CN112826087A - 一种具有抗氧化因子的固态制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于特殊用途食品的技术领域,本发明提供了一种具有抗氧化因子的固态制剂及其制备方法。本发明提供的固态制剂,由包含如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素50~150份、黑果花楸花青素30~70份、黑木耳提取物35~75份,山楂果粉450~550份,蓝靛果粉850~950份,木糖醇450~550份。本发明制备的固态制剂颗粒均匀,易溶解,粒径小服用易吸收,可有效提高机体抗氧化酶系活性,改善机体紊乱状态。
Description
技术领域
本发明涉及特殊用途食品的技术领域,尤其涉及一种具有抗氧化因子的固态制剂及其制备方法。
背景技术
蓝莓(Blueberry)为杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium spp.)的多年生常绿或落叶灌木,果实是圆形、蓝色或紫色的小浆果,又称为越橘、蓝浆果等。花青素在自然界中广泛存在,人们对它的研究已有30多年历史,美国农业部人类营养中心的研究人员比较了40多种新鲜水果和蔬菜的抗氧化活性,得出蓝莓是所有样品中抗氧化能力最高的,源于蓝莓中含量很高的花青素。蓝莓花青素不仅具有极高的营养价值,还具有防止脑神经老化、降低早性老年痴呆发病率;增强心脏功能,治疗心血管疾病;降低胆固醇,防止动脉粥样硬化;消炎抗菌、预防癌症;增强人体机能,改善和强化视力;清除自由基、延缓衰老和提升记忆力等功能。黑果腺肋花楸(Aronia melanocarpa)又称野樱莓、不老莓,为蔷薇科腺肋花楸属,黑果花楸花青素具有抗氧化,抗衰老,抗诱变,降糖,保肝和抗癌,护心、治疗高血压等心脑血管疾病的功效。黑木耳(Auricularia auricula)是我国最早栽培的食用菌品种之一,隶属于真菌门、担子菌纲、木耳目、木耳科、木耳属,是著名药食兼用真菌,其主要活性成分为多糖,许多研究结果显示黑木耳多糖具有预防肿瘤、抗凝血和血栓、降低血糖和血脂等生物活性。山楂为蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.)或山楂(Crataegus pinnatifidaBge.)的干燥成熟果实,药食两用,被用来健脾开胃、消食化滞等。蓝靛果忍冬(LoniceraedulisTurcz.),又名蓝靛果、黑瞎子果、山茄子等,是忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)植物,落叶灌木。野生蓝靛果忍冬果实酸含有大量的维生素C和氨基酸以及多种微量元素及大量黄酮类成分,提取物还富含次级代谢所需的花色苷和酚酸。
众所周知,抗氧化剂能祛除自由基对人体的损害,对健康有保护性作用。除了正常饮食以外,还可以从多种饮食渠道摄入抗氧化剂,如果汁和蔬菜汁以及市场上能买到的保健饮料等。2016年全球饮料(非酒精)市场规模为9673亿美元。从2017年到2025年,该市场预计将以5.8%的复合年增长率增长。人们对肥胖和健康意识的日益关注有望带来功能性饮料和瓶装水产品领域的增长,同时抑制了碳酸饮料的需求。饮料从早期维持人们生存需要补充水分,到现在在饮料中加入有益成分满足健康安全的需要;到未来饮料的消费趋势将往功能性发展。选择富含天然营养成分的原材料逐渐成为新的流行趋势,如在产品中添加抗氧化剂、膳食纤维、传统草药或植物萃取成分、药食同源成分、天然香料等。
发明内容
本发明的目的在于为解决当今抗氧化的化学药物具有毒副作用,研发困难,氧化应激人群日益增多并同时伴随着其他疾病等问题,提供一种具有抗氧化因子的固态制剂及其制备方法,以提高机体抗氧化酶系活性,改善机体紊乱状态。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种具有抗氧化因子的固态制剂,由包含如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素50~150份、黑果花楸花青素30~70份、黑木耳提取物35~75份,山楂果粉450~550份,蓝靛果粉850~950份,木糖醇450~550份。
