CN112568056A - 一种高腺苷蛹虫草栽培方法 - Google Patents
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Abstract
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。本发明采用液体处理器进行细菌灭活处理，且又不影响蛹虫草中其他有效成分在蛹虫草中的富集。
Description
技术领域
本发明涉及种植技术领域，具体为一种高腺苷蛹虫草栽培方法。
背景技术
蛹虫草(Cordyceps militaris)又名蛹草菌、北虫草，分类学上属于真菌门、子囊菌亚门，核菌纲，球壳目，麦角菌科，虫草属。虫草素是在1950年从北虫草的培养液中分离出来的一种3’-脱氧腺嘌呤核苷，它具有显著的药理作用，如抑菌作用、抗肿瘤作用、抑制病毒作用，以及增强免疫功能、防治心脑血管疾病等。现代科学研究表明，虫草素是蛹虫草重要的活性成分，蛹虫草中虫草素含量为冬虫夏草的数十倍，是获得虫草素的主要来源。蛹虫草具有抗疲劳、抗肿瘤、耐缺氧、增强免疫力以及抑制血小板的凝结等作用。蛹虫草作为野生虫草的替代品，市场空间大。
蛹虫草人工栽培投资少、效益高，生产周期短，一年四季均可培养，但是普通蛹虫草子实体中硒含量很低，而在培养基中加入纳米硒，通过蛹虫草的生物转化，蛹虫草中的硒含量将大大提高，并且基本以有机硒的形态存在于子实体中，从而极易被人体吸收利用；腺苷是一种内源性嘌呤核苷酸，具有广泛的生理活性，可降低心律，影响心肌收缩力，松弛血管平滑肌，抑制脂肪分解，减少肾血流量和肾素释放，减少儿茶酚胺释放，抑制中枢神经系统，增加cAMP等多种药理作用。蛹虫草中腺苷的含量与冬虫夏草相似，甚至更高，多在0.01％以上。腺苷是我国蛹虫草子实体的质量标准之一，要求腺苷含量不少于0.055％，但目前富硒蛹虫草中的腺苷含量较低，无法满足人们对蛹虫草营养价值的需求。
因此，如何栽培出高含量腺苷的蛹虫草，是有待解决的问题。因此，申请人经过多年研究及培育研发出一种高腺苷蛹虫草栽培方法。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种高腺苷蛹虫草栽培方法。用该方法栽培蛹虫草能大幅度地提高蛹虫草子实体中腺苷的含量。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
进一步地，所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO41.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
进一步地，所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
进一步地，所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
进一步地，所述营养液的组成如下：琼脂16克，氯化钠8克，蔗糖6克、牛肉糕5克、KH2 PO 4 3克和MgSO 42克。
进一步地，所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于20-28℃培养40-45天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理5-15分钟，循环2次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
进一步地，所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制2500GS,电场120KV。
进一步地，所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.5～1：1.5计算。
进一步地，所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌3-15分钟，经过紫外线杀菌后经过3500-6000GS磁场抗氧化处理。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：现有技术大都采用高压灭菌，但是高温会导致纳米硒聚沉，甚至导致其变性，从而失去效果，本发明采用液体处理器进行细菌灭活处理，且又不影响蛹虫草中其他有效成分在蛹虫草中的富集。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
在本实施例中，所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO4 1.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
在本实施例中，所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
在本实施例中，所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
在本实施例中，所述营养液的组成如下：琼脂16克，氯化钠8克，蔗糖6克、牛肉糕5克、KH 2 PO 4 3克和MgSO 42克。
在本实施例中，所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于20-28℃培养40-45天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理5-15分钟，循环2次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
在本实施例中，所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制2500GS,电场120KV。
在本实施例中，所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.5～1：1.5计算。
在本实施例中，所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌3-15分钟，经过紫外线杀菌后经过3500-6000GS磁场抗氧化处理。
实施例1
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO4 1.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
所述营养液的组成如下：琼脂16克，氯化钠8克，蔗糖6克、牛肉糕5克、KH 2 PO 4 3克和MgSO 42克。
所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于23℃培养40天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理5分钟，循环1次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制3000GS,电场100KV。
所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.5：1.5计算。
所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌5分钟，经过紫外线杀菌后经过3500GS磁场抗氧化处理。
实施例2
