CN112546091A - 一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，包括以下具体步骤：准备试剂和仪器、制备桑叶提取物、优化滴丸制作工艺条件、检测和评价、数据统计分析。本发明与现有技术相比的优点在于：实验步骤合理，原料选取贴合实际，对滴丸质量标准的要求为指标，采用超声波辅助水提法和醇提法(60％乙醇)提取桑叶中的有效成分，考察桑叶水提物和醇提物滴丸的外观和口感差异，筛选出适合桑叶提取物滴丸制备的主材料，并在此基础上进一步探索优化桑叶提取物滴丸的制备工艺条件，为桑叶进入更广泛的药品市场奠定试验基础。

Description

一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法
技术领域
本发明涉及中药滴丸，具体是指一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法。
背景技术
立桑为业及对蚕桑资源的多元化开发利用已经成为实现传统蚕桑产业转型升级和可持续发展的必由之路。现代蚕桑产业技术体不断挖掘出桑树的生态利用价值、饲料利用价值、食药利用价值等。其中，开发和利用桑树的药食价值已经取得较多的研究成果，已有的研究证实桑叶、桑枝、桑皮、桑椹、桑白皮中含有许多重要的天然活性成分，具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗衰老、防癌、抗肿瘤等药理作用，因而桑树被国家卫生部认定为“药食同源”植物。在桑树的药用价值研究和利用中，又以桑叶最受关注。桑叶的生物量大，富含的活性成分中，芸香苷、槲皮素、异槲皮素、二氢山茶等黄酮类化合物约占到桑叶干质量的1.0％～3.0％，这在植物茎叶中其含量也是比较突出的。黄酮类化合物是天然的抗氧化剂，能够清除人体中的超氧离子自由基，在抗菌、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抑制心血管疾病等方面均具有较好的功效。杨燕等对桑叶的水提物和乙醇提取物进行化学成分分析，发现桑叶水提物中富含多羟基生物碱、氨基酸、多糖和蛋白质等成分，而桑叶的醇提物(60％乙醇)中含有较多的黄酮类成分。马金秋等用60％乙醇在80℃下以超声波处理桑叶40min，结果发现提取物中总黄酮质量分数达到48.7％，不失为高效提取桑叶总黄酮的工艺技术方法。
随着对桑叶化学成分和药理作用的逐渐阐明，以桑叶为主成分开发出的药食产品如桑叶茶、桑叶挂面、桑叶粉、桑叶丸、桑叶药片等相继问市，但其产品种类还有待进一步丰富。传统中药产品中的滴丸是原料药物与适宜的基质加热熔融混匀后滴入不相混溶、互不作用的冷凝介质中制成的球形或类球形制剂，具有制作工艺简单、生产成本低、药效成分足、溶出起效快、生物利用度高、携带服用方便、质量易控制等优点，是深受消费者喜欢的产品剂型。
因此，考察桑叶水提物和醇提物滴丸的外观和口感差异，筛选出适合桑叶提取物滴丸制备的主材料，并在此基础上进一步探索优化桑叶提取物滴丸的制备工艺条件，为桑叶进入更广泛的药品市场奠定试验基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是现有的桑叶提取物滴丸制备工艺存在设计上的不足，使得实际药用性仍有较大提升空间。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，包括以下具体步骤：
S1、准备试剂和仪器，试剂选用聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、液体石蜡、无水乙醇；
仪器选用分析天平、电热恒温水浴锅、滴丸机、质构仪、真空冷冻干燥机、紫外分光光度计、超声波清洗机；
S2、制备桑叶提取物，根据桑叶中主要药用成分总黄酮和多糖的理化性质，采用超声波辅助水提和醇提两种方式制备桑叶水提物和醇提物：(1)称取500g来自冀桑2号的新鲜桑叶，60℃烘干，粉碎，过40目筛；取200g桑叶粉然后加入12倍量蒸馏水超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，沉淀加入等体积蒸馏水后按上述方法提取并离心，然后合并上清液；上清液50℃时浓缩至原有体积的1/5，待浓缩液冷却后，取一半上清液冷冻干燥，粉碎后过100目筛，得桑叶水提物；
