CN112789058A - 双特异性抗体构建体的下游加工 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于生产双特异性抗体产物的改善的制造方法，所述双特异性抗体产物包含至少两个结合结构域。所述方法至少包括以下方法：所述方法包括重折叠构建体的步骤，其中一个或多个结构域包含二硫键，并且其中使所述构建体与重折叠缓冲剂接触以将所述构建体重折叠到其天然形式，所述缓冲剂包含(i)浓度为至少0.1mM的氧化还原和/或氧化剂，和(ii)浓度>1M的离液剂，并且其中所述重折叠缓冲剂的pH对应于所述第一结构域的pI值的+/‑4.5或所述整个构建体的pI值的+/‑4.0。

Description

双特异性抗体构建体的下游加工
技术领域
本发明涉及生物技术的方法，特别涉及用于制造双特异性抗体构建体的下游制造方法。
背景技术
数年来，基于蛋白质的药物是最快速且最有前景开发的治疗剂之一，这些基于蛋白质的药物已经在几乎每个医学领域中发挥重要作用并且是临床(前)开发中和作为商业产品增长最快的治疗剂之一(Leader,Nature Reviews Drug Discovery[自然综述：药物发现]2008年1月7日,21-39)。与小化学药物相比，蛋白质药物在相对低的浓度下具有高特异性和活性，并且典型地提供高影响疾病，例如各种癌症、自身免疫疾病和代谢性病症的疗法(Roberts,Trends Biotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80；Wang,Int JPharm.[国际药学杂志]1999年8月20日；185(2):129-88)。
由于商业规模纯化方法的进步，因此现在可以在首次制造时以高纯度获得基于蛋白质的药物，例如重组蛋白质。然而，蛋白质仅临界稳定(marginally stable)并且甚至在上游制造过程中，极易受到化学和物理降解二者的影响。化学降解是指涉及共价键的修饰，例如脱酰胺化、氧化、裂解或形成新的二硫桥键、水解、异构化或去糖基化。物理降解包括蛋白质去折叠、对表面的不希望的吸附、和聚集。处理这些物理和化学不稳定性是蛋白质药物开发中最具挑战性的任务之一(Chi等人,Pharm Res[药物研究],第20卷，第9期,2003年9月,第1325-1336页,Roberts,Trends Biotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80)。
因此，尽管制造方面取得了进步，但是新的基于蛋白质的药物仍需要创新的新制造方法，以避免例如蛋白质聚集的产品质量影响。这会影响上游制造、下游制造、储存和应用。
这种新的基于蛋白质的药物包括例如双特异性(单克隆)抗体。双特异性抗体是可以同时结合两种不同类型抗原的人工蛋白。它们以若干种结构形式已知，并且目前已经探究了用于癌症免疫疗法和药物递送的应用(Fan,Gaowei；Wang,Zujian；Hao,Mingju；Li,Jinming(2015)."Bispecific antibodies and their applications[双特异性抗体及其应用]".Journal of Hematology&Oncology.[血液学与肿瘤学杂志]8:130)。
一般来讲，双特异性抗体可以是IgG样的，即全长双特异性抗体，或者是为非全长抗体构建体的非IgG样双特异性抗体。全长双特异性抗体典型地保留具有两个Fab臂和一个Fc区的传统单克隆抗体(mAb)结构，不同的是两个Fab位点结合不同抗原。非全长双特异性抗体缺乏整个Fc区。这些包括化学连接的Fab、仅由Fab区组成、以及各种类型的二价和三价单链可变片段(scFv)。还存在模拟两种抗体的可变结构域的融合蛋白。这些更新形式中最可能进一步开发的是双特异性T细胞接合剂
Figure BDA0002998948640000021
(Yang,Fa；Wen,Weihong；Qin,Weijun(2016)."Bispecific Antibodies as a Development Platform for New Concepts andTreatment Strategies[作为用于新的理念和治疗策略的开发平台的双特异性抗体]".International Journal of Molecular Sciences[国际分子科学杂志].18(1):48)。
双特异性分子例如
Figure BDA0002998948640000022
抗体构建体是由两个柔性连接的抗体衍生的结合结构域制备的重组蛋白质构建体。
Figure BDA0002998948640000023
抗体构建体的一个结合结构域对靶细胞上选择的肿瘤相关表面抗原是特异性的；第二结合结构域对CD3(T细胞上T细胞受体复合物的亚基)是特异性的。通过其特殊设计，
Figure BDA0002998948640000024
抗体构建体独特地适合于将T细胞与靶细胞瞬时连接，并且同时强有力地激活T细胞对靶细胞的固有细胞溶解潜力。对作为AMG 103和AMG 110开发到临床中的第一代
Figure BDA0002998948640000025
抗体构建体(参见WO 99/54440和WO 2005/040220)的重要的进一步开发是提供与CD3ε链的N末端处的背景独立表位结合的双特异性抗体构建体(WO 2008/119567)。与该选择的表位结合的
Figure BDA0002998948640000026
抗体构建体不仅显示出对人和绒毛猴(Callithrixjacchus)、绒顶柽柳猴(Saguinus oedipus)或松鼠猴(Saimiri sciureus)CD3ε链的跨物种特异性，而且由于识别该特异性表位(而不是先前描述的双特异性T细胞接合分子中CD3结合物的表位)而不会非特异性地激活T细胞至与对于前一代T细胞接合抗体所观察到的程度相同的程度。T细胞激活的这种减少与患者中较少或减少的T细胞再分布相关，这被鉴定为副作用的风险。
当前，约25％(m/m)或更多的双特异性抗体构建体，例如通过工业哺乳动物CHO细胞培养物(表达，分泌，从生物反应器收集并纯化，例如通过蛋白质A柱)生产的与单链Fc缀合的双特异性T细胞接合剂
Figure BDA0002998948640000031
分子
Figure BDA0002998948640000032
可以以聚集形式获得，这降低了产率并增加了生产成本。下一个下游纯化步骤(典型地是阳离子交换色谱法(CEX))去除聚集物。因此，需要在下游减少聚集。
传统上，氧化还原重折叠是在微生物系统(大肠杆菌)产生聚集在包涵体中的蛋白质后进行的。在这些情况下，典型地需要高浓度的变性剂(6M胍、尿素等)。使用氧化剂(铜、溶解氧等)以形成二硫键，或使用氧化还原试剂(半胱氨酸/胱氨酸、半胱氨酸/胱胺等)以改组加扰的二硫键。尽管通常认为工业哺乳动物细胞表达具有期望的，正确的高阶结构(折叠)和二硫键连接的蛋白质，实际上并非总是如此。
在文献中已经描述了一些情况，其中对哺乳动物细胞中产生的蛋白质和抗体进一步处理，其目的是重折叠蛋白质并产生或改组二硫键。将TNF-Fc融合蛋白(依那西普(etanercept))用半胱氨酸/胱氨酸氧化还原处理，以形成并改组加扰的二硫键，从而将后来洗脱的HIC级分最小化(Sassenfeld,H.M.,Remmele,R.L.,&McCoy,R.E.2007，Increasedrecovery of active proteins[增加的活性蛋白的回收],US 7157557；Sassenfeld,H.M.,Remmele,R.L.,&McCoy,R.E.2009,Increased recovery of active proteins(antibodies)[增加的活性蛋白(抗体)的回收],US 7544874 B2)。在另一种情况下，在IgG1抗体的Fab区观察到高百分比(16％)的开放二硫键(Chaderjian,W.B.,Chin,E.T.,Harris,R.J.,&Etcheverry,T.M.2005.Effect of copper sulfate on performance of a serum-free CHO cell culture process and the level of free thiol in the recombinantantibody expressed[硫酸铜对无血清CHO细胞培养方法的性能和表达的重组抗体中游离硫醇的水平的影响].Biotechnol.Prog.[生物技术进展],21,(2)550-553)。通过向生物反应器中添加50-100uM硫酸铜来氧化完成二硫键的形成(Chaderjian,Chin,Harris,&Etcheverry 2005)。使IgG2抗体进行氧化还原重折叠以富集所需的IgG2A或IgG2B二硫化物同种型(Dillon,T.M.,Speed-Ricci,M.,Vezina,C.,Flynn,G.C.,Liu,Y.D.,Rehder,D.S.,Plant,M.,Henkle,B.,Li,Y.,Varnum,B.,Wypych,J.,Balland,A.,&Bondarenko,P.V.2008.Structural and functional characterization of disulfide isoforms ofthe human IgG2 subclass[人IgG2亚类的二硫化物同种型的结构和功能表征].J.Biol.Chem.[生物化学杂志],283,16206-16215,Dillon,T.M.,Rehder,D.S.,Bondarenko,P.V.,Ricci,M.,Gadgil,H.S.,Banks,D.,Zhou,J.,Lu,Y.,Goetze,A.,&Zhang,Y.2011.Methods for refolding of recombinant antibodies[用于重组抗体的重折叠的方法].专利US7928205)。还对固定在蛋白质A柱上的IgG2分子进行了氧化还原重折叠和氧化还原处理，以富集所需的IgG2二硫化物同种型(Zhou,J.&Hong,T.2006,Method forrefolding polypeptides[用于重折叠多肽的方法],WO 2006/060083)。将更弱的变性条件用于包含1M尿素的单链Fv抗体(Chen,L.H.,Huang,Q.,Wan,L.,Zeng,L.Y.,Li,S.F.,Li,Y.P.,Lu,X.F.,&Cheng,J.Q.2006.Expression,purification,and in vitro refoldingof a humanized single-chain Fv antibody against human CTLA4(CD152)[针对人CTLA4(CD152)的人源化单链Fv抗体的表达、纯化、和体外重折叠].Protein Expr.Purif.[蛋白质表达和纯化],46,(2)495-502)。然而，先前没有描述可适用的重折叠条件来重折叠聚集的双特异性抗体构建体，例如
Figure BDA0002998948640000041
抗体构建体，它允许快速，通用和资源高效的步骤，该步骤可包括在常规下游加工中以增加总体产量。甚至更多的更大的包含例如半衰期延长结构域并且典型地大小至少为100kDa的双特异性抗体构建体在下游加工中甚至更具处理挑战性。例如，单链Fc(ScFc)
Figure BDA0002998948640000042
抗体构建体的大小典型地是大的(约105kDa)，并包含因蛋白质工程工作而设计的长接头。相比之下，几乎没有任何单链天然哺乳动物蛋白(小于5％)大于100kDa。在这方面，技术人员认为标准IgG抗体由两条约50kDa的重链和两条约25kDa的轻链组成，它们主要分开折叠然后结合在一起。相比之下，单链抗体构建体例如scFc
Figure BDA0002998948640000043
抗体构建体仅折叠为一条重工程链。因此，对于重工程单链抗体构建体，需要完善对下游加工的先前学习，对于那些非天然高分子量的构建体，则需要进一步完善。
发明内容
令人惊讶地，可以提供一种下游方法，其确保改善的双特异性抗体构建体产品质量，因此增加了产物产率，并可整合到现有的下游加工步骤中。
因此，在一方面，在本发明的上下文中设想提供一种纯化双特异性抗体构建体的下游方法，该构建体包含：
·与靶，优选肿瘤靶结合的pI为5.0至9.5的第一结构域；
·第二结构域，所述第二结构域与人和猕猴CD3ε链的细胞外表位结合；以及
·任选地第三结构域，该第三结构域包含两个多肽单体，每个多肽单体包含铰链、CH2结构域和CH3结构域，其中所述两个多肽单体通过肽接头彼此融合，其中所述构建体包含至少一个开放的二硫键，该方法包括重折叠构建体的步骤，其中一个或多个结构域包含二硫键，并且其中
使该构建体与重折叠缓冲剂接触以将该构建体重折叠到其天然形式，该缓冲剂包含(i)浓度为至少0.1mM的氧化还原和/或氧化剂，和(ii)浓度>1M的离液剂，并且其中重折叠缓冲剂的pH对应于第一结构域的pI值的+/-4.5或整个构建体的pI值的+/-4.0。
根据所述方面，还设想氧化剂选自由以下组成的组：铜(II)、溶解氧和(L)-脱氢抗坏血酸(DHA)，优选地铜(II)。
根据所述方面，还设想氧化剂是硫酸铜(II)。
根据所述方面，还设想氧化剂以0.1至10mM，优选0.1至1mM的浓度存在。
根据所述方面，还设想氧化还原剂选自由以下组成的组：还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽、半胱氨酸/胱氨酸、半胱氨酸/半胱胺、半胱氨酸/胱胺、二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇和谷胱甘肽。
根据所述方面，还设想氧化还原剂以0.1至10mM，优选0.1至1mM的浓度存在。
根据所述方面，还设想重折叠缓冲剂包含氧化剂但不包含氧化还原剂。
根据所述方面，还设想离液剂选自由以下组成的组：精氨酸、尿素、二甲基尿素、甲基脲、乙基脲、有机溶剂、洗涤剂、高温(优选超过40、50、60、70或80℃)和胍(或其质子化形式鈲)，优选鈲。
根据所述方面，还设想离液剂以1.2至2M的范围内的浓度存在。
根据所述方面，还设想pH值至少为4.9，优选在pH 5.0至9.5的范围内，优选约5.0至6.0或6.5至9.0，更优选5.0或7.0至8.0。
根据所述方面，还设想第一结构域结合CD33、CDH19、MSLN、FLT3、BCMA、CD19、MUC17、EpCAM、EGFRviii、DLL3、CLDN 18、CDH3、和/或PSMA。
根据所述方面，还设想，与氧化还原重折叠前的单体含量相比，在施加重折叠缓冲剂后例如通过尺寸排阻色谱法(单体峰百分比)测定的构建体的单体含量增加至少25％，并且优选量达至少40％、更优选至少60％、65％、至少70％或甚至至少85％的单体含量。
根据所述方面，还设想该方法在室温(约25℃)下进行。
根据所述方面，还设想该方法的孵育时间为1至24h，优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10h，更优选4h。
根据所述方面，还设想使构建体与重折叠缓冲剂的接触(i)在下游纯化步骤中的加工流体(池)中或(ii)在下游纯化步骤中的色谱柱上进行。
根据所述方面，还设想构建体(i)在液体池中的浓度为0.5mg/ml至15mg/ml，优选0.7mg/ml至12mg/ml或(ii)在色谱柱上的浓度为5mg/ml至15mg/ml，优选10mg/ml至15mg/ml。
根据所述方面，还设想所述液体池是收获的细胞培养液(HCCF)、色谱洗脱液池、蛋白A、蛋白L或蛋白G亲和色谱洗脱液池、过滤的病毒失活池、阳离子交换色谱法(CEX)单体池和CEX高分子量峰后池。
根据所述方面，还设想，本发明的方法优选地包括以下步骤：
(a)提供收获的细胞培养液(HCCF)，其包含哺乳动物细胞分泌的所述双特异性抗体构建体；
(b)在适合于所述构建体与所述分离基质缔合的条件下，使所述HCCF与第一分离基质接触以进行色谱纯化，其中所述分离基质是选自由以下组成的组的亲和树脂：蛋白A、蛋白G、蛋白L和合成模拟亲和树脂；
(c)洗涤所述第一分离基质；
(d)从所述第一分离基质洗脱所述构建体；
(e)使包含所述构建体的洗脱液中的病毒失活；
(f)在适合于所述构建体与所述分离基质缔合的条件下，使包含所述构建体的洗脱液与第二分离基质接触以进行色谱精制，其中所述分离基质为阳离子交换色谱基质；
(g)洗涤所述第二分离基质；
(h)从所述第二分离基质洗脱所述构建体，其中将所述构建体分成两种级分：(i)包含构建体单体的单体池和(ii)包含构建体聚集物的高分子量池，
(i)通过过滤从包含级分(i)的所述洗脱液中分离病毒；以及
(j)任选地将洗脱液进行进一步的超滤和/或渗滤步骤，
其中在收获前的细胞培养基中或在步骤(a)的HCCF中，使该构建体与重折叠缓冲剂接触以将该构建体重折叠到其天然形式。
根据所述方面，可替代地，在如上所述的步骤(b)或(f)中的至少一个中，在分离基质上(在柱上)，使该构建体与重折叠缓冲剂接触以将该构建体重折叠到其天然形式。
根据所述方面，可替代地，在如上所述的步骤(d)、(e)或(h)中的至少一个中，在加工流体(池)中，使该构建体与重折叠缓冲剂接触以将该构建体重折叠到其天然形式。
根据所述方面，还设想，构建体的第一结合结构域包含含有选自由以下组成的组的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有选自由以下组成的组的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区：
(a)如SEQ ID NO:4中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:5中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:6中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:1中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:2中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:3中所描绘的CDR-L3，
(b)如SEQ ID NO:29中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:30中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:31中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:34中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:35中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:36中所描绘的CDR-L3，
(c)如SEQ ID NO:42中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:43中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:44中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:45中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:46中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:47中所描绘的CDR-L3，
(d)如SEQ ID NO:53中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:54中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:55中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:56中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:57中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:58中所描绘的CDR-L3，
(e)如SEQ ID NO:65中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:66中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:67中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:68中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:69中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:70中所描绘的CDR-L3，
(f)如SEQ ID NO:83中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:84中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:85中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:86中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:87中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:88中所描绘的CDR-L3，
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(p)如SEQ ID NO:226中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:227中所描绘的CDR-H2、如SEQ ID NO:228中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:229中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:230中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:231中所描绘的CDR-L3；以及
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根据所述方面，还设想将所述方法应用于通过上游连续制造方法生产的构建体。
根据另一方面，还设想一种设备执行本发明的方法。
根据另一方面，还设想提供了通过本发明的方法纯化的双特异性抗体构建体。
附图说明
图1：图1显示了纯化根据本发明的双特异性抗体构建体的下游纯化方法步骤的实例设置。所生产材料的名称对应于相应的下游纯化步骤后的加工液体(池)，并收集其样品进行尺寸排阻色谱(SEC)分析。除了通过SEC测定的单体百分比外，材料的其余百分比为聚集物。低分子量(LMW)物质仅占很小的一部分。将蛋白A过滤的病毒失活池(FVIP)和阳离子交换色谱(CEX)HMW池样品用于氧化还原重折叠。
图2：图2显示了在pH 8下在仅鈲(GuHCl)处理后，聚集的示例性CD33xCD3双特异性抗体构建体CEX HMW(峰后)池的尺寸排阻色谱图。
图3：图3显示了用GuHCl和铜(II)或脱氢抗坏血酸处理后，聚集的示例性CD33xCD3双特异性抗体构建体HMW(峰后)池的尺寸排阻色谱图。
图4：图4显示了用GuHCl处理后，聚集的示例性CD33xCD3双特异性抗体构建体蛋白A FVIP池的尺寸排阻色谱图。
图5：图5显示了用GuHCl和铜(II)处理后，聚集的示例性CD19xCD3双特异性抗体构建体CEX HMW(峰后)池的尺寸排阻色谱图。
图6：图6显示了用GuHCl和铜(II)处理后，聚集的示例性CLDNxCD3双特异性抗体构建体CEX HMW(峰后)池的尺寸排阻色谱图。
具体实施方式
优选地，本文描述了为双特异性抗体构建体提供优化的氧化还原重折叠条件的下游方法，所述双特异性抗体构建体优选为单链抗体构建体，例如双特异性T细胞接合剂
Figure BDA0002998948640000101
抗体构建体，尤其是scFc
Figure BDA0002998948640000102
抗体构建体，其有利地改善抗体构建体产物质量，这包括减少聚集、增加单体抗体构建体的产量和/或减少同种型的发生，由此改善总体过程经济学。可以将该方法通用地添加到若干个标准的下游加工步骤中，例如色谱纯化、病毒失活、阳离子交换色谱、病毒过滤和或超滤/渗滤。令人惊讶地发现，特定的氧化还原重折叠条件可有效地降低双特异性抗体构建体的聚集并增加其单体产物的产量，该条件包括例如胍，本文也被称为质子化形式鈲的离液剂浓度，其特定浓度高于文献中的会预期的浓度，以及低浓度的氧化还原剂，优选氧化剂，例如铜(II)和/或低浓度的氧化还原试剂(如半胱氨酸/胱氨酸)。在某些实施例中，氧化剂是优选的。
发现典型地高百分比量，例如超过25％或甚至超过50％或70％的双特异性抗体构建体，例如通过工业哺乳动物CHO细胞(表达，分泌，从生物反应器收集并通过蛋白质A柱纯化)生产的与单链Fc缀合的
Figure BDA0002998948640000111
抗体构建体
Figure BDA0002998948640000112
在下游不利地以聚集形式获得，这大大降低了产率并增加了生产成本。聚集物典型地通过下一个下游纯化步骤(典型地是阳离子交换色谱法(CEX))去除。然而，在由哺乳动物细胞(或微生物系统)生产双特异性抗体构建体(例如
Figure BDA0002998948640000113
)的方法中，氧化还原重折叠方法作为另外的下游加工步骤，其包括如本文所述的氧化还原重折叠步骤，增加所需的单体蛋白质产物(双特异性抗体构建体)的产量以及减少聚集物。已经对双特异性抗体构建体评估了含有或不含有还原/氧化(氧化还原)试剂的众多重折叠条件。
优选地，文中描述了加工上游产生的抗体构建体、优选双特异性抗体构建体(例如
Figure BDA0002998948640000114
抗体构建体)的下游方法，该方法包括使已经由哺乳动物细胞或微生物系统生产的蛋白质与离液剂和氧化还原剂在优选的pH下接触，所述pH取决于双特异性抗体构建体的pI。在一个实施例中，优选的pH取决于双特异性抗体构建体的靶结构域的pI，并且典型地在pH 5至8的范围内。这样的pH值对应于双特异性抗体构建体的下游加工中池中或柱上条件下环境的典型pH值。评价了若干种离液剂(变性，去折叠)，包括胍、精氨酸和升高的温度。胍和精氨酸作为离液剂是优选的，最优选胍。例如，示例性评估的胍浓度在0.5至2.5的范围内，其中在高于1M的离液剂的浓度下，优选1.2至2M的范围内的浓度下，观察到单体含量显著增加。更高的离液剂浓度典型地具有增加产物聚集机会的风险。相反，低于1M的量典型地并不显示为显著的重折叠作用。
根据本发明，离液剂，例如鈲，尤其是如果与氧化还原剂，例如铜II组合，令人惊讶地减少了下游双特异性构建体聚集的发生，并且优选另外减少了同种型和/或异源抗体构建体的发生。这典型地通过在尺寸排阻色谱中更小的肩峰证明，其中肩峰应当理解为与典型地高斯曲线样形状的峰的偏差，例如通过峰的部分变宽或拖尾。相应地，根据本发明，在导致根据本发明的抗体构建体的总体更有效制造方法的下游加工中，非聚集的，即单体双特异性抗体的发生会显著增加。典型地，相对于施加本发明之前的单体百分比，代表希望的产物级分的单体含量增加了至少25％、优选至少40、50、60、70、80、90、100％，或甚至大于100％。例如，在其中单体含量(每次尺寸排阻色谱的单体峰)从约25增加至约50％的情况下，相对于施加本发明之前的单体含量，已经实现了约100％的单体含量的增加。可以实现的按百分比计的实际最终单体含量可以取决于具体分子。然而，对于通常如本文所述的抗体构建体，典型地观察到单体含量的至少25％、典型地至少约50％的百分比增加。在这方面，为了增加单体的百分比，优选将氧化还原试剂与离液剂(例如胍)一起添加到重折叠缓冲剂中。当在重折叠缓冲剂中半胱氨酸和胱氨酸形成氧化还原剂，该缓冲剂具有在至少1M，例如1至2.5M，优选1.2至2M的范围内的总氧化还原剂浓度，例如按6:1、14:1、和33:1(Cys:Cyss)的摩尔比，单体的百分比可以从39％(无氧化还原剂)分别增加至52％、61％、和69％，即增加了高达约76％。当与例如1.2M至2.0M胍一起使用氧化还原剂，例如氧化试剂，例如铜(II)硫酸盐或脱氢抗坏血酸盐，例如0.5mM硫酸铜(II)时，令人惊讶地观察到高达约90％的高度重折叠作用增加的单体含量。还用脱氢抗坏血酸盐增加了单体的百分比，例如按以下范围内的浓度：0.1M至1M、优选0.5％至高达约73％，伴随以下范围内的离液剂，约1.2M至2M，例如约1.2M至2.0M胍。然而，例如对于
Figure BDA0002998948640000121
CEX后峰池，本文描述的重折叠程序也适合更早的下游纯化。待有效纯化的此类更早的下游产物纯化可以包括蛋白A池，例如其中蛋白A FVIP样品含有大约73％单体和27％聚集的抗体构建体。如果进行根据本发明的重折叠，例如用2.0M胍，在约pH 5.0至pH 8.0的范围内的pH下，单体的百分比可以增加高达约94％。
在本发明的上下文中，已经令人惊讶地实现了限定pH范围，其中将重折叠步骤整合到下游加工方法中优选是有效的。所述pH范围取决于结合(肿瘤)靶的第一结合结构域的pI和/或整个抗体构建体的pI。如本文所述的抗体构建体的第一结构域典型地具有至少4.9的pI。例如，关于第一结构域，即靶结合结构域，如本文所述的CD33xCD3抗体构建体具有约4.9的pI。对于如本文所述的CD19xCD3抗体构建体，其他pI值典型地是约6.0，对于如本文所述的BCMAxCD3抗体构建体是约6.4，对于如本文所述的CD19xCD3抗体构建体是约8.7，对于如本文所述的MSLNxCD3抗体构建体是约9.4，以及对于如本文所述的FLT3xCD3抗体构建体是约9.2。因此，重折叠缓冲剂的pH至少应对应于典型地但不一定是4.9的本发明的抗体构建体的第一结合结构域的典型地最低pI。因此，例如，在本发明的上下文中，约pH 5的重折叠缓冲剂通常是适合的。
在本发明的上下文中，根据本发明的抗体构建体的第二结合结构域，即CD3ε结合结构域的pI，典型地具有比靶结合结构域更高的pI，例如至少9的pI，典型地9.3。在根据本发明存在第三结构域的情况下，pI典型地是至少7，典型地7.2。因此，整个抗体构建体的pI将高于第一结合结构域的pI。典型地，整个抗体构建体的pI是约7.0至9.0，即在中性范围内。因此，在本发明的上下文中，其中发生重折叠的重折叠缓冲剂或环境的中性pH，例如pH7.0至9.0，例如8.0是优选的。例如，如本文所述的CD33xCD3抗体构建体具有约7.2的pI。对于如本文所述的CD19xCD3抗体构建体，其他pI值典型地是约8.0，对于如本文所述的BCMAxCD3抗体构建体是约8.0，对于如本文所述的CD19xCD3抗体构建体是约8.6，对于如本文所述的MSLNxCD3抗体构建体是约8.8，以及对于如本文所述的FLT3xCD3抗体构建体是约8.8。
在本发明中，“池”被理解为是一种下游处理流体，其包含加工产物(即双特异性抗体构建体)，并且不与基质(例如柱)缔合。根据本发明的方法，可以将重折叠缓冲剂应用于若干个不同的池或柱上。池例如包括蛋白A纯化后的过滤病毒失活池(FVIP)或通过缓冲剂交换的CEX后或与过滤病毒失活步骤一致的高分子量(HMW)池。
双特异性抗体构建体的浓度范围可以为0.5至10mg/ml内，优选接近1mg/ml。持续时间可以是几小时，例如2至48小时，优选地长达24小时，更优选地约10、9、8、7、6、5、4、3或2小时，例如4小时。
根据本发明的方法，温度范围可以为4℃至40℃，例如10℃至30℃，优选约20℃至约25℃，例如室温约25℃。这样的温度选择既避免了不受控制的和不希望的聚集，又确保了适合的反应时间。
在本发明的上下文中，可以使用若干种氧化剂和氧化还原剂。重折叠缓冲剂中优选使用包括铜(即，铜(II))、脱氢抗坏血酸、溶解氧的“氧化剂”。优选的浓度范围是0.1至10mM，优选0.5至1mM，其高于本领域关于封闭开放的二硫键所教导的浓度范围。更低的氧化剂浓度(例如铜(II))典型地会增加氧化，即二硫键的重建所需的时间。更高的氧化剂(例如铜(II))浓度可能会不利地导致蛋氨酸残基的氧化和截断。如果蛋氨酸的氧化和截断在对功能而言至关重要的蛋白质区域，则应将其降至最低。一般来讲，选择根据本发明的氧化剂(例如铜(II))浓度作为残留的开放二硫键与截断之间的折衷方案。铜浓度还应通过蛋白质浓度测定。先前，更低的铜浓度已在本领域中进行了描述，例如Harris等人2005中硫酸铜为0.005至0.1mM，Treuheit等人、US6808902、US7723490中分别约0.01mM。然而，本发明涉及包含0.1mM至10mM氧化剂，优选0.5mM至1mM氧化剂，例如铜(II)(优选硫酸铜(II))的方法，该方法导致通过使用的根据本发明的离液剂能够更快地重建二硫键的反应。不希望受理论的束缚，不使用离液剂，仅表面暴露的开放，即还原的二硫化物可被氧化剂或氧化还原剂触及，以封闭(即氧化)二硫化物以恢复键和三级结构，从而有利地减少聚集物的量。
可以另外或替代使用若干种“氧化还原剂”，包括以下对：半胱氨酸/胱氨酸、半胱氨酸/胱胺、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽。也可以单独使用半胱氨酸或还原型谷胱甘肽，因为它们会例如在接近中性pH下产生氧化形式。令人惊讶地发现，半胱氨酸和胱氨酸的使用显著减少了聚集物。然而，使用半胱氨酸和胱氨酸时，观察到两个半胱氨酸(一个开放的二硫键)的半胱氨酸化。优选地，胱氨酸浓度为约1mM，并且半胱氨酸浓度相对于半胱氨酸浓度高n倍。例如，胱氨酸浓度可以在0.1mM-10mM的范围内，优选1mM。半胱氨酸：胱氨酸比率可以为1:1至33:1的任何值，优选约20:1。可以以相当的浓度和比率使用胱胺代替胱氨酸。还原型和氧化型谷胱甘肽也可以以类似的浓度和比率使用。
将根据本发明的氧化剂如铜或脱氢抗坏血酸与离液剂一起添加有利地减少了不希望的产物聚集物的量。典型地，可以实现聚集的显著减少，例如，通过重折叠可实现蛋白质A FVIP池中CD33xCD3双特异性抗体构建体从26％到6％。优选的条件可以包括，例如，使聚集物与pH 5.1的重折叠缓冲剂(乙酸盐缓冲剂)和2.0M胍在室温下接触4小时。在CEX HMW池中也可以实现聚集的显著减少，例如通过施用包含2.0M胍和0.5mM铜(II)的pH 8.0下的重折叠缓冲剂，或例如包含2.0M胍和0.5mM脱氢抗坏血酸的pH 8.0下的重折叠缓冲剂。
本发明还涉及可以有利地用于根据本发明的方法的重折叠缓冲剂。
根据本发明的重折叠缓冲剂也适用于在下游色谱柱(例如蛋白A柱)上重折叠。一般来讲，本文所述的氧化还原重折叠方法可以在容器中、在柱上、在收获后在细胞培养液中或在收获前在生物反应器中的细胞培养基中通过添加上述氧化还原和离液剂来进行。
根据本发明的双特异性抗体构建体例如
Figure BDA0002998948640000151
分子典型地含有Fc区，其大小，pI和疏水性与IgG抗体的相应区域类似。IgG抗体从宿主细胞蛋白(HCP)、其他生物反应器杂质和试剂、高分子量(HMW)物质或聚集物、低分子量物质或剪切物中的一般下游加工是本领域已知的(Shukla等人2006)。此类下游加工已适于纯化双特异性抗体构建体，例如
Figure BDA0002998948640000152
其典型地包括以下步骤：细胞培养物收获；蛋白A色谱法；过滤病毒失活；第二柱色谱精制步骤或两个，例如CEX；病毒过滤；UF/DF。上游获得(例如在连续制造过程中)的双特异性抗体构建体材料典型地通过应用图1中所示的步骤进行纯化。根据本发明的实现氧化还原重折叠的方法可以在上面列出的任何收获和纯化步骤中进行，通常含有很大百分比的不希望的聚集。例如，氧化还原重折叠可以在蛋白质A色谱法后在容器中进行，该蛋白质A色谱法纯化出宿主细胞蛋白质和试剂，但仍含有聚集物。可以将变性试剂添加到蛋白质A池中，或可以将蛋白质A池经缓冲剂交换进入变性重折叠缓冲剂中。还可以通过用离液剂(例如胍、精氨酸、尿素)冲洗并孵育固定在柱上的蛋白质，从而在蛋白A柱上进行重折叠。也可以添加氧化试剂(例如铜或脱氢抗坏血酸)或氧化还原试剂以进行柱上重折叠。
在本发明的上下文中，“离液剂(chaotrope)”或“离液剂(chaotrope agent)”应理解为变性剂或去折叠剂，例如胍、精氨酸、尿素、极端pH、有机溶剂例如醇和/或去污剂(例如SDS)，其会破坏大分子(例如双特异性抗体构建体)的氢键网络和范德华相互作用。这增加了大分子的熵，这与大分子的动能或运动的增加相关。在根据本发明优选施用的低浓度下，离液剂可以部分或瞬时中断蛋白质三级外部结构。对于全长单克隆抗体(mAb)，Mehta等人2014年之前已经通过使用不同的光谱技术、尺寸排阻色谱法(SEC)和分析超离心法研究了浓度为0M至2M的离液剂胍盐酸盐(GdnHCl)的作用。在第0天，检测到mAb三级结构的中度扰动。在第1天(在37℃下24小时后)，在离液剂浓度高于1.2M，尤其高于1.8M时，观察到三级结构的主要扰动。这导致在孵育6天和11天后，高分子量(HMW)物质增加。在高于1.2M胍下，仅在诱导部分去折叠的溶液中检测到mAb的聚集。Mehta等人2014指出，“差示扫描量热法研究表明，抗体的CH2结构域在以1.2M和更高浓度的GuHCl孵育的抗体分子中去折叠。这些结果表明，CH2结构域的去折叠导致聚集”。
基于本领域的教导，当应防止聚集时，技术人员将不愿意使用浓度高于1M的离液剂例如1.2M胍来处理抗体或双特异性抗体构建体。因此，令人惊讶的是，在本发明的方法中，出于重折叠目的，用离液剂浓度高于1M处理本发明的双特异性抗体，并且仍然得到非聚集产物。然而，本发明的双特异性抗体构建体在三个结合结构域的任一个中分别包含至少一个额外的二硫键，即在靶结合结构域、CD3结合结构域或scFc结合结构域中分别至少一个。优选地，在第三结构域的CH2中存在额外的二硫键，其使得双特异性抗体构建体更稳定，即，比糖基化mAb的CH2更稳定。作为支持特征，本发明的方法优选地施用更温和的反应条件，即，反应时间短于24小时，例如4小时，温度低于37℃，例如25℃。不希望受理论的束缚，根据如本文所要求保护的特殊性，施用根据本发明的方法不会导致三级结构的主要扰动，这最终将导致聚集。取而代之的是，经受本发明方法的聚集的双特异性抗体构建体通过离液剂的部分和过渡去折叠允许氧化剂和/或氧化还原剂到达“开放”的二硫键并再次将它们“封闭”。
在本发明的上下文中，“封闭”是指-S-S-二硫键的共价键的重建。因此，双特异性抗体构建体的三级结构被重建并且先前的聚集被消除或至少减少。结果，提高了施用本发明的方法的下游加工的产物产率。
在本发明的上下文中，“细胞培养”或“培养”是指细胞在多细胞生物或组织外的生长和繁殖。哺乳动物细胞的适合培养条件是本领域已知的。参见例如Animal cellculture:A Practical Approach[动物细胞培养：一种实用方法],D.Rickwood编辑,OxfordUniversity Press[牛津大学出版社],纽约(1992)。哺乳动物细胞可以悬浮培养或附着在固体底物上培养。
术语“哺乳动物细胞”是指来自或源自任何哺乳动物(例如，人、仓鼠、小鼠、绿猴、大鼠、猪、牛或兔)的任何细胞。例如，哺乳动物细胞可以是永生化细胞。在一些实施例中，哺乳动物细胞是分化细胞。在一些实施例中，哺乳动物细胞是未分化细胞。本文描述了哺乳动物细胞的非限制性实例。哺乳动物细胞的另外实例是本领域已知的。
如本文所用，术语“细胞培养基(cell culturing medium)”(也称为“培养基(culture medium)”、“细胞培养基(cell culture media)”、“组织培养基”)是指用于生长细胞(例如动物或哺乳动物细胞)的任何营养液，并且其通常提供以下至少一种或多种组分：能源(通常为碳水化合物，例如葡萄糖的形式)；所有必需氨基酸中的一种或多种，通常是二十种碱性氨基酸，再加上半胱氨酸；典型地以低浓度需要的维生素和/或其他有机化合物；脂质或游离脂肪酸；和痕量元素，例如无机化合物或天然存在的元素，其典型地以极低浓度(通常在微摩尔范围内)需要。
细胞培养基包括那些典型地用于和/或已知可用于任何细胞培养方法的培养基，例如但不限于分批、延长分批、补料分批和/或灌注或连续培养细胞。
“生长”细胞培养基或补料培养基是指典型地在指数生长时期(“生长阶段”)用于细胞培养，并且在此阶段期间足够完整以支持细胞培养的细胞培养基。生长细胞培养基还可以含有赋予掺入到宿主细胞系中的可选择标记抗性或存活性的选择剂。这样的选择剂包括但不限于遗传霉素(G4118)、新霉素、潮霉素B、嘌呤霉素、博来霉素、蛋氨酸亚磺酰亚胺、甲氨蝶呤、无谷氨酰胺的细胞培养基、缺少甘氨酸的细胞培养基、次黄嘌呤和胸苷、或单独的胸苷。
“生产”细胞培养基或补料培养基是指典型地在指数生长结束时的过渡期间以及在蛋白质生产接替时的后续过渡和/或生产阶段期间用于细胞培养的细胞培养基。这样的细胞培养基足够完整以在该阶段期间维持所需的细胞密度、生存力和/或产物滴度。
“灌注”细胞培养基或补料培养基是典型地用于通过灌注或连续培养方法来维持的细胞培养的细胞培养基，并且其足够完整以在此过程中支持细胞培养。灌注细胞培养基配制品可以比基础细胞培养基配制品更丰富或更浓，以适应用于去除用过的培养基的方法。灌注细胞培养基可在生长阶段和生产阶段期间使用。
术语“培养”或“细胞培养”是指在一组受控的物理条件下维持或增殖哺乳动物细胞。
术语“哺乳动物细胞的培养”是指在一组受控的物理条件下维持或增殖的含有多个哺乳动物细胞的液体培养基。
术语“液体培养基”是指含有足够营养以允许细胞(例如哺乳动物细胞)在体外生长或增殖的流体。例如，液体培养基可以含有以下一种或多种：氨基酸(例如20种氨基酸)、嘌呤(例如次黄嘌呤)、嘧啶(例如胸苷)、胆碱、肌醇、硫胺素、叶酸、生物素、钙、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、胸腺嘧啶、氰钴胺、丙酮酸、硫辛酸、镁、葡萄糖、钠、钾、铁、铜、锌和碳酸氢钠。在一些实施例中，液体培养基可以含有来自哺乳动物的血清。在一些实施例中，液体培养基不含有来自哺乳动物的血清或另一种提取物(确定的液体培养基)。在一些实施例中，液体培养基可含有痕量金属、哺乳动物生长激素和/或哺乳动物生长因子。液体培养基的另一个实例是基本培养基(例如，仅含有无机盐、碳源和水的培养基)。本文描述了液体培养基的非限制性实例。液体培养基的另外实例是本领域已知的并且可商购。液体培养基可以含有任何密度的哺乳动物细胞。例如，如本文所用，从生物反应器中去除的一定体积的液体培养基可以基本上不含哺乳动物细胞。
第二液体培养基可以与第一液体培养基相同。在分批补料培养的一些实例中，第二液体培养基是第一液体培养基的浓缩形式。在分批补料培养的一些实例中，第二液体培养基作为干粉添加。
术语“抗体产物”是指“分泌的蛋白”或“分泌的重组蛋白”，并且是指在哺乳动物细胞中翻译时最初含有至少一个分泌信号序列，并且至少部分地通过酶促切割哺乳动物细胞中的分泌信号序列，将其至少部分地分泌到细胞外空间(例如，液体培养基)中的蛋白(例如重组蛋白)。熟练的从业人员将理解，“分泌的”蛋白质无需完全从细胞中解离，就可以认为是分泌的蛋白。
术语双特异性抗体产物涵盖双特异性抗体，例如全长例如基于IgG的抗体及其片段，在本文中典型地称为双特异性抗体构建体。
术语“抗体构建体”是指其中结构和/或功能基于抗体(例如全长或完整免疫球蛋白分子)的结构和/或功能和/或从抗体或其片段的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)结构域中提取的分子。因此，抗体构建体能够与其特异性靶或抗原结合。此外，根据本发明的抗体构建体的结合结构域包含允许靶结合的抗体的最小结构要求。这种最小要求可以例如通过至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)，优选全部六个CDR的存在来定义。定义抗体的最小结构要求的可替代方法是分别定义特异性靶结构内的抗体表位、构成表位区(表位簇)的靶蛋白的蛋白结构域或通过参考与所定义抗体的表位竞争的特异性抗体。根据本发明的构建体所基于的抗体包括例如单克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、去免疫抗体、人源化抗体和人抗体。
根据本发明的抗体构建体的结合结构域可以例如包含上文提及的CDR组。优选地，那些CDR包含在抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)的框架中；然而，它不一定包含两者。例如，Fd片段具有两个VH区并且通常保留完整抗原结合结构域的一些抗原结合功能。抗体片段、抗体变体或结合结构域的形式的另外实例包括(1)Fab片段，一种具有VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；(2)F(ab’)2片段，一种具有由二硫桥在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；(3)具有两个VH和CH1结构域的Fd片段；(4)具有抗体单臂的VL和VH结构域的Fv片段；(5)具有VH结构域的dAb片段(Ward等人,(1989)Nature[自然]341:544-546)；(6)分离的互补决定区(CDR)；和(7)单链Fv(scFv)，后者是优选的(例如，衍生自scFV文库)。根据本发明的抗体构建体的实施例的实例例如描述于以下中：WO 00/006605、WO 2005/040220、WO 2008/119567、WO 2010/037838、WO 2013/026837、WO 2013/026833、US 2014/0308285、US 2014/0302037、WO 2014/144722、WO 2014/151910和WO 2015/048272。
另外，在“结合结构域”或“结合的结构域”的定义内是全长抗体的片段，如VH、VHH、VL、(s)dAb、Fv、Fd、Fab、Fab’、F(ab’)2或“r IgG”(“半抗体”)。根据本发明的抗体构建体还可以包含抗体的修饰片段(也称为抗体变体)，如scFv、二-scFv或二(s)-scFv、scFv-Fc、scFv-拉链、scFab、Fab2、Fab3、双抗体、单链双抗体、串联双抗体(Tandab’s)、串联二-scFv、串联三-scFv、“多抗体”(如三抗体或四抗体)、以及单结构域抗体如纳米抗体或仅包含一个可变结构域的单可变结构域抗体，该可变结构域可以是独立于其他V区或结构域而特异性结合抗原或表位的VHH、VH或VL。
如本文使用的，术语“单链Fv”、“单链抗体”或“scFv”是指单多肽链抗体片段，这些抗体片段包含来自重链和轻链的可变区，但缺乏恒定区。一般来讲，单链抗体在VH与VL结构域之间进一步包含多肽接头，该多肽接头使得其形成所希望的将允许抗原结合的结构。单链抗体详细论述于以下中：Pluckthun，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies[单克隆抗体的药理学]中,第113卷,Rosenburg和Moore编辑Springer-Verlag[施普林格出版社],纽约,第269-315页(1994)。产生单链抗体的各种方法是已知的，这些方法包括以下中所描述的那些：美国专利号4,694,778和5,260,203；国际专利申请公开号WO 88/01649；Bird(1988)Science[科学]242:423-442；Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883；Ward等人(1989)Nature[自然]334:54454；Skerra等人(1988)Science[科学]242:1038-1041。在具体的实施例中，单链抗体还可以是双特异性的、多特异性的、人和/或人源化的和/或合成的。
此外，术语“抗体构建体”的定义包括单价、二价和多价(polyvalent/multivalent)构建体，并且因此包括仅与两个抗原结构特异性结合的双特异性构建体，以及通过不同的结合结构域特异性结合超过两个(例如三个、四个或更多个)抗原结构的多特异性(polyspecific/multispecific)构建体。此外，术语“抗体构建体”的定义包括仅由一条多肽链组成的分子以及由超过一条多肽链组成的分子，这些链可以是相同的(同源二聚体、同源三聚体或同源寡聚物)或不同的(异源二聚体、异源三聚体或异源寡聚物)。上文鉴定的抗体及其变体或衍生物的实例尤其描述于以下中：Harlow和Lane,Antibodies alaboratory manual[抗体：实验室手册],CSHL Press[冷泉港实验室出版社](1988)和Using Antibodies:a laboratory manual[使用抗体：实验室手册],CSHL Press[冷泉港实验室出版社](1999)；Kontermann和Dübel,Antibody Engineering[抗体工程],Springer[施普林格],第2版2010和Little,Recombinant Antibodies for Immunotherapy[用于免疫疗法的重组抗体],Cambridge University Press[剑桥大学出版社]2009。
如本文使用的，术语“双特异性”是指“至少双特异性”的抗体构建体，即其至少包含第一结合结构域和第二结合结构域，其中第一结合结构域与一种抗原或靶(例如靶细胞表面抗原)结合，并且第二结合结构域与另一抗原或靶(例如CD3)结合。因此，根据本发明的抗体构建体包含针对至少两种不同抗原或靶的特异性。例如，第一结构域优选不与本文所述的物种中的一种或多种的CD3ε的细胞外表位结合。术语“靶细胞表面抗原”是指由细胞表达并且存在于细胞表面以使得为如本文所述的抗体构建体所接近的抗原结构。其可以是蛋白质，优选地蛋白质的细胞外部分，或碳水化合物结构，优选地蛋白质的碳水化合物结构，如糖蛋白。其优选地是肿瘤抗原。本发明的术语“双特异性抗体构建体”还涵盖多特异性抗体构建体，如三特异性抗体构建体，后者包括三个结合结构域，或具有超过三种(例如四种、五种……)特异性的构建体。
鉴于根据本发明的抗体构建体是(至少)双特异性的，它们不是天然存在的并且与天然存在的产物明显不同。因此，“双特异性”抗体构建体或免疫球蛋白是具有至少两个具有不同特异性的不同结合侧端的人工杂交抗体或免疫球蛋白。双特异性抗体构建体可以通过多种方法产生，这些方法包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接。参见，例如Songsivilai和Lachmann,Clin.Exp.Immunol.[临床实验免疫学]79:315-321(1990)。
本发明的抗体构建体的至少两个结合结构域和可变结构域(VH/VL)可以包含或可以不包含肽接头(间隔肽)。根据本发明，术语“肽接头”包含这样的氨基酸序列：通过该氨基酸序列，本发明的抗体构建体的一个(可变和/或结合)结构域和另一(可变和/或结合)结构域的氨基酸序列彼此连接。肽接头也可以用于将第三结构域与本发明的抗体构建体的其他结构域融合。这种肽接头的基本技术特征在于它不包含任何聚合活性。适合的肽接头是在美国专利4,751,180和4,935,233或WO 88/09344中描述的那些。肽接头也可用于将其他结构域或模块或区(如半衰期延长结构域)连接到本发明的抗体构建体。
本发明的抗体构建体优选地为“体外产生的抗体构建体”。这个术语是指根据上述定义的抗体构建体，其中在非免疫细胞选择，例如体外噬菌体展示、蛋白质芯片或其中可以测试候选序列与抗原结合的能力的任何其他方法中产生可变区(例如，至少一个CDR)的全部或一部分。因此，这个术语优选地排除仅由动物免疫细胞中的基因组重排产生的序列。“重组抗体”是通过使用重组DNA技术或基因工程制得的抗体。
如本文使用的，术语“单克隆抗体”(mAb)或单克隆抗体构建体是指获自实质上均质的抗体群体的抗体，即除了可能少量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)外，包含该群体的单独抗体是相同的。与典型地包括针对不同决定簇(或表位)的不同抗体的常规(多克隆)抗体制剂相比，单克隆抗体针对抗原上的单一抗原侧或决定簇具有高度特异性。除了它们的特异性之外，单克隆抗体还在它们通过杂交瘤培养合成，因此不被其他免疫球蛋白污染方面是有优势的。修饰语“单克隆”指示获自实质上均质的抗体群体的抗体的特征，并且不应理解为要求通过任何特定方法产生抗体。
对于单克隆抗体的制备，可以使用提供由连续细胞系培养物产生的抗体的任何技术。例如，将要使用的单克隆抗体可以通过Koehler等人,Nature[自然],256:495(1975)首次描述的杂交瘤方法，或可以通过重组DNA方法(参见，例如美国专利号4,816,567)制备。用于产生人单克隆抗体的另外技术的实例包括三源杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor,Immunology Today[今日免疫学]4(1983),72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy[单克隆抗体和癌症治疗],Alan R.Liss公司(1985),77-96)。
然后可以使用标准方法(如酶联免疫吸附测定(ELISA)和表面等离子体共振(BIACORETM)分析)筛选杂交瘤，以鉴定一种或多种产生与指定抗原特异性结合的抗体的杂交瘤。任何形式的相关抗原均可以用作免疫原，例如重组抗原、天然存在形式、其任何变体或片段以及其抗原肽。如在BIAcore系统中使用的表面等离子体共振可以用于增加与靶细胞表面抗原的表位结合的噬菌体抗体的效率(Schier,Human Antibodies Hybridomas[人抗体杂交瘤]7(1996),97-105；Malmborg,J.Immunol.Methods[免疫学方法杂志]183(1995),7-13)。
另一种制备单克隆抗体的示例性方法包括筛选蛋白质表达文库，例如噬菌体展示或核糖体展示文库。噬菌体展示例如描述于以下中：Ladner等人,美国专利号5,223,409；Smith(1985)Science[科学]228:1315-1317、Clackson等人,Nature[自然],352:624-628(1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],222:581-597(1991)。
除了使用展示文库之外，还可以使用相关抗原来免疫非人动物，例如啮齿动物(如小鼠、仓鼠、兔或大鼠)。在一个实施例中，非人动物包括人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可能利用人Ig(免疫球蛋白)基因座的大片段来工程化小鼠抗体产生缺陷的小鼠品系。使用杂交瘤技术，可以产生并选择衍生自具有所希望的特异性的基因的抗原特异性单克隆抗体。参见，例如，XENOMOUSETM、Green等人(1994)Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21、US 2003-0070185、WO 96/34096和WO 96/33735。
单克隆抗体也可以获自非人动物，并且然后使用本领域中已知的重组DNA技术进行修饰，例如人源化、去免疫、呈现嵌合等。修饰的抗体构建体的实例包括非人抗体的人源化变体、“亲和力成熟”抗体(参见，例如Hawkins等人J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]254,889-896(1992)和Lowman等人,Biochemistry[生物化学]30,10832-10837(1991))和具有改变的一种或多种效应子功能的抗体突变体(参见，例如美国专利5,648,260、Kontermann和Dübel(2010),上述引文和Little(2009),上述引文)。
在免疫学中，亲和力成熟是这样的过程：通过该过程，在免疫应答的过程中B细胞产生对抗原的亲和力增加的抗体。反复暴露于相同的抗原后，宿主会产生亲和力依次更大的抗体。如天然原型一样，体外亲和力成熟基于突变和选择的原理。体外亲和力成熟已经成功地用于优化抗体、抗体构建体和抗体片段。使用辐射、化学诱变剂或易错PCR在CDR内引入随机突变。此外，遗传多样性可以通过链改组来增加。使用展示方法(如噬菌体展示)进行两轮或三轮突变和选择通常产生具有在低纳摩尔范围内的亲和力的抗体片段。
抗体构建体的氨基酸取代变化的优选类型涉及取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般来讲，选择用于进一步开发的一种或多种所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改善的生物特性。用于产生此类取代变体的便利方式涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，将若干个高变区侧端(例如6-7个侧端)突变以在每个侧端产生所有可能的氨基酸取代。由此产生的抗体变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒展示为与每个颗粒内包装的M13的基因III产物的融合物。然后如本文所披露那样筛选噬菌体展示的变体的生物活性(例如结合亲和力)。为了鉴定用于修饰的候选高变区侧端，可以进行丙氨酸扫描诱变以鉴定对抗原结合有显著贡献的高变区残基。可替代地或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定结合结构域与例如人靶细胞表面抗原之间的接触点可能是有利的。根据本文阐述的技术，此类接触残基和相邻残基是用于取代的候选者。一旦产生了此类变体，就如本文所述对这组变体进行筛选，并且可以选择在一种或多种相关测定中具有优异特性的抗体用于进一步的开发。
本发明的单克隆抗体和抗体构建体具体地包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列一致或同源，而一个或多个链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列一致或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出所希望的生物活性即可(美国专利号4,816,567；Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],81:6851-6855(1984))。本文感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，这些抗体包含衍生自非人灵长类动物(例如，旧大陆猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列和人恒定区序列。已经描述了多种用于制备嵌合抗体的方法。参见，例如，Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.[美国国家科学院院刊]81:6851,1985；Takeda等人,Nature[自然]314:452,1985；Cabilly等人,美国专利号4,816,567；Boss等人,美国专利号4,816,397；Tanaguchi等人,EP 0171496；EP 0173494；和GB 2177096。
