CN112494502A

CN112494502A - 一种用于血虚证补血的糖类组合物

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Publication number: CN112494502A
Application number: CN202011302116.2A
Authority: CN
Inventors: 陈随清; 薛淑娟; 孙孝亚; 郭晓凯; 杨灏; 马美杰
Original assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Current assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date: 2020-11-19
Filing date: 2020-11-19
Publication date: 2021-03-16
Anticipated expiration: 2040-11-19
Also published as: CN112494502B

Abstract

本发明涉及用于血虚证补血的糖类组合物，可以有效解决疗效确切稳定的血虚证补血用药问题，其解决的技术方案是，一种用于血虚证补血的糖类组合物，是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.50～1.50︰1.36～4.07︰0.08～0.23︰0.26～0.78︰0.02～0.06︰0.12～0.35︰0.79～2.36作原料，将上述原料混合均匀即成。本发明配伍科学合理，组分互相支持，具有增强营养，补血健身之功效有效用于血虚证补血，疗效稳定确切，服用方便效果好是血虚证补血药物上的创新，经济和社会效益巨大。

Description

一种用于血虚证补血的糖类组合物

技术领域

本发明涉及医药，特别是一种用于血虚证补血的糖类组合物。

背景技术

血虚证（Blood deficiency）是由血液生化之源匮乏，或失血过多，或因瘀血内阻新血不生等原因所导致的血液不足或血液的营养功能衰弱，脏腑组织器官失于血液濡养的病理状态，为中医临床常见证侯，其临床表现为面色苍白或萎黄，皮肤毛发枯黄，头晕，心悸，乏力，舌淡苔白，脉细弱无力等。血虚证多存在于各种慢性疾病中，如“贫血”、“冠心病”、“脑梗死后遗症”等等，已成为影响人们健康的致病因素之一。

目前治疗血虚证补血主要是采用药物疗法，包括西药和中药，其中西药存在着不良反应较大、作用单一等缺点，而中药通常以健脾和胃、补气养血的四物汤、八珍汤、当归补血汤等复方进行治疗，由于健脾和胃、补气养血的药物多为补益之品，服药期间易出现上火、碍胃、便溏等副作用，不宜长期服用。因此研究开发出一种新的有效成分组合物是很有必要的。

九制熟地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.干燥块根的一种传统炮制加工品，比熟地黄蒸制的次数和时间均有所增加，通常以蒸制九遍为炮制的终点，为道地药材，性温，具有补血滋阴，益精填髓的作用，常用于血虚萎黄，心悸怔忡，月经不调，崩漏下血，肝肾阴虛，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，内热消渴，眩晕，耳鸣，须发早白等症。九制熟地黄作为常用的补血药，对血虚证具有显著的疗效，其中糖类成分为主要的药效成分。研究表明，熟地黄寡糖可促进造血的活性，并认为其补血机理可能是通过激活造血微环境中的某些细胞，促进其分泌造血生长因子，增加DNA的合成来增强机体的造血功能。目前仅有文献报道了熟地黄寡糖和多糖的补血作用，但具体糖类成分的组方和比例至今没有报道。

中药活性成分复杂，其多成分多靶点作用的特点已经成为研究者的共识，近年来，部分药学工作者提出以“中药药效组分群”为研究对象的思路，将中药多成分的复杂性问题简易化，具有药效物质基础清楚、作用机制明确、可控性强等特点，在一定程度上代替了中药复方。将中药配伍筛选为药效活性组分群的配伍，进而阐明中药的整合作用已成为近年普通研究模式,具有作用明确、靶位清楚、对病证针对性更强等优点,而传统的方剂全药配伍模式则是药物按照组方原则进行有序配合的有机整体。有效组分配伍一定程度上改善了传统方剂成分复杂、药效不稳定、作用环节不清、质量难以控制等问题。面对以上情况，能否根据九制熟地黄糖类具有补血作用而研制一种糖类组合物用于血虚证补血，更加确切稳定的表征血虚证补血作用，但至今未见有公开报道。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种用于血虚证补血的糖类组合物，可以有效解决疗效确切稳定的血虚证补血用药问题。

