CN105092757A - 一种克林霉素磷酸酯的分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种克林霉素磷酸酯氧化杂质，其通过对克林霉素磷酸酯在双氧水中氧化得到。该分析方法操作简单，适合该杂质的快速检测。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析化学领域，特别涉及克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析和制备方法。
背景技术
克林霉素磷酸酯属于克林霉素前药，其在体内可迅速水解为克林霉素而显示药理活性。相比于克林霉素，克林霉素磷酸酯具有抗菌活性高、吸收快、脂溶性及渗透性强、副作用少等特点。
克林霉素磷酸酯分子结构中含有磷酸酯键、硫甲基、卤素等活泼基团，易发生水解、氧化、取代、消除、重排等反应。分子中含有硫原子，易被氧化产生高价硫，或在酸性条件下磷酸酯键和硫甲基易水解。在碱性或受热时化合物容易产生卤素水解和消除反应。在上述降解过程中还会发生异构化反应。
由于克林霉素磷酸酯的稳定性低，因此对其稳定性和有关物质的充分研究对于保障药品安全至关重要。
发明内容
我们对克林霉素磷酸酯在酸破坏、碱破坏、热破坏、氧破坏以及光破坏下的的稳定性进行了研究。
母液的制备：精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为破坏性试验的母液。
a.酸破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入1ml1mol/L盐酸溶液，充分摇匀，室温下放置10h，用1ml1mol/L氢氧化钠溶液中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀。
b.碱破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入1ml1mol/L氢氧化钠溶液，充分摇匀，室温下放置10h，用1ml1mol/L盐酸溶液中和后，加流动相稀释至刻度，摇匀。
c.热破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置100℃水浴中加热30min，取出，放冷至室温。
d.氧破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀。
e.光破坏：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，5000lx照度下放置10小时，加流动相稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，并对各有关物质进行归属。
表1、破坏性试验样品的杂质与主成分含量（归一化法）及杂质归属
通过对比可以发现，样品在酸破坏、光照破坏条件下，杂质均没有明显变化；在碱破坏条件下，杂质G有所增加，有少量杂质A生成；在加热破坏条件下，有大量杂质F，杂质E生成，相对保留时间0.10，0.11，0.13，0.16，0.75处，均有少量杂质生成；在氧化破坏条件下，有大量杂质A生成，并且在相对保留时间0.33处有一个含量9.99%的未知杂质生成。
由于该氧化杂质含量较大，因此有必要对其进一步进行研究。
本发明涉及一种克拉霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法：
（1）母液的制备：精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为破坏性试验的母液；
（2）氧化：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀；
（3）分离：精密量取上述溶液20μl注入高效液相色谱仪，利用二维液相进行分析和检测：
A、一维液相色谱条件：
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=790：210，v/v
流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=400：600，v/v
柱温30℃；
流速为每分钟1.1ml；
检测波长为210nm；
梯度洗脱条件：
| 时间（min） | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 100 | 0 |
| 13 | 100 | 0 |
| 18 | 50 | 50 |
| 39 | 50 | 50 |
| 40 | 100 | 0 |
| 50 | 100 | 0 |
B、二维液相色谱条件：
流动相A：0.1%甲酸
流动相B：乙腈
| 时间（min） | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 95 | 5 |
| 1 | 95 | 5 |
| 10 | 0 | 100 |
C、质谱：安捷伦Q-TOF电压：+175V
截取一维液相中较大的未知杂质，进入二维液相，起始1分钟冲去磷酸盐，再将样品冲入高分辨质谱仪，确定该氧化杂质的精确质量为521.1200，其元素组成为C18H35N2O9PSCl，结构为：。
所述0.1mol/L磷酸二氢钾溶液采用450mg/mL的氢氧化钾溶液调pH值至6.0得到。
本发明的分析方法操作简便，非常适合克林霉素磷酸酯氧化杂质的快速检测。
附图说明
图1为克林霉素磷酸酯氧破坏后的LC-MS图谱。
具体实施方式
精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为破坏性试验的母液；
精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀；
精密量取上述溶液20μl注入高效液相色谱仪，利用二维液相进行分析和检测。
A、一维液相色谱条件：
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（采用450mg/mL的氢氧化钾溶液调pH值至6.0得到）：乙腈=790：210，v/v
流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（采用450mg/mL的氢氧化钾溶液调pH值至6.0得到）：乙腈=400：600，v/v
柱温30℃；流速为每分钟1.1ml；检测波长为210nm；
梯度洗脱条件：
| 时间（min） | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 100 | 0 |
| 13 | 100 | 0 |
| 18 | 50 | 50 |
| 39 | 50 | 50 |
| 40 | 100 | 0 |
| 50 | 100 | 0 |
B、二维液相色谱条件：
流动相A：0.1%甲酸
流动相B：乙腈
| 时间（min） | 流动相A | 流动相B |
| 0 | 95 | 5 |
| 1 | 95 | 5 |
| 10 | 0 | 100 |
质谱：安捷伦Q-TOF电压：+175V
截取一维液相中较大的未知杂质，进入二维液相，起始1分钟冲去磷酸盐，再将样品冲入高分辨质谱仪，确定该氧化杂质的精确质量为521.1200，其元素组成为C18H35N2O9PSCl，结构为：。
Claims (6)
1.一种克林霉素磷酸酯氧化杂质，其结构为：
。
2.一种克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法，其包括如下步骤：
（1）母液的制备：精密称取克林霉素磷酸酯1882.48mg，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置，作为母液；
（2）氧化：精密吸取母液1ml，置25ml量瓶中，加入2ml2%双氧水溶液，充分摇匀，室温下放置30min，加流动相稀释至刻度，摇匀；
（3）分离：精密量取上述溶液20μl注入高效液相色谱仪，利用二维液相进行分析和检测，高分辨质谱确定该氧化杂质的精确质量为521.1200，其元素组成为C18H35N2O9PSCl，结构为：。
3.根据权利要求2所述的克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法，其特征在于：
A、一维液相色谱条件：
流动相A：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=790：210，v/v；
流动相B：0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=400：600，v/v；
柱温30℃；
流速为每分钟1.1ml；
检测波长为210nm；
梯度洗脱条件：
B、二维液相色谱条件：
流动相A：0.1%甲酸；
流动相B：乙腈；
C：高分辨质谱：安捷伦Q-TOF，电压为+175V；
截取一维液相中较大的未知杂质，进入二维液相，起始1分钟冲去磷酸盐，再将样品冲入高分辨质谱仪。
4.根据权利要求2所述的克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法，其特征在于：所述流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈=790：210，v/v。
5.根据权利要求3或4所述的克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法，其特征在于：所述0.1mol/L磷酸二氢钾溶液采用450mg/mL的氢氧化钾溶液调pH值至6.0得到。
6.根据权利要求3所述的克林霉素磷酸酯氧化杂质的分析方法，其特征在于：所述的较大的未知杂质的相对保留时间为0.33。
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