抗体、抗体构建体、抗体片段或抗体变体还可以通过例如WO 98/52976或WO 00/34317中披露的方法特定地缺失人T细胞表位(称为“去免疫”的方法)来进行修饰。简而言之，可以对与MHC II类结合的肽分析抗体的重链和轻链可变结构域；这些肽代表潜在的T细胞表位(如WO 98/52976和WO 00/34317中所定义)。为了检测潜在T细胞表位，可以应用称为“肽穿线”的计算机建模方法，并且此外可以搜索人MHC II类结合肽的数据库以查找VH和VL序列中存在的基序，如WO 98/52976和WO 00/34317中所述。这些基序与18种主要的MHC II类DR同种异型中的任一种结合，并且因此构成潜在T细胞表位。检测到的潜在T细胞表位可以通过取代可变结构域中的少量氨基酸残基，或者优选地通过单个氨基酸取代来消除。典型地，进行保守取代。通常但不排他地，可以使用与人种系抗体序列中的位置共有的氨基酸。人种系序列例如披露于以下中：Tomlinson等人(1992)J.MoI.Biol.[分子生物学杂志]227:776-798；Cook,G.P.等人(1995)Immunol.Today[当代免疫]第16(5)卷:237-242；和Tomlinson等人(1995)EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]14:14:4628-4638。V BASE目录提供了人免疫球蛋白可变区序列的综合目录(由Tomlinson,LA.等人编辑MRC Centre forProtein Engineering[医学研究理事会蛋白质工程中心],Cambridge,UK[英国剑桥])。这些序列可以用作人序列的来源，例如用于框架区和CDR。也可以使用共有的人框架区，例如如美国专利号6,300,064中所述。
“人源化”抗体、抗体构建体、其变体或片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其他抗原结合子序列)是主要人序列的抗体或免疫球蛋白，其含有一种或多种衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。对于大部分来说，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的高变区(也称为CDR)的残基被来自非人(例如啮齿动物)物种(供体抗体)(如小鼠、大鼠、仓鼠或兔)的具有所希望的特异性、亲和力和能力的高变区的残基替换。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(FR)残基被相应的非人类残基替换。此外，如本文使用的，“人源化抗体”还可以包括在受体抗体或供体抗体中均未发现的残基。进行这些修饰以进一步改善和优化抗体性能。人源化抗体还可以包含典型地是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分。关于进一步的细节，参见Jones等人,Nature[自然],321:522-525(1986)；Reichmann等人,Nature[自然],332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.[结构生物学新见],2:593-596(1992)。
人源化抗体或其片段可以通过用人Fv可变结构域的等效序列替换不直接参与抗原结合的Fv可变结构域的序列来产生。用于产生人源化抗体或其片段的示例性方法由以下提供：Morrison(1985)Science[科学]229:1202-1207；Oi等人(1986)BioTechniques[生物技术]4:214；以及US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,693,762；US 5,859,205；和US 6,407,213。那些方法包括分离、操纵和表达编码来自重链或轻链中的至少一者的全部或部分免疫球蛋白Fv可变结构域的核酸序列。此类核酸可以获自如上所述的产生针对预定靶的抗体的杂交瘤，以及其他来源。然后可以将编码人源化抗体分子的重组DNA克隆到适当的表达载体中。
人源化抗体还可以使用转基因动物(如表达人重链和轻链基因但不能表达内源性小鼠免疫球蛋白重链和轻链基因的小鼠)产生。Winter描述了可用于制备本文所述的人源化抗体的示例性CDR移植方法(美国专利号5,225,539)。特定人抗体的全部CDR可以用至少一部分非人CDR替换，或者仅一些CDR可以用非人CDR替换。仅需要替换用于将人源化抗体与预定抗原结合所需的CDR数量。
可以通过引入保守取代、共有序列取代、种系取代和/或回复突变来优化人源化抗体。此类改变的免疫球蛋白分子可以通过本领域已知的几种技术中的任何一种来制备(例如，Teng等人,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊],80:7308-7312,1983；Kozbor等人,Immunology Today[今日免疫学],4:7279,1983；Olsson等人,Meth.Enzymol.[酶学方法],92:3-16,1982，以及EP 239 400)。
术语“人抗体”、“人抗体构建体”和“人结合结构域”包括具有抗体区的抗体、抗体构建体和结合结构域，这些抗体区如实质上对应于本领域中已知的人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区或结构域，包括例如由Kabat等人(1991)(上述引文)描述的那些。本发明的人抗体、抗体构建体或结合结构域可以在例如CDR中且特别是CDR3中包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或侧端特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。人抗体、抗体构建体或结合结构域可以具有至少1个、2个、3个、4个、5个或更多个被不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基替换的位置。然而，如本文使用的人抗体、抗体构建体和结合结构域的定义还涵盖“完全人抗体”，这些完全人抗体仅包含非人工和/或遗传改变的人抗体序列，如可通过使用如Xenomouse技术或系统衍生的那些。优选地，“完全人抗体”不包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基。
在一些实施例中，本发明的抗体构建体是“分离的”或“实质上纯的”抗体构建体。当用于描述本文披露的抗体构建体时，“分离的”或“实质上纯的”意指抗体构建体已从其产生环境的组分中鉴定、分离和/或回收。优选地，抗体构建体不与或实质上不与来自其产生环境的所有其他组分缔合。其产生环境的污染组分，如由重组转染细胞产生的污染组分，是典型地干扰多肽的诊断或治疗用途的物质，并且可以包括酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质溶质。抗体构建体可以例如占给定样品中总蛋白质的至少约5重量％或至少约50重量％。应理解，根据情况，分离的蛋白质可以占总蛋白质含量的5重量％至99.9重量％。通过使用诱导型启动子或高表达启动子，能以显著更高的浓度制备多肽，以使得它以增加的浓度水平制备。该定义包括在本领域中已知的多种生物体和/或宿主细胞中产生抗体构建体。在优选的实施例中，抗体构建体(1)通过使用旋杯式序列分析仪纯化至足以获得至少15个N末端或内部氨基酸序列的残基的程度，或(2)通过SDS-PAGE在非还原或还原条件下使用考马斯蓝或优选银染色纯化至均质。然而，通常通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体构建体。
术语“结合结构域”关于本发明表征了(特异性地)结合/相互作用/识别靶分子(抗原)(例如分别为CD33和CD3)上的给定靶表位或给定靶侧端的结构域。第一结合结构域(识别例如CD33)的结构和功能以及优选还有第二结合结构域(例如识别CD3)的结构和/或功能是基于抗体，例如全长或完整免疫球蛋白分子的结构和/或功能，和/或是从抗体或其片段的可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)结构域中提取。优选地，第一结合结构域的特征在于存在三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)。第二结合结构域优选还包含允许靶结合的抗体的最小结构要求。更优选地，第二结合结构域包含至少三个轻链CDR(即VL区的CDR1、CDR2和CDR3)和/或三个重链CDR(即VH区的CDR1、CDR2和CDR3)。设想第一结合结构域和/或第二结合结构域是通过噬菌体展示或文库筛选方法产生或可获得的，而不是通过将CDR序列从预先存在的(单克隆)抗体移植到支架中产生或可获得的。
根据本发明，结合结构域呈一种或多种多肽的形式。此类多肽可以包括蛋白质部分和非蛋白质部分(例如化学接头或化学交联剂，如戊二醛)。蛋白质(包括其片段、优选生物活性片段和通常具有少于30个氨基酸的肽)包含经由共价肽键彼此偶联的两个或更多个氨基酸(产生氨基酸链)。
如本文使用的，术语“多肽”描述了一组分子，这些分子通常由超过30个氨基酸组成。多肽可以进一步形成多聚体，如二聚体、三聚体和更高级的寡聚物，即由多于一个多肽分子组成。形成此类二聚体、三聚体等的多肽分子可以是相同的或不相同的。因此，此类多聚体的相应的更高级结构称为同源二聚体或异源二聚体、同源三聚体或异源三聚体等。异源多聚体的实例是在其天然形式下由两条相同的轻链多肽链和两条相同的重链多肽链组成的抗体分子。术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”还是指天然修饰的肽/多肽/蛋白质，其中该修饰是通过例如翻译后修饰(如糖基化、乙酰化、磷酸化等)来实现。当在本文中提及时，“肽”、“多肽”或“蛋白质”也可以是化学修饰的，如聚乙二醇化。此类修饰在本领域中是熟知的并且在下文描述。
优选地，结合靶细胞表面抗原的结合结构域和/或结合CD3ε的结合结构域是人结合结构域。包含至少一个人结合结构域的抗体和抗体构建体避免了与具有非人(如啮齿动物(例如鼠、大鼠、仓鼠或兔))可变区和/或恒定区的抗体或抗体构建体相关的一些问题。此类啮齿动物衍生的蛋白质的存在可以导致抗体或抗体构建体的快速清除或可以导致患者产生针对抗体或抗体构建体的免疫应答。为了避免使用啮齿动物衍生的抗体或抗体构建体，可以通过将人抗体功能引入到啮齿动物中以使啮齿动物产生完全人抗体来产生人或完全人抗体/抗体构建体。
在YAC中克隆和重组兆碱基大小的人基因座并将它们引入到小鼠种系中的能力为阐明非常大或粗略定位的基因座的功能组分以及产生有用的人疾病模型提供了强有力的方法。此外，使用这种技术将小鼠基因座取代为其人等效物可以提供关于人基因产物在发育过程中的表达和调控、其与其他系统的通信以及其参与疾病诱导和进展的独特见解。
这种策略的重要实际应用是小鼠体液免疫系统的“人源化”。将人免疫球蛋白(Ig)基因座引入到其中内源性Ig基因已经失活的小鼠中提供了研究抗体的程序化表达和组装的根本机制以及其在B细胞发育中的作用的机会。此外，这种策略可以为完全人单克隆抗体(mAb)的产生提供理想来源-这是有助于实现抗体疗法在人疾病中的前景的重要里程碑。预期完全人抗体或抗体构建体将小鼠或小鼠衍生的mAb所固有的免疫原性和变应性应答最小化，并且由此增加施用的抗体/抗体构建体的功效和安全性。可以预期使用完全人抗体或抗体构建体在治疗需要重复施用化合物的慢性和复发性人疾病(如炎症、自体免疫和癌症)中提供显著的优势。
实现这一目标的一种方法是用人Ig基因座的大片段工程化小鼠抗体产生缺陷的小鼠品系，预期这种小鼠在不存在小鼠抗体的情况下将产生大的人抗体组库。大的人Ig片段将保持大的可变基因多样性以及对抗体产生和表达的适当调控。通过利用小鼠机构实现抗体多样化和选择以及缺乏对人蛋白质的免疫耐受性，在这些小鼠品系中再生的人抗体组库应产生针对任何感兴趣的抗原(包括人抗原)的高亲和力抗体。使用杂交瘤技术，可以容易地产生和选择具有所希望特异性的抗原特异性人mAb。结合第一种XenoMouse小鼠品系的产生证明了这个一般策略(参见Green等人Nature Genetics[自然遗传学]7:13-21(1994))。XenoMouse品系用分别含有人重链基因座和κ轻链基因座的245kb和190kb大小的种系构型片段的酵母人工染色体(YAC)工程化，这些种系构型片段含有核心可变区和恒定区序列。证明含有人Ig的YAC与小鼠系统相容以重排和表达抗体，并且能够取代失活的小鼠Ig基因。这通过其诱导B细胞发育、产生完全人抗体的成人样人组库和产生抗原特异性人mAb的能力来证明。这些结果还表明，引入含有更多数量的V基因、另外的调控元件和人Ig恒定区的更大部分的人Ig基因座可以实质上再现作为对感染和免疫的人体液应答的特征的完整组库。Green等人的工作最近扩展到通过分别引入兆碱基大小的人重链基因座和κ轻链基因座的种系构型YAC片段来引入大于大约80％的人抗体组库。参见Mendez等人NatureGenetics[自然遗传学]15:146-156(1997)和美国专利申请序列号08/759,620。
XenoMouse小鼠的产生进一步论述和描绘于以下中：美国专利申请序列号07/466,008、序列号07/610,515、序列号07/919,297、序列号07/922,649、序列号08/031,801、序列号08/112,848、序列号08/234,145、序列号08/376,279、序列号08/430,938、序列号08/464,584、序列号08/464,582、序列号08/463,191、序列号08/462,837、序列号08/486,853、序列号08/486,857、序列号08/486,859、序列号08/462,513、序列号08/724,752和序列号08/759,620；和美国专利号6,162,963；6,150,584；6,114,598；6,075,181和5,939,598以及日本专利号3 068 180B2、3 068 506 B2、和3 068 507 B2。还参见Mendez等人NatureGenetics[自然遗传学]15:146-156(1997)以及Green和Jakobovits J.Exp.Med.[实验医学杂志]188:483-495(1998)、EP 0 463 151 B1、WO 94/02602、WO 96/34096、WO 98/24893、WO00/76310和WO 03/47336。
在一个可替代的方法中，包括真药物国际公司(GenPharm International,Inc.)的其他公司利用了“微基因座”方法。在微基因座方法中，通过包含来自Ig基因座的碎片(单独的基因)来模拟外源性Ig基因座。因此，将一个或多个VH基因、一个或多个DH基因、一个或多个JH基因、mu恒定区和第二恒定区(优选γ恒定区)形成为用于插入到动物中的构建体。该方法描述于以下中：Surani等人的美国专利号5,545,807和美国专利号5,545,806；5,625,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；5,770,429；5,789,650；5,814,318；5,877,397；5,874,299；和6,255,458(各自为Lonberg和Kay)、Krimpenfort和Berns的美国专利号5,591,669和6,023.010、Berns等人的美国专利号5,612,205；5,721,367；和5,789,215、以及Choi和Dunn的美国专利号5,643,763、以及真药物(GenPharm)国际美国专利申请序列号07/574,748、序列号07/575,962、序列号07/810,279、序列号07/853,408、序列号07/904,068、序列号07/990,860、序列号08/053,131、序列号08/096,762、序列号08/155,301、序列号08/161,739、序列号08/165,699、序列号08/209,741。还参见EP 0 546 073 B1、WO 92/03918、WO 92/22645、WO 92/22647、WO 92/22670、WO 93/12227、WO 94/00569、WO 94/25585、WO 96/14436、WO 97/13852和WO 98/24884以及美国专利号5,981,175。进一步参见Taylor等人(1992)、Chen等人(1993)、Tuaillon等人(1993)、Choi等人(1993)、Lonberg等人(1994)、Taylor等人(1994)、和Tuaillon等人(1995)、Fishwild等人(1996)。
Kirin也展示了从通过微细胞融合引入大段染色体或整个染色体的小鼠产生人抗体。参见欧洲专利申请号773 288和843 961。Xenerex Biosciences正在开发用于人抗体的潜在产生的技术。在这种技术中，用人淋巴细胞(例如B和/或T细胞)重组SCID小鼠。然后将小鼠用抗原免疫并且可产生针对抗原的免疫应答。参见美国专利号5,476,996；5,698,767；和5,958,765中。
人抗小鼠抗体(HAMA)应答已经导致该行业制备嵌合或其他人源化抗体。然而，预期特别是在抗体的长期或多剂量利用中会观察到某些人抗嵌合抗体(HACA)应答。因此，期望提供包含针对靶细胞表面抗原的人结合结构域和针对CD3ε的人结合结构域的抗体构建体，以消除HAMA或HACA应答的问题和/或效应。
术语“与……(特异性)结合”、“(特异性)识别”、“(特异性)针对”和“与……(特异性)反应”意指根据本发明，结合结构域与靶分子(抗原)(此处：分别为靶细胞表面抗原和CD3ε)上的给定表位或给定靶侧端相互作用或特异性相互作用。
术语“表位”是指结合结构域(如抗体或免疫球蛋白，或抗体或免疫球蛋白的衍生物、片段或变体)特异性结合的抗原上的一侧。“表位”是抗原性的，并且因此术语表位在本文中有时也称为“抗原结构”或“抗原决定簇”。因此，结合结构域是“抗原相互作用侧”。所述结合/相互作用也被理解为定义“特异性识别”。
“表位”可以通过连续的氨基酸或通过蛋白质的三级折叠并置的非连续氨基酸形成。“线性表位”是这样的表位，其中氨基酸一级序列包含所识别表位。线性表位典型地在独特的序列中包括至少3个或至少4个、且更通常地至少5个或至少6个或至少7个，例如约8个至约10个氨基酸。
与线性表位相反，“构象表位”是这样的表位，其中构成表位的氨基酸的一级序列不是所识别表位的唯一限定组分(例如，其中氨基酸的一级序列不一定被结合结构域识别的表位)。典型地，构象表位包含相对于线性表位增加数量的氨基酸。关于构象表位的识别，结合结构域识别抗原、优选肽或蛋白质或其片段的三维结构(在本发明的上下文下，一个结合结构域的抗原结构包括于靶细胞表面抗原蛋白质内)。例如，当蛋白质分子折叠以形成三维结构时，形成构象表位的某些氨基酸和/或多肽骨架并置，使得抗体能够识别表位。确定表位构象的方法包括但不限于x射线晶体学、二维核磁共振(2D-NMR)光谱学和定点自旋标记和电子顺磁共振(EPR)光谱学。
以下描述了用于表位定位的方法：当人靶细胞表面抗原蛋白中的区(连续氨基酸拉伸物)用非人和非灵长类动物靶细胞表面抗原(例如，小鼠靶细胞表面抗原，但是其他如鸡、大鼠、仓鼠、兔等也是可能的)的其相应区交换/替换时，预期发生结合结构域结合的降低，除非结合结构域对于所用的非人、非灵长类动物靶细胞表面抗原具有交叉反应性。相比于与人靶细胞表面抗原蛋白中的相应区的结合，所述降低优选地为至少10％、20％、30％、40％或50％；更优选地至少60％、70％或80％，并且最优选地90％、95％或甚至100％，由此将与人靶细胞表面抗原蛋白中相应区的结合设定为100％。设想上述人靶细胞表面抗原/非人靶细胞表面抗原嵌合体在CHO细胞中表达。还设想人靶细胞表面抗原/非人靶细胞表面抗原嵌合体与不同膜结合蛋白(如EpCAM)的跨膜结构域和/或细胞质结构域融合。
在用于表位定位的可替代或另外的方法中，可以产生若干种截短形式的人靶细胞表面抗原细胞外结构域，以确定由结合结构域识别的特定区域。在这些截短形式中，从N末端开始逐步缺失不同的细胞外靶细胞表面抗原结构域/亚结构域或区域。设想截短的靶细胞表面抗原形式可以在CHO细胞中表达。还设想截短的靶细胞表面抗原形式可以与不同膜结合蛋白(如EpCAM)的跨膜结构域和/或细胞质结构域融合。还设想截短的靶细胞表面抗原形式可在其N末端涵盖信号肽结构域，例如衍生自小鼠IgG重链信号肽的信号肽。进一步设想，截短的靶细胞表面抗原形式可以在其N末端(在信号肽后)涵盖v5结构域，其允许验证它们在细胞表面上的正确表达。预期不再涵盖由结合结构域识别的靶细胞表面抗原区域的那些截短的靶细胞表面抗原形式发生结合的降低或丧失。结合降低优选地为至少10％、20％、30％、40％、50％；更优选地至少60％、70％、80％，并且最优选地90％、95％或甚至100％，由此将与整个人靶细胞表面抗原蛋白(或其细胞外区域或结构域)的结合设定为100。
确定靶细胞表面抗原的特定残基对抗体构建体或结合结构域的识别的贡献的另一种方法是丙氨酸扫描(参见，例如Morrison KL和Weiss GA.Cur Opin Chem Biol.[化学生物学新见]2001年6月；5(3):302-7)，其中待分析的每个残基例如经由定点诱变被丙氨酸替换。丙氨酸的使用是因为其具有非巨大的、化学惰性的甲基官能团，但仍然模仿许多其他氨基酸所具有的二级结构参考。在需要保守突变残基的大小的情形下，有时可以使用巨大的氨基酸(如缬氨酸或亮氨酸)。丙氨酸扫描是一项已经使用了很长一段时间的成熟技术。
结合结构域与表位或包含表位的区域之间的相互作用意味着结合结构域对特定蛋白或抗原(此处：分别为靶细胞表面抗原和CD3)上的表位/包含表位的区域表现出可观的亲和力，并且通常与靶细胞表面抗原或CD3以外的蛋白质或抗原不表现出显著反应性。“可观的亲和力”包括以约10-6M(KD)或更强的亲和力结合。优选地，当结合亲和力为约10-12至10-8M、10-12至10-9M、10-12至10-10M、10-11至10-8M，优选地约10-11至10-9M时，认为结合是特异性的。尤其通过将所述结合结构域与靶蛋白或抗原的反应与所述结合结构域与除靶细胞表面抗原或CD3以外的蛋白质或抗原的反应进行比较，可以容易地测试结合结构域是否与靶特异性反应或结合。优选地，本发明的结合结构域基本上或实质上不结合除靶细胞表面抗原或CD3以外的蛋白质或抗原(即，第一结合结构域优选不能结合除靶细胞表面抗原以外的蛋白质，并且第二结合结构域不能结合除CD3以外的蛋白质)。设想根据本发明的抗体构建体的特征为与其他HLE形式相比具有优异的亲和力特征。因此，这种优异的亲和力表明体内半衰期延长。根据本发明的抗体构建体的更长的半衰期可以减少典型地有助于改善患者顺应性的施用的持续时间和频率。这是特别重要的，因为本发明的抗体构建体对高度虚弱的或甚至多重性癌症患者特别有益。
术语“基本上/实质上不结合”或“不能结合”意指本发明的结合结构域不结合除靶细胞表面抗原或CD3以外的蛋白质或抗原，即与除靶细胞表面抗原或CD3以外的蛋白质或抗原不显示超过30％，优选不超过20％，更优选不超过10％，特别优选不超过9％、8％、7％、6％或5％的反应性，由此将与靶细胞表面抗原或CD3的结合分别设定为100％。
据信特异性结合是通过结合结构域和抗原的氨基酸序列中的特定基序实现的。因此，由于其一级、二级和/或三级结构以及所述结构的二次修饰，因此实现了结合。抗原相互作用侧端与其特异性抗原的特异性相互作用可以导致所述侧端与抗原的简单结合。此外，抗原相互作用侧端与其特异性抗原的特异性相互作用可以可替代地或另外地导致信号的引发，例如由于诱导抗原构象的变化、抗原的寡聚化等。
术语“可变”是指抗体或免疫球蛋白结构域表现出其序列可变性并且参与确定特定抗体的特异性和结合亲和力的部分(即“一个或多个可变结构域”)。可变重链(VH)和可变轻链(VL)的配对一起形成单个抗原结合侧端。
可变性在整个抗体的可变结构域中并不均匀分布；它集中在重链可变区和轻链可变区中的每一个的子结构域中。这些子结构域被称为“高变区”或“互补决定区”(CDR)。可变结构域的更保守的(即非高变)部分被称为“框架”区(FRM或FR)，并且为三维空间中的六个CDR提供支架以形成抗原结合表面。天然存在的重链和轻链的可变结构域各自包含四个FRM区域(FR1、FR2、FR3和FR4)，这四个FRM区域主要使用β-折叠构型，通过三个高变区连接，这三个高变区形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的高变区通过FRM紧密靠近在一起，并与来自另一条链的高变区一起有助于抗原结合侧端的形成(参见Kabat等人,上述引文)。
术语“CDR”及其复数“CDR”是指其中三个构成轻链可变区的结合特征(CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)并且三个构成重链可变区的结合特征(CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)的互补决定区。CDR含有大部分负责抗体与抗原特异性相互作用的残基，并且因此有助于抗体分子的功能活性：它们是抗原特异性的主要决定簇。
准确定义的CDR边界和长度受制于不同的分类和编号系统。因此，CDR可以通过Kabat、Chothia、contact或任何其他边界定义(包括本文所述的编号系统)来引用。尽管有不同的边界，但这些系统中的每一者在构成可变序列内所谓的“高变区”的方面具有一定程度的重叠。因此，根据这些系统的CDR定义可以相对于相邻框架区在长度和边界区域方面不同。参见例如Kabat(基于跨物种序列变异性的方法)、Chothia(基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的方法)、和/或MacCallum(Kabat等人,上述引文；Chothia等人,J.MoI.Biol[分子生物学杂志],1987,196:901-917；和MacCallum等人,J.MoI.Biol[分子生物学杂志],1996,262:732)。表征抗原结合侧端的又另一标准是由牛津大学分子公司(Oxfbrd Molecular)的AbM抗体建模软件使用的AbM定义。参见例如，Protein Sequence and Structure Analysisof Antibody Variable Domains[抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析]在：AntibodyEngineering Lab Manual[抗体工程实验室手册](编辑：Duebel,S.和Kontermann,R.，施普林格出版社(Springer-Verlag)，海德尔堡)。就两种残基鉴定技术定义重叠区而非相同区而言，可以将它们组合以定义杂合CDR。然而，根据所谓的Kabat系统进行编号是优选的。
典型地，CDR形成可以分类为规范结构的环结构。术语“规范结构”是指由抗原结合(CDR)环所使用的主链构象。从比较结构研究中，已经发现六个抗原结合环中的五个仅具有有限的可用构象组库。每个规范结构可以通过多肽骨架的扭转角来表征。因此，抗体之间的对应环可具有非常类似的三维结构，但环中大部分具有高氨基酸序列变异性(Chothia和Lesk,J.MoI.Biol.[分子生物学杂志],1987,196:901；Chothia等人,Nature[自然],1989,342:877；Martin和Thornton,J.MoI.Biol[分子生物学杂志],1996,263:800)。此外，所使用的环结构与其周围的氨基酸序列之间存在关系。特定规范类别的构象由环的长度和位于环内以及保守框架内(即，环外)关键位置的氨基酸残基决定。因此，可以基于这些关键氨基酸残基的存在来进行对特定规范类别的分配。
术语“规范结构”还可以包括关于抗体的线性序列的考虑因素，例如，如通过Kabat(Kabat等人,上述引文)编目的。Kabat编号方案(系统)是以一致方式对抗体可变结构域的氨基酸残基进行编号的广泛使用的标准，并且是本发明应用的优选方案，也如本文其他地方所提及。另外的结构考虑因素也可以用于确定抗体的规范结构。例如，Kabat编号未完全反映的那些差异可以通过Chothia等人的编号系统来描述，和/或通过其他技术(例如结晶学和二维或三维计算建模)来揭示。因此，可以将给定的抗体序列置于规范类别中，该类别尤其允许鉴定适当的基础结构(chassis)序列(例如，基于在文库中包括多种规范结构的期望)。文献中描述了抗体氨基酸序列的Kabat编号和如由Chothia等人，上述引文所述的结构考虑因素以及其对解释抗体结构的规范方面的意义。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型在本领域中是熟知的。有关抗体结构的综述，参见Antibodies:A LaboratoryManual[抗体：实验室手册],Cold Spring Harbor Laboratory[冷泉港实验室],Harlow等人编辑,1988。
轻链的CDR3以及特别是重链的CDR3可以构成轻链可变区和重链可变区内抗原结合中最重要的决定簇。在一些抗体构建体中，重链CDR3似乎构成抗原与抗体之间主要的接触区域。其中单独改变CDR3的体外选择方案可以用于改变抗体的结合特性或确定哪些残基有助于抗原的结合。因此，CDR3典型地是抗体结合侧端内分子多样性的最大来源。例如，H3可以短至两个氨基酸残基或多于26个氨基酸。
在经典的全长抗体或免疫球蛋白中，每条轻(L)链通过一个共价二硫键与重(H)链连接，而两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接，这取决于H链同种型。最靠近VH的CH结构域通常命名为CH1。恒定(“C”)结构域不直接参与抗原结合，但表现出各种效应子功能，如抗体依赖性、细胞介导的细胞毒性和补体激活。抗体的Fc区包括在重链恒定结构域内，并且例如能够与位于细胞表面的Fc受体相互作用。
组装和体细胞突变后的抗体基因的序列高度改变，并且估计这些改变的基因编码1010种不同抗体分子(Immunoglobulin Genes[免疫球蛋白基因],第2版,Jonio等人编辑,Academic Press[学术出版社],San Diego,CA[加利福尼亚州圣地亚哥],1995)。因此，免疫系统提供了免疫球蛋白组库。术语“组库”是指完全或部分衍生自至少一种编码至少一种免疫球蛋白的序列的至少一种核苷酸序列。一种或多种序列可以通过重链的V、D和J区段以及轻链的V和J区段的体内重排来产生。可替代地，一种或多种序列可以响应于发生重排，例如体外刺激而从细胞产生。可替代地，一种或多种序列的一部分或全部可以通过DNA剪接、核苷酸合成、诱变和其他方法获得，参见例如美国专利5,565,332。组库可以仅包括一种序列或可以包括多种序列，包括遗传多样性集合中的序列。
术语“Fc部分”或“Fc单体”关于本发明意指包含至少一个具有CH2结构域功能的结构域和至少一个具有免疫球蛋白分子的CH3结构域功能的结构域的多肽。从术语“Fc单体”显而易见，包含那些CH结构域的多肽是“多肽单体”。Fc单体可以是至少包含排除重链的第一恒定区免疫球蛋白结构域(CH1)的免疫球蛋白恒定区的片段，但至少保持一个CH2结构域的功能部分和一个CH3结构域的功能部分的多肽，其中CH2结构域在CH3结构域的氨基末端。在这个定义的优选方面中，Fc单体可以是包含Ig-Fc铰链区、CH2区和CH3区的一部分的多肽恒定区，其中铰链区在CH2结构域的氨基末端。设想本发明的铰链区促进二聚化。例如但不限于，此类Fc多肽分子可以通过木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白区(当然产生两个Fc多肽的二聚体)获得。在这个定义的另一方面中，Fc单体可以是包含CH2区和CH3区的一部分的多肽区。例如但不限于，此类Fc多肽分子可以通过胃蛋白酶消化免疫球蛋白分子获得。在一个实施例中，Fc单体的多肽序列基本上类似于以下的Fc多肽序列：IgG1 Fc区、IgG2 Fc区、IgG3Fc区、IgG4 Fc区、IgM Fc区、IgA Fc区、IgD Fc区和IgE Fc区。(参见，例如Padlan,Molecular Immunology[分子免疫学],31(3),169-217(1993))。因为免疫球蛋白之间存在一些变化，并且仅为了清楚起见，所以Fc单体是指IgA、IgD和IgG的最后两个重链恒定区免疫球蛋白结构域，以及IgE和IgM的最后三个重链恒定区免疫球蛋白结构域。如上所提及，Fc单体还可以包括在这些结构域的N末端的柔性铰链。对于IgA和IgM，Fc单体可以包括J链。对于IgG，Fc部分包含免疫球蛋白结构域CH2和CH3以及前两个结构域与CH2之间的铰链。尽管Fc部分的边界可以改变，但包含功能铰链、CH2和CH3结构域的人IgG重链Fc部分的实例可以定义为例如包含残基D231(铰链结构域的残基-对应于下表1中的D234)至CH3结构域的羧基末端的P476，分别地L476(对于IgG4)，其中根据Kabat编号。经由肽接头彼此融合的两个Fc部分或Fc单体定义本发明的抗体构建体的第三结构域，该第三结构域也可以被定义为scFc结构域。
在本发明的一个实施例中，设想如本文披露的scFc结构域，分别地彼此融合的Fc单体仅包括在抗体构建体的第三结构域中。
根据本发明，可以使用表1中列出的Kabat编号通过类推来鉴定IgG铰链区。根据上述，设想本发明的铰链结构域/区域包含根据Kabat编号的对应于D234至P243的IgG1序列拉伸物的氨基酸残基。同样设想，本发明的铰链结构域/区域包含或由IgG1铰链序列DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:182)组成(对应于如下表1所示的拉伸物D234至P243-也设想所述序列的变异，只要铰链区仍然促进二聚化)。在本发明的优选的实施例中，通过N314X取代去除抗体构建体的第三结构域中CH2结构域的Kabat位置314处的糖基化位点，其中X是除Q之外的任何氨基酸。所述取代优选为N314G取代。在更优选的实施例中，所述CH2结构域另外包含以下取代(根据Kabat的位置)：V321C和R309C(这些取代在Kabat位置309和321处引入结构域内半胱氨酸二硫桥)。
还设想本发明的抗体构建体的第三结构域按氨基至羧基顺序包含或由以下组成：DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:182)(即铰链)-CH2-CH3-接头-DKTHTCPPCP(SEQ ID NO:182)(即铰链)-CH2-CH3。在优选的实施例中，上述抗体构建体的肽接头的特征在于氨基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly4Ser(SEQ ID NO:187)，或其聚合物，即(Gly4Ser)x，其中x为5或更大的整数(例如5、6、7、8等或更大)，优选为6((Gly4Ser)6)。所述构建体可以进一步包含上述取代N314X，优选地N314G和/或另外的取代V321C和R309C。在如前文定义的本发明抗体构建体的优选的实施例中，设想第二结构域与人和/或猕猴CD3ε链的细胞外表位结合。
表1：铰链区的氨基酸残基的Kabat编号
Figure BDA0002998948640000371
在本发明的另外实施例中，铰链结构域/区域包含或由以下组成：IgG2亚型铰链序列ERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:183)、IgG3亚型铰链序列ELKTPLDTTHTCPRCP(SEQ ID NO:184)或ELKTPLGDTTHTCPRCP(SEQ ID NO:185)和/或IgG4亚型铰链序列ESKYGPPCPSCP(SEQ IDNO:186)。IgG1亚型铰链序列可以是以下一种EPKSCDKTHTCPPCP(如表1和SEQ ID NO:183中所示)。因此，在本发明的上下文中也设想了这些核心铰链区。
IgG CH2和IgG CD3结构域的位置和序列可以使用表2中列出的Kabat编号通过类推来鉴定：
表2：IgG CH2和CH3区域的氨基酸残基的Kabat编号
Figure BDA0002998948640000381
在本发明的一个实施例中，使第一或两个Fc单体的CH3结构域中粗体强调的氨基酸残基缺失。
第三结构域的多肽单体(“Fc部分”或“Fc单体”)彼此融合的肽接头优选包含至少25个氨基酸残基(25、26、27、28、29、30等)。更优选地，这个肽接头包含至少30个氨基酸残基(30、31、32、33、34、35等)。还优选地，接头包含至多40个氨基酸残基、更优选地至多35个氨基酸残基、最优选地恰好30个氨基酸残基。该肽接头的优选的实施例的特征在于氨基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly4Ser(SEQ ID NO:187)，或其聚合物，即(Gly4Ser)x，其中x为5或更大的整数(例如6、7或8)。优选地，整数为6或7，更优选地整数为6。
在使用接头来将第一结构域与第二结构域融合或将第一结构域或第二结构域与第三结构域融合的情况下，该接头优选地具有足以确保第一结构域和第二结构域中的每一者均可以彼此独立地保留其差异结合特异性的长度和序列。对于连接本发明的抗体构建体中的至少两个结合结构域(或两个可变结构域)的肽接头，仅包含少数量的氨基酸残基(例如12个氨基酸残基或更少)的那些肽接头是优选的。因此，12、11、10、9、8、7、6或5个氨基酸残基的肽接头是优选的。设想的具有少于5个氨基酸的肽接头包含4、3、2或1个氨基酸，其中富含Gly的接头是优选的。用于融合第一结构域和第二结构域的肽接头的优选的实施例在SEQ ID NO:1中描绘。用于融合第二结构域和第三结构域的肽接头的优选接头实施例是(Gly)4-接头，分别为G4-接头。
在上述一种“肽接头”的上下文中特别优选的“单一”氨基酸是Gly。因此，所述肽接头可以由单一氨基酸Gly组成。在本发明的优选的实施例中，肽接头的特征在于氨基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly4Ser(SEQ ID NO:187)，或其聚合物，即(Gly4Ser)x，其中x为1或更大的整数(例如2或3)。优选的接头在SEQ ID No:1至12中描绘。包括不促进二级结构的所述肽接头的特征是本领域中已知的并且描述于例如Dall’Acqua等人(Biochem.[生物化学](1998)37,9266-9273)、Cheadle等人(Mol Immunol[分子免疫学](1992)29,21-30)以及Raag和Whitlow(FASEB[美国实验生物学联合会会志](1995)9(1),73-80)中。此外不促进任何二级结构的肽接头是优选的。所述结构域彼此的连接可以例如通过基因工程提供，如实例中所述。用于制备融合的且可操作地连接的双特异性单链构建体并在哺乳动物细胞或细菌中表达它们的方法是本领域中熟知的(例如WO 99/54440或Sambrook等人,MolecularCloning:A Laboratory Manual[分子克隆：实验室手册],Cold Spring HarborLaboratory Press[冷泉港实验室出版社],Cold Spring Harbor[冷泉港],纽约,2001)。
在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，第一结构域和第二结构域以选自由以下组成的组的形式形成抗体构建体：(scFv)2、scFv-单结构域mAb、双抗体和这些形式中的任一种的寡聚物。
根据特别优选的实施例，并如所附实例所记载，本发明抗体构建体的第一结构域和第二结构域是“双特异性单链抗体构建体”、更优选双特异性“单链Fv”(scFv)。尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由独立的基因编码，但使用重组方法可以将他们通过合成接头接合，如上文所述，该合成接头使它们能够制得为单条蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成单价分子；参见，例如Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA[美国国家科学院院刊]85:5879-5883。使用本领域技术人员已知的常规技术获得这些抗体片段，并且按照与完整或全长抗体相同的方式评价片段的功能。因此，单链可变片段(scFv)是免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)可变区的融合蛋白，通常利用约10至约25个氨基酸，优选地约15至20个氨基酸的短接头肽连接。接头通常富含甘氨酸以获得柔韧性，以及富含丝氨酸或苏氨酸以获得溶解性，并且可以连接VH的N末端和VL的C-末端，或反之亦然。尽管去除了恒定区并引入了接头，但该蛋白质保留了原始免疫球蛋白的特异性。
双特异性单链抗体构建体在本领域中是已知的并描述于以下中：WO 99/54440、Mack,J.Immunol.[免疫学杂志](1997),158,3965-3970、Mack,PNAS[美国国家科学院院刊],(1995),92,7021-7025、Kufer,Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学免疫治疗],(1997),45,193-197、
Figure BDA0002998948640000401
Blood[血液],(2000),95,6,2098-2103、Brühl,Immunol.[免疫学],(2001),166,2420-2426、Kipriyanov,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志],(1999),293,41-56。描述的用于产生单链抗体的技术(尤其参见美国专利4,946,778；Kontermann和Dübel(2010),上述引文和Little(2009),上述引文)可以适用于产生特异性识别一种或多种所选择的靶的单链抗体构建体。
二价(bivalent)(也称为双价(divalent))或双特异性单链可变片段(具有形式(scFv)2的二-scFv或双-scFv)可以通过连接两个scFv分子(例如利用如上文所述的接头)来工程化。如果这两个scFv分子具有相同的结合特异性，则所得(scFv)2分子将优选称为二价的(即，对于相同的靶表位具有两个价)。如果两个scFv分子具有不同的结合特异性，则所得(scFv)2分子将优选称为双特异性的。连接可以通过产生具有两个VH区和两个VL区的单一肽链从而产生串联scFv来进行(参见，例如Kufer P.等人,(2004)Trends inBiotechnology[生物技术趋势]22(5):238-244)。另一种可能性是产生具有接头肽的scFv分子，这些接头肽对于两个可变区来说太短以致于不能折叠在一起(例如约五个氨基酸)，从而迫使scFv二聚化。这物种型被称为双抗体(参见，例如Hollinger,Philipp等人,(1993年7月)Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica[美国国家科学院院刊]90(14):6444-8)。
根据本发明，第一结构域、第二结构域或第一结构域和第二结构域可以包含单结构域抗体，分别地单结构域抗体的可变结构域或至少CDR。单结构域抗体仅包含一个(单体)抗体可变结构域，该抗体可变结构域能够独立于其他V区或结构域而选择性结合特定抗原。第一单结构域抗体是从骆驼中发现的重链抗体工程化而来，并且这些被称为VHH片段。软骨鱼类也具有重链抗体(IgNAR)，可以从这些重链抗体中获得称为VNAR片段的单结构域抗体。可替代的方法是将来自常见免疫球蛋白，例如来自人或啮齿动物的二聚体可变结构域分裂成单体，因此获得作为单结构域Ab的VH或VL。尽管对单结构域抗体的大多数研究目前都是基于重链可变结构域，但是也已经显示衍生自轻链的纳米抗体特异性结合靶表位。单结构域抗体的实例是所谓的sdAb、纳米抗体或单可变结构域抗体。
因此，(单结构域mAb)2是由(至少)两个单结构域单克隆抗体构成的单克隆抗体构建体，该两个单结构域单克隆抗体单独地选自下组，该组包括：VH、VL、VHH和VNAR。接头优选呈肽接头的形式。类似地，“scFv-单结构域mAb”是由至少一个如上所述的单结构域抗体和一个如上所述的scFv分子构成的单克隆抗体构建体。同样，接头优选呈肽接头的形式。
抗体构建体是否与另一给定抗体构建体竞争结合可以在竞争测定(如竞争性ELISA或基于细胞的竞争测定)中测量。也可以使用抗生物素蛋白偶联的微粒(珠粒)。与抗生物素蛋白涂覆的ELISA板类似，当与生物素化蛋白质反应时，这些珠粒中的每一个都可用作可在其上进行测定的底物。将抗原涂覆在珠粒上，并且然后用第一抗体预涂覆。添加第二抗体并且确定任何另外的结合。用于读出的可能手段包括流式细胞术。
T细胞或T淋巴细胞是在细胞介导的免疫中发挥核心作用的一类淋巴细胞(其本身是一类白细胞)。存在若干个T细胞亚组，每个亚组具有不同的功能。T细胞可以因细胞表面上存在T细胞受体(TCR)而与其他淋巴细胞(如B细胞和NK细胞)区分开。TCR负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原，并且由两种不同的蛋白质链构成。在95％的T细胞中，TCR由阿尔法(α)和贝塔(β)链组成。当TCR与抗原肽和MHC(肽/MHC复合物)接合时，T淋巴细胞通过一系列由相关酶、共受体、专门化衔接子分子和激活或释放的转录因子介导的生物化学事件而被激活。
CD3受体复合物是一种蛋白质复合物，并且由四条链构成。在哺乳动物中，复合物含有CD3γ(伽马)链、CD3δ(德尔塔)链和两条CD3ε(伊普西龙)链。这些链与T细胞受体(TCR)和所谓的ζ(截塔)链缔合以形成T细胞受体CD3复合物并在T淋巴细胞中生成激活信号。CD3γ(伽马)、CD3δ(德尔塔)和CD3ε(伊普西龙)链是含有单一细胞外免疫球蛋白结构域的免疫球蛋白超家族的高度相关的细胞表面蛋白。CD3分子的细胞内尾含有对于TCR的信号传导能力所必需的单一保守基序，称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或简称ITAM。CD3ε分子是一种多肽，该多肽在人中由位于染色体11上的CD3E基因编码。CD3ε的最优选的表位包括在人CD3ε细胞外结构域的氨基酸残基1-27内。设想根据本发明的抗体构建体典型地并且有利地显示出更少的非特异性T细胞激活，这在特异性免疫疗法中是不需要的。这意味着副作用的风险降低。
经由多特异性(至少双特异性)抗体构建体募集T细胞对靶细胞的再定向溶解涉及溶细胞突触形成以及穿孔素和颗粒酶的递送。所接合的T细胞能够连续靶细胞溶解，并且不受干扰肽抗原加工和呈递或克隆T细胞分化的免疫逃逸机制的影响；参见，例如WO 2007/042261。
能以各种方式测量由本发明的抗体构建体介导的细胞毒性。效应细胞可以是例如刺激的富集的(人)CD8阳性T细胞或未刺激的(人)外周血单核细胞(PBMC)。如果靶细胞是猕猴起源的或表达的或用第一结构域结合的猕猴靶细胞表面抗原转染，则效应细胞也应是猕猴起源的，如猕猴T细胞系，例如4119LnPx。靶细胞应表达靶细胞表面抗原(至少细胞外结构域)，例如人或猕猴靶细胞表面抗原。靶细胞可以是用靶细胞表面抗原(例如人或猕猴靶细胞表面抗原)稳定或瞬时转染的细胞系(如CHO)。可替代地，靶细胞可以是靶细胞表面抗原阳性天然表达细胞系。对于在细胞表面上表达较高水平的靶细胞表面抗原的靶细胞系，预期EC50值通常较低。效应细胞与靶细胞(E:T)比率通常为约10:1，但也可以改变。靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的细胞毒活性可以在51Cr-释放测定(约18小时的孵育时间)或在基于FACS的细胞毒性测定(约48小时的孵育时间)中测量。也可能对测定孵育时间(细胞毒性反应)进行修改。其他测量细胞毒性的方法对本领域技术人员来说是熟知的，并且包括MTT或MTS测定、基于ATP的测定(包括生物发光测定)、磺基罗丹明B(SRB)测定、WST测定、克隆生成测定和ECIS技术。
优选在基于细胞的细胞毒性测定中测量由本发明的靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体介导的细胞毒活性。其也可以在51Cr-释放测定中测量。其由EC50值表示，该值对应于半数最大有效浓度(诱导在基线与最大值之间的中途的细胞毒性应答的抗体构建体的浓度)。优选地，靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的EC50值≤5000pM或≤4000pM、更优选≤3000pM或≤2000pM、甚至更优选≤1000pM或≤500pM、甚至更优选≤400pM或≤300pM、甚至更优选≤200pM、甚至更优选≤100pM、甚至更优选≤50pM、甚至更优选≤20pM或≤10pM、并且最优选≤5pM。
上述给定的EC50值可以在不同的测定中测量。本领域技术人员知道，当使用刺激/富集的CD8+T细胞作为效应细胞时，与未刺激的PBMC相比，可以预期EC50值较低。此外可以预期，与低靶表达大鼠相比，当靶细胞表达大量靶细胞表面抗原时，EC50值较低。例如，当使用刺激/富集的人CD8+T细胞作为效应细胞(并且使用靶细胞表面抗原转染的细胞如CHO细胞或靶细胞表面抗原阳性人细胞系作为靶细胞)时，靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的EC50值优选≤1000pM、更优选≤500pM、甚至更优选≤250pM、甚至更优选≤100pM、甚至更优选≤50pM、甚至更优选≤10pM、并且最优选≤5pM。当使用人PBMC作为效应细胞时，靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的EC50值优选≤5000pM或≤4000pM(特别是当靶细胞是靶细胞表面抗原阳性人细胞系时)、更优选≤2000pM(特别是当靶细胞是靶细胞表面抗原转染的细胞如CHO细胞时)、更优选≤1000pM或≤500pM、甚至更优选≤200pM、甚至更优选≤150pM、甚至更优选≤100pM、并且最优选≤50pM或更低。当使用猕猴T细胞系如LnPx4119作为效应细胞并且使用猕猴靶细胞表面抗原转染的细胞系如CHO细胞作为靶细胞系时，靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的EC50值优选≤2000pM或≤1500pM、更优选≤1000pM或≤500pM、甚至更优选≤300pM或≤250pM、甚至更优选≤100pM、并且最优选≤50pM。
优选地，本发明的靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体不诱导/介导溶解或基本上不诱导/介导靶细胞表面抗原阴性细胞如CHO细胞的溶解。术语“不诱导溶解”、“基本上不诱导溶解”、“不介导溶解”或“基本不介导溶解”意指本发明的抗体构建体不诱导或介导超过30％，优选不超过20％，更优选不超过10％，特别优选不超过9％、8％、7％、6％或5％的靶细胞表面抗原阴性细胞的溶解，由此将靶细胞表面抗原阳性人细胞系的溶解设定为100％。这通常适用于浓度高达500nM的抗体构建体。本领域技术人员知道如何毫不费力地测量细胞溶解。此外，本说明书教导了如何测量细胞溶解的具体说明。
单个的靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的单体与二聚体同种型之间细胞毒活性的差异称为“效能间隙”。该效能间隙可以例如计算为分子的单体与二聚体形式的EC50值之间的比率。本发明的靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体的效能间隙优选≤5、更优选≤4、甚至更优选≤3、甚至更优选≤2、并且最优选≤1。
本发明的抗体构建体的第一结合结构域和/或第二(或任何其他)结合结构域优选对于灵长类哺乳动物目的成员具有跨物种特异性。跨物种特异性CD3结合结构域例如描述于WO 2008/119567中。根据一个实施例，除了分别与人靶细胞表面抗原和人CD3结合之外，第一结合结构域和/或第二结合结构域还将与灵长类动物的靶细胞表面抗原/CD3结合，这些灵长类动物包括(但不限于)新大陆灵长类动物(如狨毛猴、绒顶柽柳猴或松鼠猴)、旧大陆灵长类动物(如狒狒和猕猴)、长臂猿和非人类人亚科。
在本发明的抗体构建体的一个实施例中，第一结构域结合人靶细胞表面抗原并进一步结合猕猴靶细胞表面抗原(如食蟹猕猴的靶细胞表面抗原)，并且更优选地，结合在表面猕猴细胞上表达的猕猴靶细胞表面抗原。第一结合结构域对猕猴靶细胞表面抗原的亲和力优选≤15nM、更优选≤10nM、甚至更优选≤5nM，甚至更优选≤1nM、甚至更优选≤0.5nM、甚至更优选≤0.1nM、并且最优选≤0.05nM或甚至≤0.01nM。
优选地，根据本发明的抗体构建体对结合猕猴靶细胞表面抗原对人靶细胞表面抗原[ma靶细胞表面抗原:hu靶细胞表面抗原]的亲和力间隙(如例如通过BiaCore或通过Scatchard分析确定)<100、优选<20、更优选<15、进一步优选<10、甚至更优选<8、更优选<6并且最优选<2。根据本发明的抗体构建体对结合猕猴靶细胞表面抗原对人靶细胞表面抗原的亲和性间隙的优选范围在0.1与20之间、更优选在0.2与10之间、甚至更优选在0.3与6之间、甚至更优选在0.5与3之间或在0.5与2.5之间、并且最优选在0.5与2之间或在0.6与2之间。
本发明的抗体构建体的第二(结合)结构域与人CD3ε和/或猕猴CD3ε结合。在优选的实施例中，第二结构域进一步与绒毛猴、绒顶柽柳猴或松鼠猴CD3ε结合。狨毛猴和绒顶柽柳猴两者均是属于狨亚科(Callitrichidae)的新大陆灵长类动物，而松鼠猴是属于悬猴科(Cebidae)的新大陆灵长类动物。
对于本发明的抗体构建体优选的是，与人和/或猕猴CD3的细胞外表位结合的第二结构域包含含有选自以下的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区：
(a)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:27中所描绘的CDR-L1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:28中所描绘的CDR-L2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:29中所描绘的CDR-L3；
(b)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:117中所描绘的CDR-L1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:118中所描绘的CDR-L2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:119中所描绘的CDR-L3；以及
I如WO 2008/119567的SEQ ID NO:153中所描绘的CDR-L1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:154中所描绘的CDR-L2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:155中所描绘的CDR-L3。
在本发明的抗体构建体的同样优选的实施例中，与人和/或猕猴CD3ε链的细胞外表位结合的第二结构域包含含有选自以下的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区：
(a)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:12中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:13中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:14中所描绘的CDR-H3；
(b)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:30中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:31中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:32中所描绘的CDR-H3；
I如WO 2008/119567的SEQ ID NO:48中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQID NO:49中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:50中所描绘的CDR-H3；
(d)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:66中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:67中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:68中所描绘的CDR-H3；
I如WO 2008/119567的SEQ ID NO:84中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQID NO:85中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:86中所描绘的CDR-H3；
(f)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:102中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:103中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:104中所描绘的CDR-H3；
(g)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:120中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:121中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:122中所描绘的CDR-H3；
(h)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:138中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:139中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:140中所描绘的CDR-H3；
(i)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:156中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:157中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:158中所描绘的CDR-H3；以及
(j)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:174中所描绘的CDR-H1，如WO 2008/119567的SEQ ID NO:175中所描绘的CDR-H2以及如WO 2008/119567的SEQ ID NO:176中所描绘的CDR-H3。
在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，将上述三组VL CDR与上述十组VH CDR在第二结合结构域内组合以形成(30)组，每组包含CDR-L 1-3和CDR-H 1-3。
对于本发明的抗体构建体优选的是，与CD3结合的第二结构域包含选自由以下组成的组的VL区：如WO 2008/119567的SEQ ID NO:17、21、35、39、53、57、71、75、89、93、107、111、125、129、143、147、161、165、179或183中所描绘的或SEQ ID NO:200中所描绘的VL区。