优选的,由包含如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素100mg、黑果花楸花青素50mg、黑木耳提取物53.7mg、山楂果粉480mg、蓝靛果粉928mg、木糖醇500g。
优选的,所述山楂果粉的粒径≤200目,蓝靛果粉的粒径≤200目。
本发明还提供了一种具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,包含如下步骤:将蓝莓花青素、黑果花楸花青素、黑木耳提取物、山楂果粉、蓝靛果粉、木糖醇和水混合后造粒,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
优选的,所述蓝莓花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对蓝莓进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的蓝莓进行醇提,得到蓝莓醇提液;
(3)对所述蓝莓醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到蓝莓花青素。
优选的,所述黑果花楸花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对黑果花楸进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的黑果花楸进行醇提,得到黑果花楸醇提液;
(3)对所述黑果花楸醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到黑果花楸花青素。
优选的,所述步骤(2)中醇提采用乙醇进行提取,所述乙醇的浓度为50~70%,所述破碎的蓝莓全果或黑果花楸全果与乙醇的用量比为1g:2~5mL;所述醇提的温度为40~60℃,醇提的时间为0.5~1.5h;所述醇提在超声辅助条件下进行,所述超声的功率为300~500W;
所述步骤(3)中的柱层析分离纯化是先用水冲洗后,再用乙醇进行洗脱;所述水的体积为3~5BV;所述乙醇的浓度为50~70%,体积为2~3BV;所述洗脱的流速为0.4~0.6BV/h;所述冻干处理的温度为-60~25℃。
优选的,所述黑木耳提取物的制备方法包含如下步骤:
(1)将黑木耳干燥后粉碎,得到黑木耳干粉;
(2)对所述黑木耳干粉进行水提,得到提取液;
(3)将所述提取液醇沉后干燥,得到黑木耳提取物。
优选的,所述步骤(1)中黑木耳干粉的粒径为200~300μm;
所述步骤(2)中水提的料液比为1g:80~120mL,水提的时间为2~4h,水提的温度为80~100℃,水提的次数为2~3次;所述水提是在超声的条件下进行的,所述超声的时间为15~20min,超声功率为300~500W;
所述步骤(3)醇沉中乙醇的浓度为90~95%,所述提取液与乙醇的体积比为1:2~4;所述干燥的温度为-60~25℃,真空度为-0.08~-0.07Mpa,干燥的时间为20~28h。
本发明提供的固态制剂具有提高机体抗氧化酶系活性,改善机体紊乱状态的功效。按照本发明的制备方法制备的固态制剂颗粒均匀,易溶解,粒径小服用易吸收,能够获得一种多用途、效果好、副作用小的纯天然花青素抗氧化固体制剂。
附图说明
图1为剪切速率对液体粘度的影响分析图;
图2为制剂储能模量和耗能模量的变化情况;
图3为制剂的Zeta电位和粒径分析图;
图4为制剂对小鼠血清SOD活力的影响分析图;
图5为制剂对小鼠血清GSH-px活力的影响分析图;
图6为制剂对小鼠血清CAT活力的影响分析图;
图7为制剂对小鼠肝脏组织中GSH-Px活力的影响分析图;
图8为制剂对小鼠肝脏组织中SOD活力的影响分析图;