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO4 1.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
所述营养液的组成如下：琼脂20克，氯化钠10克，蔗糖5克、牛肉糕8克、KH 2 PO 46克和MgSO4 5克。
所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于25℃培养43天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理10分钟，循环2次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制4000GS,电场120KV。
所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.6：1.5计算。
所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌10分钟，经过紫外线杀菌后经过4500GS磁场抗氧化处理。
实施例3
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO4 1.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
所述营养液的组成如下：琼脂20克，氯化钠10克，蔗糖5克、牛肉糕8克、KH 2 PO 46克和MgSO4 5克。
所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于28℃培养45天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理12分钟，循环3次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制4500GS,电场80KV。
所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.8：1.5计算。
所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌12分钟，经过紫外线杀菌后经过5000GS磁场抗氧化处理。
实施例4
一种高腺苷蛹虫草栽培方法，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO4 1.2克，KH2PO4 2.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
所述营养液的组成如下：琼脂18克，氯化钠6克，蔗糖3克、牛肉糕10克、KH 2 PO 48克和MgSO4 8克。
所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于28℃培养45天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理15分钟，循环5次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制4500GS,电场80KV。
所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比1：1.5计算。
所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌15分钟，经过紫外线杀菌后经过6000GS磁场抗氧化处理。
对比实施例A,采用常规方式进行，培养液中不添加硒米。
对比实施例B,采用常规方式进行，培养液中添加硒米，不经过抗氧化处理。
对比实施例C,采用常规方式进行，培养液中添加硒米，经过抗氧化处理。
通过实验对比分析，对比实施例A与实施例1、2、3、4进行比较，在不添加硒米的混合的培养中接种培养的子实体中检测腺苷含量未增加(以腺苷基值1.5毫克每克的含量进行计算)。
通过实验对比分析，对比实施例B与实施例1、2、3、4进行比较，在添加硒米的混合的培养中接种培养的子实体中检测腺苷平均含量2.11-2.89(以腺苷基值1.5毫克每克的含量进行计算)。
通过实验对比分析，对比实施例C与实施例1、2、3、4进行比较，培养液中添加硒米，经过抗氧化处理,子实体中检测腺苷平均含量2.5-3.5(以腺苷基值1.5毫克每克的含量进行计算)。
以上结构表明：通过抗氧化处理可以进一步的促进蛹虫草的生长，消除了因硒米浓度的不同对蛹虫草的生长抑制作用，且硒米的增加可以显著地提高虫草中腺苷的含量，可见，硒米提纯对虫草腺苷含量的促进作用相对比较好。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (9)
1.一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤，
1)分离培养，将分离自虫草子实体的真菌类菌株经固体培养和摇床培养后，得到菌丝体；
2)接种培养，将步骤1)得到的菌丝体接种到含参混多糖提纯及木薯蚕蛹干粉的培养液中进行深层发酵，得深层发酵菌丝体；
3)杀菌处理，将步骤2)得到的深层发酵菌丝体，使菌丝体和微生物经过液体处理器进行过滤处理；然后离心发酵液，分离得到菌丝体和菌液；
4)步骤3)得到的菌液加入到蛹虫草子实体培养基中继续培养，得到蛹虫草子实体。
2.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述步骤2中深层发酵培养液为：葡萄糖15克，酵母浸膏粉5克，MgSO41.2克，KH2PO42.2克，蛋白胨0.5克，余量为水。
3.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述步骤2中的多糖为麦芽糖或是壳聚糖按照1:2混合而成。
4.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述蛹虫草子实体培养基为硒米和营养液按5:1比例混合而成。
5.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述营养液的组成如下：琼脂16克，氯化钠8克，蔗糖6克、牛肉糕5克、KH 2PO 43克和MgSO 42克。
6.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述的蛹虫草菌丝体是指将蛹虫草组织分离获得优良菌种或复壮菌种接种到PDA斜面培养基上，于20-28℃培养40-45天获得；
步骤(3)中所述的破壁处理的除菌方式是液体处理器处理，液体处理器为梯度磁场处理器，处理5-15分钟，循环1-5次；
步骤(2)中所述的继续培养的过程包括发菌管理、转色期管理、子实体生长阶段管理和采收。
7.根据权利要求1或6所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述液体处理包含磁场与电场，磁场控制2500-5500GS,电场80-120KV。
8.根据权利要求1所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述的菌液的加入量按菌液：蛹虫草子实体培养基＝体积比0.5～1.2：1.5计算。
9.根据权利要求4所述的一种高腺苷蛹虫草栽培方法，其特征在于，所述硒米和营养液按5:1比例混合后经过紫外线杀菌3-15分钟，经过紫外线杀菌后经过3500-6000GS磁场抗氧化处理。
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