同样优选的是，与CD3结合的第二结构域包含选自由以下组成的组的VH区：如WO2008/119567的SEQ ID NO:15、19、33、37、51、55、69、73、87、91、105、109、123、127、141、145、159、163、177或181中所描绘的或SEQ ID NO:201中所描绘的VH区。
最优选地，本发明的抗体构建体的特征在于与CD3结合的第二结构域包含选自由以下组成的组的VL区和VH区：
(a)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:17或21中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:15或19中所描绘的VH区；
(b)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:35或39中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:33或37中所描绘的VH区；
I如WO 2008/119567的SEQ ID NO:53或57中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:51或55中所描绘的VH区；
(d)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:71或75中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:69或73中所描绘的VH区；
I如WO 2008/119567的SEQ ID NO:89或93中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:87或91中所描绘的VH区；
(f)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:107或111中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:105或109中所描绘的VH区；
(g)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:125或129中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:123或127中所描绘的VH区；
(h)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:143或147中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:141或145中所描绘的VH区；
(i)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:161或165中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:159或163中所描绘的VH区；以及
(j)如WO 2008/119567的SEQ ID NO:179或183中所描绘的VL区和如WO 2008/119567的SEQ ID NO:177或181中所描绘的VH区。
关于本发明的抗体构建体还优选的是，与CD3结合的第二结构域包含如SEQ IDNO:200中所描绘的VL区和如SEQ ID NO:201中所描绘的VH区。
根据本发明的抗体构建体的优选的实施例，第一结构域和/或第二结构域具有以下形式：VH区和VL区的对是呈单链抗体(scFv)的形式。VH和VL区以VH-VL或VL-VH的顺序排列。优选的是，VH区位于接头序列的N末端，并且VL区位于接头序列的C末端。
本发明的上述抗体构建体的优选的实施例的特征在于结合CD3的第二结构域包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：WO 2008/119567的SEQ ID NO:23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187或在SEQ ID NO:202中所描绘的。
抗体构建体的共价修饰也包括在本发明的范围内，并且通常但不总是在翻译后进行。例如，通过使抗体构建体的特定氨基酸残基与能够与选择的侧链或N或C末端残基反应的有机衍生剂反应，将抗体构建体的若干物种型的共价修饰引入到分子中。
半胱氨酰残基最常见地与α-卤代乙酸酯(和相应的胺)，如氯乙酸或氯乙酰胺反应，以得到羧甲基或羧酰胺甲基衍生物。半胱氨酰残基还可以通过与溴三氟丙酮、α-溴-β-(5-咪唑基)丙酸、磷酸氯乙酰酯、N-烷基马来酰亚胺、3-硝基-2-吡啶基二硫化物、甲基2-吡啶基二硫化物、对氯汞苯甲酸酯、2-氯汞-4-硝基苯酚或氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑反应来衍生出。
组氨酰残基是通过在pH 5.5-7.0下与焦碳酸二乙酯反应衍生出，因为这种制剂对组氨酰侧链具有相对特异性。对溴苯甲酰甲基溴也是有用的；该反应优选在pH 6.0下在0.1M二甲胂酸钠中进行。赖氨酰残基和氨基末端残基与琥珀酸酐或其他羧酸酐反应。用这些药剂衍生化具有逆转赖氨酰残基的电荷的效应。用于衍生含α-氨基的残基的其他适合试剂包括亚氨酸酯，如甲基吡啶亚胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；硼氢化氯；三硝基苯磺酸；O-甲基异脲；2,4-戊二酮；以及转氨酶催化的与乙醛酸盐的反应。
精氨酰残基通过与一种或若干种常规试剂(其中苯甲酰甲醛、2,3-丁二酮、1,2-环己二酮和茚三酮)反应而被修饰。由于胍官能团的高pKa，因此精氨酸残基的衍生化要求反应在碱性条件下进行。此外，这些试剂可以与赖氨酸基团以及精氨酸ε-氨基基团反应。
可以对酪氨酰残基进行特定修饰，特别感兴趣的是通过与芳族重氮化合物或四硝基甲烷反应将光谱标记引入到酪氨酰残基中。最常见地，将N-乙酰基咪唑和四硝基甲烷分别用于形成O-乙酰基酪氨酰物质和3-硝基衍生物。使用125I或131I碘化酪氨酰残基以制备用于放射免疫测定的标记蛋白质，上述氯胺T法是适合的。
羧基侧基团(天冬氨酰基或谷氨酰基)通过与碳二亚胺(R’—N＝C＝N–R’)反应而选择性地修饰，其中R和R’任选为不同的烷基基团，例如1-环己基-3-(2-吗啉基-4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3-(4-氮鎓-4,4-二甲基戊基)碳二亚胺。此外，天冬氨酰残基和谷氨酰残基通过与铵离子反应转化为天冬酰胺酰残基和谷氨酰胺酰残基。
用双功能剂衍生化可用于将本发明的抗体构建体交联到水不溶性载体基质或表面以用于多种方法中。常用的交联剂包括例如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯基乙烷、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯(例如与4-叠氮基水杨酸的酯)、同双官能亚氨酸酯，包括二琥珀酰亚胺酯，如3,3’-二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)、和双官能马来酰亚胺，如双-N-马来酰亚胺-1,8-辛烷。衍生剂如3-[(对叠氮基苯基)二硫代]丙酰亚胺酸甲酯产生能够在光存在下形成交联的可光活化中间体。可替代地，反应性水不溶性基质如溴化氰活化的碳水化合物和反应性底物，如美国专利号3,969,287；3,691,016；4,195,128；4,247,642；4,229,537；和4,330,440所述，用于蛋白质固定。
谷氨酰胺酰残基和天冬酰胺酰残基通常分别脱酰胺成相应的谷氨酰残基和天冬氨酰残基。可替代地，这些残基在弱酸性条件下脱酰胺。这些残基的任一形式都属于本发明的范围。
其他修饰包括对脯氨酸和赖氨酸的羟基化、对丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化、对赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties[蛋白质：结构和分子特性],W.H.Freeman&Co.[W.H.弗里曼公司],San Francisco[旧金山],1983,第79-86页)、对N末端胺的乙酰化和对任何C末端羧基的酰胺化。
包括在本发明范围内的抗体构建体的另一物种型的共价修饰包括改变蛋白质的糖基化模式。如本领域中已知的，糖基化模式可以取决于蛋白质的序列(例如，下文论述的特定糖基化氨基酸残基的存在或不存在)或其中产生蛋白质的宿主细胞或生物体。下面论述特定的表达系统。
多肽的糖基化典型地是N-连接或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分连接至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X为除脯氨酸以外的任何氨基酸)是将碳水化合物部分酶促连接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，在多肽中这些三肽序列中的任一个的存在产生潜在的糖基化位点。O-连接糖基化是指将糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一种连接至羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
通过改变氨基酸序列以使得它含有上述三肽序列中的一者或多者(对于N-连接的糖基化位点)，而方便地完成向抗体构建体添加糖基化位点。还可以通过向起始序列(对于O-连接的糖基化位点)添加或取代为一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来作出改变。为了方便起见，抗体构建体的氨基酸序列优选通过DNA水平的变化来改变，特别是通过在预选碱基处突变编码多肽的DNA，以使得产生将翻译成所希望氨基酸的密码子。
增加抗体构建体上的碳水化合物部分的数量的另一种手段是通过将糖苷化学或酶促偶联至蛋白质。这些程序的有利之处在于它们不需要在具有用于N-和O-连接的糖基化的糖基化能力的宿主细胞中产生蛋白质。取决于所使用的偶联方式，一种或多种糖可连接至(a)精氨酸和组氨酸，(b)游离羧基，(c)游离巯基，如半胱氨酸的那些，(d)游离羟基，如丝氨酸、苏氨酸或羟基脯氨酸的那些，I芳香族残基，如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的那些，或(f)谷氨酰胺的酰胺基团。这些方法描述于WO87/05330以及Aplin和Wriston,1981,CRCCrit.Rev.Biochem.[CRC生物化学关键评论],第259-306页中。
存在于起始抗体构建体上的碳水化合物部分的去除可以通过化学或酶促方式完成。化学去糖基化要求将蛋白质暴露于化合物三氟甲磺酸，或等效化合物。该处理导致除连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)以外的大多数或所有糖裂解，同时使多肽保持完整。化学去糖基化由Hakimuddin等人,1987,Arch.Biochem.Biophys.[生物化学与生物物理学集刊]259:52和Edge等人,1981,Anal.Biochem.[分析生物化学]118:131描述。多肽上碳水化合物部分的酶促裂解可以通过使用多种内切糖苷酶和外切糖苷酶实现，如由Thotakura等人,1987,Meth.Enzymol.[酶学方法]138:350所述的。可以通过使用化合物衣霉素防止潜在糖基化位点处的糖基化，如由Duskin等人,1982,J.Biol.Chem.[生物化学杂志]257:3105所述的。衣霉素阻断蛋白质-N-糖苷键的形成。
本文还考虑抗体构建体的其他修饰。例如，抗体构建体的另一种类型的共价修饰包括以美国专利号4,640,835、4,496,689、4,301,144、4,670,417、4,791,192或4,179,337中示出的方式将抗体构建体连接至各种非蛋白质聚合物，包括但不限于各种多元醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧化烯或聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物。此外，如本领域中已知的，可以在抗体构建体内的不同位置进行氨基酸取代，例如以有利于添加聚合物如PEG。
在一些实施例中，本发明的抗体构建体的共价修饰包括添加一个或多个标记。标记基团可以经由各种长度的间隔臂与抗体构建体偶联以减少潜在的空间位阻。用于标记蛋白质的各种方法在本领域中是已知的并且可以用于进行本发明。术语“标记”或“标记基团”是指任何可检测的标记。一般来讲，标记属于多种类别，这取决于将检测它们的测定-以下实例包括但不限于：
a)同位素标记，这些同位素标记可以是放射性同位素或重同位素，如放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、89Zr、90Y、99Tc、111In、125I、131I)
b)磁性标记(例如磁性颗粒)
c)氧化还原活性部分
d)光学染料(包括但不限于，生色团、磷光体和荧光团)，如荧光基团(例如FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)、化学发光基团和荧光团，这些荧光团可以是“小分子”荧光剂或蛋白质荧光剂
e)酶促基团(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)
f)生物素化基团
g)由第二报道子识别的预定多肽表位(例如，亮氨酸拉链对序列、第二抗体的结合侧、金属结合结构域、表位标签等)
“荧光标记”意指可以经由其固有的荧光特性检测到的任何分子。适合的荧光标记包括但不限于荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明、伊红、赤藓红、香豆素、甲基-香豆素、芘、孔雀石绿、二苯乙烯、荧光黄、瀑布蓝J、德克萨斯红、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC红640、Cy5、Cy5.5、LC红705、俄勒冈绿、Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、AlexaFluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、瀑布蓝、瀑布黄和R-藻红蛋白(PE)(俄勒冈州尤金市的分子探针公司(Molecular Probes,Eugene,OR))、FITC、罗丹明和德克萨斯红(伊利诺伊州罗克福德的皮尔斯公司(Pierce,Rockford,IL))、Cy5、Cy5.5、Cy7(宾夕法尼亚州匹兹堡市的阿默舍姆生命科学公司(Amersham Life Science,Pittsburgh,PA))。适合的光学染料(包括荧光团)描述于Richard P.Haugland的Molecular Probes Handbook[分子探针手册]中。
适合的蛋白质荧光标记还包括但不限于绿色荧光蛋白，包括海肾(Renilla)、海笔(Ptilosarcus)或水母(Aequorea)物种的GFP(Chalfie等人,1994,Science[科学]263:802-805)；EGFP(克罗泰克实验室有限公司(Clontech Laboratories,Inc.)，基因库登录号U55762)、蓝色荧光蛋白(BFP，量子生物科技有限公司(Quantum Biotechnologies,Inc.)，加拿大魁北克省蒙特利尔(Montreal,Quebec,Canada)迈松纳夫大道西部(de MaisonneuveBlvd.West)1801，第8层，H3H 1J9)；Stauber,1998,Biotechniques[生物技术]24:462-471；Heim等人,1996,Curr.Biol.[当代生物学]6:178-182)、增强型黄色荧光蛋白(EYFP，克罗泰克实验室有限公司)、萤光素酶(Ichiki等人,1993,J.Immunol.[免疫学杂志]150:5408-5417)、β半乳糖苷酶(Nolan等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]85:2603-2607)和海肾(WO92/15673、WO95/07463、WO98/14605、WO98/26277、WO99/49019、美国专利号5,292,658、5,418,155、5,683,888、5,741,668、5,777,079、5,804,387、5,874,304、5,876,995、5,925,558)。
本发明的抗体构建体还可以包含另外的结构域，这些结构域例如有助于分离分子或涉及分子的适应性药代动力学分布。有助于分离抗体构建体的结构域可以选自肽基序或辅助性地引入的部分，这些部分可以在分离方法(例如分离柱)中捕获。此类另外的结构域的非限制性实施例包括称为Myc-标签、HAT-标签、HA-标签、TAP-标签、GST-标签、几丁质结合结构域(CBD-标签)、麦芽糖结合蛋白(MBP-标签)、Flag-标签、Strep-标签以及其变体(例如StrepII-标签)和His-标签的肽基序。以鉴定的CDR为特征的本文披露的所有抗体构建体都可以包含His-标签结构域，该His-标签结构域通常称为分子的氨基酸序列中的连续His残基重复序列、优选5个、且更优选6个His残基(六组氨酸)。His-标签可以位于例如抗体构建体的N或C末端，优选地它位于C末端。最优选地，六组氨酸标签(HHHHHH)(SEQ ID NO:199)经由肽键连接至根据本发明的抗体构建体的C末端。另外，PLGA-PEG-PLGA的缀合物体系可以与聚组氨酸标签组合用于缓释应用和改善的药代动力学分布。
还考虑了本文所述的抗体构建体的氨基酸序列修饰。例如，可能需要改善抗体构建体的结合亲和力和/或其他生物特性。通过将适当核苷酸变化引入到抗体构建体核酸或通过肽合成来制备抗体构建体的氨基酸序列变体。所有下面描述的氨基酸序列修饰均应产生仍然保留未修饰的亲本分子的所希望生物活性(与靶细胞表面抗原和CD3结合)的抗体构建体。
术语“氨基酸”或“氨基酸残基”典型地是指具有其本领域公认的定义的氨基酸，如选自由以下组成的组的氨基酸：丙氨酸(Ala或A)；精氨酸(Arg或R)；天冬酰胺(Asn或N)；天冬氨酸(Asp或D)；半胱氨酸(Cys或C)；谷氨酰胺(Gin或Q)；谷氨酸(Giu或E)；甘氨酸(Giy或G)；组氨酸(His或H)；异亮氨酸(He或I)；亮氨酸(Leu或L)；赖氨酸(Lys或K)；蛋氨酸(Met或M)；苯丙氨酸(Phe或F)；脯氨酸(Pro或P)；丝氨酸(Ser或S)；苏氨酸(Thr或T)；色氨酸(Trp或W)；酪氨酸(Tyr或Y)；以及缬氨酸(Val或V)，尽管可以根据需要使用修饰的、合成的或稀有的氨基酸。一般来讲，氨基酸可以分组为具有非极性侧链(例如Ala、Cys、He、Leu、Met、Phe、Pro、Val)；具有带负电的侧链(例如Asp、Giu)；具有带正电的侧链(例如Arg、His、Lys)；或具有不带电的极性侧链(例如Asn、Cys、Gin、Giy、His、Met、Phe、Ser、Thr、Trp和Tyr)。
氨基酸修饰包括例如抗体构建体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。进行缺失、插入和取代的任何组合以达到最终构建体，条件是最终的构建体具有所希望的特征。氨基酸变化还可以改变抗体构建体的翻译后过程，如改变糖基化位点的数目或位置。
例如，可以在每个CDR中插入、取代或缺失1、2、3、4、5或6个氨基酸(当然，取决于其长度)，而可以在每个FR中插入、取代或缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25个氨基酸。优选地，氨基酸序列插入到抗体构建体中包括与含有100个或更多个残基的多肽的长度范围为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个残基的氨基和/或羧基末端融合物，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。也可以在本发明的抗体构建体的第三结构域内进行相应的修饰。本发明的抗体构建体的插入变体包括与酶的抗体构建体的N末端或C末端的融合或与多肽的融合。
取代诱变最感兴趣的位点包括(但不限于)重链和/或轻链的CDR，特别是高变区，但也考虑重链和/或轻链的FR改变。取代优选地是如本文所述的保守取代。优选地，可以在CDR中取代1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸，而可以在框架区(FR)中取代1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25个氨基酸，这取决于CDR或FR的长度。例如，如果CDR序列涵盖6个氨基酸，则设想这些氨基酸中的1个、2个或3个被取代。类似地，如果CDR序列涵盖15个氨基酸，则设想这些氨基酸中的1个、2个、3个、4个、5个或6个被取代。
用于鉴定作为优选诱变位置的抗体构建体的某些残基或区域的有用方法称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells于Science[科学],244:1081-1085(1989)中所述的。在此，鉴定了抗体构建体内的残基或靶残基组(例如带电残基，如arg、asp、his、lys和glu)并且用中性或带负电的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)替换以影响氨基酸与表位的相互作用。
然后通过在取代位点处或为取代位点引入进一步的或其他变体来精炼那些展示对取代具有功能敏感性的氨基酸位置。因此，虽然用于引入氨基酸序列变化的位点或区域是预定的，但突变本身的性质无需预定。例如，为了分析或优化给定位点处突变的性能，可以在靶密码子或区域处进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且筛选所表达的抗体构建体变体以获得所希望活性的最优组合。用于在具有已知序列的DNA中的预定位点进行取代突变的技术是熟知的，例如，M13引物诱变和PCR诱变。使用抗原结合活性(如靶细胞表面抗原或CD3结合)的测定来筛选突变体。
一般来讲，如果氨基酸在重链和/或轻链的一个或多个或所有CDR中被取代，则优选的是，之后获得的“取代的”序列与“初始”CDR序列具有至少60％或65％、更优选70％或75％、甚至更优选80％或85％并且特别优选90％或95％同一性。这意指该取代取决于CDR的长度与“取代”序列的相同程度。例如，具有5个氨基酸的CDR优选与其取代序列80％相同，以便取代至少一个氨基酸。因此，抗体构建体的CDR可以与其取代的序列具有不同程度的同一性，例如CDRL1可以具有80％，而CDRL3可以具有90％。
优选的取代(或替代)是保守取代。然而，只要抗体构建体保留其经由第一结构域与靶细胞表面抗原结合并且经由第二结构域与CD3，分别地CD3ε结合的能力和/或其CDR与之后取代的序列具有同一性(与“原始”CDR序列具有至少60％或65％，更优选70％或75％，甚至更优选80％或85％并且特别优选90％或95％同一性)，则设想出任何取代(包括非保守取代或来自下表3中列出的“示例性取代”的一个或多个)。
保守取代示于表3中“优选取代”标题之下。如果此类取代导致生物活性变化，则可以将在表3中命名为“示例性取代”或如在下文参考氨基酸类别进一步所述的更实质性变化引入，并且筛选产物以获得所希望的特征。
表3：氨基酸取代
Figure BDA0002998948640000551
本发明的抗体构建体的生物特性的实质性修饰是通过选择在保持以下的效应方面显著不同的取代来完成：(a)取代区域中的多肽骨架的结构，例如呈折叠或螺旋构象，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(c)侧链的大部分。基于共同的侧链特性将天然存在的残基分组：(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；(3)酸性：asp、gln；(4)碱性：his、lys、arg；(5)影响链取向的残基：gly、pro；以及(6)芳香族的：trp、tyr、phe。
非保守性取代将需要将这些类别中一类别的成员换成另一类别。任何不参与维持抗体构建体的适当构象的半胱氨酸残基通常可以被丝氨酸取代，以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可以将一个或多个半胱氨酸键添加至抗体以改善其稳定性(特别是在抗体是抗体片段(如Fv片段)的情况下)。
对于氨基酸序列，通过使用本领域已知的标准技术确定序列同一性和/或相似性，包括但不限于，Smith和Waterman,1981,Adv.Appl.Math.[高级应用数学]2:482的局部序列同一性算法、Needleman和Wunsch,1970,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]48:443的序列同一性比对算法、Pearson和Lipman,1988,Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]85:2444的相似性方法的检索、这些算法的计算机化实现(威斯康星遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机集团，575科学大道，麦德逊，威斯康星州(GeneticsComputer Group,575Science Drive,Madison,Wis.))、Devereux等人,1984,Nucl.AcidRes.[核酸研究]12:387-395所述的最佳匹配序列程序，优选地使用默认设置，或通过检查。优选地，通过FastDB基于以下参数计算同一性百分比：错配罚分为1；空位罚分为1；空位大小罚分为0.33；以及连接罚分为30，“Current Methods in Sequence Comparison andAnalysis[序列比较和分析的当前方法]”,Macromolecule Sequencing and Synthesis[大分子测序与合成],Selected Methods and Applications[所选择的方法与应用],第127-149页(1988),Alan R.Liss公司。
有用的算法的实例是PILEUP。PILEUP使用渐进式成对比对从一组相关序列中创建多序列比对。它还可以绘制显示用于创建比对的聚类关系的树形图。PILEUP使用Feng和Doolittle,1987,J.Mol.Evol.[分子进化杂志]35:351-360的渐进式比对方法的简单化；该方法类似于Higgins和Sharp,1989,CABIOS 5:151-153所述的方法。有用的PILEUP参数包括3.00的默认空位权重、0.10的默认空位长度权重和加权末端空位。
有用的算法的另一实例是BLAST算法，描述于以下中：Altschul等人,1990,J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410；Altschul等人,1997,Nucleic Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402；和Karin等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]90:5873-5787。特别有用的BLAST程序是从Altschul等人,1996,Methods inEnzymology[酶学方法]266:460-480获得的WU-BLAST-2程序。WU-BLAST-2使用若干个搜索参数，其中大部分都设定为默认值。将可调整参数设置为以下值：重叠间隔＝1，重叠分数＝0.125，字阈值(T)＝II。HSP S和HSP S2参数是动态值，并且由程序本身根据特定序列的组成和特定数据库的组成来确立，根据该特定数据库来搜索感兴趣的序列；然而，可以调整这些值以增加灵敏度。
另外有用的算法是由Altschul等人,1993,Nucl.Acids Res.[核酸研究]25:3389-3402报道的空位BLAST。空位BLAST使用BLOSUM-62取代评分；阈值T参数设定为9；触发非空位扩展的双击方法，对k的空位长度收取10+k的成本；Xu设定为16，并且Xg设定为40(用于数据库搜索阶段)以及67(用于算法的输出阶段)。空位比对由对应于约22比特的评分触发。
一般来讲，各个变体CDR或VH/VL序列之间的氨基酸同源性、相似性或同一性与本文描绘的序列是至少60％，并且更典型地具有至少65％或70％，更优选至少75％或80％，甚至更优选至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和几乎100％的优选增加的同源性或同一性。以类似的方式，相对于本文中鉴定的结合蛋白的核酸序列的“百分比(％)核酸序列同一性”被定义为候选序列中与抗体构建体的编码序列中的核苷酸残基相同的核苷酸残基的百分比。具体方法利用设定为默认参数的WU-BLAST-2的BLASTN模块，重叠间隔和重叠分数分别设定为1和0.125。
一般来讲，编码各个变体CDR或VH/VL序列的核苷酸序列与本文描绘的核苷酸序列之间的核酸序列同源性、相似性或同一性是至少60％，并且更典型地具有至少65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％和几乎100％的优选增加的同源性或同一性。因此，“变体CDR”或“变体VH/VL区”是与本发明的亲本CDR/VH/VL具有指定的同源性、相似性或同一性，并且共享生物功能，包括但不限于亲本CDR或VH/VL的特异性和/或活性的至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
在一个实施例中，根据本发明的抗体构建体与人种系的同一性百分比为≥70％或≥75％，更优选≥80％或≥85％，甚至更优选≥90％，并且最优选≥91％、≥92％、≥93％、≥94％、≥95％或甚至≥96％。与人抗体种系基因产物的同一性被认为是降低治疗期间治疗性蛋白引发患者中针对药物的免疫应答的风险的重要特征。Hwang和Foote(“Immunogenicity of engineered antibodies[工程化抗体的免疫原性]”；Methods[方法]36(2005)3-10)证明了药物抗体构建体的非人部分的减少导致治疗期间患者中诱导抗药物抗体的风险降低。通过比较无数临床评价的抗体药物和相应免疫原性数据，显示以下趋势：抗体的V区的人源化使得蛋白质免疫原性(平均5.1％的患者)比携带未改变的非人V区的抗体(平均23.59％的患者)更低。因此，呈抗体构建体形式的基于V区的蛋白质治疗剂需要与人序列具有较高程度的同一性。出于确定种系同一性的目的，可以使用Vector NTI软件将VL的V区与人种系V区段和J区段(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)的氨基酸序列进行比对并且通过将相同的氨基酸残基除以VL的氨基酸残基总数计算氨基酸序列(以百分比计)。对于VH区段(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)同样适用的，只是由于VH CDR3的高度多样性和缺少现有人种系VH CDR3比对配偶体，因此可以排除VH CDR3。然后可以使用重组技术来增加与人抗体种系基因的序列同一性。
在另一实施例中，本发明的双特异性抗体构建体在标准研究规模条件下，例如在标准的两步纯化过程中表现出高单体产率。优选地，根据本发明的抗体构建体的单体产率为≥0.25mg/L上清液、更优选≥0.5mg/L、甚至更优选≥1mg/L、并且最优选≥3mg/L上清液。
同样地，可以确定抗体构建体的二聚体抗体构建体同种型的产率，并由此确定单体百分比(即，单体:(单体+二聚体))。单体和二聚体抗体构建体的生产率和计算的单体百分比可以例如在来自在滚瓶中标准化研究规模生产的培养物上清液的SEC纯化步骤中获得。在一个实施例中，抗体构建体的单体百分比为≥80％、更优选≥85％、甚至更优选≥90％、并且最优选≥95％。
在一个实施例中，抗体构建体的优选血浆稳定性(具有血浆的EC50与无血浆的EC50的比率)为≤5或≤4、更优选≤3.5或≤3、甚至更优选≤2.5或≤2、并且最优选≤1.5或≤1。抗体构建体的血浆稳定性可以通过将构建体在37℃下在人血浆中孵育24小时，之后在51铬释放细胞毒性测定中确定EC50来测试。细胞毒性测定中的效应细胞可以为刺激的富集的人CD8阳性T细胞。靶细胞可以是例如用人靶细胞表面抗原转染的CHO细胞。效应细胞与靶细胞(E:T)比率可以选择为10:1。用于此目的的人血浆库来源于由EDTA涂覆的注射器收集的健康供体的血液。通过离心去除细胞组分，并且收集上层血浆相并随后汇集。作为对照，在RPMI-1640培养基中的细胞毒性测定之前立即稀释抗体构建体。血浆稳定性计算为EC50(血浆孵育后)与EC50(对照)的比率。
此外优选的是，本发明的抗体构建体的单体到二聚体的转化较低。可以在不同条件下测量转化并且通过高性能尺寸排阻色谱进行分析。例如，抗体构建体的单体同种型的孵育可以在37℃以及例如100μg/ml或250μg/ml的浓度下在孵育箱中进行7天。在这些条件下，优选的是，本发明的抗体构建体显示出≤5％、更优选≤4％、甚至更优选≤3％、甚至更优选≤2.5％、甚至更优选≤2％、甚至更优选≤1.5％并且最优选≤1％或≤0.5％或甚至0％的二聚体百分比。
还优选的是，本发明的双特异性抗体构建体在多个冷冻/解冻循环后以非常低的二聚体转化存在。例如，将抗体构建体单体在例如通用配制缓冲剂中调整至浓度为250μg/ml，并且进行三个冷冻/解冻循环(在-80℃下冷冻30min，之后在室温下解冻30min)，之后进行高性能SEC以确定已经转化成二聚体抗体构建体的最初单体抗体构建体的百分比。优选地，例如在三个冷冻/解冻循环之后，双特异性抗体构建体的二聚体百分比为≤5％、更优选≤4％、甚至更优选≤3％、甚至更优选≤2.5％、甚至更优选≤2％、甚至更优选≤1.5％、并且最优选≤1％或甚至≤0.5％。
本发明的双特异性抗体构建体优选显示出聚集温度≥45℃或≥50℃、更优选≥52℃或≥54℃、甚至更优选≥56℃或≥57℃、并且最优选≥58℃或≥59℃的有利热稳定性。热稳定性参数可以根据抗体聚集温度如下确定：将浓度为250μg/ml的抗体溶液转移到一次性比色杯中并置于动态光散射(DLS)装置中。将样品以0.5℃/min的加热速率从40℃加热至70℃，恒定获取测量的半径。使用指示蛋白质和聚集物熔融的半径增加来计算抗体的聚集温度。
可替代地，可以通过差示扫描量热法(DSC)确定温度熔融曲线以确定抗体构建体的固有生物物理学蛋白质稳定性。这些实验使用微凯尔有限公司(MicroCal LLC)(美国马萨诸塞州的北安普顿(Northampton,MA,U.S.A))VP-DSC装置进行。与仅含有配制缓冲剂的样品相比，从20℃至90℃记录含有抗体构建体的样品的能量摄取。将抗体构建体例如在SEC运行缓冲剂中调整至250μg/ml的终浓度。为了记录相应熔融曲线，逐步升高整个样品温度。在每个温度T下，记录样品和配制缓冲剂参考物的能量摄取。将样品的能量摄取Cp(千卡/摩尔/℃)减去参考物的差针对相应温度作图。熔融温度被定义为第一次最大能量摄取时的温度。
还设想本发明的靶细胞表面抗原xCD3双特异性抗体构建体具有≤0.2、优选≤0.15、更优选≤0.12、甚至更优选≤0.1并且最优选≤0.08的浊度(如在将纯化的单体抗体构建体浓缩至2.5mg/ml并过夜孵育后通过OD340测量的)。
此外设想，本发明的双特异性抗体构建体表现出治疗功效或抗肿瘤活性。这可以例如在以下晚期人肿瘤异种移植模型的实例中披露的研究中评估：
本领域技术人员知道如何修改或调整该研究的某些参数，如注射的肿瘤细胞的数量、注射位点、移植的人T细胞的数量、要施用的双特异性抗体构建体的量以及时间线，同时仍然获得有意义且可再现的结果。优选地，肿瘤生长抑制T/C[％]为≤70或≤60、更优选≤50或≤40、甚至更优选≤30或≤20并且最优选≤10或≤5或甚至≤2.5。
在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，抗体构建体是单链抗体构建体。
另外，在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，所述第三结构域按氨基至羧基顺序包含：
铰链-CH2-CH3-接头-铰链-CH2-CH3。
另外，在本发明的一个实施例中，第三结构域的一个或优选每个(两个)多肽单体的CH2结构域包含结构域内半胱氨酸二硫桥。如本领域所知，术语“半胱氨酸二硫桥”是指具有通式结构R–S–S–R的官能团。该键联也称为SS键或二硫桥，并且通过半胱氨酸残基的两个硫醇基团的偶联来衍生。对于本发明的抗体构建体特别优选的是，将成熟抗体构建体中形成半胱氨酸二硫桥的半胱氨酸引入到对应于309和321(Kabat编号)的CH2结构域的氨基酸序列中。
在本发明的一个实施例中，去除CH2结构域的Kabat位置314中的糖基化位点。优选的是，通过N314X取代实现糖基化位点的去除，其中X是除Q之外的任何氨基酸。所述取代优选为N314G取代。在更优选的实施例中，所述CH2结构域另外包含以下取代(根据Kabat的位置)：V321C和R309C(这些取代在Kabat位置309和321处引入结构域内半胱氨酸二硫桥)。
假定与例如本领域中已知的双特异性异源Fc抗体构建体相比(图1b)本发明的抗体构建体的优选特征可以尤其涉及在CH2结构域中引入上述修饰。因此，对于本发明的构建体优选的是，本发明的抗体构建体的第三结构域中的CH2结构域在Kabat位置309和321处包含结构域内半胱氨酸二硫桥和/或Kabat位置314处的糖基化位点通过上述N314X取代去除，优选地通过N314G取代去除。
在本发明的另一个优选的实施例中，本发明的抗体构建体的第三结构域中的CH2结构域在Kabat位置309和321处包含结构域内半胱氨酸二硫桥并且Kabat位置314处的糖基化位点通过N314G取代去除。
在一个实施例中，本发明提供了抗体构建体，其中：
(182)该第一结构域包含两个抗体可变结构域，并且该第二结构域包含两个抗体可变结构域；
(ii)该第一结构域包含一个抗体可变结构域，并且该第二结构域包含两个抗体可变结构域；
(iii)该第一结构域包含两个抗体可变结构域，并且该第二结构域包含一个抗体可变结构域；或
(iv)该第一结构域包含一个抗体可变结构域，并且该第二结构域包含一个抗体可变结构域。
因此，第一结构域和第二结构域可以是各自包含两个抗体可变结构域(如VH和VL结构域)的结合结构域。此类包含两个抗体可变结构域的结合结构域的实例在上文进行了描述并且包括例如上文所述的Fv片段、scFv片段或Fab片段。可替代地，这些结合结构域中的一个或两个可以仅包含单一可变结构域。这种单结构域结合结构域的实例在上文进行了描述并且包括例如纳米抗体或仅包含一个可变结构域的单一可变结构域抗体，该一个可变结构域可以是独立于其他V区或结构域特异性结合抗原或表位的VHH、VH或VL。
在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，第一结构域和第二结构域经由肽接头与第三结构域融合。优选的肽接头已在上文描述并且特征在于氨基酸序列Gly-Gly-Gly-Gly-Ser，即Gly4Ser(SEQ ID NO:187)，或其聚合物，即(Gly4Ser)x，其中x为1或更大的整数(例如2或3)。用于第一结构域和第二结构域与第三结构域融合的特别优选的接头在SEQ IDNo:1中描绘。
在优选的实施例中，本发明的抗体构建体的特征在于按氨基至羧基顺序包含：
(a)第一结构域；
(b)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID No:187-189；
I第二结构域；
(d)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:187、188、189、195、196、197和198；
I第三结构域的第一多肽单体；
(f)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID No:191、192、193和194；以及
(g)第三结构域的第二多肽单体。
在本发明的一个方面中，由第一结构域结合的靶细胞表面抗原是肿瘤抗原、对免疫障碍特异的抗原或病毒抗原。如本文使用的术语“肿瘤抗原”可以理解为呈递在肿瘤细胞上的那些抗原。这些抗原可以呈递在具有细胞外部分的细胞表面上，该细胞外部分通常与分子的跨膜和细胞质部分组合。这些抗原有时只能由肿瘤细胞呈递，而从来不能由正常细胞呈递。与正常细胞相比，肿瘤抗原可以只在肿瘤细胞上表达或者可以代表肿瘤特异性突变。在这种情况下，它们被称为肿瘤特异性抗原。更常见的是由肿瘤细胞和正常细胞呈递的抗原，并且它们被称为肿瘤相关抗原。与正常细胞相比，这些肿瘤相关抗原可以过表达，或者由于肿瘤组织的结构与正常组织相比较不紧密，因此是肿瘤细胞中的抗体结合可接近的。本文使用的肿瘤抗原的非限制性实例是CDH19、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、CD33、CD19、MUC17、CLDN18.2、CDH3、CD70、BCMA和PSMA。
在本发明的上下文中，对免疫障碍特异的其他靶细胞表面抗原包括例如TL1A和TNF-α。所述靶优选通过本发明的双特异性抗体构建体解决，其优选是全长抗体。在一个非常优选的实施例中，本发明的抗体是异源IgG抗体。
在本发明的抗体构建体的优选的实施例中，肿瘤抗原，优选地肿瘤抗原选自由以下组成的组：CDH19、MSLN、DLL3、FLT3、EGFRvIII、CD33、CD19、、MUC17、CLDN18.2、CDH3、CD70、BCMA和PSMA。
在本发明的一个方面中，抗体构建体按氨基至羧基顺序包含：
(a)第一结构域，该第一结构域具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ IDNo:7、8、17、27、28、37、38、39、40、41、48、49、50、51、52、59、60、61、62、63、64、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、89、90、91、92、93、100、101、102、103、104、113、114、121、122、123、124、125、131、132、133、134、135、136、143、144、145、146、147、148、149、150、151、158、159、160、161、162、163、164、165、166、173、174、175、176、177、178、179、180、181、223、235和246，
(b)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID No:187-189；
I第二结构域，该第二结构域具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：WO 2008/119567的SEQ ID No:23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185或187或SEQ ID NO:202；
(d)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID No:187、188、189、195、196、197和198；
I第三结构域的第一多肽单体，该第一多肽单体具有选自由以下组成的组的多肽序列：WO2017/134140的SEQ ID No:17-24；
(f)肽接头，该肽接头具有选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID No:191、192、193和194；以及
(g)第三结构域的第二多肽单体，该第二多肽单体具有选自由以下组成的组的多肽序列：WO2017/134140的SEQ ID No:17-24。
在一方面，本发明的双特异性抗体构建体的特征在于具有选自由以下组成的组的氨基酸序列并且针对相应靶细胞表面抗原：
(a)SEQ ID No:27、28、37至41； CD33
(b)SEQ ID No:48至52中的每一个； EGFRvIII
(c)SEQ ID No:59至64中的每一个； MSLN
(d)SEQ ID No:71至82中的每一个 CDH19
(e)SEQ ID No:100至104中的每一个 DLL3
(f)SEQ ID NO:7、8、17、113和114 CD19
(g)SEQ ID No:89至93中的每一个 FLT3
(h)SEQ ID No:121至125中的每一个 CDH3
(i)SEQ ID No:132至136中的每一个 BCMA
(j)SEQ ID No:143至151、158至166和173至181中的每一个 PSMA
(k)SEQ ID NO:213 MUC17
(l)SEQ ID NO:225和237中的每一个 CLDN18.2和
(m)SEQ ID No:248 CD70
本发明进一步提供了编码本发明的抗体构建体的多核苷酸/核酸分子。多核苷酸是由共价键合在链中的13个或更多个核苷酸单体构成的生物聚合物。DNA(如cDNA)和RNA(如mRNA)是具有不同生物功能的多核苷酸的实例。核苷酸是充当核酸分子如DNA或RNA的单体或亚单位的有机分子。核酸分子或多核苷酸可以为双链和单链的、线性的和圆形的。它优选包含在载体中，该载体优选包含在宿主细胞中。所述宿主细胞例如在用本发明的载体或多核苷酸转化或转染后能够表达抗体构建体。出于此目的，多核苷酸或核酸分子与控制序列可操作地连接。
遗传密码是将遗传物质(核酸)内编码的信息翻译成蛋白质的一组规则。活细胞中的生物解码是通过以由mRNA指定的顺序连接氨基酸的核糖体，使用tRNA分子携带氨基酸并一次读出mRNA三个核苷酸来完成。该密码定义了这些核苷酸三联体的序列(称为密码子)如何指定在蛋白质合成期间接下来将添加哪种氨基酸。除了一些例外，核酸序列中的三核苷酸密码子指定单一氨基酸。因为绝大多数基因都使用完全相同的密码进行编码，所以该特定密码通常称为规范或标准遗传密码。虽然遗传密码决定给定编码区的蛋白质序列，但其他基因组区可能会影响这些蛋白质产生的时间和地点。
此外，本发明提供了载体，该载体包含本发明的多核苷酸/核酸分子。载体是用作将(外来)遗传物质转移到细胞中的媒介物的核酸分子。术语“载体”涵盖但不限于质粒、病毒、粘粒和人造染色体。一般来讲，工程化载体包含复制起点、多克隆位点和选择性标记。载体本身通常是核苷酸序列，该核苷酸序列通常是包含插入物(转基因)和充当载体的“骨架”的更大序列的DNA序列。除转基因插入物和骨架外，现代载体可涵盖其他特征：启动子、遗传标记、抗生素抗性、报告基因、靶向序列、蛋白质纯化标签。称为表达载体(表达构建体)的载体尤其用于在靶细胞中表达转基因，并且通常具有控制序列。
术语“控制序列”是指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适用于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵子序列和核糖体结合侧。已知真核细胞利用启动子、聚腺苷酸化信号和增强子。
当核酸与另一核酸序列处于功能关系时，该核酸是“可操作地连接的”。例如，如果将前序列或分泌前导序列的DNA表达为参与多肽分泌的前蛋白，则该前序列或分泌前导序列的DNA可操作地连接至该多肽的DNA；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则该启动子或增强子可操作地连接至该序列；或者如果核糖体结合侧被定位成使得有助于翻译，则该核糖体结合侧可操作地连接至编码序列。一般来讲，“可操作地连接”意指所连接的DNA序列是连续的，并且在分泌性前导序列的情形下是连续的并处于阅读相(reading phase)中。然而，增强子不必是连续的。连接通过在方便的限制性位点进行接合来完成。如果不存在此类位点，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸衔接子或连接子。
“转染”是有意将核酸分子或多核苷酸(包括载体)引入到靶细胞中的过程。该术语主要用于真核细胞中的非病毒方法。转导通常用于描述病毒介导的核酸分子或多核苷酸的转移。动物细胞的转染典型地涉及打开细胞膜中的瞬时孔或“洞”，以允许摄取物质。转染可以使用磷酸钙，通过电穿孔，通过细胞挤压或通过将阳离子脂质与物质混合以产生脂质体(这些脂质体与细胞膜融合并将其货物存放在内部)来进行。
术语“转化”用于描述核酸分子或多核苷酸(包括载体)向细菌中，以及向非动物真核细胞(包括植物细胞)中的非病毒转移。因此，转化是细菌或非动物真核细胞的基因改变，该基因改变是因通过一个或多个细胞膜从其周围直接摄取并随后并入外源遗传物质(核酸分子)而产生。转化可以通过人为手段来实现。为了使转化发生，细胞或细菌必须处于感受态，这可能作为对如饥饿和细胞密度的环境条件的时间限制应答而发生。
此外，本发明提供了宿主细胞，该宿主细胞用本发明的多核苷酸/核酸分子或载体转化或转染。如本文使用的，术语“宿主细胞”或“受体细胞”旨在包括可以是或已经是载体、外源性核酸分子和编码本发明抗体构建体的多核苷酸的受体和/或抗体构建体本身的受体的任何单个细胞或细胞培养物。通过转化、转染等方式将相应物质引入到细胞中。术语“宿主细胞”还旨在包括单细胞的后代或潜在后代。因为某些修饰可能由于天然的、意外的或有意的突变或由于环境影响而在后代中发生，所以这种后代事实上可能与亲本细胞不完全相同(在形态或基因组或全部DNA补体中)，但仍包括在本文所用术语的范围内。适合的宿主细胞包括原核细胞或真核细胞，并且还包括但不限于细菌、酵母细胞、真菌细胞、植物细胞和动物细胞，如昆虫细胞和哺乳动物细胞，例如鼠、大鼠、猕猴或人。
本发明的抗体构建体可以在细菌中产生。表达后，将本发明的抗体构建体从大肠杆菌细胞糊中以可溶性级分分离，并且可以通过例如亲和色谱法和/或尺寸排除来纯化。最终纯化可以类似于用于纯化例如在CHO细胞中表达的抗体的方法进行。
除了原核生物之外，真核微生物(如丝状真菌或酵母)是本发明的抗体构建体的适合的克隆或表达宿主。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或普通面包酵母是低等真核宿主微生物中最常用的。然而，许多其他属、物种和菌株通常可获得并且可用于本文中，如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、克鲁维酵母属(Kluyveromyce)宿主，如乳酸克鲁维酵母(K.lactis)、脆壁克鲁维酵母(K.fragilis)(ATCC 12424)、保加利亚克鲁维酵母(K.bulgaricus)(ATCC 16045)、威克克鲁维酵母(K.wickeramii)(ATCC 24178)、瓦尔提鲁维酵母(K.waltii)(ATCC 56500)、果蝇克鲁维酵母(K.drosophilarum)(ATCC 36906)、耐热克鲁维酵母(K.thermotolerans)和马克斯克鲁维酵母(K.marxianus)；耶氏酵母属(EP402 226)；毕赤酵母(EP 183 070)；假丝酵母属；瑞氏木霉(EP 244 234)；粗糙脉孢菌；许旺酵母属(Schwanniomyces)，如西方许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)；和丝状真菌，如脉孢菌属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、弯颈霉属(Tolypocladium)和曲霉属(Aspergillus)宿主，如构巢曲霉(A.nidulans)和黑曲霉(A.niger)。
用于表达本发明的糖基化抗体构建体的适合的宿主细胞衍生自多细胞生物体。无脊椎动物细胞的实例包括植物细胞和昆虫细胞。已经鉴定了来自如草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)(毛虫)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)(蚊子)、白纹伊蚊(Aedesalbopictus)(蚊子)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)(果蝇)和家蚕(Bombyx mori)的宿主的许多杆状病毒株和变体以及相应的许可性昆虫宿主细胞。用于转染的多种病毒株是公众可获得的，例如苜蓿银纹夜蛾(Autographa californica)NPV的L-1变体和家蚕NPV的Bm-5株，并且根据本发明，此类病毒可以用作本文的病毒，特别是用于转染草地贪夜蛾细胞。
棉花、玉米、马铃薯、大豆、矮牵牛、番茄、拟南芥和烟草的植物细胞培养物也可以用作宿主。可用于在植物细胞培养物中产生蛋白质的克隆和表达载体是本领域技术人员已知的。参见，例如Hiatt等人,Nature[自然](1989)342:76-78；Owen等人(1992)Bio/Technology[生物/技术]10:790-794；Artsaenko等人(1995)The Plant J[植物杂志]8:745-750和Fecker等人(1996)Plant Mol Biol[植物分子生物学]32:979-986。
然而，对脊椎动物细胞的兴趣最大，并且脊椎动物细胞在培养物(组织培养物)中的繁殖已成为常规程序。有用的哺乳动物宿主细胞系的实例是由SV40(COS-7，ATCC CRL1651)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(293细胞或亚克隆用于在悬浮培养中生长的293细胞，Graham等人,J.Gen Virol.[普通病毒学杂志]36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL10)；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO，Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]77:4216(1980))；小鼠塞托利细胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.[生殖生物学]23:243-251(1980))；猴肾细胞(CVI ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCCCRL1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2,14138065)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL5 1)；TRI细胞(Mather等人,Annals N.YAcad.Sci.[纽约科学院年刊](1982)383:44-68)；MRC 5细胞；FS4细胞；和人肝癌细胞系(Hep G2)。
在另一实施例中，本发明提供了用于产生本发明的抗体构建体的方法，所述方法包括在允许表达本发明的抗体构建体的条件下培养本发明的宿主细胞并且从该培养物中回收所产生的抗体构建体。
如本文使用的，术语“培养”是指细胞在适合的条件下在培养基中的体外维持、分化、生长、增殖和/或繁殖。术语“表达”包括涉及产生本发明的抗体构建体的任何步骤，包括但不限于转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰和分泌。
当使用重组技术时，抗体构建体可以在周质空间中细胞内产生，或直接分泌到培养基中。如果抗体构建体是在细胞内产生，则作为第一步，例如通过离心或超滤去除宿主细胞或溶解片段的微粒状碎片。Carter等人,Bio/Technology[生物/技术]10:163-167(1992)描述了用于分离分泌到大肠杆菌周质空间的抗体的程序。简而言之，在约30min内，在乙酸钠(pH 3.5)、EDTA和苯甲基磺酰氟(PMSF)存在下使细胞糊解冻。可以通过离心去除细胞碎片。在将抗体分泌到培养基中的情况下，通常首先使用可商购的蛋白质浓缩滤器，例如Amicon或Millipore Pellicon超滤单元对来自此类表达系统的上清液进行浓缩。任何前述步骤中可以包括蛋白酶抑制剂(如PMSF)以抑制蛋白水解，并且可以包括抗生素以防止外来污染物的生长。
可以使用例如羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析和亲和色谱法回收或纯化从宿主细胞制备的本发明的抗体构建体。取决于要回收的抗体，也可使用其他用于蛋白质纯化的技术，如在离子交换柱上分级分离、乙醇沉淀、反相HPLC、在二氧化硅上进行的色谱法、在肝素SEPHAROSETM上进行的色谱法、在阴离子或阳离子交换树脂(如聚天冬氨酸柱)上进行的色谱法、色谱聚焦、SDS-PAGE、以及硫酸铵沉淀。当本发明的抗体构建体包含CH3结构域时，Bakerbond ABX树脂(美国贝克，菲利普斯堡，新泽西州(J.T.Baker，Phillipsburg，NJ))可用于纯化。
亲和色谱法是优选的纯化技术。亲和配体所连接的基质最常为琼脂糖，但其他基质也是可用的。在机械上稳定的基质如可控多孔玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯允许比用琼脂糖可以实现的更快的流速和更短的处理时间。
此外，本发明提供了药物组合物，该药物组合物包含本发明的抗体构建体或根据本发明的方法产生的抗体构建体。对于本发明的药物组合物优选的是，抗体构建体的均质性为≥80％，更优选≥81％、≥82％、≥83％、≥84％或≥85％，进一步优选≥86％、≥87％、≥88％、≥89％或≥90％，还进一步优选≥91％、≥92％、≥93％、≥94％或≥95％，并且最优选≥96％、≥97％、≥98％或≥99％。
如本文使用的，术语“药物组合物”涉及适合施用给患者，优选人患者的组合物。本发明的特别优选的药物组合物包含优选治疗有效量的一种或多种本发明的抗体构建体。优选地，药物组合物进一步包含一种或多种(药学上有效的)载剂、稳定剂、赋形剂、稀释剂、增溶剂、表面活性剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂的适合配制品。组合物的可接受成分优选在所使用的剂量和浓度下是对接受者无毒性的。本发明的药物组合物包括但不限于液体、冷冻和冻干组合物。
本发明组合物可以包含药学上可接受的载剂。一般来讲，如本文使用的，“药学上可接受的载剂”意指与药物施用，特别是肠胃外施用相容的任何和所有的水性和非水性溶液、无菌溶液、溶剂、缓冲剂(例如磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液)、水、悬浮液、乳液(如油/水乳液)、各物种型的润湿剂、脂质体、分散介质和包衣。此类介质和药剂在药物组合物中的使用在本领域中是熟知的，并且包含此类载剂的组合物可以通过熟知的常规方法配制。
某些实施例提供了药物组合物，这些药物组合物包含本发明的抗体构建体和另外一种或多种赋形剂，如在本部分和本文其他地方说明性描述的那些赋形剂。在这方面，赋形剂在本发明中可用于多种目的，如调整配制品的物理、化学或生物特性，如调整粘度和/或本发明的方法以改善有效性和/或稳定此类配制品和方法，以对抗由于例如在制造、运输、储存、使用前准备、施用和之后过程中发生的压力而导致的降解和腐坏。
在某些实施例中，药物组合物可以含有用于改变、保持或保存组合物的以下方面的目的的配制物质：例如pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附性或渗透性(参见REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明登氏药学全书],第18"版,(A.R.Genrmo编辑),1990,Mack Publishing Company[马克出版公司])。在此类实施例中，适合的配制物质可以包括但不限于：
·氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、苏氨酸、脯氨酸、2-苯丙氨酸，包括带电荷的氨基酸，优选赖氨酸、乙酸赖氨酸、精氨酸、谷氨酸盐和/或组氨酸
·抗微生物剂，如抗细菌剂和抗真菌剂
·抗氧化剂，如抗坏血酸、甲硫氨酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠；
·缓冲剂、缓冲系统和缓冲剂，用于将组合物保持在生理pH值或稍更低的pH值；缓冲剂的实例是硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其他有机酸、琥珀酸盐、磷酸盐和组氨酸；例如约pH 7.0-8.5的Tris缓冲剂；
·非水性溶剂，如丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油和可注射用有机酯如油酸乙酯；
·水性载剂包括水、醇/水性溶液、乳剂或悬浮液，包括盐水和缓冲的介质；
·生物可降解聚合物，如聚酯；
·膨胀剂，如甘露醇或甘氨酸；
·螯合剂，如乙二胺四乙酸(EDTA)；
·等渗剂和吸收延迟剂；
·络合剂(如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；
·填充剂；
·单糖；二糖；和其他碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖或糊精)；碳水化合物可以是非还原糖，优选海藻糖、蔗糖、八硫酸盐、山梨醇或木糖醇；
·(低分子量)蛋白质、多肽或蛋白质载剂，如人或牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白，优选是人来源的；
·着色剂和调味剂；
·含硫还原剂，如谷胱甘肽、硫辛酸、巯基乙酸钠、硫代甘油、[α]-一硫代甘油和硫代硫酸钠
·稀释剂；
·乳化剂；
·亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；
·成盐抗衡离子，如钠；
·防腐剂，如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等；实例是：苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢；
·金属复合物，如Zn-蛋白质复合物；
·溶剂和共溶剂(如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；
·糖和糖醇，如海藻糖、蔗糖、八硫酸盐、甘露醇、山梨醇或木糖醇水苏糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、肌糖(myoinisitose)、半乳糖、乳糖醇、核糖醇、肌肉肌醇(myoinisitol)、半乳糖醇、甘油、环多醇(例如肌醇)、聚乙二醇；和多元糖醇；
·悬浮剂；
·表面活性剂或润湿剂(如普朗尼克(pluronics)、PEG、脱水山梨聚糖、聚山梨醇酯(如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯)、氚核、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙星(tyloxapal))；表面活性剂可以是洗涤剂，优选分子量>1.2KD，和/或聚醚，优选分子量>3KD；优选洗涤剂的非限制性实例是吐温20、吐温40、吐温60、吐温80和吐温85；优选聚醚的非限制性实例是PEG 3000、PEG 3350、PEG 4000和PEG 5000；
·稳定性增强剂，如蔗糖或山梨醇；
·张力增强剂(如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾、甘露醇山梨醇)；
·肠胃外递送媒介物，包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发性油；
·静脉内递送媒介物，包括流体和营养补充物、电解质补充物(如基于林格氏右旋糖的那些)。
对于本领域技术人员来说明显的是，例如，药物组合物的不同成分(例如，上文列出的那些)可以具有不同的效应，并且氨基酸可以充当缓冲剂、稳定剂和/或抗氧化剂；甘露醇可以充当膨胀剂和/或张力增强剂；氯化钠可以充当递送媒介物和/或张力增强剂；等。
设想除了本文定义的本发明的多肽之外，本发明的组合物可以包含另外的生物活性剂，这取决于组合物的预期用途。此类药剂可以是作用于胃肠系统的药物、充当细胞抑制剂的药物、预防高尿酸血症的药物、抑制免疫反应的药物(例如皮质类固醇)、调节炎症应答的药物、作用于循环系统的药物和/或本领域中已知的药剂如细胞因子。还设想将本发明的抗体构建体应用于共疗法中，即与另一种抗癌药物组合。
在某些实施例中，最佳药物组合物将由本领域技术人员根据例如预期施用途径、递送形式和所希望剂量来确定。参见，例如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明登氏药学全书]，同上。在某些实施例中，此类组合物可以影响本发明的抗体构建体的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。在某些实施例中，药物组合物中的主要媒介物或载剂本质上可以是水性的或非水性的。例如，适合的媒介物或载剂可以是注射用水、生理盐水溶液或人造脑脊液，可能补充有用于肠胃外施用的组合物中常见的其他物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是另外的示例性媒介物。在某些实施例中，本发明抗体构建体组合物可以通过将具有所希望纯度的选定成分与任选配制品(REMINGTON’SPHARMACEUTICAL SCIENCES[雷明登氏药学全书]，同上)以冻干饼或水性溶液的形式混合来制备用于储存。此外，在某些实施例中，可以使用适当的赋形剂(如蔗糖)将本发明的抗体构建体配制成冻干物。
当考虑肠胃外施用时，用于本发明的治疗组合物能以无热原的肠胃外可接受的水性溶液的形式提供，该水性溶液在药学上可接受的媒介物中包含本发明的所希望抗体构建体。用于肠胃外注射的特别适合的媒介物是无菌蒸馏水，其中将本发明的抗体构建体配制成适当保存的无菌等渗溶液。在某些实施例中，该制备可以涉及用可以提供产物(该产物可以经由储库注射来递送)的受控或持续释放的药剂(如可注射微球体、生物可侵蚀颗粒、聚合物化合物(如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠粒或脂质体)配制所希望分子。在某些实施例中，也可以使用透明质酸，该透明质酸具有促进循环持续时间的作用。在某些实施例中，可植入药物递送装置可用于引入所希望的抗体构建体。
其他药物组合物对于本领域技术人员来说是显而易见的，包括在持续或控制递送/释放配制品中涉及本发明抗体构建体的配制品。用于配制各种其他持续或控制递送方式的技术(如脂质体载剂、生物可侵蚀微粒或多孔珠粒和储库注射)也是本领域技术人员已知的。参见，例如国际专利申请号PCT/US93/00829，其描述了用于递送药物组合物的多孔聚合物微粒的控制释放。持续释放制剂可以包括呈成型制品(例如膜或微胶囊)形式的半透性聚合物基质。持续释放基质可以包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯(如美国专利号3,773,919和欧洲专利申请公开号EP 058481中所披露)、L-谷氨酸和γ-L-谷氨酸乙酯的共聚物(Sidman等人,1983,Biopolymers[生物聚合物]2:547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等人,1981,J.Biomed.Mater.Res.[生物医学材料研究杂志]15:167-277和Langer,1982,Chem.Tech.[化学技术]12:98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人,1981,同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(欧洲专利申请公开号EP 133,988)。持续释放组合物还可以包括可以通过本领域中已知的若干种方法中的任一种制备的脂质体。参见，例如Eppstein等人,1985,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.[美国国家科学院院刊]82:3688-3692；欧洲专利申请公开号EP 036,676；EP 088,046和EP 143,949。
也可以将抗体构建体包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中，包埋在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)中或包埋在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明登氏药学全书],第16版,Oslo,A.编辑,(1980)中。
用于体内施用的药物组合物典型地以无菌制剂提供。灭菌可以通过无菌滤膜过滤完成。当将组合物冻干时，可以在冻干和重构之前或之后使用该方法进行灭菌。用于肠胃外施用的组合物能以冻干形式或于溶液中储存。通常将肠胃外组合物置入具有无菌进入口的容器(例如具有可由皮下注射针刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)中。
本发明的另一方面包括自缓冲的本发明抗体构建体配制品，这些配制品可用作药物组合物，如国际专利申请WO 06138181A2(PCT/US2006/022599)中所述。在这方面有用的蛋白质稳定和配制材料和方法，可以获得各种各样的说明，如Arakawa等人,“Solventinteractions in pharmaceutical formulations[药物配制品中的溶剂相互作用],”Pharm Res.[药物研究]8(3):285-91(1991)；Kendrick等人,“Physical stabilization ofproteins in aqueous solution[水性溶液中蛋白质的物理稳定化]”在RATIONAL DESIGNOF STABLE PROTEIN FORMULATIONS:THEORY AND PRACTICE[稳定蛋白质配制品的合理设计：理论与实践]中,Carpenter和Manning编辑Pharmaceutical Biotechnology[药物生物技术]13:61-84(2002)和Randolph等人,“Surfactant-protein interactions[表面活性剂-蛋白质相互作用]”,Pharm Biotechnol.[药物生物技术]13:159-75(2002)，特别参见关于根据本发明的自缓冲蛋白质配制品的相关赋形剂和方法的相关部分，尤其是关于用于兽医和/或人医学用途的蛋白质药物产品和方法。
根据本发明的某些实施例，可以使用盐以例如调整配制品的离子强度和/或等渗性和/或改善根据本发明的组合物的蛋白质或其他成分的溶解度和/或物理稳定性。众所周知，离子可以通过与蛋白质表面上的带电荷的残基结合并通过屏蔽蛋白质中的带电荷基团和极性基团并降低其静电相互作用、吸引和排斥相互作用的强度来稳定蛋白质的天然状态。离子还可以通过特别地与蛋白质的变性肽键(--CONH)结合来稳定蛋白质的变性状态。此外，与蛋白质中的带电荷基团和极性基团的离子相互作用还可以减少分子间静电相互作用，并且从而防止或减少蛋白质聚集和不溶解。
离子种类对蛋白质的作用显著不同。已经开发了多种对可用于配制根据本发明的药物组合物的离子及其对蛋白质的作用的分类评级。一个实例是Hofmeister系列，该系列通过对溶液中蛋白质的构象稳定性的作用来对离子和极性非离子溶质进行评级。稳定溶质称为“亲液的”。不稳定溶质称为“离液的”。通常使用高浓度的亲液剂(例如，>1摩尔硫酸铵)以从溶液中沉淀蛋白质(“盐析”)。通常使用离液剂来使蛋白质变性和/或溶解(“盐溶”)。离子对“盐溶”和“盐析”的相对有效性限定了其在Hofmeister系列中的位置。
根据本发明的各种实施例，游离氨基酸可在本发明抗体构建体配制品中作为膨胀剂、稳定剂和抗氧化剂以及其他标准用途。赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸和丙氨酸可用于稳定配制品中的蛋白质。甘氨酸可用于冻干以确保正确的饼结构和特性。在液体配制品和冻干配制品两者中，精氨酸均可用于抑制蛋白质聚集。蛋氨酸可用作抗氧化剂。
多元醇包括糖，例如甘露醇、蔗糖和山梨醇以及多元醇，如例如甘油和丙二醇，并且出于本文论述的目的，包括聚乙二醇(PEG)和相关物质。多元醇是亲液的。它们在液体配制品和冻干配制品两者中是有用的稳定剂，以保护蛋白质免受物理和化学降解过程的影响。多元醇也可用于调整配制品的张力。在本发明的选择实施例中有用的多元醇是甘露醇，甘露醇通常用于确保在冻干配制品中饼的结构稳定性。它确保了饼的结构稳定性。它通常与冻干保护剂(例如蔗糖)一起使用。山梨醇和蔗糖是用于调整张力且作为稳定剂以防止在运输过程中的冷冻-解冻应力或防止在制造过程中制备团块的优选药剂。还原糖(含有游离醛或酮基团)，如葡萄糖和乳糖，可以使表面赖氨酸和精氨酸残基糖基化。因此，它们通常不是根据本发明使用的优选多元醇。此外，在这方面，形成此类反应性物质的糖也不是本发明优选的多元醇，该糖如蔗糖，蔗糖在酸性条件下水解为果糖和葡萄糖并因此产生糖基化。PEG可用于稳定蛋白质并用作冷冻保护剂，并且在这方面可以用于本发明。
本发明抗体构建体配制品的实施例进一步包含表面活性剂。蛋白质分子可易于吸附在表面上，并且变性以及随后在空气-液体、固体-液体和液体-液体界面处聚集。这些效应通常与蛋白质浓度成反比。这些有害的相互作用通常与蛋白质浓度成反比，并且典型地因物理振荡(如在产品运输和处理过程中产生的物理振荡)而加剧。常规使用表面活性剂来防止、最小化或减少表面吸附。在这方面，本发明中有用的表面活性剂包括聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、脱水山梨醇聚乙氧基化物的其他脂肪酸酯、以及泊洛沙姆188。表面活性剂也常用于控制蛋白质构象稳定性。在这方面使用表面活性剂是蛋白质特异性的，因为任何给定的表面活性剂典型地会稳定一些蛋白质并使其他蛋白质不稳定。
聚山梨醇酯易于氧化降解，并且通常在供应时含有足够量的过氧化物以引起蛋白质残基侧链，尤其是甲硫氨酸的氧化。因此，应谨慎使用聚山梨醇酯，并且在使用时应以其最低有效浓度使用。在这方面，聚山梨醇酯例示了赋形剂应以其最低有效浓度使用的一般规则。
本发明抗体构建体配制品的实施例进一步包含一种或多种抗氧化剂。通过保持适当水平的环境氧气和温度并避免暴露于光下，可以在某种程度上防止药物配制品中蛋白质的有害氧化。也可以使用抗氧化赋形剂来防止蛋白质的氧化降解。在这方面，有用的抗氧化剂是还原剂、氧/自由基清除剂和螯合剂。用于根据本发明的治疗性蛋白质配制品中的抗氧化剂优选是水溶性的并且在整个产品的储存寿命内保持其活性。在这方面，EDTA是根据本发明的优选的抗氧化剂。抗氧化剂可以破坏蛋白质。例如，还原剂，如特别是谷胱甘肽，可以破坏分子内二硫键。因此，选择用于本发明的抗氧化剂尤其用于消除或足够降低其本身破坏配制品中的蛋白质的可能性。
根据本发明的配制品可以包含金属离子，这些金属离子是蛋白质辅助因子并且是形成蛋白质配位复合物所必需的，如形成某些胰岛素悬浮液所必需的锌。金属离子也可以抑制降解蛋白质的一些过程。然而，金属离子也催化降解蛋白质的物理和化学过程。镁离子(10-120mM)可用于抑制天冬氨酸异构化为异天冬氨酸。Ca+2离子(高达100mM)可以增加人脱氧核糖核酸酶的稳定性。然而，Mg+2、Mn+2和Zn+2可以使rhDNase去稳定。类似地，Ca+2和Sr+2可以稳定因子VIII，它可以因Mg+2、Mn+2和Zn+2、Cu+2和Fe+2去稳定，并且其聚集可以通过Al+3离子增加。
本发明抗体构建体配制品的实施例进一步包含一种或多种防腐剂。当开发涉及从同一容器提取超过一次的多剂量肠胃外配制品时，防腐剂是必需的。其主要功能是抑制微生物生长并确保在药物产品的整个保质期或使用期限内的产品无菌性。常用的防腐剂包括苯甲醇、苯酚和间甲酚。尽管防腐剂在小分子肠胃外使用方面有着悠久的历史，但包含防腐剂的蛋白质配制品的开发可能具有挑战性。防腐剂几乎总是对蛋白质具有不稳定效应(聚集)，并且这已成为限制其在多剂量蛋白质配制品中使用的主要因素。迄今为止，大部分蛋白质药物仅配制用于一次性使用。然而，当多剂量配制品是可能时，它们具有使患者方便的附加优势和增加的可销售性。一个良好的实例是人生长激素(hGH)，其中防腐配制品的开发已经导致更方便、多次使用的注射笔展示的商业化。至少四种含有hGH的防腐配制品的此类笔装置目前可在市场上获得。Norditropin(液体，诺和诺德公司(Novo Nordisk))、Nutropin AQ(液体，基因泰克公司(Genentech))和Genotropin(冻干的--双室药筒，法玛西亚普强公司(Pharmacia&Upjohn))含有苯酚，而Somatrope(礼来公司(Eli Lilly))用间-甲酚进行配制。在防腐剂型的配制和开发期间需要考虑若干个方面。必须优化药物产品中有效的防腐剂浓度。这需要以赋予抗微生物有效性而不损害蛋白质稳定性的浓度范围测试剂型中给定的防腐剂。
正如可以预期的那样，含有防腐剂的液体配制品的开发比冻干配制品更具挑战性。冷冻干燥的产品可以在没有防腐剂的情况下冻干，并且在使用时用含有防腐剂的稀释剂重构。这缩短了防腐剂与蛋白质接触的时间，从而显著最小化相关的稳定性风险。在液体配制品的情况下，应在整个产品保质期(约18至24个月)内保持防腐剂有效性和稳定性。要指出的重要点是，防腐剂有效性应在含有活性药物和所有赋形剂组分的最终配制品中得到证实。
本文披露的抗体构建体也可以配制为脂质体。“脂质体”是由各物种型的脂质、磷脂和/或表面活性剂构成的小囊泡，该小囊泡可用于将药物递送至哺乳动物。脂质体的组分通常以双层形式排列，类似于生物膜的脂质排列。含有抗体构建体的脂质体通过本领域已知的方法制备，如Epstein等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],82:3688(1985)；Hwang等人,Proc.Natl Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],77:4030(1980)；美国专利号4,485,045和4,544,545；以及WO 97/38731中所述。具有延长的循环时间的脂质体披露于美国专利号5,013,556中。特别有用的脂质体可以通过反相蒸发方法用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物产生。使脂质体挤出通过具有限定孔径的滤器以产生具有所希望的直径的脂质体。本发明的抗体构建体的Fab’片段可以与脂质体经由二硫键交换反应缀合，如Martin等人J.Biol.Chem.[生物化学杂志]257:286-288(1982)中所述。化学治疗剂任选地包含在脂质体内。参见Gabizon等人J.NationalCancer Inst.[国家癌症研究所杂志]81(19)1484(1989)。
一旦配制了药物组合物，可以将它作为溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体、晶体或作为脱水或冻干粉末储存在无菌小瓶中。此类配制品能以即用形式或以在施用前重构的形式(例如冻干形式)储存。
本文定义的药物组合物的生物活性可以例如通过细胞毒性测定来确定，如以下实例、WO 99/54440或由Schlereth等人(Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学免疫治疗]20(2005),1-12)所述。如本文使用的，“功效”或“体内功效”是指使用例如标准化NCI应答标准对本发明的药物组合物治疗的应答。使用本发明的药物组合物的疗法的成功或体内功效是指组合物对于其预期用途的有效性，即组合物引起其所希望效应，即耗尽病理细胞(例如肿瘤细胞)的能力。体内功效可以通过已建立的相应疾病实体的标准方法进行监测，这些方法包括但不限于白细胞计数、差异、荧光激活细胞分选法、骨髓抽吸。另外，可以使用各种疾病特异性临床化学参数和其他建立的标准方法。此外，可以使用计算机辅助断层摄影术、X射线、核磁共振断层摄影术(例如，用于基于国家癌症研究所标准的应答评估[Cheson BD,Horning SJ,Coiffier B,Shipp MA,Fisher RI,Connors JM,Lister TA,VoseJ,Grillo-Lopez A,Hagenbeek A,Cabanillas F,Klippensten D,Hiddemann W,Castellino R,Harris NL,Armitage JO,Carter W,Hoppe R,Canellos GP.Report of aninternational workshop to standardize response criteria for non-Hodgkin’slymphomas[标准化非霍奇金淋巴瘤应答标准的国际研讨会报告].NCI SponsoredInternational Working Group[NCI资助的国际工作组].J Clin Oncol.[临床肿瘤学杂志]1999年4月；17(4):1244])、正电子发射断层摄影术扫描、白细胞计数、差异、荧光激活细胞分选法、骨髓抽吸、淋巴结活组织检查/组织学和各种淋巴瘤特异性临床化学参数(例如乳酸盐脱氢酶)和其他已建立的标准方法。
开发药物(如本发明的药物组合物)的另一主要挑战是药代动力学特性的可预测调节。为此，可以建立候选药物的药代动力学曲线，即影响特定药物治疗给定病状的能力的药代动力学参数的曲线。影响药物治疗某种疾病实体的能力的药物的药代动力学参数包括但不限于：半衰期、分布容量、肝脏首过代谢和血清结合程度。给定药剂的功效可以受到上文提及的每个参数的影响。本发明的抗体构建体的设想特征提供有它们包含的特定FC模式，例如药代动力学行为的差异。根据本发明的半衰期延长的靶向抗体构建体与所述抗体构建体的“规范的”非HLE型式相比优选显示体内滞留时间令人惊讶地增加。
“半衰期”意指50％的施用药物通过生物过程(例如代谢、排泄等)消除的时间。“肝脏首过代谢”意指药物在首次与肝脏接触时，即在首次通过肝脏期间代谢的倾向。“分布体积”意指药物在身体各个隔室(例如细胞内和细胞外空间、组织和器官等)中的滞留程度，以及药物在这些隔室内的分布。“血清结合程度”意指药物与血清蛋白(如白蛋白)相互作用并结合从而导致药物生物活性降低或丧失的倾向。
药代动力学参数还包括对于施用的给定量药物的生物利用度、滞后时间(T滞后)、Tmax、吸收速率、起效时间和/或Cmax。“生物利用度”意指血液隔室中药物的量。“滞后时间”意指药物施用与其在血液或血浆中的检测和可测量性之间的时间延迟。“Tmax”是药物达到最大血液浓度之后的时间，并且“Cmax”是用给定药物获得的最大血液浓度。达到其生物效应所需的药物的血液或组织浓度的时间受到所有参数的影响。表现出跨物种特异性的双特异性抗体构建体的药代动力学参数(其可以在如上所概述的非黑猩猩灵长类动物的临床前动物测试中确定)也示于例如Schlereth等人(Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学免疫治疗]20(2005),1-12)的公开中。
在本发明的优选方面中，药物组合物在约-20℃下稳定至少四周。从所附实施例中显而易见的是，可以使用不同的系统测试本发明的抗体构建体的质量相比于相应现有技术抗体构建体的质量。这些测试被理解为符合“ICH Harmonised Tripartite Guideline:Stability Testing of Biotechnological/Biological Products Q5C andSpecifications:Test procedures and Acceptance Criteria for BiotechBiotechnological/Biological Products Q6B[ICH三方协调指南：生物技术/生物产品的稳定性测试Q5C和规格：生物技术/生物产品的测试程序和验收准则Q6B]”，并且因此被选择以提供稳定性指示曲线，从而确定检测到产品的属性、纯度和效力的变化。人们普遍接受术语纯度是相对术语。由于糖基化、脱酰胺或其他异质性的效应，因此生物技术/生物产品的绝对纯度典型地应通过超过一种的方法进行评估，并且所导出的纯度值取决于方法。出于稳定性测试的目的，纯度测试应集中在确定降解产物的方法上。
为了评估包含本发明的抗体构建体的药物组合物的质量，可以例如通过分析溶液中可溶性聚集物的含量(根据尺寸排除的HMWS)来分析。优选的是，在约-20℃下稳定至少四周的特征在于小于1.5％HMWS/优选小于1％HMWS的含量。
作为药物组合物的抗体构建体的优选配制品可以例如包含如下所述的配制品的组分：
·配制品：
磷酸钾、L-精氨酸盐酸盐、海藻糖、聚山梨醇酯80，在pH 6.0下
在所附实例4-12中提供了用于评估呈药物组合物形式的本发明的抗体构建体的稳定性的其他实例。在那些实例中，关于不同药物配制品中的不同应力条件测试本发明的抗体构建体的实施例，并且将结果与本领域已知的双特异性T细胞接合抗体构建体的其他半衰期延长(HLE)形式进行比较。一般来讲，设想与具有不同HLE形式和不具有任何HLE形式的抗体构建体(即“规范的”抗体构建体)相比，根据本发明的提供有特定FC模式的抗体构建体在宽范围的应力条件(如温度和光应力)下典型地更稳定。所述温度稳定性可以涉及降低的温度(低于室温，包括冷冻)和升高的温度(高于室温，包括高达或高于体温的温度)两者。正如本领域技术人员将会认识到，在临床实践中难以避免的这种关于应力的改善稳定性使得抗体构建体更安全，这是因为在临床实践中会出现较少的降解产物。结果，所述增加的稳定性意味着安全性增加。
一个实施例提供了本发明的抗体构建体或根据本发明的方法产生的抗体构建体，其用于预防、治疗或缓解增殖性疾病、肿瘤性疾病、病毒性疾病或免疫性障碍。
本文所述的配制品可在有需要的患者中用作治疗、缓解和/或预防如本文所述的病理医学病状的药物组合物。术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性(prophylactic或preventative)措施两者。治疗包括将配制品施加或施用至患有疾病/障碍、疾病/障碍的症状或患疾病/障碍的倾向的患者的体内、分离的组织或细胞，目的是治愈、痊愈、缓和、减轻、改变、补救、缓解、改善或影响该疾病，该疾病症状或患该疾病的倾向。
如本文使用的，术语“缓解”是指通过将根据本发明的抗体构建体施用至有需要的受试者而对患有如下文所述的肿瘤或癌症或转移性癌症的患者的疾病状态的任何改善。这种改善还可以被视为减缓或停止患者的肿瘤或癌症或转移性癌症的进展。如本文使用的，术语“预防”意指通过将根据本发明的抗体构建体施用至有需要的受试者来避免患有如下文所指定的肿瘤或癌症或转移性癌症的患者发生或复发。
术语“疾病”是指将受益于用本文所述的抗体构建体或药物组合物治疗的任何病状。这包括慢性和急性障碍或疾病，包括那些使哺乳动物易患所考虑疾病的病理病状。
“赘生物”是组织的异常生长，通常但不总是形成肿块。当也形成肿块时，通常称之为“肿瘤”。赘生物或肿瘤可以是良性的、潜在恶性的(癌前)、或恶性的。恶性赘生物通常称为癌症。它们通常侵入并破坏周围组织，并可能形成转移，即它们扩散到身体的其他部位、组织或器官。因此，术语“转移性癌症”涵盖转移到原始肿瘤的组织或器官除外的其他组织或器官。淋巴瘤和白血病是淋巴赘生物。出于本发明的目的，它们也涵盖在术语“肿瘤”或“癌症”中。
术语“病毒性疾病”描述了作为受试者病毒感染的结果的疾病。
如本文使用的，术语“免疫学障碍”根据该术语的常见定义描述免疫学障碍，如自体免疫疾病、超敏反应、免疫缺陷。
在一个实施例中，本发明提供治疗或缓解增殖性疾病、肿瘤性疾病、病毒性疾病或免疫障碍的方法，该方法包括向有需要的受试者施用本发明的抗体构建体或根据本发明的方法产生的抗体构建体的步骤。
术语“有需要的受试者”或“需要治疗的那些”包括已经患有障碍的那些以及要预防障碍的那些。有需要的受试者或“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人和其他哺乳动物受试者。
本发明的抗体构建体通常将针对特定施用途径和方法、特定施用剂量和频率、特定疾病的特定治疗、生物利用度和持久性范围等来设计。组合物的物质优选以对于施用位点可接受的浓度配制。
因此可以根据本发明设计配制品和组合物以通过任何适合的施用途径递送。在本发明的上下文中，施用途径包括但不限于
·局部途径(如表皮、吸入、鼻、眼、耳(auricular/aural)、阴道、黏膜)；
·肠内途径(如口服、胃肠道、舌下、唇下部、经颊、直肠)；以及
·肠胃外途径(如静脉内、动脉内、骨内、肌内、脑内、脑室内、硬膜外、鞘内、皮下、腹膜内、羊膜外、关节内、心内、真皮内、病灶内、子宫内、膀胱内、玻璃体内、经皮、鼻内、经黏膜、滑膜内、管腔内)。
本发明的药物组合物和抗体构建体可特别用于肠胃外施用，例如皮下或静脉内递送，例如通过注射如弹丸注射，或通过输注如连续输注。药物组合物可以使用医疗装置来施用。用于施用药物组合物的医疗装置的实例描述在美国专利号4,475,196；4,439,196；4,447,224；4,447,233；4,486,194；4,487,603；4,596,556；4,790,824；4,941,880；5,064,413；5,312,335；5,312,335；5,383,851；和5,399,163中。
特别地，本发明提供了适合的组合物的不间断施用。作为非限制性实例，可以通过患者佩戴的用于计量治疗剂进入患者体内的流入的小型泵系统来实现不间断或实质上不间断(即连续)的施用。包含本发明的抗体构建体的药物组合物可以通过使用所述泵系统施用。此类泵系统在本领域中通常是已知的，并且通常依赖于含有要输注的治疗剂的药筒的定期更换。当更换这种泵系统中的药筒时，可能导致原本不间断地流入患者体内的治疗剂的暂时中断。在这种情况下，药筒替换之前的施用阶段和药筒替换之后的施用阶段仍将被认为在药物手段的含义内，并且本发明的方法一起构成这种治疗剂的一次“不间断施用”。
本发明的抗体构建体的连续或不间断施用可以通过流体递送装置或小型泵系统进行静脉内或皮下施用，该流体递送装置或小型泵系统包括用于将流体驱出储器的流体驱动机构和用于致动驱动机构的致动机构。用于皮下施用的泵系统可以包括用于穿透患者皮肤并将适合的组合物递送到患者体内的针或套管。所述泵系统可以独立于静脉、动脉或血管而直接固定或连接到患者皮肤，从而允许泵系统与患者皮肤直接接触。泵系统可以连接到患者皮肤24小时至数天。泵系统可能尺寸较小，具有小容积的储器。作为非限制性实例，待施用的适合的药物组合物的储器容积可以为0.1至50ml。
连续施用也可以通过佩戴在皮肤上的贴片经皮施用，并且以一定间隔进行更换。本领域技术人员知道适用于该目的的用于药物递送的贴片系统。值得注意的是，经皮施用尤其适合于不间断施用，因为第一用尽的贴片的更换可以有利地与在将新的第二贴片放置在例如紧邻第一用尽的贴片的皮肤表面上的同时并在即将移除第一用尽的贴片之前来完成。不会出现流动中断或电池故障的问题。
如果已将药物组合物冻干，则在施用之前首先将冻干物质在适当液体中重构。可以将冻干物质在例如抑菌注射用水(BWFI)、生理盐水、磷酸盐缓冲盐水(PBS)或与冷冻干燥前蛋白质所处于的相同配制品中重构。
本发明的组合物能以适合的剂量施用至受试者，该剂量可以例如通过向非黑猩猩灵长类动物(例如猕猴)施用增加剂量的表现出本文所述的跨物种特异性的本发明的抗体构建体通过剂量递增研究来确定。如上所述，表现出本文所述的跨物种特异性的本发明的抗体构建体可以有利地以相同形式用于非黑猩猩灵长类动物的临床前测试并且作为药物用于人类中。剂量方案将由主治医师和临床因素决定。如在医学领域中熟知的，任何一个患者的剂量取决于许多因素，包括患者体型、体表面积、年龄、待施用的具体化合物、性别、施用时间和途径、一般健康状况和同时施用的其他药物。
术语“有效剂量(effective dose或effective dosage)”定义为足以实现或至少部分实现所希望效应的量。术语“治疗有效剂量”定义为足以治愈或至少部分阻止已罹患疾病的患者的疾病及其并发症的量。对此用途有效的量或剂量将取决于要治疗的病状(适应症)、递送的抗体构建体、治疗背景和目标、疾病的严重程度、先前疗法、患者的临床病史和对治疗剂的应答、施用途径、患者的体型(体重、体表或器官大小)和/或病状(年龄和一般健康状况)以及患者自体免疫系统的一般状态。可以根据主治医生的判断调整适当的剂量，以使得它可以一次施用至患者或经一系列施用而施用至患者，并且以便获得最佳治疗效应。
根据上文提及的因素，典型的剂量范围可以为约0.1μg/kg至高达约30mg/kg或更多。在具体的实施例中，剂量范围可以为1.0μg/kg至约20mg/kg、任选地10μg/kg至约10mg/kg或100μg/kg至约5mg/kg。
本发明的抗体构建体的治疗有效量优选导致疾病症状严重程度降低、无疾病症状期的频率或持续时间增加或预防由于疾病折磨而产生的损害或残疾。为了治疗表达靶细胞抗原的肿瘤，本发明的抗体构建体的治疗有效量，例如抗靶细胞抗原/抗CD3抗体构建体，相对于未治疗的患者优选地抑制细胞生长或肿瘤生长至少约20％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、或至少约90％。可以在预测功效的动物模型中评价化合物抑制肿瘤生长的能力。
药物组合物可以作为单独的治疗剂或与另外的疗法(如视需要的抗癌疗法，例如其他蛋白质和非蛋白质药物)组合施用。这些药物可以与包含如本文定义的本发明的抗体构建体的组合物同时施用，或者在施用所述抗体构建体之前或之后以时间限定间隔和剂量分开施用。
如本文使用的，术语“有效且无毒的剂量”是指本发明抗体构建体的可耐受剂量，该可耐受剂量足够高以引起病理性细胞消耗、肿瘤消除、肿瘤缩小或疾病稳定，而没有或基本上没有主要毒性效应。这种有效且无毒的剂量可以例如通过本领域中描述的剂量递增研究来确定，并且应低于诱导严重不良副作用事件的剂量(剂量限制毒性，DLT)。
如本文使用的，术语“毒性”是指在不良事件或严重不良事件中表现的药物的毒性效应。这些副作用事件可能是指施用后缺乏系统性药物耐受性和/或缺乏局部耐受性。毒性还可能包括由药物引起的致畸或致癌效应。
如本文使用的，术语“安全性”、“体内安全性”或“耐受性”定义了药物的施用而在施用后未立即诱导严重不良事件(局部耐受性)以及在药物的较长施用时段期间未诱导严重不良事件。例如，可以在治疗和随访期期间以例如有规律的间隔评价“安全性”、“体内安全性”或“耐受性”。测量包括临床评价，例如器官表现，以及实验室异常的筛选。可以进行临床评价，并且根据NCI-CTC和/或MedDRA标准记录/编码与正常发现的偏差。器官表现可以包括如过敏/免疫学、血液/骨髓、心律失常、凝血等的标准，如例如不良事件的通用术语标准v3.0(CTCAE)中所述的。可以测试的实验室参数包括例如血液学、临床化学、凝血曲线和尿液分析以及其他体液(如血清、血浆、淋巴或脊髓液、液体等)的检查。因此安全性可以通过例如身体检查、成像技术(即超声波、x射线、CT扫描、磁共振成像(MRI)、其他具有技术装置的措施(即心电图术))、生命体征、通过测量实验室参数和记录不良事件来评估。例如，根据本发明的用途和方法中非黑猩猩灵长类动物中的不良事件可以通过组织病理学和/或组织化学方法进行检查。
上述术语也在以下中提及：例如Preclinical safety evaluation ofbiotechnology-derived pharmaceuticals S6[生物技术衍生药物的临床前安全性评价S6]；ICH Harmonised Tripartite Guideline[ICH三方协调指南]；ICH SteeringCommittee meeting on July 16,1997[1997年7月16日的ICH指导委员会会议]。
最后，本发明提供了试剂盒，该试剂盒包含本发明的抗体构建体或根据本发明的方法产生的抗体构建体、本发明的药物组合物、本发明的多核苷酸、本发明的载体和/或本发明的宿主细胞。
在本发明的上下文中，术语“试剂盒”意指两种或更多种组分(其中一种对应于本发明的抗体构建体、药物组合物、载体或宿主细胞)一起包装在容器、接受器或其他中。因此，试剂盒可以被描述为足以实现某一目标的一组产品和/或器具，其可以作为单一单元销售。
试剂盒可以包括一个或多个具有任何适当形状、大小和材料(优选防水的，例如塑料或玻璃)的接受器(如小瓶、安瓿、容器、注射器、小瓶、袋)，该一个或多个接收器含有适于施用的剂量的本发明的抗体构建体或药物组合物(参见上文)。试剂盒可以另外含有使用说明(例如呈小册子或说明手册的形式)、用于施用本发明的抗体构建体的手段(如注射器、泵、输注器等)、用于重构本发明的抗体构建体的手段和/或用于稀释本发明的抗体构建体的手段。
Figure BDA0002998948640000851
本发明还提供了用于单剂量施用单元的试剂盒。本发明的试剂盒还可以含有包含干燥/冻干的抗体构建体的第一接受器和包含水性配制品的第二接受器。在本发明的某些实施例中，提供了含有单室和多室预填充注射器(例如液体注射器和冻干注射器)的试剂盒。
应指出的是，除非上下文另有明确指明，否则如本文所用，单数形式“一种(a)”、“一种(an)”和“该(the)”包括复数个指示物。因此，例如，对“一种试剂”的提及包括此类不同试剂中的一种或多种，并且对“所述方法”的提及包括提及本领域普通技术人员已知的可以修改或取代本文所述的方法的等效步骤和方法。
除非另外指示，否则在一系列元素前面的术语“至少”应被理解为指该系列中的每一个元素。本领域技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施例的许多等效物。此类等效物旨在涵盖在本发明中。
术语“和/或”在本文使用时包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的全部或任何其他组合”的含义。
如本文使用的，术语“约”或“大约”意指在给定值或范围的20％内、优选在10％内、并且更优选在5％内。然而，它也包括明确数字，例如约20包括20。
术语“小于”或“大于”包括明确数字。例如，小于20意指小于或等于。类似地，多于或大于分别意指多于或等于/或大于或等于。
贯穿本说明书及其后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”以及变型如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”应当被理解成隐含包括所述整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤的组。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有”或“包括”来取代，或者有时在本文中使用时用术语“具有”取代。
当在本文中使用时，“由……组成”时，排除了在权利要求要素中未指定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由……组成”并不排除不实质性地影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。
在本文的每个例子中，术语“包含/包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”中的任何一个可以用其他两个术语中的任一个替代。
应理解，本发明不限于本文所述的特定方法、方案、材料、试剂和物质等，并且因此可以变化。本文使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不打算限制仅由权利要求限定的本发明的范围。
本说明书全文中引用的所有出版物和专利(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、说明书等)，无论是上文还是下文，均通过引用整体并入文中。本文没有任何内容应解释为承认本发明无权由于先前发明而早于这些披露内容。通过引用并入的材料在一定程度上与本说明书发生冲突或不一致时，本说明书将替代任何此类材料。
将从以下实例中获得对本发明及其优点的更好理解，这些实例仅用于说明目的。这些实例并不打算以任何方式限制本发明的范围。
实例1：确定CD33 x CD3
Figure BDA0002998948640000861
抗体构建体的最佳重折叠条件
材料和方法：将CD33 x CD3 x scFc双特异性抗体构建体(
Figure BDA0002998948640000862
SEQ IDNO:41)用于本研究。根据图1的步骤纯化
Figure BDA0002998948640000863
材料。将蛋白A过滤的病毒失活池(FVIP)和CEX HMW池样品用于氧化还原重折叠。
将尺寸排阻色谱法(SEC)用于测量
Figure BDA0002998948640000864
的单体和聚集物物质的百分比，包括以下条件：柱：G3000SWxl TOSOH Bioscience，7.8mm ID x 30cm柱(目录号08541)，在室温下或25℃。流动相：100mM磷酸钠，250mM NaCl，pH 6.8。流速：0.5ml/min。运行时间：35min。除非另有说明，否则重折叠程序使用Thermo Scientific Slide-A-LyzerTM透析盒(20k MWCO)在室温下通过逐步渗析进行。用重折叠缓冲剂处理后，将样品透析回100mMNaOAc，pH 5.1，在4℃下过夜。
结果：施用一系列pH和胍浓度以增加
Figure BDA0002998948640000871
峰后池中单体物质的浓度，该池仅含有25％-27％单体物质。当用对照缓冲剂(100mM NaOAc，pH 5.1)将
Figure BDA0002998948640000872
峰后样品池进行缓冲剂交换时，单体的百分比保持在约25％-27％。然而，当重折叠缓冲剂中包含的胍浓度高于1M且高达2M时，
Figure BDA0002998948640000873
单体的百分比以浓度依赖的方式增加，直至60％单体。重折叠条件的详细列表和所得单体的百分比列于表4中，胍浓度对重折叠的作用示于图2的SEC色谱图中。为了评估pH对重折叠的作用，使用乙酸或Tris碱将含有2.0M和2.5M胍的重折叠缓冲剂调节至pH 4.2、5.1或8.0。在pH 5.1与pH 8.0之间未观察到显著差异。然而，当在pH 4.2下孵育时，CEX峰后
Figure BDA0002998948640000874
样品聚集(表4)。
为了进一步增加单体的百分比，将氧化还原试剂与胍一起添加到重折叠缓冲剂中。当将半胱氨酸和胱氨酸以6：1、14：1和33：1(Cys：Cyss)摩尔比添加到1.2M胍重折叠缓冲剂中时，单体的百分比从39％(不含氧化还原剂)分别增加到52％、61％和69％(表4)。因此，用Cys/Cyss进行重折叠处理值得进一步研究。
评估了氧化试剂，例如铜(II)硫酸盐和脱氢抗坏血酸盐。发现0.5mM硫酸铜(II)与1.2M或2.0M胍一起具有最大的重折叠作用，将单体百分比分别增加至90％和88％(参见表4，图3)。用0.5mM脱氢抗坏血酸盐与1.2M和2.0M胍处理的单体百分比也分别增加至66％和73％。
为证明上文对
Figure BDA0002998948640000875
峰后池报道的重折叠程序也适用于更早的下游纯化，例如蛋白A池，用2.0M胍对含有大约73％单体和27％聚集物的蛋白A FVIP样品进行重折叠。在pH 5.1和pH 8.0下，单体的百分比分别增加到94％和89％(表5和图4)。
表4.显示了下游CEX HMW(峰后)池的重折叠条件和结果，其在重折叠处理之前仅含有25％单体和75％高分子量物质，并且在用根据本发明的示例性CD33xCD3双特异性抗体构建体重折叠处理之后高达89.6％。
Figure BDA0002998948640000876
Figure BDA0002998948640000881
表5：
Figure BDA0002998948640000882
蛋白A FVIP池重折叠的条件和结果。
Figure BDA0002998948640000883
实例2：确定DLL3 x CD3抗体构建体在柱上的最佳重折叠条件
有效地检查了DLL3 x CD3 x scFc(SEQ ID NO:104)双特异性抗体构建体的柱上氧化还原重折叠。为此，使用具有等度洗脱的ProA柱。负载为10g/Lr(按照DLL3xCD3双特异性抗体构建体方法)HCCF。洗涤缓冲剂条件为：25mM Tris+1.2M胍，2M胍，1.2M胍中的硫酸铜(II)*；在25mM Tris+Arg条件下进行对照*，所有均在pH 8.0下。用2倍柱体积的缓冲剂洗涤；保持2小时；分别收集洗涤池。pH 3.7下洗脱蛋白(按照DLL3xCD3
Figure BDA0002998948640000884
方法)；样品。病毒失活：滴定至pH 3.6，保持60分钟，用2M Tris碱中和至pH 5.1；样品。池：洗涤池；pH3.9下洗脱池；中和的病毒失活池。使用的分析工具为：SEC、CHOP、浸出ProA。
实例3：确定CD19和CLDN双特异性抗体构建体的成功重折叠条件
在pH 8.0下，在室温下，用2.0M胍和0.5mM铜(II)将CD19 x CD3 x scFc(SEQ IDNO:114)和CLND x CD3 x scFc抗体构建体CEX峰后池重折叠4小时，之后将缓冲剂交换回pH5.1下的乙酸盐缓冲剂。对于CD19 x CD3 x scFc抗体构建体而言，单体的百分比从24.0％增加至48.7％(即增加了约100％)(参见图5和表6)，并且对于CLND x CD3 x scFc抗体构建体而言，从23.4％增加至38.5％(即增加了约64％)(参见图6和表7)。对于一些情况，本发明的施加方法显著减少了聚集物形成并且增加了单体百分比。还观察到改善的单体结构均质性(减少的单体同种型)。
表6：CD19 x CD3 x scFc分子实验条件
Figure BDA0002998948640000891
表7：CLDN x CD3 x scFc分子实验条件
Figure BDA0002998948640000892
此外，还在pH 7.0下进行重折叠实验。在pH 7.0下，用2.0M胍和0.5mM铜(II)孵育时，单体同种型从10.2％减少至0％(参见表8)。
表8：CD19 x CD3 x scFc分子实验条件
Figure BDA0002998948640000893
Figure BDA0002998948640000901
表9：序列表
Figure BDA0002998948640000902
Figure BDA0002998948640000911
Figure BDA0002998948640000921
Figure BDA0002998948640000931
Figure BDA0002998948640000941
Figure BDA0002998948640000951
Figure BDA0002998948640000961
Figure BDA0002998948640000971
Figure BDA0002998948640000981
Figure BDA0002998948640000991
Figure BDA0002998948640001001
Figure BDA0002998948640001011
Figure BDA0002998948640001021
Figure BDA0002998948640001031
Figure BDA0002998948640001041
Figure BDA0002998948640001051
Figure BDA0002998948640001061
Figure BDA0002998948640001071
Figure BDA0002998948640001081
Figure BDA0002998948640001091
Figure BDA0002998948640001101
Figure BDA0002998948640001111
Figure BDA0002998948640001121
Figure BDA0002998948640001131
Figure BDA0002998948640001141
Figure BDA0002998948640001151
Figure BDA0002998948640001161
Figure BDA0002998948640001171
Figure BDA0002998948640001181
Figure BDA0002998948640001191
Figure BDA0002998948640001201
Figure BDA0002998948640001211
Figure BDA0002998948640001221
Figure BDA0002998948640001231
Figure BDA0002998948640001241
Figure BDA0002998948640001251
序列表
<110> 安进公司（Amgen Inc.）
<120> 双特异性抗体构建体的下游加工
<130> 32243/53572A/PC
<150> US 62/744,595
<151> 2018-10-11
<160> 248
<170> PatentIn3.5版
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VL CDR1
<400> 1
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Leu Asn
1 5 10 15
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VL CDR2
<400> 2
Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VL CDR3
<400> 3
Gln Gln Ser Thr Glu Asp Pro Trp Thr
1 5
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VH CDR1
<400> 4
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VH CDR2
<400> 5
Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VH CDR3
<400> 6
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VL
<400> 7
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 8
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 VH
<400> 8
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 9
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VH CDR1
<400> 9
Arg Tyr Thr Met His
1 5
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VH CDR2
<400> 10
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 11
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VH CDR3
<400> 11
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VL CDR1
<400> 12
Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn
1 5 10
<210> 13
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VL CDR2
<400> 13
Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser
1 5
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VL CDR3
<400> 14
Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1 5
<210> 15
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VH
<400> 15
Asp Ile Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3 VL
<400> 16
Val Asp Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser
1 5 10 15
Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp
35 40 45
Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly Val Pro Tyr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu
65 70 75 80
Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 17
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19xCD3 scFv BLINCYTO incl接头和his-标签
<400> 17
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Val Ser Gly Ile Pro Pro
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Lys Val Asp Ala Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Thr
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
115 120 125
Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser Ser Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr Trp Met
145 150 155 160
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Gln
165 170 175
Ile Trp Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Glu Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Ala Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg
210 215 220
Arg Glu Thr Thr Thr Val Gly Arg Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
245 250 255
Ile Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser
260 265 270
Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr
275 280 285
Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
290 295 300
Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
305 310 315 320
Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
325 330 335
Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
340 345 350
Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Thr Leu Thr Val Ser Ser Val Glu Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Val Asp Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro
385 390 395 400
Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg
405 410 415
Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly
420 425 430
Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Val Ala Ser Gly
435 440 445
Val Pro Tyr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu
450 455 460
Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
465 470 475 480
Gln Trp Ser Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu
485 490 495
Leu Lys His His His His His His
500
<210> 18
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-L1
<400> 18
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-L2
<400> 19
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro
1 5
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-L3
<400> 20
Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
1 5
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-H1
<400> 21
Lys Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 22
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-H2
<400> 22
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Asp
<210> 23
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的CDR-H3
<400> 23