(2)另称取200g桑叶粉加入20倍量60％乙醇，超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，浓缩回收乙醇，浓缩液60℃烘干，粉碎后过100目筛，得桑叶醇提取物；
以上两种提取物的粉末均置于放有变色硅胶的玻璃干燥器中备用；
S3、优化滴丸制作工艺条件，针对单因素试验和正交试验进行优化：(1)单因素试验，以药液流动性、溶解量以及滴丸的外观、圆整度、硬度、溶散时限、重量差异等为考核指标，选择制作工艺中的冷凝剂、滴距、滴速、冷却液温度、基质复合度、主药与基质比例和药液温度进行单因素试验，考察各因素对滴丸成型性的影响；每个处理重复3次；
(2)在单因素试验的基础上，对主药与基质的质量比、混合基质聚乙二醇4000与聚乙二醇6000的质量比和药液温度进行3因素3水平试验设计，以加药量、溶解量、药液流动性、硬度、圆整度、溶散时限、质量差异得分为响应值，通过正交试验分析各个因素之间的相互作用，优化得到最佳的制备工艺条件；每个处理重复3次；
S4、检测和评价，包括以下几个方面：(1)溶散时限测定和滴丸质量差异检查；
(2)滴丸圆整度的测定；
(3)滴丸品质的评价；
(4)桑叶提取物总黄酮和多糖的含量检测，将桑叶粉和桑叶60％乙醇提取物及其滴丸在55℃烘箱中烘干至恒重，过60目筛；总黄酮检测样品制备方法如下：称取0.20～0.25g样品，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL体积分数为60％的乙醇溶液，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为60℃，功率为500W的超声波清洗器中，超声波处理30min，12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取1次，与上一次抽提的上清液含并，定容至10mL，所得溶液用注射器在0.45μm滤膜过滤抽提，弃掉杂质；每种样品重复3次检测；
多糖检测样品制备方法如下：称取0.20g样品粉末，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL纯净水，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为80℃，功率为400W的超声波清洗器中，超声波处理30min，混合液冷却；12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取2次，定容至10mL；取5mL提取液加入50mL的离心管中，再加入20mL无水乙醇，沉淀12h，12000r/min离心10min，弃掉上清液，再用80％乙醇洗2遍，同样弃去上清液。沉淀加蒸馏水搅拌使糖溶解，定容至10mL；多糖含量的检测采用蒽酮-硫酸法，多糖含量(质量比mg/g)＝，式中，C为根据标准曲线得到多糖质量浓度，Vt为样品提取液总体积(mL)，n为稀释倍数，W为样品干质量(g)；每种样品重复3次检测；
S5、数据统计分析，试验数据用
Figure BDA0002840467890000031
表示，并采用SPSS18.0进行单因素方差分析，P≤0.05表明差异有统计学意义。
本发明与现有技术相比的优点在于：实验步骤合理，原料选取贴合实际，对滴丸质量标准的要求为指标，采用超声波辅助水提法和醇提法(60％乙醇)提取桑叶中的有效成分，考察桑叶水提物和醇提物滴丸的外观和口感差异，筛选出适合桑叶提取物滴丸制备的主材料，并在此基础上进一步探索优化桑叶提取物滴丸的制备工艺条件，为桑叶进入更广泛的药品市场奠定试验基础。
作为改进，S1步骤中用到的试剂均为化学纯；植物油为金龙鱼大豆油，水为蒸馏水。
作为改进，S4步骤中对滴丸圆整度的测定，以每粒滴丸最大最小2个方向直径的差值来反映滴丸的不圆整性，选择5粒滴丸，以R＝[1－(最大直径平均数－最小直径平均数)/10组直径的平均数]×100％来表示滴丸圆整度，R值越大，圆整度越好，反之圆整度越不好；