本发明解决的技术方案是，一种用于血虚证补血的糖类组合物，是由以下质量比例计的：

葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.50～1.50︰1.36～4.07︰0.08～0.23︰0.26～0.78︰0.02～0.06︰0.12～0.35︰0.79～2.36作原料，将上述原料混合均匀即成。

本发明配伍科学合理，组分互相支持，具有增强营养，补血健身之功效有效用于血虚证补血，疗效稳定确切，服用方便效果好是血虚证补血药物上的创新，经济和社会效益巨大。

具体实施方式

以下结合具体情况和实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。

实施例1

本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=1.00︰2.71︰0.15︰0.52︰0.04︰0.23︰1.57作原料，将上述原料混合均匀即成。

实施例2

本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.50︰1.36︰0.08︰0.26︰0.02︰0.12︰0.79作原料，将上述原料混合均匀即成。

实施例3

本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖︰蔗糖︰棉籽糖︰水苏糖=1.50︰4.07︰0.23︰0.78︰0.06︰0.35︰2.36作原料，将上述原料混合均匀即成。

实施例4

本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖︰蔗糖︰棉籽糖︰水苏糖=0.80︰2.17︰0.12︰0.42︰0.03︰0.18︰1.26作原料，将上述原料混合均匀即成。

实施例5

本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖︰蔗糖︰棉籽糖︰水苏糖=1.20︰3.25︰0.18︰0.62︰0.05︰0.28︰1.88作原料，将上述原料混合均匀即成。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。而且在具体实施时为了操作方便还可将上述实施例质量比分别转化为份数质量比，如实施例4本发明一种用于血虚证补血的糖类组合物是由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.80︰2.17︰0.12︰0.42︰0.03︰0.18︰1.26将上述原料混合均匀即成。

直接转化为一种用于血虚证补血的糖类组合物质量份数比的：葡萄糖800份、甘露三糖2170份、甘露糖120份、蜜二糖420份、阿拉伯糖30份、半乳糖180份、果糖1260份。其他实例以此类推，据此可将发明部分的组分按质量份数比修改为：葡萄糖500～1500份、甘露三糖1360～4070份、甘露糖80～230份、蜜二糖260～780份、阿拉伯糖20～60份、半乳糖120～350份、果糖790～2360份。

本发明是根据九制熟地黄糖类的有效活性成分的构成经实地测试和实验才做出的首创性的糖类组合物用于制备治疗血虚证补血用的糖类组合物，将中药原料配伍筛选为药效活性成分群的配伍，改变了传统方剂成分复杂，药效不稳定，作用环节不清，质量难以控制的问题，有关资料如下：

1、糖类有效物的筛选确定果糖的含量

采用HPLC色谱法进行含量测定：

色谱条件

色谱柱：Inertsil NH₂(5μm，4.6×250mm）；流动相为乙腈比水（70∶30）；采用示差折光检测器；流速为1mL/min。

对照品溶液的制备

精密称取果糖4.97mg置于1mL容量瓶中，加水溶解至刻度，得到浓度为4.97mg/mL的果糖对照品溶液。

供试品溶液的制备

精确称定九制熟地黄样品1.50g于锥形瓶中，量取50mL蒸馏水回流2h，而后取出放至冷却，补足重量滤过，取续滤液20mL，用等量石油醚和乙酸乙酯分别萃取两次，取下层溶液过0.22μm微孔滤膜备用。

2、葡萄糖、半乳糖、甘露三糖、蜜二糖、阿拉伯糖和甘露糖含量测定

采用HPLC色谱法进行含量测定：

色谱条件

色谱柱：Waters XBridge®shield C18色谱柱（250×4.6mm，5μm）；葡萄糖和半乳糖流动相：20mM乙酸铵水溶液（B）和乙腈（A）；甘露三糖、蜜二糖、阿拉伯糖和甘露糖流动相：0.1%的甲酸（B）和乙腈（A）。梯度洗脱程序如表1，流速为1mL/min。检测器：日本岛津SPD-20A，波长：245nm。

表1 流动相组成表

时间（min）	流动相比例
		0-5	0.1%的甲酸（B）︰乙腈（A）（83︰17）
5-15	B︰A（83︰17）→B︰A（80︰20）
		15-20	B︰A（80︰20）→B︰A（77︰23）
20-25	B︰A（77︰23）→B︰A（76︰24）
		25-30	B︰A（76︰24）→B︰A（83︰17）
30-32	B︰A（83︰17）

