CN110607249A - 链霉菌生防菌株及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株链霉菌生防菌株及应用。该菌株的分类命名为Streptomyces sp.QJK‑26,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC NO:M2018434。生物防治实验表明:链霉菌(Streptomyces sp.QJK‑26)发酵液对水稻纹枯病、稻瘟病和青钱柳叶黑枯病具有良好的生防作用,相对防治效果分别为67.1%、74.8%和64.8%。
Description
技术领域
本发明属于生物技术的微生物领域,具体涉及一株高效防治水稻纹枯病、稻瘟病和青钱柳叶黑枯病的生防菌株—链霉菌(Streptomyces sp.QJK-26)及其应用。
背景技术
青钱柳(Cyclocarya paliurus(Bata1.)Iljinskaja)属濒危珍稀植物,是胡桃科青钱柳属的单属种乔木。青钱柳叶具有较高的药用价值,含有多种药理成分和微量元素,具有降血糖、降血压、降血脂、抗氧化和消炎等多种药用活性,尤其对糖尿病有显著的辅助疗效。最近,在人工栽培的青钱柳苗中首次报道了叶黑枯病,发病率在10%以上,严重影响青钱柳叶的产量和品质。该病由杜仲拟茎点霉(Phomopsis eucommiae)引起,主要为害叶片,有时为害枝条。病斑初为暗褐色或黑色小点,后扩大成近圆形或不规则形,灰黑色,病健交界处不明显,后期病斑扩展连接,覆盖整叶,整株呈灰色至黑色,严重时可致植株死亡。
水稻纹枯病是由立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)侵染引起的一种世界性真菌病害,适宜在高温、高湿条件下发生和流行。在我国所有稻作区均有发生,在长江流域及以南尤为严重。常致叶片或茎秆发黄枯死,结实率下降,千粒重减轻,秕谷增多,通常减产10~30%,严重时高达50%以上。水稻纹枯病的抗性种质资源非常稀少,至今未发现对纹枯病免疫的水稻品种。
稻瘟病是由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的毁灭性水稻病害,在水稻3-4叶期、分蘖盛期和始穗期容易发生。稻瘟病每年造成水稻产量损失10~30%,严重时产量损失可达到50%,甚至绝收,全世界每年因稻瘟病损失的水稻足以养活6000万人。水稻纹枯病和稻瘟病的防治对水稻丰产、稳产,保障国家粮食安全极其重要。
植物病害的防治方法主要包括:选用抗病品种、加强水肥和栽培管理以及施用化学农药。化学农药高残留,对人畜有害,污染环境,具有环境风险,且长期使用导致抗药性。利用拮抗微生物防治植物病害,因选择性好、易降解和对环境友好等特点,在植物病害绿色防控方面越来越受到重视。研究表明,根际有益微生物对植物具有较好的亲和性,施用后易在植物体表或体内存活、定殖,防治效果持久稳定。目前,水稻纹枯病和稻瘟病的生防菌株主要为芽孢杆菌和假单胞菌,来源单一,相关技术仍然薄弱。青钱柳叶黑枯病的防治措施尚无报道。
放线菌是一类具有重要开发价值的微生物,其中链霉菌属(Streptomyces)及其相关类群是重要的植物病害生防菌。链霉菌可通过植物体外的抗生作用、竞争作用、捕食作用和重寄生作用,以及植物体内的诱导抗性或产生抑菌物质拮抗病原菌的生长、繁殖和扩展,或直接杀死病原菌,从而达到病害防治的目的。链霉菌作为生防菌,可直接制成活菌制剂,也可利用其产生的抗生素、酶或其他代谢产物。
发明内容
本发明的目的在于提供一株链霉菌生防菌株,它可以用作生物农药,防治水稻纹枯病、稻瘟病和青钱柳叶黑枯病。
本发明的链霉菌生防菌株,该菌株的分类命名为Streptomyces sp.QJK-26,保藏于中国典型培养物保藏中心,简称CCTCC,保藏地址为中国,武汉,武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M2018434,保藏日期为2018年7月2日。
