CN112557538A - 一种三肽-1铜的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及检测方法领域，具体而言，涉及一种三肽‑1铜的检测方法。一种三肽‑1铜的检测方法，包括：将待测样品用溶剂配制成供试样品溶液；采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；其中，色谱柱为ZORBAX SB‑C18或者ZORBAX Eclipse XDB‑C18；流动相A为乙腈；流动相B为0.08‑0.12vol％的三氟乙酸‑水溶液；洗脱方式为：(18‑22)％A相等度洗脱；洗脱后进入检测器检测。本申请提供的检测方法得到的色谱图杂峰较少，出峰无拖尾，具有检测结果准确，耗时较短的优点。

Description

一种三肽-1铜的检测方法
技术领域
本申请涉及检测方法领域，具体而言，涉及一种三肽-1铜的检测方法。
背景技术
三肽-1铜是一种化合物，英文名称TRIPEPTIDE-1。三肽-1铜可以作为组织重塑的激活剂和抗氧化剂，也是一个信号肽，促进伤疤外部大量胶原蛋白集聚物的降解，皮肤正常胶原蛋白的合成、弹力蛋白、蛋白聚糖和葡萄胺聚糖的生成、不同细胞类型的生长速度和迁移、抗炎、抗氧化反应。
在制备和使用过程中，准确测量三肽-1铜的含量是很有必要的，本申请旨在提供一种新的三肽-1铜含量的测试方法。
发明内容
本申请实施例的目的在于提供一种三肽-1铜的检测方法，其旨在提供一种新的测量三肽-1铜的检测方法。
本申请提供一种三肽-1铜的检测方法，包括：
将待测样品用溶剂配制成供试样品溶液；
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；
其中，色谱柱为ZORBAX SB-C18或者ZORBAX Eclipse XDB-C18；
流动相A为乙腈；
流动相B为0.08-0.12vol％的三氟乙酸-水溶液；
洗脱方式为：(18-22)％A相等度洗脱；
洗脱后进入检测器检测。
在本申请的一些实施例中，上述流动相B为0.1vol％的三氟乙酸-水溶液。
在本申请的一些实施例中，上述所述洗脱方式为：20％A相等度洗脱；
在本申请的一些实施例中，上述所述洗脱方式为：20％A相等度洗脱20-30分钟。
在本申请的一些实施例中，上述柱温为20-30℃。
在本申请的一些实施例中，上述进样流速为1.0mL/min～1.2mL/min。
在本申请的一些实施例中，上述所述检测器为紫外检测器，检测波长为215-225nm。
在本申请的一些实施例中，上述所述检测器为紫外检测器，检测波长为219nm。
在本申请的一些实施例中，上述检测过程中，进样量为5μL-20μL。
本申请实施例的目的在于提供一种三肽-1铜的检测方法至少具有以下有益效果：
本申请提供一种高效液相色谱检测三肽-1铜的方法，通过本申请的色谱条件可以得到色谱图杂峰较少，出峰无拖尾的色谱图，使三肽-1铜与其余物质有效分离，通过该方法可以比较准确的测量三肽-1铜的含量，且具有耗时较短的优点。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1示出了三肽-1铜标准品的HPLC色谱图。
图2示出了进样量2.5μL的三肽-1铜标准曲线。
图3示出了进样量5.0μL的三肽-1铜标准曲线。
图4示出了实施例1提供的HPLC色谱图。
图5示出了实施例2提供的HPLC色谱图。
图6示出了对比例1提供的HPLC色谱图。
图7示出了对比例2提供的HPLC色谱图。
图8示出了对比例3提供的HPLC色谱图。
图9示出了实施例3提供的HPLC色谱图。
图10示出了实施例4提供的HPLC色谱图。
图11示出了实施例5提供的HPLC色谱图。
图12示出了实施例6提供的HPLC色谱图。
图13示出了实施例7提供的HPLC色谱图。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本申请实施例的三肽-1铜的检测方法进行具体说明。
一种三肽-1铜的检测方法，包括：
将待测样品用溶剂配制成供试样品溶液；然后采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液。
例如，准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20～5000μg/mL的三肽-1铜样品溶液待用。
制备好的供试样品溶液后，采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液。
色谱柱为ZORBAX SB-C18(4.6×150mm，5μm)或者ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)。
色谱条件如下：
流动相A为乙腈；
流动相B为0.08-0.12vol％的三氟乙酸-水溶液；例如，流动相B相可以为0.08vol％的三氟乙酸-水溶液、0.09vol％的三氟乙酸-水溶液、0.10vol％的三氟乙酸-水溶液、0.11vol％的三氟乙酸-水溶液、0.12vol％的三氟乙酸-水溶液等等。
在一些实施例中，在洗脱之前还采用0.45μm滤膜分别过滤流动相B和流动相A，取滤液。
色谱柱的柱温为20-30℃。例如，色谱柱的柱温可以为20℃、22℃、25℃、26℃、28℃或者30℃等等。