图9为制剂对小鼠肝脏组织中MDA活力的影响分析图;
图10为制剂对小鼠肝脏组织中CAT活力的影响分析图。
具体实施方式
本发明提供了一种具有抗氧化因子的固态制剂,由包含如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素50~150份、黑果花楸花青素30~70份、黑木耳提取物35~75份,山楂果粉450~550份,蓝靛果粉850~950份,木糖醇450~550份。
在本发明中,所述具有抗氧化因子的固态制剂,优选由包括如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素优选为50~150份,进一步优选为80~120份,更进一步优选为100份;黑果花楸花青素优选为30~70份,进一步优选为40~60份,更进一步优选为50份;黑木耳提取物优选为35~75份,进一步优选为45~65份,更进一步优选为53.7份;山楂果粉优选为450~550份,进一步优选为480~520份,更进一步优选为480份;蓝靛果粉优选为850~950份,进一步优选为928份;木糖醇优选为450~550份,进一步优选为480~520份,更进一步优选为500份。
在本发明中,所述山楂果粉的粒径优选≤200目,进一步优选为≤300目;蓝靛果粉的粒径优选≤200目,进一步优选为≤300目。
在本发明中,所述山楂果粉和蓝靛果粉优选为去核后经过冻干处理和粉碎后得到;所述冻干的温度优选为-60~-20℃,进一步优选为-40℃;时间优选为10~40h,进一步优选为12h。
本发明制备具有抗氧化因子的固态制剂的原料优选还包含水,所述水和木糖醇的用量比优选为50~100mL:450~550g,进一步优选为60~90mL:480~520g,更进一步优选为80mL:500g。
本发明还提供了一种具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,包含如下步骤:将蓝莓花青素、黑果花楸花青素、黑木耳提取物、山楂果粉、蓝靛果粉、木糖醇和水混合后造粒,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
作为优选的,所述蓝莓花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对蓝莓进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的蓝莓进行醇提,得到蓝莓醇提液;
(3)对所述蓝莓醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到蓝莓花青素。
作为优选的,所述黑果花楸花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对黑果花楸进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的黑果花楸进行醇提,得到黑果花楸醇提液;
(3)对所述黑果花楸醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到黑果花楸花青素。
在所述蓝莓花青素的制备方法和所述黑果花楸花青素的制备方法中,所述步骤(2)中醇提采用乙醇进行提取,所述乙醇的浓度优选为50~70%,进一步优选为60%;所述破碎的蓝莓全果或黑果花楸全果与乙醇的用量比优选为1g:2~5mL,进一步优选为1g:4mL;所述醇提的温度优选为40~60℃,进一步优选为50~55℃,更进一步优选为50℃;醇提的时间优选为0.5~1.5h,进一步优选为1h;所述醇提在超声辅助条件下进行,所述超声的功率优选为300~500W,进一步优选为400W。
本发明优选在所述醇提之后对醇提液进行浓缩处理,所述浓缩处理优选浓缩至1/4;浓缩处理的温度优选为50~60℃,进一步优选为55℃;浓缩处理的真空度优选为-0.10MPa~-0.05MPa,进一步优选为-0.09MPa。