链霉菌(Streptomyces sp.QJK-26)生防菌株具有以下的微生物学特性:革兰氏阳性菌,孢子链形态对生,明胶液化,牛奶胨化阳性,接触酶阳性,酯酶阳性,不产生H2S,能利用L-树胶醛醣、D-甘露醇、D-葡萄糖等大多数碳源,氮源利用广泛(除甘氨酸和DL-a-丙氨酸不利用外),兼性厌氧,能耐受绝大部分抗生素。NA培养基上培养7d后菌落圆滑,基内菌丝体黄褐的橄榄色;气生菌丝体丰富,白色;无可溶性色素。NB液体培养3d发酵液呈黄褐色,澄清透明,菌体生长旺盛。
本发明的链霉菌(Streptomyces sp.QJK-26)生防菌株,从青钱柳根际土壤中采用土壤连续梯度稀释法,并结合室内对峙试验分离筛选获得。
本发明的链霉菌(Streptomyces sp.QJK-26)的培养方法(或繁殖方法)、检测存活性条件:
(1)营养琼脂(NA)培养基,10g蛋白胨,5g氯化钠,5g牛肉膏,15g琼脂粉,1L蒸馏水,pH 7.2-7.4,28℃下培养,实验室液体培养采用营养肉汤(NB)培养基;
(2)大量发酵培养采用小米培养基,具体为:葡萄糖10g、蛋白胨3g、NaCl2.5g、CaCO3 2g,小米10g、蒸馏水1000ml、pH值7.2-7.4。
上述的链霉菌生防菌株可作为生物农药,用于防治水稻纹枯病、稻瘟病或青钱柳叶黑枯病。防治水稻纹枯病,防治效果可达67.1%;防治稻瘟病,防治效果可达74.8%;防治青钱柳叶黑枯病,防治效果可达64.8%。
本发明的有益效果,具体体现在如下几个方面:
(1)本发明的链霉菌QJK-26为植物根际有益放线菌,能在植物体表和体内定殖,防治效果持久稳定。
(2)本发明的链霉菌QJK-26对环境友好。
(3)本发明的链霉菌QJK-26可以防治多种植物病害,对水稻纹枯病和稻瘟菌的防治效果显著,因而有利于控制主要的水稻病害;对青钱柳叶黑枯病的防治效果也显著。
(4)本发明的链霉菌QJK-26培养条件简单,易保存,易于工业化生产,具有良好的开发应用潜力。
附图说明
图1是链霉菌QJK-26对青钱柳叶黑枯病菌的体外抑菌活性测定实验结果图。
图2是本发明实施例1—链霉菌QJK-26对水稻纹枯病菌的体外抑菌活性测定实验结果图。
图3是本发明实施例2—链霉菌QJK-26对稻瘟菌的体外抑菌活性测定实验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实验实例及附图对本发明作进一步详细的描述。
实施例1:链霉菌QJK-26的分离筛选与鉴定。
本发明的链霉菌,其属名为Streptomyces,种名为Streptomyces sp.,株名为QJK-26,菌株是从湖南科技大学生物园(海拔44.5m北纬27°55'东经112°55')青钱柳植株下的根际土壤中分离,通过土壤连续梯度稀释法和平板对峙试验筛选获得,所述筛选方法属于本领域常规实验方法。
具体方法及过程描述如下:取根际土样(距土表层约10cm深)1g于99mL无菌水中制成10-2的土壤悬液,28℃180rpm摇瓶30min取出,静置30min后取上清液,采用连续梯度稀释法分离放线菌,挑选单菌落后,采用平板划线法进行多次纯化,获得放线菌的纯培养,共获得8株典型的土壤放线菌,经平板对峙法筛选,获得一株青钱柳叶黑枯病拮抗放线菌,相对抑菌率为70.0%,结果参见图3。菌株经形态学(培养)特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定为链霉菌(Streptomyces sp.),即本发明的链霉菌QJK-26菌株。
平板对峙法筛选过程如下:
青钱柳叶黑枯病菌CB3(由本申请人分离保存),在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)平板上25℃培养5d,用0.8cm的打孔器制成菌饼,置另一PDA平板中心位置,在距平板中心3cm处放置分离纯化的放线菌菌饼,以不接放线菌菌饼的PDA平板作为对照,试验设3个重复,28℃下培养,直至对照中菌丝扩展至平板边缘,记录实验结果(照相)。相对抑菌率=(对照菌落扩展直径-处理菌落扩展直径)/对照菌落扩展直径×100%。其中,菌落扩展直径(cm)=菌落的平均直径-0.8(菌饼直径)。
菌株鉴定涉及的相关内容如下:
(1)形态学(培养)特征:革兰氏阳性菌,孢子丝呈现柔曲的对生生长形态,兼性厌氧。NA培养基上培养7d后菌落圆滑,表面褶皱,呈脐突状隆起,边缘完整,基内菌丝体黄褐的橄榄色;气生菌丝体丰富,白色;无可溶性色素。NB液体培养3d发酵液呈黄褐色,澄清透明,菌体生长旺盛。在不同的培养基上的培养特征如表1所示,颜色参照文献(Ridgway R.Colorstandards and color nomenclature[J].1912.)比对完成。
(2)生理生化特征如表2所示。
表1链霉菌QJK-26菌株的培养特征
表2链霉菌QJK-26菌株的生理生化特征
注:“++”表示生长良好;“+”表示能生长或反应阳性;“-”表示不能生长或反应阴性
(3)16S rRNA基因序列分析
提取菌株QJK-26的基因组DNA后,采用通用引物引物27f和1492r进行PCR扩增,将纯化后的扩增产物送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行DNA测序,使用EzBioCloud数据库进行16S rRNA基因序列同源性比对分析,查看与同源菌株的相似性情况,初步确定菌株QJK-26的分类地位为链霉菌(Streptomyces sp.),链霉菌QJK-26菌株很可能是潜在新种,新种鉴定有待后续工作。
实施例2:链霉菌QJK-26对水稻纹枯病菌的体外抑菌活性测定实验。
以水稻纹枯病菌(HN-7,本实验室分离保存)为供试菌,实施平板对峙试验,具体按实施例1所述。
结果表明,链霉菌QJK-26菌株对纹枯病菌菌丝生长的抑制率为71.1%,如表3所示。
表3链霉菌QJK-26菌株对水稻纹枯病菌的体外抑菌活性
实施例3:链霉菌QJK-26防治水稻纹枯病的田间试验。
链霉菌QJK-26发酵液的制备:将保存的菌种接种到NA试管斜面,于28℃培养5d。用接种环从斜面上挑取菌落接种到装有NB培养液的三角瓶中,摇床振荡培养3d(28℃,180r/min)制备种子液,按5%的接种量接种到装有小米培养基的发酵罐中发酵培养48h(28℃,180r/min)。
田间试验在湖南省湘乡市月山镇金坪村进行,该村常年自然发生水稻纹枯病。水稻品种为杂交中稻隆两优华占。将田块分为4×5m的小区,随机区组试验,秧苗移栽后20d和35d,对稻苗喷雾两次,分4种处理,3次重复:(1)清水对照,750L/ha;(2)链霉菌QJK-26发酵悬液(1×108cfu/mL),750L/ha;(3)井冈霉素(质量分数为20%的可湿性粉剂),施用量225g/ha,兑水750L/ha。在第二次喷雾处理后30d,按国际水稻所(IRRI)1980年制定的水稻纹枯病分级标准调查病情,随机调查200株。病情指数=Σ[各级病叶(叶鞘)数×各级相对病级值]/[调查总叶数(叶鞘)]×最高病级值。防治效果(%)=(对照病情指数―处理病情指数)/对照病情指数×100。
如表4所示,试验结果表明,链霉菌QJK-26菌株对水稻纹枯病的防效达67.1%,略低于井冈霉素的防效(70.9%),但两者之间没有显著差异(P>0.05)。
表4链霉菌QJK-26对水稻纹枯病的田间防效
实施例4:链霉菌QJK-26对稻瘟菌的体外抑菌活性测定实验。
以稻瘟菌R01-1菌株(由本申请人实验室保存)为供试菌,实施平板对峙试验,具体按实施例1所述。
如表5所示,结果表明,链霉菌QJK-26菌株对稻瘟菌菌丝生长有明显的拮抗作用,相对抑制率为84.0%。
表5链霉菌QJK-26对稻瘟菌的拮抗作用
实施例5:链霉菌QJK-26防治稻瘟病的田间试验。
田间试验地点同实施例3,该地点常年自然发生稻瘟病。水稻品种为杂交中稻隆两优华占。将田块分为4×5m的小区,随机区组试验,秧苗移栽后20d和40d,对稻苗喷雾,分4种处理,3次重复:(1)清水对照,750L/ha;(2)链霉菌QJK-26发酵悬液(1×108cfu/mL),750L/ha;(3)三环唑(质量分数为75%的可湿性粉剂),施用量300g/ha,兑水750L/ha。在第二次喷雾处理后40d,按稻瘟病测报调查规范(GB/T 15790-1995)计算防治效果(防效)。病情指数=Σ[各级病叶数×各级相对病级值]/[调查总叶数]×最高病级值。防效(%)=(对照病情指数―处理病情指数)/对照病情指数×100。