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的VH
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的VL
<400> 25
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
20 25 30
Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 26
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> I2C的VH-VL
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
130 135 140
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
165 170 175
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly
180 185 190
Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
195 200 205
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
210 215 220
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
225 230 235 240
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 27
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 ccVH
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Asn Leu Gly Gly Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 VH
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Asn Leu Gly Gly Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 HCDR1
<400> 29
Asn Tyr Gly Met Asn
1 5
<210> 30
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 HCDR2
<400> 30
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 HCDR3
<400> 31
Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 CC VL
<400> 32
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asp Ser Pro Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Ala His Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 33
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 VL
<400> 33
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asp Ser Pro Gln Pro Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Ser Ala His Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 LCDR1
<400> 34
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 LCDR2
<400> 35
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 LCDR3
<400> 36
Gln Gln Ser Ala His Phe Pro Ile Thr
1 5
<210> 37
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 HL CC
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Asn Leu Gly Gly Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser
180 185 190
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Pro Gln Pro Glu
210 215 220
Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala His Phe Pro Ile Thr
225 230 235 240
Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 38
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> E11的CD33 HL
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Asn Leu Gly Gly Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser
180 185 190
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Pro Gln Pro Glu
210 215 220
Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala His Phe Pro Ile Thr
225 230 235 240
Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 39
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD33 CC E11 HL x I2C HL双特异性分子
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Arg Asn Leu Gly Gly Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser
180 185 190
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp Ser Pro Gln Pro Glu
210 215 220
Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ala His Phe Pro Ile Thr
225 230 235 240
Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser
245 250 255
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
260 265 270
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
275 280 285
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
290 295 300
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
305 310 315 320
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
325 330 335
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
340 345 350
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
355 360 365
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
370 375 380
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
385 390 395 400
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
405 410 415
Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
420 425 430
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly
435 440 445
Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
450 455 460
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
485 490 495
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
500 505
<210> 40
<211> 511
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD33 E11 HL x I2C HL
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Trp Ser Trp Ser Asp Gly Tyr Tyr Val Tyr Phe Asp Tyr Trp
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Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly Glu Arg Thr Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser
180 185 190
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
275 280 285
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
290 295 300
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
305 310 315 320
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
325 330 335
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340 345 350
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
355 360 365
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
370 375 380
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
385 390 395 400
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
405 410 415
Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
420 425 430
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly
435 440 445
Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
450 455 460
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
485 490 495
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu His His His His His His
500 505 510
<210> 41
<211> 993
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD33 CC x I2C-scFc双特异性HLE分子
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
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115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
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145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Thr Asn Lys Asn Ser Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Leu Ser
180 185 190
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195 200 205
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225 230 235 240
Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser
245 250 255
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260 265 270
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr
275 280 285
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
305 310 315 320
Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
325 330 335
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340 345 350
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp
355 360 365
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370 375 380
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
385 390 395 400
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
465 470 475 480
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Lys
<210> 42
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR1
<400> 42
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR2
<400> 43
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 44
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VH CDR3
<400> 44
Asp Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Pro Arg Asp Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 45
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR1
<400> 45
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser
1 5 10 15
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR2
<400> 46
Arg Ile Ser Arg Arg Phe Ser
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIIIxCD3-scFc VL CDR3
<400> 47
Met Gln Ser Thr His Val Pro Arg Thr
1 5
<210> 48
<211> 124
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIII_CCxCD3-scFc VH
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Pro Arg Asp Phe Asp
100 105 110
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<210> 49
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIII_CCxCD3-scFc VL
<400> 49
Asp Thr Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser His Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Ile Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Arg Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 50
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIII_CCxCD3-scFc scFv
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Pro Arg Asp Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Val Met Thr
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Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
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Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
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195 200 205
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225 230 235 240
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 51
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIII_CCxCD3-scFc双特异性分子
<400> 51
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Pro Arg Asp Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Val Met Thr
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Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
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Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Arg Ile Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile Ser Arg Val Glu Ala
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Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Thr His Val Pro Arg
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Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
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Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys
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Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
340 345 350
Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr
355 360 365
Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val
385 390 395 400
Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr
405 410 415
Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro
420 425 430
Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly
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Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
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Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu
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Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
485 490 495
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
500 505
<210> 52
<211> 994
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> EGFRvIII_CCxCD3-scFc双特异性HLE分子
<400> 52
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Pro Arg Asp Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Thr Val Met Thr
130 135 140
Gln Thr Pro Leu Ser Ser His Val Thr Leu Gly Gln Pro Ala Ser Ile
145 150 155 160
Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr
165 170 175
Leu Ser Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Arg Ile Ser Arg Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile Ser Arg Val Glu Ala
210 215 220
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Thr His Val Pro Arg
225 230 235 240
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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305 310 315 320
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325 330 335
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
340 345 350
Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr
355 360 365
Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val
385 390 395 400
Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr
405 410 415
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420 425 430
Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly
435 440 445
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
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Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
485 490 495
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515 520 525
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
530 535 540
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545 550 555 560
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
565 570 575
Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys
580 585 590
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
595 600 605
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
610 615 620
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
625 630 635 640
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
645 650 655
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
660 665 670
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
675 680 685
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
690 695 700
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
705 710 715 720
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
725 730 735
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
755 760 765
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
770 775 780
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
785 790 795 800
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
805 810 815
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
820 825 830
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
835 840 845
Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
850 855 860
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
865 870 875 880
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
885 890 895
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
900 905 910
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
915 920 925
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
930 935 940
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
945 950 955 960
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
965 970 975
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
980 985 990
Gly Lys
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MSLN_5 VH CDR1
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Asp Tyr Tyr Met Thr
1 5
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 54
Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 55
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 55
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1 5
<210> 56
<211> 11
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 56
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1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 57
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1 5
<210> 58
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 58
Gln Gln Ala Lys Ser Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 59
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MSLN _5 VH
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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115
<210> 60
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 60
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1 5 10 15
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys Ser Phe Pro Arg
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100 105
<210> 61
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 61
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20 25 30
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35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser
130 135 140
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145 150 155 160
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210 215 220
Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235
<210> 62
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MSLN_5xI2C0双特异性分子
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
245 250 255
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
260 265 270
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275 280 285
Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala
290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser
340 345 350
Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
355 360 365
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
370 375 380
Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly
385 390 395 400
Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser
405 410 415
Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
420 425 430
Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg
435 440 445
Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly
450 455 460
Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser
465 470 475 480
Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490
<210> 63
<211> 982
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MSLN_5xCD3-scFc双特异性HLE分子
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Thr Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Asn Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
145 150 155 160
Ile Asn Thr Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
165 170 175
Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys
210 215 220
Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
245 250 255
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
260 265 270
Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
275 280 285
Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala
290 295 300
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
305 310 315 320
Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu
325 330 335
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser
340 345 350
Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
355 360 365
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
370 375 380
Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly
385 390 395 400
Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser
405 410 415
Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
420 425 430
Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg
435 440 445
Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly
450 455 460
Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser
465 470 475 480
Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
485 490 495
Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
500 505 510
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
515 520 525
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
530 535 540
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
545 550 555 560
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser
565 570 575
Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
580 585 590
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
595 600 605
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
610 615 620
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
625 630 635 640
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
645 650 655
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
660 665 670
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
675 680 685
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
690 695 700
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
705 710 715 720
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
725 730 735
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
740 745 750
Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
755 760 765
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
770 775 780
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
785 790 795 800
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
805 810 815
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly
820 825 830
Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
835 840 845
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
850 855 860
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
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885 890 895
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
945 950 955 960
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
965 970 975
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 64
<211> 982
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MSLN_5_CCxCD3-scFc双特异性HLE分子
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Phe
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Ala Arg Asp Val Gly Ser His Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser
130 135 140
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
145 150 155 160
Ile Ser Arg Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
165 170 175
Lys Leu Leu Ile Ser Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Lys
210 215 220
Ser Phe Pro Arg Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
245 250 255
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
260 265 270
Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
275 280 285
Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala
290 295 300
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
305 310 315 320
Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu
325 330 335
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser
340 345 350
Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
355 360 365
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
370 375 380
Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly
385 390 395 400
Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser
405 410 415
Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
420 425 430
Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg
435 440 445
Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly
450 455 460
Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser
465 470 475 480
Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly
485 490 495
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530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
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Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
595 600 605
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610 615 620
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
625 630 635 640
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
645 650 655
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
660 665 670
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
675 680 685
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
690 695 700
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
705 710 715 720
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
725 730 735
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
740 745 750
Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
755 760 765
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
770 775 780
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785 790 795 800
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
805 810 815
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly
820 825 830
Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
835 840 845
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
850 855 860
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
865 870 875 880
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
885 890 895
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900 905 910
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945 950 955 960
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980
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-H1
<400> 65
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 66
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-H2
<400> 66
Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-H3
<400> 67
Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-L1
<400> 68
Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr Ser
1 5 10
<210> 69
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-L2
<400> 69
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的CDR-L3
<400> 70
Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val
1 5
<210> 71
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的VH
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的VL
<400> 72
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser
100 105
<210> 73
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007的VH-VL
<400> 73
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu
130 135 140
Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile
145 150 155 160
Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp Thr Lys
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn
195 200 205
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser
245
<210> 74
<211> 507
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007 x I2C
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu
130 135 140
Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile
145 150 155 160
Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp Thr Lys
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn
195 200 205
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
245 250 255
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
260 265 270
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp
275 280 285
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg
290 295 300
Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg
340 345 350
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly
355 360 365
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro
385 390 395 400
Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser
405 410 415
Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln
420 425 430
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu
435 440 445
Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys
450 455 460
Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr
485 490 495
Lys Leu Thr Val Leu His His His His His His
500 505
<210> 75
<211> 989
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007 x I2C scFc双特异性HLE分子
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu
130 135 140
Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile
145 150 155 160
Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp Thr Lys
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn
195 200 205
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
245 250 255
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
260 265 270
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp
275 280 285