对照品溶液的制备

精密称取葡萄糖4.86mg、半乳糖4.98mg、甘露三糖4.79mg、甘露糖4.79mg、蜜二糖5.41mg、阿拉伯糖8.29mg置于1mL容量瓶中，加水溶解至刻度。对照品葡萄糖、半乳糖、甘露三糖、甘露糖、蜜二糖、阿拉伯糖的浓度分别为4.86mg/mL、4.98mg/mL、4.79mg/mL、4.79mg/mL、5.41mg/mL、8.29mg/mL。

供试品溶液的PMP衍生

取供试品溶液100μL，依次加100μL、0.3mol/L NaOH溶液和0.5mol/L PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液至离心管中，混匀后放于70℃下反应30min。冷却后加入等量0.3mol/L HCl溶液反应后，用400μL氯仿进行离心萃取10min，取上层溶液进行HPLC分析。

3、7种糖含量测定结果

将5份九制熟地黄样品（APRR-1～APRR-5）按上述供试品溶液的制备方法制备，分别注入高效液相色谱仪，测定样品中7种糖的含量，并以葡萄糖的平均比例为参比，以平均比例的50%作为最低比例，以平均比例的150%作为最高比例，计算得到各个成分与葡萄糖的比例范围，结果见表2。

表2 九制熟地黄样品7种糖的含量测定结果

样品	甘露三糖	甘露糖	蜜二糖	阿拉伯糖	葡萄糖	半乳糖	果糖
								APRR-1	19.34%	1.15%	3.24%	0.25%	7.55%	1.66%	10.54%
APRR-2	19.03%	1.04%	4.02%	0.33%	6.98%	1.76%	10.48%
								APRR-3	21.13%	1.06%	3.77%	0.25%	7.77%	1.63%	12.21%
APRR-4	19.59%	1.10%	4.02%	0.28%	6.82%	1.71%	12.64%
								APRR-5	19.37%	1.08%	3.87%	0.36%	7.21%	1.59%	11.19%
平均值	19.69%	1.09%	3.78%	0.29%	7.27%	1.67%	11.41%
								比例	2.71	0.15	0.52	0.04	1.00	0.23	1.57
比例范围	1.36-4.07	0.08-0.23	0.26-0.78	0.02-0.06	0.50-1.50	0.12-0.35	0.79-2.36

根据表2结果经反复实验测定确定本发明的糖类组合物以质量比为：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.50～1.50︰1.36～4.07︰0.08～0.23︰0.26～0.78︰0.02～0.06︰0.12～0.35︰0.79～2.36，并对实施例给出的糖类组合物药效进行了药效实验，实验表明效果非常好。

一、动物实验

1、动物分组

96只SD大鼠，雌性，180-220g，适应性喂养一周后随机分为12组，每组8只，分别设为空白对照组、模型组、糖组合物高剂量组、糖组合物中剂量组、糖组合物低剂量组、葡萄糖组、甘露三糖组、甘露糖组、蜜二糖组、阿拉伯糖组、半乳糖组和果糖组。

2、血虚证模型的建立

除空白对照组（简称空白组）外，其余每组大鼠均于实验开始第1、4天分别皮下注射乙酰苯肼（APH）生理盐水溶液20mg/Kg、10mg/Kg，第4天皮下注射APH生理盐水2h后，在第4～7天，每日腹腔注射环磷酰胺（CTX）生理盐水溶液20mg/Kg，同时空白对照组分别皮下、腹腔注射等量的生理盐水溶液，建立血虚证模型。

3、试验方法

实验开始第一天，糖组合物低剂量组（以实施例2为例）灌服低剂量糖组合物混合液，每毫升含糖组合物148.47毫克（148.47mg/mL），糖组合物中剂量组（以实施例1为例）灌服中剂量糖组合物混合液，每毫升含糖组合物296.95毫克（296.95mg/mL），糖组合物高剂量组（以实施例3为例）灌服高剂量糖组合物混合液，每毫升含糖组合物593.88毫克（593.88mg/mL），其余单糖组分别按照高剂量糖组合物中各个糖的比例进行灌胃，灌胃体积为1mL/100g，空白对照组与模型组分别灌服等量的蒸馏水，一天一次，连续15天。