作为改进，S4步骤中对滴丸品质的评价，滴丸的要求为外观应圆整，大小、色泽应均匀，应在30min内全部溶散，其中，每一粒滴丸之间的质量差异和溶散时限有具体标准，因此在评分时合格的为5级，不合格的为0级；
由于色泽均能达到要求，故不计分；
综合评分为所有测定项目分值之和。
附图说明
图1是一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶提取物滴丸制备工艺正交试验因素水平设计图。
图2一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶提取物滴丸的品质评分标准示意图。
图3一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的两种桑叶提取物滴丸的外观形态对比示意图。
图4一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶提取物滴丸制作工艺部分单因素试验结果示意图。
图5一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶提取物滴丸制作工艺条件的正交试验结果示意图。
图6一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶提取物滴丸制作工艺条件正交试验结果的方差分析示意图。
图7一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的采用优化工艺条件制备桑叶提取物滴丸的外观形态示意图。
图8一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法的桑叶粉和提取物及制备滴丸的总黄酮、多糖含量比较示意图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做进一步的详细说明。
本发明在具体实施时，一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，包括以下具体步骤：
S1、准备试剂和仪器，试剂选用聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、液体石蜡、无水乙醇；
仪器选用分析天平、电热恒温水浴锅、滴丸机、质构仪、真空冷冻干燥机、紫外分光光度计、超声波清洗机；
S2、制备桑叶提取物，根据桑叶中主要药用成分总黄酮和多糖的理化性质，采用超声波辅助水提和醇提两种方式制备桑叶水提物和醇提物：(1)称取500g来自冀桑2号的新鲜桑叶，60℃烘干，粉碎，过40目筛；取200g桑叶粉然后加入12倍量蒸馏水超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，沉淀加入等体积蒸馏水后按上述方法提取并离心，然后合并上清液；上清液50℃时浓缩至原有体积的1/5，待浓缩液冷却后，取一半上清液冷冻干燥，粉碎后过100目筛，得桑叶水提物；
(2)另称取200g桑叶粉加入20倍量60％乙醇，超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，浓缩回收乙醇，浓缩液60℃烘干，粉碎后过100目筛，得桑叶醇提取物；
以上两种提取物的粉末均置于放有变色硅胶的玻璃干燥器中备用；
S3、优化滴丸制作工艺条件，针对单因素试验和正交试验进行优化：(1)单因素试验，以药液流动性、溶解量以及滴丸的外观、圆整度、硬度、溶散时限、重量差异等为考核指标，选择制作工艺中的冷凝剂、滴距、滴速、冷却液温度、基质复合度、主药与基质比例和药液温度进行单因素试验，考察各因素对滴丸成型性的影响；每个处理重复3次；
(2)在单因素试验的基础上，对主药与基质的质量比、混合基质聚乙二醇4000与聚乙二醇6000的质量比和药液温度进行3因素3水平试验设计，以加药量、溶解量、药液流动性、硬度、圆整度、溶散时限、质量差异得分为响应值，通过正交试验分析各个因素之间的相互作用，优化得到最佳的制备工艺条件；每个处理重复3次；
