CN112684056B - 一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，采用高效液相色谱法检测，选择流动相组分，科学配比，采用梯度洗脱，设定洗脱条件，能快速、精确检测克林霉素磷酸酯阴道片中克林霉素磷酸酯的含量，以实现简便、快速、精确控制产品质量的目的。

Description

一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法
技术领域
本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法。
背景技术
克林霉素磷酸酯(clindamycin phosphate)是广泛应用于革兰阳性球菌及厌氧菌所致严重感染的半合成抗菌药物，为半合成抗生素，是林可霉素的衍生物。克林霉素磷酸酯在体外无效，在体内可以迅速转化成抗菌有效的克林霉素。克林霉素磷酸酯阴道片治疗细菌性阴道炎治愈率高且疗程短，具有生产、使用方便和起效快的特点。
专利CN103487518B，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；磷酸二氢钾溶液-甲醇为流动相，采用高效液相色谱法进行检测，关键控制检测条件，但含量测定中主峰分离不明显，主峰含量下降较大，主峰保留时间偏长。
发明内容
鉴以此，本发明提出一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，以实现快速、精确检测克林霉素磷酸酯片剂中克林霉素磷酸酯的含量。
本发明的技术方案是这样实现的：一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法：其中，高效液相色谱法的色谱条件如下：
固定相：辛烷基硅烷键合硅胶
流动相A：磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁
流动相B：甲酸水溶液
流速：1.3～1.5ml/min
柱温：50～70℃
检测波长：200～400nm；
洗脱条件为：
(1)第0～5.0min，流动相A与流动相B的体积比为40～45:55～60；
(2)第5.01～9min，流动相A与流动相B的体积比为55～60:40～45；
(3)第9.01～25min，流动相A与流动相B的体积比为75～80:20～25；
该方法包括以下步骤：
S1、取克林霉素磷酸酯阴道片，研磨后溶解于乙醇中，过滤，
S2、量取步骤S1过滤后的上清液0.3～1.5ml置量瓶中，用流动相稀释，作为供试品溶液，
S3、将供试品溶液注入到高效液相色谱仪中进行高效液相色谱法检测，对克林霉素磷酸酯阴道片剂中克林霉素磷酸酯含量的检测。
进一步的，所述流动相B为质量分数0.1～1.3％的甲酸水溶液。
进一步的，所述流动相中磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁的体积比为(10～15):(3～8):(11～15):(2～4):(1～3)。
进一步的，所述的氟代有机酸选自三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸中的任一种。
进一步的，所述检测条件中流速为1.4ml/min。
进一步的，所述检测条件中柱温为60℃。
进一步的，所述步骤S2中用流动相稀释至每毫升含克林霉素3.2～5.2mg的溶液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供的克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，采用辛烷基硅烷键合硅胶为固定相，磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁为流动相A，甲酸水溶液为流动相B，选择梯度洗脱，按照HPLC检测的条件，检测结果显示保留时间为11min，理论塔板数大部分在2000以上，拖尾因子在0.8～1.1范围内，分离度0.1～7.2，说明本发明方法检测迅速，主峰保留时间适中，峰形较稳定，拖尾现象和分离度较好，从而可以说明本方法符合要求，色谱分离效果和测量精度较高，提高了检测的准确率，为克林霉素磷酸酯片的质量控制提供了可参考依据。
其中，改进流动相A，限定磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁的体积比，协同洗脱条件，有效改善拖尾现象，拖尾因子和分离度较好，理论塔板数更高，缩短主峰保留时间。
附图说明
图1为本发明实施例3克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定的HPLC图谱。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定
HPLC检测条件如下：
固定相：辛烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：磷酸二氢钾-乙腈-水-七氟丁酸-氯化铁，体积比为10:3:11:2:1；
流动相B：质量分数为0.1％的甲酸水溶液；
流速：1.3ml/min；
柱温：50℃；
检测波长：200nm；
洗脱条件为：
(1)第0～5.0min，流动相A与流动相B的体积比为40:60；
(2)第5.01～9min，流动相A与流动相B的体积比为55:45；
(3)第9.01～25min，流动相A与流动相B的体积比为75:25；
S1、取克林霉素磷酸酯阴道片8片(32mg)，研磨后溶解于乙醇中，过滤，
S2、量取步骤S1过滤后的上清液0.3ml置量瓶中，用流动相稀释至每毫升含克林霉素3.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，
S3、将供试品溶液注入到高效液相色谱仪中进行高效液相色谱法检测，对克林霉素磷酸酯阴道片剂中克林霉素磷酸酯含量的检测。
实施例2克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定
HPLC检测条件如下：
固定相：辛烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：磷酸二氢钾-乙腈-水-五氟丙酸-氯化铁，体积比为15:8:15:4:3；
流动相B：质量分数为1.3％的甲酸水溶液；
流速：1.5ml/min；
柱温：70℃；
检测波长：400nm；
洗脱条件为：
(1)第0～5.0min，流动相A与流动相B的体积比为45:55；