在所述蓝莓花青素的制备方法和所述黑果花楸花青素的制备方法中,所述步骤(3)中的柱层析分离纯化是先用水冲洗后,再用乙醇进行洗脱;所述水的体积优选为3~5BV,进一步优选为4BV;所述乙醇的浓度优选为50~70%,进一步优选为60%,体积优选为2~3BV;所述洗脱的流速优选为0.4~0.6BV/h,进一步优选为0.5BV/h;所述冻干处理的温度优选为-60~25℃,进一步优选为-40~5℃,更进一步优选为-40℃。
本发明优选在所述柱层析分离纯化之后收集洗脱液进行浓缩处理,所述浓缩处理优选浓缩至1/10。
作为优选的,所述黑木耳提取物的制备方法包含如下步骤:
(1)将黑木耳干燥后粉碎,得到黑木耳干粉;
(2)对所述黑木耳干粉进行水提,得到提取液;
(3)将所述提取液醇沉后干燥,得到黑木耳提取物。
在所述黑木耳提取物的制备方法中,所述步骤(1)中黑木耳干粉的粒径优选为200~300μm,进一步优选为250μm。
本发明优选将所得黑木耳干粉继续进行脱脂干燥之后再进行水提,所述脱脂干燥优选为先使用石油醚进行脱脂,再用95%乙醇除去低聚糖。
在所述黑木耳提取物的制备方法中,所述步骤(2)中水提的料液比优选为1g:80~120mL,进一步优选为1g:100mL;水提的时间优选为2~4h,进一步优选为3h;水提的温度优选为80~100℃,进一步优选为90℃;水提的次数优选为2~3次,进一步优选为2次;所述水提是在超声的条件下进行的,所述超声的时间优选为15~20min,进一步优选为18min;超声功率优选为300~500W,进一步优选为400W。
本发明优选在水提后对提取液进行浓缩处理,所述浓缩处理优选浓缩至原体积的1/4。
在所述黑木耳提取物的制备方法中,所述步骤(3)醇沉中乙醇的浓度优选为90~95%,进一步优选为95%;所述提取液与乙醇的体积比优选为1:2~4,进一步优选为1:3;所述干燥的温度优选为-60~25℃;真空度优选为-0.08~-0.07Mpa,进一步优选为-0.075Mpa;干燥的时间优选为20~28h,进一步优选为24h。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
分别对蓝莓和黑果花楸进行全果破碎。再将破碎的蓝莓全果和黑果花楸全果分别用60%乙醇按照料液比为1g:4mL的比例于50℃下超声提取1h,得到醇提液。将醇提液浓缩至1/4后先用4BV的水冲洗,再用60%乙醇进行洗脱。对洗脱液进行浓缩处理,然后在-40℃下冻干,得到蓝莓花青素和黑果花楸花青素。
将黑木耳干燥后粉碎,得到粒径为250μm的黑木耳干粉。将黑木耳干粉于90℃下水提3h,其中用400W功率的超声波辅助浸提18min,得到提取液。将提取液用3倍体积的95%乙醇醇沉,于-60℃下干燥24h,得到黑木耳提取物。
将山楂及蓝靛果去核后分别于-40℃下冷冻干燥12h,经80目粗粉碎及200目超微粉碎后得到山楂果粉和蓝靛果果粉。
将上述处理得到的蓝莓花青素100mg、黑果花楸花青素50mg、黑木耳提取物53.7mg、山楂果粉480mg、蓝靛果粉928mg混合均匀得原料A。取80g原料A用80mL水溶解,与500g木糖醇混合,然后用螺旋造粒机造粒,再于55℃条件下鼓风干燥4.5h,最后紫外灭菌30min、包装,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
实施例2
分别对蓝莓和黑果花楸进行全果破碎。再将破碎的蓝莓全果和黑果花楸全果分别用60%乙醇按照料液比为1g:4mL的比例于50℃下超声提取1h,得到醇提液。将醇提液浓缩至1/4后先用4BV的水冲洗,再用60%乙醇进行洗脱。对洗脱液进行浓缩处理,然后在-40℃下冻干,得到蓝莓花青素和黑果花楸花青素。
将黑木耳干燥后粉碎,得到粒径为250μm的黑木耳干粉。将黑木耳干粉于90℃下水提3h,其中用400W功率的超声波辅助浸提18min,得到提取液。将提取液用3倍体积的95%乙醇醇沉,于-60℃下干燥24h,得到黑木耳提取物。
将山楂及蓝靛果去核后分别于-40℃下冷冻干燥24h,经80目粗粉碎及200目超微粉碎后得到山楂果粉和蓝靛果果粉。