如表6所示,试验结果表明,链霉菌QJK-26菌株对稻瘟病的防效达74.8%,与三环唑的防效(75.9%)没有显著差异(P>0.05)。
表6链霉菌QJK-26对稻瘟菌的田间防效
实施例6链霉菌QJK-26防治青钱柳叶黑枯病菌的温室试验。
将青钱柳叶黑枯病菌(CB3)接种在PDA培养基上,25℃,培养22d,收集分生孢子,用无菌水配制106/mL的孢子悬液。田间取土,晾晒1-2d,碾碎,过筛,用普通塑料喷壶均匀喷洒孢子悬液,充分拌匀,制作带菌土,装入上口径60cm、底部口径为45cm的陶瓷盆中,装土量为陶瓷盆容积的2/3。每盆栽植1年龄健康青钱柳苗,置室外温室培养。培养条件:温度25-28℃(昼)/20℃-23℃(夜),相对湿度85%—90%,自然光周期。采用下述3中处理:(1)清水对照;(2)链霉菌QJK-26发酵悬液(1×108cfu/mL);(3)甲基硫菌灵(质量分数为70%的可湿性粉剂)。青钱柳苗栽植前蘸根,将根充分浸泡在上述3种处理液中20min。栽植30d后用上述3种处理液喷雾,让植株充分湿润,喷雾量以液体不下流为止,喷雾处理后60d后调查病情。
病级标准:0级,无叶黑枯症状;1级,1-25%的叶出现叶黑枯症状;2级,26-50%的叶出现叶黑枯症状;3级,51-75%的叶出现叶黑枯症状;76%及以上的叶出现叶黑枯症状。病情指数=Σ[各级病叶数×各级相对病级值]/[调查总叶数]×最高病级值。防效(%)=(对照病情指数―处理病情指数)/对照病情指数×100。
如表7所示,试验结果表明,链霉菌QJK-26菌株对青钱柳叶黑枯病的防效达64.8%,低于甲基硫菌灵(P<0.05),两者只相差4.3%。
表7链霉菌QJK-26对青钱柳叶黑枯病的温室防效
Claims (4)
1.一种链霉菌生防菌株,其特征在于,其分类命名为Streptomyces sp.QJK-26,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2018434,保藏日期为2018年7月2日。
2.如权利要求1所述的链霉菌生防菌株在防治水稻纹枯病中的应用。
3.如权利要求1所述的链霉菌生防菌株在防治稻瘟病中的应用。
4.如权利要求1所述的链霉菌生防菌株在防治青钱柳叶黑枯病中的应用。
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CN115216430A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-10-21 | 湖南科技大学 | 一种链霉菌生防菌株及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1519310A (zh) * | 2003-05-22 | 2004-08-11 | 郑爱萍 | 一种抗水稻纹枯病和稻瘟病的链霉菌菌株 |
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Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1519310A (zh) * | 2003-05-22 | 2004-08-11 | 郑爱萍 | 一种抗水稻纹枯病和稻瘟病的链霉菌菌株 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
刘诗胤等: "稻瘟菌拮抗细菌的筛选与鉴定", 《浙江农业学报》 * |
罗文芳等: "水稻纹枯病生防菌的筛选与鉴定", 《沈阳农业大学学报》 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115216430A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-10-21 | 湖南科技大学 | 一种链霉菌生防菌株及其应用 |
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