S4、检测和评价，包括以下几个方面：(1)溶散时限测定和滴丸质量差异检查；
(2)滴丸圆整度的测定；
(3)滴丸品质的评价；
(4)桑叶提取物总黄酮和多糖的含量检测，将桑叶粉和桑叶60％乙醇提取物及其滴丸在55℃烘箱中烘干至恒重，过60目筛；总黄酮检测样品制备方法如下：称取0.20～0.25g样品，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL体积分数为60％的乙醇溶液，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为60℃，功率为500W的超声波清洗器中，超声波处理30min，12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取1次，与上一次抽提的上清液含并，定容至10mL，所得溶液用注射器在0.45μm滤膜过滤抽提，弃掉杂质；每种样品重复3次检测；
多糖检测样品制备方法如下：称取0.20g样品粉末，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL纯净水，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为80℃，功率为400W的超声波清洗器中，超声波处理30min，混合液冷却；12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取2次，定容至10mL；取5mL提取液加入50mL的离心管中，再加入20mL无水乙醇，沉淀12h，12000r/min离心10min，弃掉上清液，再用80％乙醇洗2遍，同样弃去上清液。沉淀加蒸馏水搅拌使糖溶解，定容至10mL；多糖含量的检测采用蒽酮-硫酸法，多糖含量(质量比mg/g)＝，式中，C为根据标准曲线得到多糖质量浓度，Vt为样品提取液总体积(mL)，n为稀释倍数，W为样品干质量(g)；每种样品重复3次检测；
S5、数据统计分析，试验数据用
Figure BDA0002840467890000051
表示，并采用SPSS18.0进行单因素方差分析，P≤0.05表明差异有统计学意义。
所述S1步骤中用到的试剂均为化学纯；植物油为金龙鱼大豆油，水为蒸馏水。
所述S4步骤中对滴丸圆整度的测定，以每粒滴丸最大最小2个方向直径的差值来反映滴丸的不圆整性，选择5粒滴丸，以R＝[1－(最大直径平均数－最小直径平均数)/10组直径的平均数]×100％来表示滴丸圆整度，R值越大，圆整度越好，反之圆整度越不好；
所述S4步骤中对滴丸品质的评价，滴丸的要求为外观应圆整，大小、色泽应均匀，应在30min内全部溶散，其中，每一粒滴丸之间的质量差异和溶散时限有具体标准，因此在评分时合格的为5级，不合格的为0级；
由于色泽均能达到要求，故不计分；
综合评分为所有测定项目分值之和。
本发明的工作原理：1、材料与方法
1.1材料与方法
聚乙二醇4000，聚乙二醇6000、液体石蜡、无水乙醇，所用试剂均为化学纯；植物油为金龙鱼大豆油，水为蒸馏水；
分析天平、电热恒温水浴锅、滴丸机、质构仪、真空冷冻干燥机、紫外分光光度计、超声波清洗机
1.2桑叶提取物的制备
根据桑叶中主要药用成分总黄酮和多糖的理化性质，采用超声波辅助水提和醇提2种方式制备桑叶水提物和醇提物。具体操作：称取500g来自冀桑2号的新鲜桑叶，60℃烘干，粉碎，过40目筛；取200g桑叶粉然后加入12倍量蒸馏水超声波提取30min(60℃)，12000r/min离心15min，取上清液，沉淀加入等体积蒸馏水按上述方法提取、离心，合并上清液。上清液50℃浓缩至原有体积的1/5，待浓缩液冷却后，取一半上清液冷冻干燥，粉碎，过100目筛，得桑叶水提物；另称取200g桑叶粉加入20倍量60％乙醇，超声波提取30min(60℃)，12000r/min离心15min，取上清液，浓缩回收乙醇，浓缩液60℃烘干，粉碎，过100目筛，得桑叶醇提取物。以上2种提取物的粉末均置于放有变色硅胶的玻璃干燥器中，备用。
1.3滴丸制作工艺条件的优化