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg
290 295 300
Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg
340 345 350
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly
355 360 365
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro
385 390 395 400
Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser
405 410 415
Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln
420 425 430
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu
435 440 445
Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys
450 455 460
Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr
485 490 495
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
500 505 510
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
515 520 525
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
530 535 540
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
545 550 555 560
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
565 570 575
Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr
580 585 590
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
595 600 605
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
610 615 620
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
625 630 635 640
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
645 650 655
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
660 665 670
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
675 680 685
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
690 695 700
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
705 710 715 720
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
755 760 765
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
770 775 780
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
785 790 795 800
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
805 810 815
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
820 825 830
Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu
835 840 845
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
850 855 860
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
865 870 875 880
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
885 890 895
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
900 905 910
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
915 920 925
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
930 935 940
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
945 950 955 960
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
965 970 975
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 76
<211> 987
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007 x I2C scFc_delGK双特异性HLE分子
<400> 76
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu
130 135 140
Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile
145 150 155 160
Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr Gln Asp Thr Lys
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn
195 200 205
Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
245 250 255
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
260 265 270
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp
275 280 285
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg
290 295 300
Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg
340 345 350
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly
355 360 365
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro
385 390 395 400
Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser
405 410 415
Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln
420 425 430
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu
435 440 445
Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys
450 455 460
Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr
485 490 495
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
500 505 510
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
515 520 525
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
530 535 540
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
545 550 555 560
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
565 570 575
Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr
580 585 590
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
595 600 605
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
610 615 620
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
625 630 635 640
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
645 650 655
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
660 665 670
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
675 680 685
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
690 695 700
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
705 710 715 720
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly
725 730 735
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
740 745 750
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
755 760 765
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
770 775 780
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
785 790 795 800
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
805 810 815
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys
820 825 830
Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val
835 840 845
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
850 855 860
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
865 870 875 880
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
885 890 895
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
900 905 910
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
915 920 925
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
930 935 940
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
945 950 955 960
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
965 970 975
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 77
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007_CC x I2C scFc VH
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 78
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007_CC x I2C scFc VL
<400> 78
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Arg Leu Gly Glu Lys Tyr Thr
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Leu Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Glu Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 79
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007_CC x I2C scFc scFv
<400> 79
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Phe Ile Trp Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Ile Gly Tyr Tyr Tyr Gly Met
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Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu
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225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 80
<211> 501
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH19 65254.007_CC x I2C scFc双特异性分子
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<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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Thr Lys Val Glu Ile Lys
245
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<211> 501
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> FLT3_7 A8xCD3双特异性分子
<400> 92
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Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr
180 185 190
Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
245 250 255
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
260 265 270
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp
275 280 285
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg
290 295 300
Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg
340 345 350
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly
355 360 365
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro
385 390 395 400
Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser
405 410 415
Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln
420 425 430
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu
435 440 445
Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys
450 455 460
Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr
485 490 495
Lys Leu Thr Val Leu
500
<210> 93
<211> 989
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> FLT3_7 A8xCD3-scFc双特异性HLE分子
<400> 93
Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Glu
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Ala
20 25 30
Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Ser Thr Ser
50 55 60
Leu Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Thr Gln Val
65 70 75 80
Val Leu Thr Met Thr Asn Val Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Ile Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Tyr Gly Phe Phe Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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245 250 255
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu
260 265 270
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp
275 280 285
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg
290 295 300
Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp
305 310 315 320
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln
325 330 335
Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg
340 345 350
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly
355 360 365
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro
385 390 395 400
Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser
405 410 415
Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln
420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr
465 470 475 480
Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr
485 490 495
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515 520 525
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545 550 555 560
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565 570 575
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595 600 605
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
610 615 620
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
625 630 635 640
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Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
675 680 685
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
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<210> 94
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR1 DLL3_1_CC_delGK
<400> 94
Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 95
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR2 DLL3_1_CC_delGK
<400> 95
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 96
Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 97
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR1 DLL3_1_CC_delGK
<400> 97
Arg Ala Ser Gln Arg Val Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 98
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR2 DLL3_1_CC_delGK
<400> 98
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR3 DLL3_1_CC_delGK
<400> 99
Gln Gln Tyr Asp Arg Ser Pro Leu Thr
1 5
<210> 100
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH DLL3_1_CC_delGK
<400> 100
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
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65 70 75 80
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Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 101
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL DLL3_1_CC_delGK
<400> 101
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Arg Ser Pro
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 102
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> DLL3_1_CC_delGK
<400> 102
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Arg Val Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
165 170 175
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180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Asp Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys
<210> 103
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> DLL3_1_CCxCD3_delGK 双特异性分子
<400> 103
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
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Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Arg Val Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
165 170 175
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Asp Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
290 295 300
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
340 345 350
Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
355 360 365
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser
385 390 395 400
Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val
405 410 415
Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
420 425 430
Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro
435 440 445
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu
450 455 460
Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp
465 470 475 480
Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490 495
<210> 104
<211> 982
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> DLL3_1_CCxCD3-scFc_delGK 双特异性HLE分子
<400> 104
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Val Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
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Ser Ile Ala Val Thr Gly Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu
130 135 140
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Arg Val Asn Asn Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln
165 170 175
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
210 215 220
Tyr Asp Arg Ser Pro Leu Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
290 295 300
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
340 345 350
Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
355 360 365
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser
385 390 395 400
Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val
405 410 415
Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
420 425 430
Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro
435 440 445
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu
450 455 460
Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp
465 470 475 480
Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490 495
Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
725 730 735
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
740 745 750
Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
755 760 765
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
770 775 780
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
785 790 795 800
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
805 810 815
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly
820 825 830
Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
835 840 845
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
850 855 860
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
865 870 875 880
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885 890 895
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900 905 910
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915 920 925
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930 935 940
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945 950 955 960
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
965 970 975
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR1 CD19 97-G1RE-C2
<400> 105
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 106
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR2 CD19 97-G1RE-C2
<400> 106
Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 107
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR3 CD19 97-G1RE-C2
<400> 107
Asp Arg Gly Thr Ile Phe Gly Asn Tyr Gly Leu Glu Val
1 5 10
<210> 108
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CD19 97-G1RE-C2 CC
<400> 108
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Thr Ile Phe Gly Asn Tyr Gly Leu Glu Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 109
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR1 CD19 97-G1RE-C2
<400> 109
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Lys Asn Ala Phe Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 110
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR2 CD19 97-G1RE-C2
<400> 110
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR3 CD19 97-G1RE-C2
<400> 111
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 112
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CD19 97-G1RE-C2 CC
<400> 112
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ile Ser Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Lys
20 25 30
Asn Ala Phe Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 113
<211> 525
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 97-G1RE-C2 CC x I2C0
<400> 113
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ile Ser Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Leu Leu His Lys Asn Ala Phe Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu
50 55 60
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn
65 70 75 80
Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly
115 120 125
Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val
145 150 155 160
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
165 170 175
Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
180 185 190
Cys Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr
195 200 205
Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
210 215 220
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr
225 230 235 240
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Thr Ile Phe Gly Asn Tyr
245 250 255
Gly Leu Glu Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
275 280 285
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
290 295 300
Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
305 310 315 320
Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
325 330 335
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
340 345 350
Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
370 375 380
Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
385 390 395 400
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
420 425 430
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
435 440 445
Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
450 455 460
Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
465 470 475 480
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
485 490 495
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
500 505 510
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
515 520 525
<210> 114
<211> 1013
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD19 97-G1RE-C2 CC x I2C0-scFc
<400> 114
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ile Ser Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
35 40 45
Gln Ser Leu Leu His Lys Asn Ala Phe Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu
50 55 60
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn
65 70 75 80
Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly
115 120 125
Thr Lys Val Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val
145 150 155 160
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
165 170 175
Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
180 185 190
Cys Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Glu Gly Ser Asn Lys Tyr
195 200 205
Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
210 215 220
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr
225 230 235 240
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Gly Thr Ile Phe Gly Asn Tyr
245 250 255
Gly Leu Glu Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
275 280 285
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
290 295 300
Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
305 310 315 320
Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr
325 330 335
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
340 345 350
Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp
355 360 365
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr
370 375 380
Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
385 390 395 400
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
420 425 430
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
435 440 445
Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
450 455 460
Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
465 470 475 480
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
485 490 495
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
500 505 510
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly
515 520 525
Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
530 535 540
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
545 550 555 560
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
565 570 575
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
580 585 590
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr
595 600 605
Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
610 615 620
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
625 630 635 640
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
645 650 655
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
660 665 670
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
675 680 685
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
690 695 700
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
705 710 715 720
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
725 730 735
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
740 745 750
Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
755 760 765
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
770 775 780
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
785 790 795 800
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
805 810 815
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
820 825 830
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
835 840 845
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser
850 855 860
Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
865 870 875 880
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
885 890 895
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
900 905 910
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
915 920 925
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
930 935 940
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
945 950 955 960
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
965 970 975
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
980 985 990
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
995 1000 1005
Leu Ser Pro Gly Lys
1010
<210> 115
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR1 CDH3 G8A 6-B12
<400> 115
Ser Tyr Pro Ile Asn
1 5
<210> 116
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR2 CDH3 G8A 6-B12
<400> 116
Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 117
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDR3 CDH3 G8A 6-B12
<400> 117
Ser Arg Gly Val Tyr Asp Phe Asp Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR1 CDH3 G8A 6-B12
<400> 118
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Phe
1 5 10 15
Ala
<210> 119
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR2 CDH3 G8A 6-B12
<400> 119
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 120
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDR3 CDH3 G8A 6-B12
<400> 120
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 121
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VH CDH3 G8A 6-B12
<400> 121
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Ser Arg Gly Val Tyr Asp Phe Asp Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> VL CDH3 G8A 6-B12
<400> 122
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 123
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH3 G8A 6-B12 scFv
<400> 123
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Ser Arg Gly Val Tyr Asp Phe Asp Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn
145 150 155 160
Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr
165 170 175
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
210 215 220
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 124
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH3 G8A 6-B12 x I2C0双特异性分子
<400> 124
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Ser Arg Gly Val Tyr Asp Phe Asp Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn
145 150 155 160
Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr
165 170 175
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
210 215 220
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
260 265 270
Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys
275 280 285
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
290 295 300
Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala
305 310 315 320
Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
325 330 335
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
340 345 350
Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr
355 360 365
Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val
385 390 395 400
Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr
405 410 415
Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro
420 425 430
Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly
435 440 445
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
450 455 460
Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu
465 470 475 480
Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
485 490 495
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
500 505
<210> 125
<211> 994
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CDH3 G8A 6-B12 x I2C0双特异性分子 HLE
<400> 125
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Pro Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Trp Thr Gly Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Ser Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Ser Arg Gly Val Tyr Asp Phe Asp Gly Arg Gly Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn
145 150 155 160
Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr
165 170 175
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
180 185 190
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala
210 215 220
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Tyr