将上述处理得到的蓝莓花青素100mg、黑果花楸花青素50mg、黑木耳提取物53.7mg、山楂果粉480mg、蓝靛果粉928mg混合均匀得原料A。取80g原料A用80mL水溶解,与500g木糖醇混合,然后用螺旋造粒机造粒,再于55℃条件下鼓风干燥4.5h,最后紫外灭菌30min、包装,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
实施例3
分别对蓝莓和黑果花楸进行全果破碎。再将破碎的蓝莓全果和黑果花楸全果分别用60%乙醇按照料液比为1g:4mL的比例于50℃下超声提取1h,得到醇提液。将醇提液浓缩至1/4后先用4BV的水冲洗,再用60%乙醇进行洗脱。对洗脱液进行浓缩处理,然后在-40℃下冻干,得到蓝莓花青素和黑果花楸花青素。
将黑木耳干燥后粉碎,得到粒径为250μm的黑木耳干粉。将黑木耳干粉于90℃下水提3h,其中用400W功率的超声波辅助浸提18min,得到提取液。将提取液用3倍体积的95%乙醇醇沉,于-60℃下干燥24h,得到黑木耳提取物。
将山楂及蓝靛果去核后分别于-40℃下冷冻干燥36h,经80目粗粉碎及200目超微粉碎后得到山楂果粉和蓝靛果果粉。
将上述处理得到的蓝莓花青素100mg、黑果花楸花青素50mg、黑木耳提取物53.7mg、山楂果粉480mg、蓝靛果粉928mg混合均匀得原料A。取80g原料A用80mL水溶解,与500g木糖醇混合,然后用螺旋造粒机造粒,再于55℃条件下鼓风干燥4.5h,最后紫外灭菌30min、包装,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
实施例4
分别对蓝莓和黑果花楸进行全果破碎。再将破碎的蓝莓全果和黑果花楸全果分别用60%乙醇按照料液比为1g:4mL的比例于50℃下超声提取1h,得到醇提液。将醇提液浓缩至1/4后先用4BV的水冲洗,再用60%乙醇进行洗脱。对洗脱液进行浓缩处理,然后在-40℃下冻干,得到蓝莓花青素和黑果花楸花青素。
将黑木耳干燥后粉碎,得到粒径为250μm的黑木耳干粉。将黑木耳干粉于90℃下水提3h,其中用400W功率的超声波辅助浸提18min,得到提取液。将提取液用3倍体积的95%乙醇醇沉,于-60℃下干燥24h,得到黑木耳提取物。
将山楂及蓝靛果去核后分别于-40℃下冷冻干燥12h,经80目粗粉碎及200目超微粉碎后得到山楂果粉和蓝靛果果粉。
将上述处理得到的蓝莓花青素50mg、黑果花楸花青素30mg、黑木耳提取物35mg、山楂果粉450mg、蓝靛果粉850mg混合均匀得原料A。取80g原料A用80mL水溶解,与450g木糖醇混合,然后用螺旋造粒机造粒,再于45℃条件下鼓风干燥5h,最后紫外灭菌30min、包装,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
实施例5
分别对蓝莓和黑果花楸进行全果破碎。再将破碎的蓝莓全果和黑果花楸全果分别用60%乙醇按照料液比为1g:4mL的比例于50℃下超声提取1h,得到醇提液。将醇提液浓缩至1/4后先用4BV的水冲洗,再用60%乙醇进行洗脱。对洗脱液进行浓缩处理,然后在-40℃下冻干,得到蓝莓花青素和黑果花楸花青素。
将黑木耳干燥后粉碎,得到粒径为250μm的黑木耳干粉。将黑木耳干粉于90℃下水提3h,其中用400W功率的超声波辅助浸提18min,得到提取液。将提取液用3倍体积的95%乙醇醇沉,于-60℃下干燥24h,得到黑木耳提取物。
将山楂及蓝靛果去核后分别于-40℃下冷冻干燥12h,经80目粗粉碎及200目超微粉碎后得到山楂果粉和蓝靛果果粉。
将上述处理得到的蓝莓花青素150mg、黑果花楸花青素70mg、黑木耳提取物75mg、山楂果粉550mg、蓝靛果粉950mg混合均匀得原料A。取80g原料A用80mL水溶解,与550g木糖醇混合,然后用螺旋造粒机造粒,再于60℃条件下鼓风干燥4h,最后紫外灭菌30min、包装,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