1.3.1单因素试验，以药液流动性、溶解量以及滴丸的外观、圆整度、硬度、溶散时限、重量差异等为考核指标，选择制作工艺中的冷凝剂、滴距、滴速、冷却液温度、基质复合度、主药与基质比例和药液温度进行单因素试验，考察各因素对滴丸成型性的影响。每个处理重复3次。
1.3.2正交试验，在单因素试验的基础上，对主药与基质的质量比(A)、混合基质PEG4000与PEG6000的质量比(B)和药液温度(C)进行3因素3水平试验设计(图1)，以加药量、溶解量、药液流动性、硬度、圆整度、溶散时限、质量差异得分为响应值，通过正交试验分析各个因素之间的相互作用，优化得到最佳的制备工艺条件。每个处理重复3次。
1.4检测和评价方法
1.4.1溶散时限测定和滴丸质量差异检查按照《中国药典》2015版中的方法进行测定。
1.4.2滴丸圆整度的测定，《中国药典》未对滴丸圆整度的测定方法有明确的规定，由于本试验制备的滴丸具有较好的平滑度，所以尝试以每粒滴丸最大最小2个方向直径的差值来反映滴丸的不圆整性。随机选择5粒滴丸，以R＝[1－(最大直径平均数－最小直径平均数)/10组直径的平均数]×100％来表示滴丸圆整度，R值越大，圆整度越好，反之圆整度越不好。
1.4.3滴丸品质的评价，《中国药典》2015版第4部对滴丸的要求为外观应圆整，大小、色泽应均匀，应在30min内全部溶散。其中，每一粒滴丸之间的质量差异和溶散时限有具体标准，因此，在评分时合格的为5级，不合格的为0级。由于色泽均能达到要求，故不计分。综合评分为所有测定项目分值之和。
主药与基质的质量比表示载药量，主药比例越大，载药量越多，分为5级；溶解量用“+”表示，“+”越多溶解量越多，分为5级；药液流动性是滴头不加控制下1min药液滴出的滴数；参试滴丸的硬度分布在10～15N之间，故设为5级；圆整度分布在91％～98％之间，分为5个级次。
1.4.4桑叶提取物总黄酮和多糖的含量检测将桑叶粉和桑叶60％乙醇提取物及其滴丸在55℃烘箱中烘干至恒重，过60目筛。总黄酮检测样品制备：称取0.20～0.25g样品，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1:0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL体积分数为60％的乙醇溶液，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为60℃，功率为500W的超声波清洗器中，超声波处理30min，12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取1次，与上一次抽提的上清液含并，定容至10mL，所得溶液用注射器在0.45μm滤膜过滤抽提，弃掉杂质。总黄酮含量的检测参照的方法，每种样品重复3次检测。多糖检测样品制备：另称取0.20g样品粉末，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1:0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL纯净水，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为80℃，功率为400W的超声波清洗器中，超声波处理30min，混合液冷却；12000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取2次，定容至10mL；取5mL提取液加入50mL的离心管中，再加入20mL无水乙醇，沉淀12h，12000r/min离心10min，弃掉上清液，再用80％乙醇洗2遍，同样弃去上清液。沉淀加蒸馏水搅拌使糖溶解，定容至10mL。多糖含量的检测采用蒽酮-硫酸法，多糖含量(质量比mg/g)＝(C×Vt×n)/W，式中，C为根据标准曲线得到多糖质量浓度，Vt为样品提取液总体积(mL)，n为稀释倍数，W为样品干质量(g)。每种样品重复3次检测。
1.5数据统计分析
试验数据用
Figure BDA0002840467890000071
表示，并采用SPSS18.0进行单因素方差分析，P≤0.05表明差异有统计学意义。
2结果分析
2.1以桑叶水提物和醇提物预制滴丸的外观及口感比较