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly
245 250 255
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
260 265 270
Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys
275 280 285
Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
290 295 300
Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala
305 310 315 320
Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn
325 330 335
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val
340 345 350
Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr
355 360 365
Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val
385 390 395 400
Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr
405 410 415
Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro
420 425 430
Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly
435 440 445
Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
450 455 460
Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu
465 470 475 480
Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val
485 490 495
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys
500 505 510
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
515 520 525
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
530 535 540
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
545 550 555 560
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
565 570 575
Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys
580 585 590
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
595 600 605
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
610 615 620
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
625 630 635 640
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
645 650 655
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
660 665 670
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
675 680 685
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
690 695 700
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
705 710 715 720
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
725 730 735
Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
755 760 765
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
770 775 780
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
785 790 795 800
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
805 810 815
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
820 825 830
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg
835 840 845
Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
850 855 860
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
865 870 875 880
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
885 890 895
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
900 905 910
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
915 920 925
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
930 935 940
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
945 950 955 960
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
965 970 975
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
980 985 990
Gly Lys
<210> 126
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR1 VH
<400> 126
Asn His Ile Ile His
1 5
<210> 127
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR2 VH
<400> 127
Tyr Ile Asn Pro Tyr Pro Gly Tyr His Ala Tyr Asn Glu Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR3 VH
<400> 128
Asp Gly Tyr Tyr Arg Asp Thr Asp Val Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 129
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR1 VL
<400> 129
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 130
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR2 VL
<400> 130
Tyr Thr Ser Arg Leu His Thr
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CDR3 VL
<400> 131
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 132
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) VH
<400> 132
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Pro Gly Tyr His Ala Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Arg Asp Thr Asp Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 133
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) VL
<400> 133
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 134
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) scFv
<400> 134
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Pro Gly Tyr His Ala Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Arg Asp Thr Asp Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Thr
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 135
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) x I2C0双特异性分子
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Pro Gly Tyr His Ala Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Arg Asp Thr Asp Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Thr
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu
<210> 136
<211> 986
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> BCMA A7 27-C4-G7 CC (44/100) x I2C0-scFc双特异性分子 HLE
<400> 136
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn His
20 25 30
Ile Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Pro Gly Tyr His Ala Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Met Thr Ser Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Tyr Arg Asp Thr Asp Val Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Thr
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
610 615 620
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
740 745 750
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
755 760 765
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
770 775 780
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
785 790 795 800
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
805 810 815
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
820 825 830
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
835 840 845
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
850 855 860
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
865 870 875 880
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
885 890 895
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
900 905 910
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
915 920 925
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
930 935 940
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
945 950 955 960
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
965 970 975
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VH CDR1
<400> 137
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 138
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VH CDR2
<400> 138
Ile Ile Ser Asp Ala Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 139
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VH CDR3
<400> 139
Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VL CDR1
<400> 140
Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Ala Asn Val Ala
1 5 10
<210> 141
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VL CDR2
<400> 141
Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
1 5
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VL CDR3
<400> 142
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr
1 5
<210> 143
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VH
<400> 143
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Ala Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC VL
<400> 144
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Ala Asn
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Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<400> 145
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1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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225 230 235 240
Glu Ile Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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195 200 205
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210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成多肽
<220>
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130 135 140
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165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
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195 200 205
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210 215 220
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<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC x I2C0-scFc_delGK双特异性HLE分子
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<210> 149
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc双特异性分子
<400> 149
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290 295 300
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325 330 335
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355 360 365
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<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc双特异性HLE分子
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Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Cys Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Cys Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
610 615 620
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
740 745 750
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
755 760 765
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
770 775 780
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
785 790 795 800
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
805 810 815
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
820 825 830
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
835 840 845
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
850 855 860
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
865 870 875 880
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
885 890 895
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
900 905 910
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
915 920 925
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
930 935 940
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
945 950 955 960
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
965 970 975
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 151
<211> 984
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.17 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK双特异性HLE
分子
<400> 151
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Ala Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Ala Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Cys Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Cys Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
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515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
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625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
755 760 765
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
770 775 780
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
785 790 795 800
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
805 810 815
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820 825 830
Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
835 840 845
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
850 855 860
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
865 870 875 880
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
885 890 895
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
900 905 910
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 152
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VH CDR1
<400> 152
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 153
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VH CDR2
<400> 153
Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 154
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VH CDR3
<400> 154
Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 155
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VL CDR1
<400> 155
Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 156
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VL CDR2
<400> 156
Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
1 5
<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VL CDR3
<400> 157
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr
1 5
<210> 158
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VH
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 159
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC VL
<400> 159
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 160
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC scFv
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 161
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0双特异性分子
<400> 161
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
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Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
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Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu
<210> 162
<211> 986
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc双特异性HLE分子
<400> 162
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
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165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
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275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc双特异性HLE分子
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<210> 166
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<212> PRT
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<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK双特异性HLE
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Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
865 870 875 880
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
885 890 895
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
900 905 910
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 167
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR1
<400> 167
Asp Tyr Tyr Met Tyr
1 5
<210> 168
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR2
<400> 168
Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 169
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH CDR3
<400> 169
Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr
1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR1
<400> 170
Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala
1 5 10
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<211> 7
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR2
<400> 171
Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
1 5
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<211> 9
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL CDR3
<400> 172
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr
1 5
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VH
<400> 173
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc VL
<400> 174
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc scFv
<400> 175
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
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<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc双特异性分子
<400> 176
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu
<210> 177
<211> 986
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc双特异性HLE分子
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
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625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
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675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
740 745 750
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
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885 890 895
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915 920 925
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930 935 940
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
945 950 955 960
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
965 970 975
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 178
<211> 984
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0-scFc_delGK双特异性HLE分子
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
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Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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115 120 125
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Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
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625 630 635 640
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675 680 685
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
755 760 765
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
770 775 780
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
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805 810 815
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820 825 830
Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
835 840 845
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850 855 860
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865 870 875 880
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885 890 895
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900 905 910
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915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 179
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc双特异性分子
<400> 179
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Cys Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Cys Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu
<210> 180
<211> 986
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc双特异性HLE分子
<400> 180
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Cys Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Cys Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
610 615 620
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
740 745 750
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
755 760 765
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
770 775 780
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
785 790 795 800
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
805 810 815
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
820 825 830
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
835 840 845
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
850 855 860
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
865 870 875 880
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
885 890 895
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
900 905 910
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
915 920 925
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
930 935 940
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
945 950 955 960
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
965 970 975
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985
<210> 181
<211> 984
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> PM 76-B10.11 CC x I2C0 CC (103/43)-scFc_delGK双特异性HLE
分子
<400> 181
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Asp Gly Gly Tyr Tyr Thr Tyr Tyr Ser Asp Ile Ile
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Pro Leu Leu Arg His Gly Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys
145 150 155 160
Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Val Tyr Trp
180 185 190
Asp Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ser Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Asp Gln Gln Leu Ile Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Cys Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Cys Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
610 615 620
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
755 760 765
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
770 775 780
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
785 790 795 800
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
805 810 815
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln
820 825 830
Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
835 840 845
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
850 855 860
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
865 870 875 880
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
885 890 895
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
900 905 910
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 182
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> IgG1 铰链
<400> 182
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 183
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> IgG2亚型铰链
<400> 183
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 184
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> IgG3亚型铰链
<400> 184
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
<210> 185
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> IgG3亚型铰链
<400> 185
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro
<210> 186
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> IgG4亚型铰链
<400> 186
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 187
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> G4S 接头
<400> 187
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 188
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)2 接头
<400> 188
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 189
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)3 接头
<400> 189
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 190
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)4 接头
<400> 190
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 191
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)5 接头
<400> 191
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 192
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)6 接头
<400> 192
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 193
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)7 接头
<400> 193
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 194
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> (G4S)8 接头
<400> 194
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
35 40
<210> 195
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 肽接头
<400> 195
Pro Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 196
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 肽接头
<400> 196
Pro Gly Gly Asp Gly Ser
1 5
<210> 197
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 肽接头
<400> 197
Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 198
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 肽接头
<400> 198
Gly Gly Gly Gly
1
<210> 199
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 六组氨酸标签
<400> 199
His His His His His His
1 5
<210> 200
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3e结合物VL
<400> 200
Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly
20 25 30
Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 201
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3e结合物VH
<400> 201
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Trp
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 202
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD3e结合物scFv
<400> 202
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Trp
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val
130 135 140
Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu
145 150 155 160
Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn
165 170 175
Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly
180 185 190
Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu
195 200 205
Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp
210 215 220
Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe
225 230 235 240
Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
<210> 203
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR1
<400> 203
Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 204
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR2
<400> 204
Asp Ile Asp Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 205
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH CDR3
<400> 205
Lys Lys Tyr Ser Thr Val Trp Ser Tyr Phe Asp Asn
1 5 10
<210> 206
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR1
<400> 206
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 207
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR2
<400> 207
Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 208
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL CDR3
<400> 208
Gln Ala Trp Gly Ser Ser Thr Ala Val
1 5
<210> 209
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VH
<400> 209
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Lys Lys Tyr Ser Thr Val Trp Ser Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 210
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc VL
<400> 210
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Val Pro Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Gly Ser Ser Thr Ala Val
85 90 95
Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 211
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc scFv
<400> 211
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Lys Lys Tyr Ser Thr Val Trp Ser Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ser
130 135 140
Val Ser Val Pro Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp
145 150 155 160
Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala
210 215 220
Trp Gly Ser Ser Thr Ala Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
<210> 212
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc双特异性分子
<400> 212
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Lys Lys Tyr Ser Thr Val Trp Ser Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ser
130 135 140
Val Ser Val Pro Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp
145 150 155 160
Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala
210 215 220
Trp Gly Ser Ser Thr Ala Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
290 295 300
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
340 345 350
Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
355 360 365
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser
385 390 395 400
Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val
405 410 415
Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
420 425 430
Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro
435 440 445
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu
450 455 460
Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp
465 470 475 480
Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490 495
<210> 213
<211> 984
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> MU 8-B7 CC x I2C0-scFc双特异性HLE分子
<400> 213
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Lys Lys Tyr Ser Thr Val Trp Ser Tyr Phe Asp Asn Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Ser Ser
130 135 140
Val Ser Val Pro Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp
145 150 155 160
Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Arg Lys Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr
195 200 205
Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala
210 215 220
Trp Gly Ser Ser Thr Ala Val Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
245 250 255
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
260 265 270
Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn
290 295 300
Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser
305 310 315 320
Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly
340 345 350
Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
355 360 365
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
370 375 380
Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser
385 390 395 400
Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val
405 410 415
Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
420 425 430
Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly Thr Pro
435 440 445
Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu
450 455 460
Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val Leu Trp
465 470 475 480
Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
485 490 495
Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
500 505 510
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
515 520 525
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
530 535 540
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
545 550 555 560
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr
565 570 575
Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
580 585 590
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
595 600 605
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
610 615 620
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
625 630 635 640
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
645 650 655
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
660 665 670
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
675 680 685
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
690 695 700
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
705 710 715 720
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
725 730 735
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
740 745 750
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
755 760 765
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
770 775 780
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
785 790 795 800
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
805 810 815
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu Gln
820 825 830
Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
835 840 845
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
850 855 860
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
865 870 875 880
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
885 890 895
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
900 905 910
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
915 920 925
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
930 935 940
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
945 950 955 960
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
965 970 975
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980
<210> 214
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VH CDR1
<400> 214
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 215
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VH CDR2
<400> 215
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 216
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VH CDR3
<400> 216
Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 217
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VL CDR1
<400> 217
Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 218
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VL CDR2
<400> 218
Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
<210> 219
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VL CDR3
<400> 219
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr
1 5
<210> 220
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CL-1 VH
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VH
<400> 220
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 221
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 VL
<400> 221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 222
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 scFv
<400> 222
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245
<210> 223
<211> 502
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 x I2C双特异性分子
<400> 223
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
245 250 255
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys
260 265 270
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn
275 280 285
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
290 295 300
Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
305 310 315 320
Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
340 345 350
Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp
355 360 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
385 390 395 400
Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
405 410 415
Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln
420 425 430
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe
435 440 445
Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly
450 455 460
Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu
465 470 475 480
Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly
485 490 495
Thr Lys Leu Thr Val Leu
500
<210> 224
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 x I2C-6His双特异性分子 -his 标签
<400> 224
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
245 250 255
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260 265 270
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
340 345 350
Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp
355 360 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly
485 490 495
Thr Lys Leu Thr Val Leu His His His His His His
500 505
<210> 225
<211> 990
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-1 x I2C-scFc双特异性scFc分子
<400> 225
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
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325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
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435 440 445
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<210> 226
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VH CDR1
<400> 226
Gly Tyr Tyr Met His
1 5
<210> 227
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VH CDR2
<400> 227
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 228
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VH CDR3
<400> 228
Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 229
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VL CDR1
<400> 229
Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala
1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
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Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VL CDR3
<400> 231
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr
1 5
<210> 232
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VH
<400> 232
Gln Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys His Gly Ala
1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 233
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 VL
<400> 233
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
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Thr Phe Gly Cys Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 234
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 scFv
<400> 234
Gln Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys His Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
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Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
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165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
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Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
245
<210> 235
<211> 502
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 x I2C双特异性分子
<400> 235
Gln Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys His Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
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100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
245 250 255
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys
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340 345 350
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355 360 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
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485 490 495
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<210> 236
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 x I2C-6His双特异性分子 - his 标签
<400> 236
Gln Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys His Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
245 250 255
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys
260 265 270
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn
275 280 285
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
290 295 300
Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
305 310 315 320
Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
340 345 350
Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp
355 360 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
385 390 395 400
Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
405 410 415
Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln
420 425 430
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe
435 440 445
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485 490 495
Thr Lys Leu Thr Val Leu His His His His His His
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CL-2 x I2C-scFc双特异性scFc分子
<400> 237
Gln Val Gln Met Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys His Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Cys Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Ile Thr Val Ala Gly Thr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
145 150 155 160
Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Trp Leu Ala Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser
180 185 190
Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
195 200 205
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Cys
225 230 235 240
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln
245 250 255
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys
260 265 270
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn
275 280 285
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
290 295 300
Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
305 310 315 320
Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu
325 330 335
Gln Met Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val
340 345 350
Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp
355 360 365
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
370 375 380
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu
385 390 395 400
Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly
405 410 415
Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln
420 425 430
Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe
435 440 445
Leu Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly
450 455 460
Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu
465 470 475 480
Tyr Tyr Cys Val Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly
485 490 495
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys
500 505 510
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
515 520 525
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
530 535 540
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
545 550 555 560
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
565 570 575
Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu
580 585 590
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
595 600 605
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
610 615 620
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
625 630 635 640
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
645 650 655
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
660 665 670
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
675 680 685
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
690 695 700
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
705 710 715 720
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
725 730 735
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
740 745 750
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr
755 760 765
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
770 775 780
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
785 790 795 800
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
805 810 815
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
820 825 830
Lys Pro Cys Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val
835 840 845
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
850 855 860
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
865 870 875 880
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
885 890 895
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
900 905 910
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
915 920 925
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
930 935 940
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
945 950 955 960
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
965 970 975
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985 990
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 HCDR1
<400> 238
Thr Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 239
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 HCDR2
<400> 239
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Tyr Ala Glu Ser Val Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 240
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 HCDR3
<400> 240
His Asp Tyr Ser Asn Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 241
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 LCDR1
<400> 241
Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 242
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 LCDR2
<400> 242
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 243
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 LCDR3
<400> 243
Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro Phe Thr
1 5
<210> 244
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 VH
<400> 244
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys His Asp Tyr Ser Asn Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 245
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 VL
<400> 245
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Ser Cys Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 246
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 VHVL
<400> 246
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys His Asp Tyr Ser Asn Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val Arg Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Ser Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile
<210> 247
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 x I2C
<400> 247
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys His Asp Tyr Ser Asn Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val Arg Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Ser Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val
<210> 248
<211> 986
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成多肽
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> CD70 x I2C x scFc
<400> 248
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Met Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Cys Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Phe Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys His Asp Tyr Ser Asn Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly
130 135 140
Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala
145 150 155 160
Ser Gln Ser Val Arg Ser Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
180 185 190
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Ser Cys
210 215 220
Gln Gln Tyr Gly Asp Leu Pro Phe Thr Phe Gly Cys Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
245 250 255
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala
260 265 270
Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Lys Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln
275 280 285
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr
290 295 300
Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr
305 310 315 320
Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg His Gly Asn
340 345 350
Phe Gly Asn Ser Tyr Ile Ser Tyr Trp Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
355 360 365
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
370 375 380
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
385 390 395 400
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
405 410 415
Ala Val Thr Ser Gly Asn Tyr Pro Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly
420 425 430
Gln Ala Pro Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Lys Phe Leu Ala Pro Gly
435 440 445
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
450 455 460
Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Val
465 470 475 480
Leu Trp Tyr Ser Asn Arg Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
485 490 495
Val Leu Gly Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
500 505 510
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
515 520 525
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
530 535 540
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
545 550 555 560
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu Glu
565 570 575
Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
580 585 590
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
595 600 605
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
610 615 620
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
625 630 635 640
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
645 650 655
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
660 665 670
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
675 680 685
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
690 695 700
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
705 710 715 720
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
725 730 735
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
740 745 750
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
755 760 765
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
770 775 780
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
785 790 795 800
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
805 810 815
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Cys Glu
820 825 830
Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Cys Val Ser Val Leu Thr Val Leu
835 840 845
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
850 855 860
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
865 870 875 880
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
885 890 895
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
900 905 910
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
915 920 925
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
930 935 940
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
945 950 955 960
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
965 970 975
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
980 985

Claims (22)

1.一种纯化双特异性抗体构建体的方法，所述构建体包含至少两个结构域：
·与靶，优选肿瘤靶结合的pI为5.0至9.5的第一结构域，
·第二结构域，所述第二结构域与人和猕猴CD3ε链的细胞外表位结合；以及
·任选地第三结构域，所述第三结构域包含两个多肽单体，每个多肽单体包含铰链、CH2结构域和CH3结构域，其中所述两个多肽单体通过肽接头彼此融合，其中所述构建体包含至少一个开放的二硫键，其中一个或多个所述结构域包含二硫键，
所述方法包括重折叠所述构建体的步骤，其中使所述构建体与重折叠缓冲剂接触以将所述构建体重折叠到其天然形式，
所述缓冲剂包含(i)浓度为至少0.1mM的氧化还原和/或氧化剂，和(ii)浓度为至少1M的离液剂，并且其中所述重折叠缓冲剂的pH对应于所述第一结构域的pI值的+/-4.5或所述整个构建体的pI值的+/-4.0。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述氧化剂选自由以下组成的组：铜(II)、溶解氧和(L)-脱氢抗坏血酸(DHA)，优选地铜(II)。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述氧化剂是硫酸铜(II)。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述氧化剂以0.1至10mM，优选0.1至1mM的浓度存在。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述氧化还原剂选自由以下组成的组：还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽、半胱氨酸/胱氨酸、半胱氨酸/半胱胺、半胱氨酸/胱胺、二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇和谷胱甘肽。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述氧化还原剂以0.1至10mM，优选0.1至1mM的浓度存在。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述重折叠缓冲剂包含氧化剂但不包含氧化还原剂。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述离液剂选自由以下组成的组：尿素、二甲基尿素、甲基脲、乙基脲、有机溶剂和鈲，优选鈲。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述离液剂以1.2至2M的浓度存在。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述pH值至少是4.9，优选在pH 5.0至9.5的范围内，更优选5.0至6.0或7.0至9.0，更优选约5.0或7.0至8.0。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述第一结构域结合CD33、CDH19、MSLN、FLT3、BCMA、CD19、MUC17、CDH3、CLDN18.2、CD70、EGFRviii、EpCAM、DLL3和/或PSMA。
12.如权利要求1所述的方法，其中在施加所述重折叠缓冲剂后例如通过尺寸排阻色谱法(单体峰百分比)测定的所述构建体的所述单体含量为至少40％、优选至少60％或至少65％、至少70％或甚至至少85％。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述方法在4℃与30℃之间的温度下进行，优选室温(25℃)。
14.如权利要求1所述的方法，其中所述方法的孵育时间为1至24h，优选4h。
15.如权利要求1所述的方法，其中使所述构建体与所述重折叠缓冲剂的接触(i)在下游纯化步骤中的加工流体(池)中或(ii)在下游纯化步骤中的色谱柱上进行。
16.如权利要求1所述的方法，其中所述构建体(i)在所述液体池中的浓度为0.5mg/ml至15mg/ml，优选0.7mg/ml至12mg/ml或(ii)在色谱柱上的浓度为5mg/ml至15mg/ml，优选10mg/ml至15mg/ml。
17.如权利要求15所述的方法，其中所述液体池选自由以下组成的组：收获的细胞培养液(HCCF)、色谱洗脱液池、蛋白A、蛋白L或蛋白G亲和色谱洗脱液池、过滤的病毒失活池、阳离子交换色谱法(CEX)单体池和CEX高分子量峰后池。
18.如权利要求1所述的方法，其包括以下步骤：
(a)提供收获的细胞培养液(HCCF)，其包含哺乳动物细胞分泌的所述双特异性抗体构建体；
(b)在适合于所述构建体与所述分离基质缔合的条件下，使所述HCCF与第一分离基质接触以进行色谱纯化，其中所述分离基质是选自由以下组成的组的亲和树脂：蛋白A、蛋白G、蛋白L和合成模拟亲和树脂；
(c)洗涤所述第一分离基质；
(d)从所述第一分离基质洗脱所述构建体；
(e)使包含所述构建体的洗脱液中的病毒失活；
(f)在适合于所述构建体与所述分离基质缔合的条件下，使包含所述构建体的洗脱液与第二分离基质接触以进行色谱精制，其中所述分离基质为阳离子交换色谱基质；
(g)洗涤所述第二分离基质；
(h)从所述第二分离基质洗脱所述构建体，其中将所述构建体分成两种级分：(i)包含构建体单体的单体池和(ii)包含构建体聚集物的高分子量池，
(i)通过过滤从包含级分(i)的所述洗脱液中分离病毒；以及
(j)任选地将洗脱液进行进一步的超滤和/或渗滤步骤，
其中将
(1)在收获前的细胞培养基中或在步骤(a)的HCCF中，和/或
(2)在步骤(b)或(f)中至少一个的所述分离基质上(在柱上)，和/或
(3)在至少一个步骤(d)、(e)或(h)中的加工流体(池)中的所述构建体与所述重折叠缓冲剂接触以将所述构建体重折叠到其天然形式。
19.如权利要求1所述的方法，其中所述构建体的第一结合结构域包含含有选自由以下组成的组的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有选自由以下组成的组的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区：
(a)如SEQ ID NO:4中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:5中所描绘的CDR-H2、如SEQ IDNO:6中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:1中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:2中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:3中所描绘的CDR-L3，
(b)如SEQ ID NO:29中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:30中所描绘的CDR-H2、如SEQ IDNO:31中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:34中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:35中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:36中所描绘的CDR-L3，
(c)如SEQ ID NO:42中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:43中所描绘的CDR-H2、如SEQ IDNO:44中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:45中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:46中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:47中所描绘的CDR-L3，
(d)如SEQ ID NO:53中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:54中所描绘的CDR-H2、如SEQ IDNO:55中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:56中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:57中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:58中所描绘的CDR-L3，
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(i)如SEQ ID NO:115中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:116中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:117中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:118中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:119中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:120中所描绘的CDR-L3，
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(k)如SEQ ID NO:137中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:138中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:139中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:140中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:141中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:142中所描绘的CDR-L3，
(l)如SEQ ID NO:152中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:153中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:154中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:155中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:156中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:157中所描绘的CDR-L3，
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(o)如SEQ ID NO:214中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:215中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:216中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:217中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:218中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:219中所描绘的CDR-L3；
(p)如SEQ ID NO:226中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:227中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:228中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:229中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:230中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:231中所描绘的CDR-L3；以及
(q)如SEQ ID NO:238中所描绘的CDR-H1、如SEQ ID NO:239中所描绘的CDR-H2、如SEQID NO:240中所描绘的CDR-H3、如SEQ ID NO:241中所描绘的CDR-L1、如SEQ ID NO:242中所描绘的CDR-L2和如SEQ ID NO:243中所描绘的CDR-L3。
20.如权利要求1所述的方法，其中将所述方法应用于通过上游连续制造方法生产的构建体。
21.一种执行如权利要求1所述的方法的设备。
22.一种通过如权利要求1所述的方法纯化的双特异性抗体构建体。
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