源化纳米抗体设计及基因制备
采用表面氨基酸替换的设计对候选的单域抗体进行人源化，获得并合成人源化纳米抗体序列后，构建人源化单域抗体表达载体；对上述制备的表达载体进行质粒大量抽提，以此制备转染级别的质粒。
2.2人源化纳米抗体表达及纯化
以上述制备的人源化纳米抗体表达载体通过瞬时转染至293F细胞中，并使用Protein A纯化重组抗体，浓缩后使用BCA法定量。
2.3 人源化纳米抗体的结合特异性及亲和力检测：
流式实验设计
实验组：纯化后的人源化纳米抗体与表达CD22的重组细胞株共孵育
阳性对照组：原始的未进行人源化处理的CD22纳米抗体和表达CD22的重组细胞株孵育
FACS检测人源化纳米抗体与靶标蛋白的对比结合情况，若实验组与阳性对照组相比，流式细胞结合能力相当，则对其实验组进行克隆以便后续的亲和力检测（亲和力范围介于10-8～10-9M）；
1）结合能力测定：
流式检测步骤如下：
（1）将靶细胞分为若干份，每份细胞的数量为5*10^5个细胞，使用100ul PBS重悬细胞，使用瞬时转染表达的人源化纳米抗体分别孵育靶细胞（表达CD22的重组细胞株），充分混匀后，室温孵育1小时， H10抗体为阳性对照 ，800xg室温离心5分钟，去掉含有抗体的上清，使用PBS洗涤细胞3次；
（2）加入1 ul PE标记的Anti-human IgG，充分混匀后，室温避光孵育30分钟；
（3）800xg室温离心5分钟，去掉含有二抗的上清，使用PBS洗涤细胞3次；
（4）使用500uL PBS重悬细胞，进行流式分析，如图3所示；其中H10-2-1为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q的人源化CD22纳米抗体、H10-2-2为氨基酸替换设计为1E、34M、35S、37V、44G、45L、47W、119Q的人源化CD22纳米抗体、H10-2-3为氨基酸替换设计为1E、34M、35S、37V、44G、45L、47W、50A、119Q的人源化CD22纳米抗体、H10-2-4为氨基酸替换设计为1E、37V、44G、45 L、119 Q、47W的人源化CD22纳米抗体；H10抗体为未做人源化处理的原始CD22纳米抗体；
2）人源化单域抗体亲和力测定
根据上述流式结果，对抗体进行表达纯化，以及亲和力测定。采用Biacore T200仪器，以原始驼源抗体作为对照，分别检测上述制备的阳性人源化纳米抗体与靶蛋白CD22的结合能力，目标亲和力要求在10-9 M；
将人CD22重组蛋白使用10 mM Acetate缓冲液固定在CM5芯片上，以制备的阳性人源化纳米抗体及未人源化处理的原始CD22纳米抗体作为流动相，检测人源化前后抗体与靶蛋白CD22的结合能力；
使用未人源化处理的原始H10抗体作为阳性对照，根据流式检测结果，选择H10-2-1和H10-2-4进行抗体的表达纯化以及亲和力检测，结果如图4、图5和图6所示；
结果显示：H10抗体：ka = 6.787×105 M-1s-1；kd = 2.270 ×10-4 s-1 ；KD = 3.345× 10-10 M ；
H10-2-1抗体：结果： ka = 1.184 ×105 M-1s-1 ；kd = 2.569× 10-4 s-1 ；KD =2.169 ×10-9 M ；
H10-2-4抗体：结果：ka = 4.239 × 105 M-1s-1 ；kd = 2.950 ×10-4 s-1 ；KD =6.958× 10-10 M；
最终得到有效的人源化CD22的抗体，氨基酸替换设计包括1E、37V、44G、45 L、119Q和/或47W，人源化纳米抗体的氨基酸序列如SEQ NO:10或SEQ NO:11所示；对应的编码相应的人源化纳米抗体的核苷酸序列如SEQ NO：12或SEQ NO：13所示。
由上述实施例1和实施例2的记载可知，本发明筛选获得的CD22纳米抗体对CDD2蛋白具有高的结合特异性，并且通过创造性的选择特定的氨基酸突变修饰方案，对羊驼来源的CD22纳米抗体进行人源化处理，在不降低抗体的结合特异性的同时，提高抗体应用于人体的免疫排斥效应，提高其安全性和稳定性。并且通过实验验证也证明了以本发明抗体序列为抗原结合结构域构建的CAR-T细胞对表达CD22蛋白的肿瘤细胞具有高的裂解效果，能够产生靶向杀死肿瘤细胞的作用。那么结合上述实施例的验证结果应当可以理解的是，以本发明纳米抗体作为药物活性成分制备的药物可以应用于治疗以CD22为靶标的疾病，例如B细胞肿瘤或其他复发性肿瘤，比如治疗急性淋巴目细胞性白血病、慢性淋巴性白血病或非霍奇金氏淋巴瘤等。应当可以理解的是也可以制备诊断试剂用于诊断以CD22蛋白作为标志物的疾病。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
序列表
<110> 河南创新生物科技研究院有限公司
<120> 一种CD22纳米抗体、分离的核酸分子、药物组合物及其应用
<160> 13
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Gly Phe Thr Leu Asp His Tyr His
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 2
Ile Ser Asn Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 3
Ala Ala Gly Arg Trp Tyr Tyr Asp Gly Ser Arg Tyr Cys Pro Pro Gly
1 5 10 15
Ala Met Asp Tyr
20
<210> 4
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 4
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 5
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
1 5 10 15
Cys
<210> 6
<211> 38
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 6
Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 7
Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 8
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 8
gctgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttggac cattatcaca taggctggtt ccgccaggcc 120
ccagggaagg agcgtgaggg ggtctcatgt attagtaata gtggtggtag cacaaactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacggtgtat 240
ctgcaaatga acagcctgaa acctgaggac acagctgtct attactgtgc agccgggcga 300
tggtactatg atggtagtcg ctactgccca ccaggtgcca tggactactg gggcaaaggg 360
accctggtca ccgtctcctc g 381
<210> 9