实验例1
按照实施例1设计制备的固态制剂粉体特征结果如表1所示。持水率是不受外力时,一定量样品结合的水的质量。堆密度定义为样品的质量除以它的体积,这一体积包括样品本身和样品孔隙及其样品间隙体积。当赋型剂添加量比例不当时,颗粒粘连变形或者太硬,不易存储。颗粒越接近球形时,休止角越小;粒径越大,休止角越大。含水量增加时,休止角变大,摩擦和黏附作用增加。一般认为休止角越小,流动性越好,小于30°视为最佳,小于40°可以满足生产需求。离心沉淀率是直观体现产品稳定性的参数。
表1固态制剂粉体特征
由表1可知,本发明制备的固态制剂的持水率为78.23%,表明固态制剂在水中溶解性能好。振实密度变化率为7.39%,表明颗粒粒度较小,间隙不大。水分含量为4.17%,满足粉剂国家生产标准。休止角为27.8°,表明其颗粒型态较好,流动性好。离心沉淀率为3.08%,表明在实施例1的配方及配比下不同组分的稳定性较好。
实验例2
以实施例1设计制备的固态制剂为例,进行粘度测定,结果见图1。
剪切粘度是稳流状态下剪切应力与剪切速率之比,是液体分子内摩擦的量度,也是物体黏流性质的一项具体反映。日常检测时通常采用的剪切速率低限值为0.01s-1,而此时的粘度值与溶液体系的稳定性密切相关,如持水性、抵抗沉降及扰动能力的结构稳定性等,亦在一定程度上反映了口服液的货架期长短。剪切速率在0.01至100s-1之间变化,由图1可知,液体制剂粘度大于固体制剂,随着剪切速率的增加粘度下降,在剪切速率大于10s-1后,剪切速率趋于平稳。颗粒间形成较弱的絮凝,而流速增大时将破坏这种絮凝使粘度减小。可见口服液和固态制剂溶液表现出明显的剪切稀化特性,随着剪切速率的增加粘度急剧下降,初始粘度口服液高于固态制剂溶液,口服液储存时较稳定,固态制剂不易沉降。
实验例3
以实施例1设计制备的固态制剂为例,进行储能模量和耗能模量测定,结果见图2。
储能模量是指在交变应力作用下一个周期内储存能量的能力,通常指弹性。耗能模量用来表征耗散变形能量的能力,体现了粘性本质。它表示当发生形变时,能量转化成热能。由图2可知,在频率0.01-100Hz范围内,储能模量和耗能模量增加,弹性大于粘性,样品表现出液体的行为。
实验例4
以实施例1设计制备的固态制剂为例,进行Zeta电位和粒径测定,结果见图3。
Zeta电位近似地表示材料在液体(常在水溶液)中其表面所带有的静电荷的电位。Zeta电位的重要意义在于它的数值与胶态分散的稳定性相关。Zeta电位是对颗粒之间相互排斥或吸引力的强度的度量。分子或分散粒子越小,Zeta电位(正或负)越高,体系越稳定,即溶解或分散可以抵抗聚集。反之,Zeta电位(正或负)越低,越倾向于凝结或凝聚,即吸引力超过了排斥力,分散被破坏而发生凝结或凝聚。Zeta电位绝对值8.92±0.2mV,体系稳定性一般。如图3所示,本发明的固态制剂粒径为3125±210.23nm,说明强度较高。PDI为0.241,说明分散性很好,与Zeta电位分析一致。固态制剂颗粒比较均匀,易溶解,粒径小服用易吸收。
实验例5
以实施例1设计制备的固态制剂为例,研究固态制剂对小鼠血清中SOD指标的影响,结果见图4。注:实验数据以平均值±标准差表示(n=10)。*表示与空白组之间存在显著差异(P<0.05);**表示与空白组之间存在极显著差异(P<0.01);#表示与模型组之间存在显著差异(P<0.05),##表示与模型组之间存在极显著差异(P<0.01)。
SOD能够消除机体在正常能量交换时候产生的有害物质。辐射后小鼠灌胃天然植物化学物质可以有效提高机体SOD活力,清除体内多余自由基,降低O2-的破坏作用,达到预防或改善辐射诱导的氧化损伤。任何进行需氧呼吸的机体没有SOD或相当的保护机制是不能存活的,因此,从SOD的活性可以判断机体的抗氧化、抗应激能力。由图4可知,与空白组相比,模型组小鼠经过辐射以后,其血清中的SOD活力显著降低(P<0.01),表明辐射破坏了小鼠体内的氧化还原平衡,诱导小鼠机体产生氧化损伤。与辐射模型组相比,各剂量组小鼠血清中SOD活力有显著的改善,其中辛伐他丁组活力增加最多,低剂量组与花青素组SOD活力相当,并超过空白组,起到很强的抗氧化、抗辐射作用。