初步将滴丸的制作工艺条件设定为：以液体石蜡为冷凝剂，PEG4000为基质，提取物与基质的质量比1︰3，药液温度75℃，冷凝剂温度为10℃，滴距7cm，滴速30滴/min。比较上述工艺条件下预制的2种滴丸的外观及口感，结果显示，桑叶水提物滴丸与醇提物滴丸相比，主药与基质无法混匀，滴丸颜色暗沉，色泽不均，口感发涩；而醇提物滴丸混匀效果好，色泽明亮，口感优于水提物(如图3所示)。故此，选用醇提物作为桑叶滴丸的主材料。
2.2单因素对桑叶提取物滴丸制备效果的影响
2.2.1冷凝剂的影响分别以液体石蜡、二甲基硅油，植物油为冷凝剂，对3种冷凝剂制作滴丸的成型状态、外观、滴制情况进行考察：以二甲基硅油为冷凝剂时，药液的沉降速度适中，滴丸外观圆整光滑，无拖尾，且底部无黏连；植物油、液体石蜡为冷凝剂时，药液的沉降相对较快，有拖尾现象，故选择二甲基硅油为冷凝剂。
2.2.2滴距和滴速的影响采用不同的滴距(1～10cm)进行试验，结果发现，滴距＞7cm进行滴制时，滴丸容易发生滴溅产生子母丸，而过低(＜5cm)则对滴丸的成型和滴速不利，故试验采用6cm滴距。对滴速考察结果显示，在6cm滴距条件下，药液以30滴/min的速度滴制不易发生黏连，可提高生产效率。
2.2.3冷却液温度的影响冷却液温度过低，药液粘度增加，不利于滴制成丸；冷却液温度过高，容易发生拖尾，导致滴丸圆整度差。经过反复试验后，最后采用梯度冷却液温(冷却温度10～40℃)制备，滴丸的圆整度较好。
2.2.4基质复合度影响常用水溶性基质有PEG4000和PEG6000，此类基质稳定性好、宜于药物熔融和滴制，故对其进行考察。采用二甲基硅油为冷凝剂，主药与基质质量比为1︰4，药液温度80℃，经过10～40℃梯度冷却，保持滴距6cm，滴速30滴/min，考察不同PEG4000与PEG6000的质量比(1︰0、3︰1、5︰1、0︰1)。结果表明，单以PEG4000为基质时，熔融点低，硬度小，流动性差，易产生拖尾丸和气泡丸；而单以PEG6000为基质时，熔融点高，硬度大，流动性好，但滴丸圆整度略差。结合综合评分，当PEG4000和PEG6000的质量比范围在1︰1～3︰1，可以改善药液的流动性，降低药液温度和提高滴丸硬度。
2.2.5主药与基质比例的影响采用二甲基硅油为冷凝剂，PEG4000与PEG6000的质量比为3︰1，药液温度80℃，经10～40℃梯度冷却，保持滴距6cm、滴速30滴/min考察主药与基质之间的比例(1︰1、1︰5、1︰9)。结果发现，主药与基质比例为1︰1时产生大量沉淀，主药很难与基质混匀，滴丸颜色较深；主药与基质比例为1︰9时，载药量大幅减少，滴丸颜色较浅(图4)。综合比较药物与基质的比例范围为1︰1～1︰9之间，故采用1︰3、1︰5和1︰7共3种比例进行优化。
2.2.6药液温度的影响采用二甲基硅油为冷凝剂，主药与基质比例1︰4，PEG4000与PEG6000比例3︰1，药液温度80℃，10～40℃梯度冷却，滴距6cm，滴速30滴/min，考察药液温度(65℃、80℃、95℃)对滴丸的影响。结果发现，温度过低(65℃)，药液流动性差，滴丸质量大，圆整度不好，重量差异大；而温度过高(95℃)，液滴与冷凝剂温差大，滴丸圆整度差。综合比较药液温度的范围为65～95℃之间，故采取70℃、80℃和90℃3种温度进行正交试验。
2.3正交试验优化的桑叶提取物滴丸制备工艺条件及验证
2.3.1正交试验优化冷凝剂、滴距、滴速、冷却温度等因素均为影响滴丸成型的外部因素，而主药与基质的质量比、混合基质的质量比以及药液温度是滴丸的内部因素。根据单因素试验结果，选择主药与基质的质量比(A)、混合基质PEG4000与PEG6000的质量比(B)和药液温度(C)3个因素进行L9(34)正交试验，结果见表4。可以看出，影响滴丸品质的因素A>C>B，即主药与基质配比为主要因素。方差分析结果表明，A(主药与基质配比)对滴丸最终品质具有显著的影响(P<0.05)。根据正交试验和方差分析结果选择的最优条件为A2B3C1，即主药与基质的质量比1︰5，PEG4000与PEG6000的质量比为3︰1，药液温度为90℃，在此工艺条件下制备桑叶提取物滴丸的品质最佳。