检测过程中，进样量为5μL-20μL。例如，进样量为5μL、6μL、7μL、8μL、10μL、15μL、16μL、18μL、19μL或者20μL等等。
洗脱方式为：(18-22)％A相等度洗脱。换言之，洗脱方式为等度洗脱，A相的比例可以为18％-22％，例如，等度洗脱过程中A相的比例为18％、19％、20％或者22％等等。
进样流速可以为1.0mL/min～1.2mL/min。例如，进样流速进为1.0mL/min、1.1mL/min或者1.2mL/min。
进样完成后，进入检测器检测。
检测器为紫外检测器、检测波长为215-225nm。例如检测波长为215nm、216nm、219nm、220nm、223nm或者225nm等等。
在检测过程中，对三肽-1铜标准品和测试品通过相同的测试条件，根据标准品确定的保留时间，确定待测样品中三肽-1铜。
作为示例性地，准确称取三肽-1铜标准品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成1400μg/mL、1800μg/mL、2100μg/mL、2500μg/mL、3100μg/mL、4200μg/mL、5000μg/mL的三肽-1铜标准品溶液。用高效液相色谱进行检测，获得系列浓度的标准溶液高效液相色谱图和标准曲线。
然后读取供试样品溶液测量得到的HPLC色谱图中三肽-1铜对应的峰面积，通过标准曲线的公式计算三肽-1铜的含量。
图1示出了三肽-1铜标准品的HPLC色谱图。图2示出了进样量2.5μL的三肽-1铜标准曲线；图3示出了进样量5.0μL的三肽-1铜标准曲线。
发明人研究后发现本申请的高效液相色谱的测试条件对三肽-1铜进行测试，可以得到三肽-1铜峰比较漂亮的色谱图，从而可以比较准确地测试三肽-1铜的含量。
以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1-实施例2、对比例1-对比例3均是对山东济肽公司的Copper Tripeptide-1solution产品的测试，产品中主要包括三肽-1铜、甘油、丙二醇、辛甘醇、水、苯氧乙醇。
实施例1
本实施例提供了一种三肽-1铜的检测方法，包括：
准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20μg/mL的三肽-1铜供试样品溶液。
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；色谱条件如下：
色谱系统：Agilent 1200；色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；柱温25℃。流动相A为乙腈，流动相B为0.10vol％的三氟乙酸-水溶液；流速1.0mL/min。流动相B的制备方法如下：量取1.0mL三氟乙酸加纯水1000mL，混匀。流动相使用前均经0.45μm滤膜过滤。
洗脱程序：0～21min，20％A。进样量：2.5μL。
紫外检测器检测波长：219nm。
图4示出了实施例1提供的HPLC色谱图。
实施例2
本实施例提供了一种三肽-1铜的检测方法，包括：
准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20μg/mL的三肽-1铜供试样品溶液。
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；色谱条件如下：
色谱系统：Agilent 1200；色谱柱：ZORBAX SB-C18(4.6×150mm，5μm)；柱温25℃。流动相A为乙腈，流动相B为0.10vol％的三氟乙酸-水溶液；流速1.0mL/min。流动相B的制备方法如下：量取1.0mL三氟乙酸加纯水1000mL，混匀。流动相使用前均经0.45μm滤膜过滤。
洗脱程序：0～21min，20％A。进样量：2.5μL。
紫外检测器检测波长：219nm。
图5示出了实施例2提供的HPLC色谱图。
对比例1
本对比例提供了一种三肽-1铜的检测方法，包括：
准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20μg/mL的三肽-1铜供试样品溶液。
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；色谱条件如下：
色谱系统：Agilent 1200；色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；柱温25℃。
流动相A为0.10％三氟乙酸-乙腈溶液，通过量取1.0mL三氟乙酸加乙腈1000mL制备得到。
流动相B为0.10vol％的三氟乙酸-水溶液；流速1.0mL/min。流动相B的制备方法如下：量取1.0mL三氟乙酸加纯水1000mL，混匀。流动相使用前均经0.45μm滤膜过滤。
洗脱程序：0～14min，31％A。进样量：5μL。
紫外检测器检测波长：219nm。
图6示出了对比例1提供的HPLC色谱图。
对比例2
本对比例提供了一种三肽-1铜的检测方法，包括：
准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20μg/mL的三肽-1铜供试样品溶液。
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；色谱条件如下：