4、外周血指标及胸腺、脾脏指数检测

末次给药1h后，各大鼠眼眶取血，全自动血液分析仪测定外周血中红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、红细胞压积(HCT)的值。取大鼠胸腺、脾腺，分别计算其与体质量的比值(即胸腺、脾脏指数)，其中胸腺指数=胸腺（mg）/鼠重（g）×100%，脾腺指数=脾腺（mg）/鼠重（g）×100%

5、统计分析

采用SPSS20.0统计软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，所有实验数据均采用

±s表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

6、实验结果

统计学处理结果见表3

表3 各组大鼠外周血象及胸腺和脾腺比较（

±s，n=8）

组别

WBC/×109·L-1

RBC/×1012·L-1

HGB/g·L-1

HCT（%）

胸腺指数（mg/g）

脾脏指数（mg/g）

空白组

13.83±2.26

7.75±0.31

146±4.76

44.8±1.16

2.56±0.4

2.45±0.24

模型组

6.88±4.06##

2.3±0.72##

56.2±18.82##

18.98±6.1##

0.67±0.16##

9.15±1.38##

糖组合物低剂量组

15.02±3.63**

6.16±0.22**

140±2.92*

45.23±1.34**

1.55±0.24

2.48±0.62*

糖组合物中剂量组

16.53±1.73**

6.24±0.21**

148±4.31**

47.2±1.4**

1.57±0.31*

2.47±0.17**

糖组合物高剂量组

23.7±2.28**

6.31±0.17**

151.2±4.93**

47.5±1.79**

1.59±0.3*

1.97±0.35**

葡萄糖

6.72±1.21

2.12±0.12

54.4±1.12

17.72±3.2

0.74±0.25

9.42±0.15

甘露三糖

7.12±0.26

4.45±0.69

58.3±2.15

29.68±1.6

0.98±0.56

8.45±0.25

甘露糖

6.81±0.85

2.36±0.21

59.5±1.52

16.85±5.2

0.56±0.13

9.04±0.14

蜜二糖

7.09±0.52

3.89±0.43

72.8±1.38

27.12±2.5

0.71±0.25

9.12±0.25

阿拉伯糖

6.62±1.34

2.41±0.25

59.8±2.58

19.45±1.3

0.62±0.41

9.23±0.28

半乳糖

6.76±0.76

2.43±0.18

60.01±2.17

20.14±1.9

0.68±0.15

9.18±0.12

果糖

7.24±0.81

4.81±0.32

65.24±3.59

28.45±5.2

0.78±0.23

7.23±1.25

从表3中可以清楚看出，模型对照组大鼠与空白对照组大鼠相比，白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积以及胸腺指数均显著降低（P＜0.01），而脾腺指数显著升高（P＜0.01）。与模型组相比，糖组合物低剂量组白细胞数、红细胞数和红细胞压积显著增高（P＜0.01），而血红蛋白含量及脾脏指数升高（P＜0.05）；糖组合物中剂量组白细胞数、红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量均显著升高（P＜0.01），而胸腺指数有所升高（P＜0.05），脾脏指数显著降低（P＜0.01）；糖组合物高剂量组白细胞数、红细胞数、红细胞压积及血红蛋白含量均显著升高（P＜0.01），而胸腺指数有所升高（P＜0.05），脾脏指数显著降低（P＜0.01）。其他单糖溶液对白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量、红细胞压积以及胸腺、脾腺指数影响较小，结果见表3。由表3可知，本发明糖类组合物对血虚证大鼠的红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量、白细胞及胸腺指数有显著提高作用，而对脾脏指数有显著降低作用，相比单糖溶液具有较好的疗效，表明本发明所述糖类组合物具有补血的作用，可用于治疗血虚证补血，且在实验中无发现毒副作用。

二、临床试验

在动物实验确保安全的基础上并经临床实验取得了非常好的有益技术效果，有关资料如下：

1、选择病例的标准

血虚证，是指体内血液不足，肢体脏腑五官百脉失于濡养而出现的全身性衰弱的证候。但要注意，中医讲的血虚和西医的贫血不是同一个概念，血虚未必贫血，贫血一定存在血虚。

失血过多：因外伤失血过多、月经过多，或其它慢性失血皆可造成血虚证。由于出血过多，日久则导致瘀血内阻，脉络不通，一方面造成再出血，另一方面也影响新血的生成，继而加重血虚。

