CN110684702B - 一种博斯氏菌属y4及其在促进真姬菇生长中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种博斯氏菌属Y4及其在促进真姬菇生长中的应用，涉及食用菌生物技术领域。该博斯氏菌属(Bosea sp.)Y4，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No:M 2019634；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。将其应用到促进真姬菇的生长中，通过菌液培养、栽培施加、出菇管理，加入博斯氏菌属Y4的真姬菇菌丝生长速率增加、子实体菌盖直径增加、菌柄长，满瓶时间缩短、瓶产量增加，能有效提高真姬菇的生长速率，缩短真姬菇的生产周期，能够提高真姬菇产量，保证产品绿色健康无污染，提高真姬菇生产经济和社会效益。

Description

一种博斯氏菌属Y4及其在促进真姬菇生长中的应用
技术领域
本发明涉及食用菌生物技术领域，具体涉及一种博斯氏菌属Y4及其在促进真姬菇生长中的应用。
背景技术
真姬菇(Hypsizygus marmoreus(Peck)H.E.Bigelow)又名玉蕈，斑玉蕈属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、玉蕈属，外形美观，质地脆嫩，味道鲜美，具有海蟹味。子实体中等至较大。斑玉蕈的蛋白质中氨基酸种类齐全，包括8种人体必需氨基酸，其中赖氨酸、精氨酸含量高于一般菇类，对青少年智力、增高起着重要作用。斑玉蕈子实体中提取的β-1，3-D葡聚糖具有很高的抗肿瘤活性，而且从斑玉蕈中分离得到的聚合糖酶的活性也比其它菇类要高许多，其子实体热水提取物和有机溶剂提取物有清除体内自由基作用，因此，具有防止便秘、抗癌、防癌、提高免疫力、预防衰老、延长寿命的独特功效。作为大众消费的食品其货架期长，是一种低热量、低脂肪的保健食品。
传统真姬菇种植方法一般采用化肥来提高产量，随着化肥的大量使用，其利用率不断降低，仅靠大量增施化肥来提高真姬菇产量是有限的，更何况还有环境污染等一系列的问题。微生物肥料是以微生物生命活动导致农作物得到特定的肥料效应，达到促进农作物生长或产量增加或质量提高的一类制品。不仅可以为农作物提供生长所必需的各种营养元素，增加土壤中有益微生物的活性，同时可减少化学肥料的过量施用，克服不科学施肥所造成的弊端。因此寻找适宜的微生物，既能够促进真姬菇产量增加又不会造成人体健康危害和环境污染，保证产品绿色健康无污染，变得尤为重要。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种博斯氏菌属Y4，对真姬菇的生长具有促进作用；本发明所要解决的技术问题是提供博斯氏菌属Y4在促进真姬菇生长中的应用，以解决传统真姬菇种植方法产量低，环境污染的问题。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案为：
一种博斯氏菌属(Bosea sp.)Y4，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No:M 2019634；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。
上述博斯氏菌属Y4在促进真姬菇生长中的应用。
进一步的，博斯氏菌属Y4以发酵液方式加入。
进一步的，博斯氏菌属Y4发酵液的施用量为4～6mL，发酵液中博斯氏菌属Y4的浓度为5×107～1×108CFU/mL。
有益效果：与现有技术相比，本发明从真姬菇栽培基质中筛选分离并鉴定了一种促进真姬菇生长的细菌博斯氏菌属Y4，通过菌液培养、栽培施加、出菇管理，加入博斯氏菌属Y4的真姬菇菌丝生长速率增加、子实体菌盖直径增加、菌柄长，满瓶时间缩短、瓶产量增加，能有效提高真姬菇的生长速率，缩短真姬菇的生产周期，能够提高真姬菇产量，保证产品绿色健康无污染，提高真姬菇生产经济和社会效益。
附图说明
图1是筛选出来的菌与真姬菇真菌在平板上共培养5d的结果图；
图2是博斯氏菌对真姬菇子实体菌盖直径的影响图；
图3是博斯氏菌对真姬菇子实体菌柄高度的影响图；
图4是博斯氏菌对真姬菇满瓶时间的影响图；
图5是博斯氏菌对真姬菇单瓶产量的影响图；
图6是博斯氏菌对真姬菇菇蕾形成天数的影响图；
图7是博斯氏菌的系统进化树图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明，但这些实施例并不用来限制本发明。
实施例1
1)细菌的分离筛选和鉴定
从山东常生源食用菌公司随机采取真姬菇菌棒栽培料，通过梯度稀释法，采用加富培养基平板稀释涂布，从中共分离得到42个细菌分离物。然后利用NA培养基进行分离纯化。
其中，NA培养基配方为蛋白胨10g、牛肉膏5g、氯化钠5g、琼脂20g、pH7.2～7.4。
将初筛分离纯化后保存的菌株接入NA液体培养基的锥形瓶中，28℃，180r/min，摇床培养48h，得到培养好的饱和细菌菌液，用移液枪按无菌操作要求将细菌菌液各取0.2mL接种于加富平板(葡萄糖20g、马铃薯200g、蛋白胨10g、酵母膏3g、琼脂15-20g、水1000mL，pH7.0)，用涂布器均匀涂抹，用打孔器取真姬菇真菌1cm，放于涂好菌的平板中央。对照组加入0.2mL的无菌水，接种后置于28℃培养箱培养，每天观察菌丝的生长状况，拍照记录。培养5d时结果如图1所示。
对该菌株进行16S rDNA序列进行扩增，将PCR扩增后的产物送至上海生工生物工程公司完成序列测定，其序列如SEQ ID NO.1所示。在NCBI上对测序结果进行Blast分析，并且利用MEGA7.0构建系统进化树如图7。测序结果经Blast比对，确定该菌株为博斯氏菌属。