2.3.2最优工艺验证为验证优选工艺的稳定性，按试验选定的制备工艺重复制备滴丸280粒进行验证。结果发现，以PEG为基质，桑叶醇提物为主药，二甲基硅油350CS为冷却剂，主药与基质质量比为1︰5，PEG4000与PEG6000的质量比为3︰1，药液温度90℃，冷却方式以10～40℃梯度冷却，保持滴速30滴/min、滴距6cm的工艺条件下，制备的桑叶提取物滴丸圆具有以下特征：圆整度好，表面光滑，大小均一，无拖尾现象(图7)；成丸率100％，平均丸质量0.028g±0.0019g，平均差异度为6.11％；30min中所有滴丸全部溶散。由此可知，正交试验优选的工艺条件稳定可行，综合质量较好。
2.4桑叶提取物滴丸的总黄酮和多糖含量，桑叶粉、桑叶醇提取物和按工艺生产的桑叶滴丸中总黄酮和多糖的含量见表6，可以看出，桑叶醇提物中的主要成分为总黄酮，多糖含量较低，根据优选的工艺条件加工成桑叶提取物滴丸不会影响总黄酮的含量。
3、讨论
本研究利用传统中药滴丸的制作工艺，比较了桑叶水提物和醇提物在滴丸制备中的差异。以桑叶水提物制备的滴丸色泽不均一，存在难以混匀的现象，这可能是由于桑叶水提物含有的多糖黏性较强，在与聚乙二醇熔融时极易析出。用60％乙醇制备的桑叶提取物，由于乙醇沉淀了大部分多糖，使得滴丸的溶解度和感观得以改善。
本试验结果显示，主药(桑叶醇提物)与基质的配比是桑叶滴丸制备工艺中的主要因素。由于主药性质和成分的差异，不同的滴丸配方往往存在很大的差异。我们采用主药与基质的质量比为1︰3进行试验，发现在熔融过程中大量的醇提物聚集在一起，难以混匀。之后尝试加入少量蒸馏水来溶解，但造成滴丸粒软，并且在持续的加热过程中由于水分的蒸发造成滴丸质量差异度增加，当水分蒸发到一定比例，药物会重新聚集，影响滴制和滴丸的品质。正交试验证明主药和基质的配比是滴丸制备工艺中的主要因素，这一结论与文献报道的研究结果一致。由于正交试验主要考虑药物与基质的比例、基质间的搭配和料液温度3种因素，而将滴距、滴速和冷却液温度通过单因素试验来确定，所以得出的试验结论与部分相关研究有一定的差异。另外，本试验发现加入一定比例的PEG6000可以增加药液的流动性，提高滴丸的硬度，从而间接的提高载药量。但由于PEG6000的熔融点高于PEG4000，所以需要提高料液温才能达到较好的效果。
由于现行药典未对滴丸的圆整度提供具体的测定方法，故本试验以5粒滴丸最大直径和最小直径平均数的差值与5粒滴丸直径的平均数的比值来作为滴丸圆整度的评价尺度，其与1之间的差值则代表了其圆整度的数值。该评价方法操作简单，与直观方法相比更能准确反映滴丸的圆整度，为滴丸圆整度的评定提供了依据。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征，在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”，“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (4)

1.一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，其特征在于包括以下具体步骤：
S1、准备试剂和仪器，试剂选用聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、液体石蜡、无水乙醇；
仪器选用分析天平、电热恒温水浴锅、滴丸机、质构仪、真空冷冻干燥机、紫外分光光度计、超声波清洗机；
S2、制备桑叶提取物，根据桑叶中主要药用成分总黄酮和多糖的理化性质，采用超声波辅助水提和醇提两种方式制备桑叶水提物和醇提物：(1)称取500g来自冀桑2号的新鲜桑叶，60℃烘干，粉碎，过40目筛；取200g桑叶粉然后加入12倍量蒸馏水超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，沉淀加入等体积蒸馏水后按上述方法提取并离心，然后合并上清液；上清液50℃时浓缩至原有体积的1/5，待浓缩液冷却后，取一半上清液冷冻干燥，粉碎后过100目筛，得桑叶水提物；
(2)另称取200g桑叶粉加入20倍量60％乙醇，超声波提取30min(60℃)，再以12000r/min的频率离心15min，取上清液，浓缩回收乙醇，浓缩液60℃烘干，粉碎后过100目筛，得桑叶醇提取物；