临床表现为面色苍白或萎黄，唇色淡白，爪甲苍白，皮肤毛发枯黄，头晕目眩，心悸失眠，手足发麻，妇女月经量少色淡，经期错后或闭经，舌淡苔白，脉细无力，凡具有上述症状的均作为选择病例的标准。

2、诊断标准

凡具有病例选择标准的面色苍白或萎黄，唇色淡白，爪甲苍白，皮肤毛发枯黄，头晕目眩，心悸失眠，手足发麻，妇女月经量少色淡，经期错后或闭经，舌淡苔白，脉细无力症状者，在中医上均可诊断确诊为患有血虚证，需要进行用药治疗（无需做西医诊断的指标性化验）。

3、治疗方案

以实施例1为例

对确诊的患者采用本发明糖类组合物进行治疗，将实施例1给出的糖类组合物加水制成质量浓度为296.95mg/mL，每天服用2-3次，每次20-30mL，30天为一疗程，2个疗程统计疗效（儿童减半）。

4、疗效评定标准

治愈：临床症状消失，患者各项指标，如红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、红细胞压积(HCT)等指标恢复正常。

显效：临床症状有明显改善。

有效：症状有改善，但不明显。

无效：临床症状无改善，甚而有加重之趋势。

5、统计学处理

采用SPSS20.0统计软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA) ，所有实验数据均采用

±s表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

经对确诊的58例血虚证患者采用本发明进行治疗补血，其中男30例，女28例，年龄5-70岁，患病时间1-12个月（包括以采用其他药物治疗无明显效果者），经统计学处理其中治愈40例，治愈率为69%，显效10例，占17%，有效7例，占12%，无效1例，占2%，而且在实验中未发现不良反应。

在上述对实施例作实验的基础上，还对其他实施例进行了实验，均取得了相同和相近似的结果，这里不一一列举。在实验中均未发现有不良反应，表明用药安全，疗效稳定可靠。

6、结论

上述实验清楚表明本申请糖类组合物对血虚证大鼠的红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量、白细胞及胸腺指数有显著提高作用，而对脾脏指数有显著降低作用，相比单糖溶液具有较好的疗效，表明本发明所述糖类组合物具有补血的作用，可用于治疗血虚证补血，并经临床实验在已有的实验中有效率达98%，且无毒副作用，效果之好是未曾料到的，将中药配伍筛选为中药活性有效成分群的配伍，使其更具有作用明确、靶位清楚、对病证针对性更强得药物，改变了传统的方剂全药配伍模式，有效活性成分配伍一定程度上改善了传统方剂成分复杂、药效不稳定、作用环节不清、质量难以控制技术缺陷等问题。是治疗血虚证补血药物上的一大创新，开拓了血虚证治疗用药上的新途径，有巨大的经济和社会效益。

Claims

1.一种用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖︰蔗糖︰棉籽糖︰水苏糖=0.50～1.50︰1.36～4.07︰0.08～0.23︰0.26～0.78︰0.02～0.06︰0.12～0.35︰0.79～2.36作原料，将上述原料混合均匀即成。

2.根据权利要求1所述的用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=1.00︰2.71︰0.15︰0.52︰0.04︰0.23︰1.57作原料，将上述原料混合均匀即成。

3.根据权利要求1所述的用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.50︰1.36︰0.08︰0.26︰0.02︰0.12︰0.79作原料，将上述原料混合均匀即成。

4.根据权利要求1所述的用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=1.50︰4.07︰0.23︰0.78︰0.06︰0.35︰2.36作原料，将上述原料混合均匀即成。

5.根据权利要求1所述的用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=0.80︰2.17︰0.12︰0.42︰0.03︰0.18︰1.26作原料，将上述原料混合均匀即成。

6.根据权利要求1所述的用于血虚证补血的糖类组合物，其特征在于，由以下质量比例计的：葡萄糖︰甘露三糖︰甘露糖︰蜜二糖︰阿拉伯糖︰半乳糖︰果糖=1.20︰3.25︰0.18︰0.62︰0.05︰0.28︰1.88作原料，将上述原料混合均匀即成。