实验例6
以实施例1设计制备的固态制剂为例,研究固态制剂对小鼠血清中GSH-Px指标的影响,结果见图5。注:实验数据以平均值±标准差表示(n=10)。*表示与空白组之间存在显著差异(P<0.05);**表示与空白组之间存在极显著差异(P<0.01);#表示与模型组之间存在显著差异(P<0.05),##表示与模型组之间存在极显著差异(P<0.01)。
在细胞内广泛存在的GSH-Px通过有效清除活性氧自由基、保护巯基蛋白、调节细胞增殖等方面的作用能够解除外源性有毒有害物质造成的细胞毒理学损伤和抵抗放射性因素导致的氧化应激所造成的组织结构破坏。GSH-Px功能与结构中的巯基三肽密切相关,其在血清和细胞中的活性水平目前被作为氧化还原状态的评价标志,氧化应激可导致GSH-Px活力下降,是一种潜在的凋亡早期激活信号,随后产生的ROS促使细胞发生凋亡。由图5可知,与空白对照组相比,辐射模型组小鼠的血清中GSH-px活力显著降低(P<0.05),主要是大量的GSH-px用于清除自由基而被消耗,使其含量降低,测定结果减小。而连续给药后,不同剂量组的GSH-px活力有一定程度的增加,与辐射模型组相比,低、高剂量组存在极显著差异(P<0.01),而阳性对照组有一定程度提高,花青素效果较辛伐他丁组较好。本实验结果表明,谷胱甘肽是构成细胞内抗氧化防御系统的主要酶系,可以将活性氧分子转换成无毒的化合物,本发明固态制剂对GSH的活性起到一定的保护作用,具有抗辐射的效果。
实验例7
以实施例1设计制备的固态制剂为例,研究固态制剂对小鼠血清中CAT指标的影响,结果见图6。注:实验数据以平均值±标准差表示(n=10)。*表示与空白组之间存在显著差异(P<0.05);**表示与空白组之间存在极显著差异(P<0.01);#表示与模型组之间存在显著差异(P<0.05),##表示与模型组之间存在极显著差异(P<0.01)。
过氧化氢酶(CAT)是过氧化物酶系的代表,占过氧化物酶总量的40%左右,而辐射将导致CAT活力降低,影响机体清除H2O2,对生物体的产生损伤。正常情况下,细胞内部和线粒体基质中有完善抗氧化防御系统,保持活性氧在一个比较低的生理浓度。能呼吸的生物体几乎都存在CAT。本实验测定了小鼠血清中的CAT活力,用来研究制剂对辐射诱导小鼠抗氧化酶系的缓解作用。由图6可知,与空白对照组相比,在辐射模型组中,小鼠血清中的CAT含量下降,辐射以后小鼠机体造成了损伤,导致CAT活性下降(P<0.01)。与模型组相比,各剂量组小鼠血清中的CAT活性有一定程度提高,其中低剂量组提高最多,高于阳性组,高剂量组也接近花青素组,表明制剂对CAT有保护作用,起到一定抗氧化、抗辐射作用。
实验例8
以实施例1设计制备的固态制剂为例,研究固态制剂对小鼠肝脏中抗氧化指标的影响,结果见图7~10。注:实验数据以平均值±标准差表示(n=10)。*表示与空白组之间存在显著差异(P<0.05);**表示与空白组之间存在极显著差异(P<0.01);#表示与模型组之间存在显著差异(P<0.05),##表示与模型组之间存在极显著差异(P<0.01)。
肝脏对电离辐射敏感,易受电离辐射损害造成氧化还原失衡。对小鼠肝脏中GSH-Px、SOD、MDA、CAT几个指标进行整体分析,可以得出,辐射会造成肝脏的脂质过氧化显著增加,抗氧化酶活性(SOD和GSH-Px)显著下降,过氧化氢酶活性下降。从增加SOD的活性上来看,辛伐他丁、花青素、低高剂量组都极显著,且各剂量组之间进行比较,高剂量组的效果最佳(P<0.01),除辛伐他丁组,其它各都可恢复至正常水平;从降低肝脏组织中MDA含量的能力上来看,与模型组相比,除低剂量组,其它各组均效果显著(P<0.01);从增加GSH-px的活性上来看,高剂量组极显著,其他组效果显著,花青素组效果较好。综上所述,辐射会造成小鼠肝脏氧化还原状态紊乱,而制剂可有效提高机体抗氧化酶系活性,以改善其紊乱状态。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种具有抗氧化因子的固态制剂,其特征在于,由包含如下重量份的原料制备得到:蓝莓花青素50~150份、黑果花楸花青素30~70份、黑木耳提取物35~75份、山楂果粉450~550份、蓝靛果粉850~950份、木糖醇450~550份。