(2)第5.01～9min，流动相A与流动相B的体积比为60:40；
(3)第9.01～25min，流动相A与流动相B的体积比为80:20；
S1、取克林霉素磷酸酯阴道片13片(52mg)，研磨后溶解于乙醇中，摇匀，过滤，
S2、量取步骤S1过滤后的上清液1.5ml置量瓶中，用流动相稀释至每毫升含克林霉素5.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，
S3、将供试品溶液注入到高效液相色谱仪中进行高效液相色谱法检测，对克林霉素磷酸酯阴道片剂中克林霉素磷酸酯含量的检测。
实施例3克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定
HPLC检测条件如下：
固定相：辛烷基硅烷键合硅胶
流动相A：磷酸二氢钾-乙腈-水-三氟乙酸-氯化铁，体积比为13:5:12:3:2；
流动相B：质量分数为1.0％的甲酸水溶液；
流速：1.4ml/min；
柱温：60℃；
检测波长：210nm。
洗脱条件为：
(1)第0～5.0min，流动相A与流动相B的体积比为42:58；
(2)第5.01～9min，流动相A与流动相B的体积比为57:43；
(3)第9.01～25min，流动相A与流动相B的体积比为78:22；
S1、取克林霉素磷酸酯阴道片10片(40mg)，研磨后溶解于乙醇中，过滤，
S2、量取步骤S1过滤后的上清液0.8ml置量瓶中，流动相稀释至每毫升含克林霉素4.0mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，
S3、将供试品溶液注入到高效液相色谱仪中进行高效液相色谱法检测，对克林霉素磷酸酯阴道片剂中克林霉素磷酸酯含量的检测。
采用实施例3的方法测定克林霉素磷酸酯阴道片后，进行方法学考察，具体分析如下：
Figure BDA0002875320600000051
Figure BDA0002875320600000061
实施例4
本实施例与实施例3的区别在于流动相中磷酸二氢钾-乙腈-水-三氟乙酸-氯化铁的体积比为18:2:16:5:5。
采用实施例4的方法测定克林霉素磷酸酯阴道片后，进行方法学考察，具体分析如下：
峰号 保留时间 面积 高度 理论塔板数(USP) 拖尾因子 分离度(USP)
1 2.513 2652 397 68 - -
5 3.618 3617 516 1030 1.218 1.234
10 8.833 6937 1345 4054 1.236 8.364
15 12.367 2903 323 193 1.978 7.210
结果显示拖尾因子在12min时为1.978，拖尾现象较实施例3明显，分离度较实施例3高。
对比例1
本对比例与实施例3的区别在于洗脱条件为等度洗脱，在0～25min中流动相A与流动相B的体积比为57:43。
采用对比例1的方法测定克林霉素磷酸酯阴道片后，进行方法学考察，具体分析如下：
Figure BDA0002875320600000062
Figure BDA0002875320600000071
结果显示保留时间过长，达到23min，拖尾现象和分离度较实施例3更明显，含量检测不够精准。
对比例2
本对比例与实施例3的区别在于流动相为磷酸二氢钾-乙腈。
采用对比例2的方法测定克林霉素磷酸酯阴道片后，进行方法学考察，具体分析如下：
峰号 保留时间 面积 高度 理论塔板数(USP) 拖尾因子 分离度(USP)
1 4.065 2052 357 54 1.969 -
5 6.218 4967 516 1029 1.993 0.114
10 11.603 10137 1755 4035 1.990 1.200
15 18.997 2903 3931 93 - 0.219
20 22.149 15402 1402 2945 - 0.303
结果显示，保留时间过长，达到22min，拖尾现象和分离度较实施例3更明显，含量检测不够精准。
由上述测定结果可知，本发明采用了磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁为流动相A，甲酸水溶液为流动相B，调整洗脱条件，改善分离效果；梯度洗脱显著改善克林霉素磷酸酯的拖尾现象，拖尾因子在0.8～1.1的范围内，符合要求，说明色谱分离效果和测量精度较高，在11min能精准测出，缩短运行时间，结果证明，在此检测下，目标成分相应良好，分离度符合要求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，其特征在于：采用高效液相色谱法检测，其中，高效液相色谱法的色谱条件如下：
固定相：辛烷基硅烷键合硅胶，
流动相A：体积比为(10～15):(3～8):(11～15):(2～4):(1～3)的磷酸二氢钾-乙腈-水-氟代有机酸-氯化铁，
流动相B：质量分数0.1～1.3％的甲酸水溶液，
流速：1.3～1.5ml/min，
柱温：50～70℃，
检测波长：200～400nm；
洗脱条件为：
(1)第0～5.0min，流动相A与流动相B的体积比为40～45:55～60；
(2)第5.01～9min，流动相A与流动相B的体积比为55～60:40～45；
(3)第9.01～25min，流动相A与流动相B的体积比为75～80:20～25；
该方法包括以下步骤：
S1、取克林霉素磷酸酯阴道片，研磨后溶解于乙醇中，过滤，
S2、量取步骤S1过滤后的上清液0.3～1.5ml置量瓶中，用流动相稀释，作为供试品溶液，
S3、将供试品溶液注入到高效液相色谱仪中进行高效液相色谱法检测，确定克林霉素磷酸酯阴道片剂中克林霉素磷酸酯的含量。
2.如权利要求1所述的一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，其特征在于：所述的氟代有机酸选自三氟乙酸、五氟丙酸、七氟丁酸、九氟戊酸、十一氟己酸、十三氟庚酸、十五氟辛酸中的任一种。
3.如权利要求1所述的一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，其特征在于：所述色谱条件中流速为1.4ml/min。
4.如权利要求1所述的一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，其特征在于：所述色谱条件中柱温为60℃。
5.如权利要求1所述的一种克林霉素磷酸酯阴道片的含量测定方法，其特征在于：所述步骤S2中用流动相稀释至每毫升含克林霉素3.2～5.2mg的溶液。
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