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 9
Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp His Tyr
20 25 30
His Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Asn Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Arg Trp Tyr Tyr Asp Gly Ser Arg Tyr Cys Pro Pro Gly
100 105 110
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 10
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp His Tyr
20 25 30
His Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Asn Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Arg Trp Tyr Tyr Asp Gly Ser Arg Tyr Cys Pro Pro Gly
100 105 110
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 127
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp His Tyr
20 25 30
His Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Asn Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Arg Trp Tyr Tyr Asp Gly Ser Arg Tyr Cys Pro Pro Gly
100 105 110
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 12
gaggtgcagc tggttgaatc tggcggagga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccctggat cactatcaca tcggctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaagg cgtgtcctgc atcagcaaca gcggcggcag caccaattac 180
gccgatagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccgtgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gcctgaggac accgccgtgt actattgtgc cgctggcaga 300
tggtactacg acggcagcag atactgtcct cctggcgcca tggattattg gggccaggga 360
acactggtca ccgtgtctag t 381
<210> 13
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 13
gaggtgcagc tggttgaatc tggcggagga ctggttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
tcttgtgccg ccagcggctt caccctggat cactatcaca tcggctgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gacttgaatg ggtgtcctgc atcagcaaca gcggcggcag caccaattac 180
gccgatagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa caccgtgtac 240
ctgcagatga acagcctgaa gcctgaggac accgccgtgt actattgtgc cgctggcaga 300
tggtactacg acggcagcag atactgtcct cctggcgcca tggattattg gggccaggga 360
acactggtca ccgtgtctag t 381

Claims (12)

1.一种CD22纳米抗体，其特征在于，包括重链可变区，其中重链互补决定区CDR1的氨基酸序列为GFTLDHYH，如SEQ NO：1所示；CDR2的氨基酸序列为ISNSGGST，如SEQ NO：2所示；CDR3氨基酸序列为AAGRWYYDGSRYCPPGAMDY，如SEQ NO：3所示。
2.如权利要求1所述的CD22纳米抗体，其特征在于，重链可变区还包括四个框架区域，其中FR1氨基酸序列为AVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS，如SEQ NO：4所示；FR2氨基酸序列为IGWFRQAPGKEREGVSC，如SEQ NO：5所示；FR3氨基酸序列为NYADSVKGRFTISRDNAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYC，如SEQ NO：6所示；FR4氨基酸序列为WGKGTLVTVSS，如SEQ NO：7所示。
3.如权利要求1或2所述的CD22纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体为人源化纳米抗体；重链框架区包括氨基酸残基1E、37V、44G、45L、119Q；其氨基酸序列如SEQ NO：10所示。
4.如权利要求3所述的CD22纳米抗体，其特征在于，所述抗体的重链框架区还包括氨基酸残基47W，其氨基酸序列如SEQ NO：11所示。
5.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求3～4任一项所述的CD22纳米抗体。
6.如权利要求5所述的分离的核酸分子，其特征在于，包括如SEQ NO：8、或SEQ NO：12、或SEQ NO：13所示的核苷酸序列。
7.一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1～4任一项所述的纳米抗体及药物上可接受的赋形剂。
8.一种如权利要求1～4任一项所述纳米抗体的应用，其特征在于，应用于制备以CD22蛋白为目标物的诊断试剂。
9.如权利要求8所述的纳米抗体的应用，其特征在于，应用于制备以CD22蛋白为目标物的疾病体外检测试剂、体内无创伤诊断试剂。
10.一种如权利要求1～4任一项所述的纳米抗体的应用，其特征在于，应用于制备治疗B细胞肿瘤或其他以CD22为治疗靶标的药物。
11.一种如权利要求1～4任一项所述的纳米抗体的应用，其特征在于，应用于制备治疗急性淋巴目细胞性白血病、慢性淋巴性白血病或非霍奇金氏淋巴瘤的药物。
12.一种如权利要求5或6所述分离的核酸分子的应用，其特征在于，用于制备嵌合抗原结合受体、多特异性抗体、载体、免疫效应细胞。
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