2.根据权利要求1所述的一种具有抗氧化因子的固态制剂,其特征在于,由包含如下重量的原料制备得到:蓝莓花青素100mg、黑果花楸花青素50mg、黑木耳提取物53.7mg、山楂果粉480mg、蓝靛果粉928mg、木糖醇500g。
3.根据权利要求1或2所述的一种具有抗氧化因子的固态制剂,其特征在于,所述山楂果粉的粒径≤200目,蓝靛果粉的粒径≤200目。
4.权利要求1~3任意一项所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,包含如下步骤:
将蓝莓花青素、黑果花楸花青素、黑木耳提取物、山楂果粉、蓝靛果粉、木糖醇和水混合后造粒,得到具有抗氧化因子的固态制剂。
5.根据权利要求4所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,所述蓝莓花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对蓝莓进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的蓝莓进行醇提,得到蓝莓醇提液;
(3)对所述蓝莓醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到蓝莓花青素。
6.根据权利要求4所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,所述黑果花楸花青素的制备方法包含如下步骤:
(1)对黑果花楸进行全果破碎;
(2)对经过步骤(1)处理后的黑果花楸进行醇提,得到黑果花楸醇提液;
(3)对所述黑果花楸醇提液顺次进行柱层析分离纯化、浓缩处理和冻干处理,得到黑果花楸花青素。
7.根据权利要求5或6所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中醇提采用乙醇进行提取,所述乙醇的浓度为50~70%,所述破碎的蓝莓全果或黑果花楸全果与乙醇的用量比为1g:2~5mL;所述醇提的温度为40~60℃,醇提的时间为0.5~1.5h;所述醇提在超声辅助条件下进行,所述超声的功率为300~500W;
所述步骤(3)中的柱层析分离纯化是先用水冲洗后,再用乙醇进行洗脱;所述水的体积为3~5BV;所述乙醇的浓度为50~70%,体积为2~3BV;所述洗脱的流速为0.4~0.6BV/h;所述冻干处理的温度为-60~25℃。
8.根据权利要求4所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,所述黑木耳提取物的制备方法包含如下步骤:
(1)将黑木耳干燥后粉碎,得到黑木耳干粉;
(2)对所述黑木耳干粉进行水提,得到提取液;
(3)将所述提取液醇沉后干燥,得到黑木耳提取物。
9.根据权利要求8所述的具有抗氧化因子的固态制剂的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中黑木耳干粉的粒径为200~300μm;
所述步骤(2)中水提的料液比为1g:80~120mL,水提的时间为2~4h,水提的温度为80~100℃,水提的次数为2~3次;所述水提是在超声的条件下进行的,所述超声的时间为15~20min,超声功率为300~500W;
所述步骤(3)醇沉中乙醇的浓度为90~95%,所述提取液与乙醇的体积比为1:2~4;所述干燥的温度为-60~25℃,真空度为-0.08~-0.07Mpa,干燥的时间为20~28h。
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