以上两种提取物的粉末均置于放有变色硅胶的玻璃干燥器中备用；
S3、优化滴丸制作工艺条件，针对单因素试验和正交试验进行优化：(1)单因素试验，以药液流动性、溶解量以及滴丸的外观、圆整度、硬度、溶散时限、重量差异等为考核指标，选择制作工艺中的冷凝剂、滴距、滴速、冷却液温度、基质复合度、主药与基质比例和药液温度进行单因素试验，考察各因素对滴丸成型性的影响；每个处理重复3次；
(2)在单因素试验的基础上，对主药与基质的质量比、混合基质聚乙二醇4000与聚乙二醇6000的质量比和药液温度进行3因素3水平试验设计，以加药量、溶解量、药液流动性、硬度、圆整度、溶散时限、质量差异得分为响应值，通过正交试验分析各个因素之间的相互作用，优化得到最佳的制备工艺条件；每个处理重复3次；
S4、检测和评价，包括以下几个方面：(1)溶散时限测定和滴丸质量差异检查；
(2)滴丸圆整度的测定；
(3)滴丸品质的评价；
(4)桑叶提取物总黄酮和多糖的含量检测，将桑叶粉和桑叶60％乙醇提取物及其滴丸在55℃烘箱中烘干至恒重，过60目筛；总黄酮检测样品制备方法如下：称取0.20～0.25g样品，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL体积分数为60％的乙醇溶液，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为60℃，功率为500W的超声波清洗器中，超声波处理30min，12 000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取1次，与上一次抽提的上清液含并，定容至10mL，所得溶液用注射器在0.45μm滤膜过滤抽提，弃掉杂质；每种样品重复3次检测；
多糖检测样品制备方法如下：称取0.20g样品粉末，精确至0.001g，置于10mL离心管中，按1：0.02(g/L)的料液质量浓度加入5mL纯净水，漩涡混匀2min，将离心管放入温度为80℃，功率为400W 的超声波清洗器中，超声波处理30min，混合液冷却；12 000r/min离心20min，收集上清液至10mL容量瓶中，重复提取2次，定容至10mL；取5mL提取液加入50mL的离心管中，再加入20mL无水乙醇，沉淀12h，12 000r/min离心10min，弃掉上清液，再用80％乙醇洗2遍，同样弃去上清液。沉淀加蒸馏水搅拌使糖溶解，定容至10mL；多糖含量的检测采用蒽酮-硫酸法，多糖含量(质量比mg/g)＝，式中，C为根据标准曲线得到多糖质量浓度，Vt为样品提取液总体积(mL)，n为稀释倍数，W为样品干质量(g)；每种样品重复3次检测；
S5、数据统计分析，试验数据用
Figure FDA0002840467880000021
表示，并采用SPSS18.0进行单因素方差分析，P≤0.05表明差异有统计学意义。
2.根据权利要求1所述的一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，其特征在于：所述S1步骤中用到的试剂均为化学纯；植物油为金龙鱼大豆油，水为蒸馏水。
3.根据权利要求1所述的一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，其特征在于：所述S4步骤中对滴丸圆整度的测定，以每粒滴丸最大最小2个方向直径的差值来反映滴丸的不圆整性，选择5粒滴丸，以R＝[1－(最大直径平均数－最小直径平均数)/10组直径的平均数]×100％来表示滴丸圆整度，R值越大，圆整度越好，反之圆整度越不好。
4.根据权利要求1所述的一种桑叶提取物滴丸的制备工艺及检测方法，其特征在于：所述S4步骤中对滴丸品质的评价，滴丸的要求为外观应圆整，大小、色泽应均匀，应在30min内全部溶散，其中，每一粒滴丸之间的质量差异和溶散时限有具体标准，因此在评分时合格的为5级，不合格的为0级；
由于色泽均能达到要求，故不计分；
综合评分为所有测定项目分值之和。
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