3)生理生化特性
革兰氏阴性，氧化酶，接触酶阳性，杆状。有运动性，单端极生鞭毛。菌落光滑，圆形，凸起。有尿酶活性，能还原柠檬酸盐，同化葡萄糖，阿拉伯糖，甘露醇，麦芽糖，己二酸。
实施例2
博斯氏菌属Y4对出菇的影响
在学校合作食用菌企业车间，栽培真姬菇4000瓶，按照正常企业生产标准生产，其中2000瓶栽培瓶中在接种时施加菌剂，每瓶施加浓度为5×107～1×108CFU/mL的博斯氏菌属Y4 5mL；同时设置喷施相同总体积的无菌水2000瓶作为对照，观察真姬菇出菇速度以及产量。食用菌促生细菌对真姬菇菌株的子实体性状影响如图2至图6所示，由图2可以看出加入促生细菌的真姬菇子实体菌盖直径变大，由图3可得加入促生细菌的真姬菇子实体菌柄高度增加，由图4可知真姬菇满瓶时间缩短3天左右，满瓶时间缩短生长速度加快，由图5可知真姬菇子实体单瓶产量增加近40g，由图6可知真姬菇菇蕾形成天数缩短；综上，加入促生细菌的真姬菇菌丝生长速率增加、菌盖直径增加、菌柄长、子实体个变大，满瓶时间缩短、菌株子实体瓶产量增加，共培养组子实体品质优于对照组。
序列表
<110> 曲阜师范大学
<120> 一种博斯氏菌属Y4及其在促进真姬菇生长中的应用
<130> 1
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1138
<212> DNA
<213> Bosea sp.
<400> 1
ggggcgggcg ggcaggctta cacatgcagt cgaacgggca cttcggtgct agtggcagac 60
gggtgagtaa cacgtgggaa cgtacctttt ggttcggaat aatccaggga aacttggact 120
aataccggat acgcccttcg ggggaaagat ttatcgccga aagatcggcc cgcgtctgat 180
tagctagttg gtgaggtaaa ggctcaccaa ggcgacgatc agtagctggt ctgagaggat 240
gatcagccac attgggactg agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtggggaa 300
tattggacaa tgggcgcaag cctgatccag ccatgccgcg tgagtgatga aggccttagg 360
gttgtaaagc tcttttgtcc gggaagataa tgactgtacc ggaagaataa gccccggcta 420
acttcgtgcc agcagccgcg gtaatacgaa gggggctagc gttgctcgga atcactgggc 480
gtaaagggcg cgtaggcgga cttttaagtc ggaggtgaaa gcccagggct caaccctgga 540
attgccttcg atactgggag tcttgagttc ggaagaggtt ggtggaactg cgagtgtaga 600
ggtgaaattc gtagatattc gcaagaacac cggtggcgaa ggcggccaac tggtccgaaa 660
ctgacgctga ggcgcgaaag cgtggggagc aaacaggatt agataccctg gtagtccacg 720
ccgtaaacga tgaatgccag ccgttgggga gcttgctctt cagtggcgca gctaacgctt 780
taagcattcc gcctggggag tacggtcgca agattaaaac tcaaaggaat tgacgggggc 840
ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgcagaacc ttaccagctt 900
ttgacatgtc cggtttgatc ggcagagatg cctttcttca gttcggctgg ccggaacaca 960
ggtgctgcat ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag 1020
cgcaaccctc gcccctagtt gccatcattc agttgggaac tctaggggga ctgccggtga 1080
taagccgcga ggaaggtggg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacag gctgggct 1138

Claims (4)

1.一种博斯氏菌属(Bosea sp.)Y4，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC No:M 2019634；保藏日期：2019年8月16日；保藏地址：中国武汉武汉大学。
2.权利要求1所述的博斯氏菌属Y4在促进真姬菇生长中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述博斯氏菌属Y4以发酵液方式加入。
4.权利要求3所述的应用，其特征在于，所述博斯氏菌属Y4发酵液的施用量为4～6mL，所述发酵液中博斯氏菌属Y4的浓度为5×107～1×108CFU/mL。
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