色谱系统：Agilent 1200；色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；柱温25℃。
流动相A为甲醇。
流动相B为0.10vol％的三氟乙酸-水溶液；流速1.0mL/min。流动相B的制备方法如下：量取1.0mL三氟乙酸加纯水1000mL，混匀。流动相使用前均经0.45μm滤膜过滤。
洗脱程序：0～14min，31％A。进样量：2.5μL。
紫外检测器检测波长：219nm。
图7示出了对比例2提供的HPLC色谱图。
对比例3
本对比例提供了一种三肽-1铜的检测方法，包括：
准确称取三肽-1铜样品用超纯水溶解，经0.22μm滤膜过滤，制成20μg/mL的三肽-1铜供试样品溶液。
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；色谱条件如下：
色谱系统：Agilent 1200；色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；柱温25℃。
流动相A为乙腈。
流动相B为0.10vol％的三氟乙酸-水溶液；流速1.0mL/min。流动相B的制备方法如下：量取1.0mL三氟乙酸加纯水1000mL，混匀。流动相使用前均经0.45μm滤膜过滤。
洗脱程序：0～4min，20％A；4～5min，20％A→10％A；5～6min，10％A→20％A；6～7min，20％A。进样量：2.5μL。
紫外检测器检测波长：219nm。
图8示出了对比例3提供的HPLC色谱图。
请参阅图4和图5，从图4和图5可以看出，实施例1和实施例2提供的方法得到的HPLC色谱图杂峰较少，出峰无拖尾，检测准确度高。
请参阅图6和图7，从图6和图7可以看出，流动相A为甲醇、0.10％三氟乙酸-乙腈溶液时，HPLC色谱图杂峰较多，且出现拖尾情况，不能准确测出三肽-1铜的含量。
请参阅图8，从图8可以看出，当洗脱程序为梯度洗脱时，得到的峰与杂质峰出现部分重叠，并未有效分离三肽-1铜和干扰杂质，导致检测结果不准确。
实施例3-实施例7
实施例3-实施例7分别对不同公司提供的不同产品进行三肽-1铜的检测，其中，检测方法如实施例2所示。
实施例3对山东济肽公司提供的产品名为Copper Tripeptide-1solution进行三肽-1铜的检测，该产品中的主要成分包括水、甘油、丙二醇、三肽-1铜、苯氧乙醇、辛甘醇等等，图9示出了实施例3提供的HPLC色谱图。
实施例4对维琪Winkey公司提供的产品名为WKPep Copper peptide进行三肽-1铜的检测，图10示出了实施例4提供的HPLC色谱图。
实施例5对联邦制药BIOPHIN提供的产品名为焕采肽进行三肽-1铜的检测，图11示出了实施例5提供的HPLC色谱图。
实施例6对华工创为公司提供的产品名为TRIP-REGEN进行三肽-1铜的检测，图12示出了实施例6提供的HPLC色谱图。
实施例7对湃肽公司提供的产品名为ZPC Repairs 012进行三肽-1铜的检测，图13示出了实施例7提供的HPLC色谱图。
综上所述，本申请实施例提供的三肽-1铜的检测方法具有检测结果准确，耗时较短的优点。且本申请实施例提供的三肽-1铜的检测方法适合多种测试样品。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种三肽-1铜的检测方法，其特征在于，包括：
将待测样品用溶剂配制成供试样品溶液；
采用高效液相色谱检测所述供试样品溶液；
其中，色谱柱为ZORBAX SB-C18或者ZORBAX Eclipse XDB-C18；
流动相A为乙腈；
流动相B为0.08-0.12vol％的三氟乙酸-水溶液；
洗脱方式为：(18-22)％A相等度洗脱；
洗脱后进入检测器检测。
2.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
流动相B为0.1vol％的三氟乙酸-水溶液。
3.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
所述洗脱方式为：20％A相等度洗脱。
4.根据权利要求3所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
所述洗脱方式为：20％A相等度洗脱20-30分钟。
5.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，柱温为20-30℃。
6.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，进样流速为1.0mL/min～1.2mL/min。
7.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
所述检测器为紫外检测器，检测波长为215-225nm。
8.根据权利要求7所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
所述检测器为紫外检测器，检测波长为219nm。
9.根据权利要求1所述的三肽-1铜的检测方法，其特征在于，
检测过程中，进样量为5μL-20μL。
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