CN1254261C - 提高机体免疫功能药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种提高机体免疫功能药物及其制备方法。本发明药物由无花果40-60，枸杞子20-30，甘草25，大豆提取物3，淀粉10，甜味剂1-3为原料制成(用量为重量份)。该药物的制备方法是取无花果、枸杞子、甘草，加水煮沸，将煎煮液离心过滤。滤液减压浓缩，加入95%乙醇，滤除上清液，沉淀用水溶解，沉淀经喷雾干燥得到有效成分；将大豆加水煮沸，将煎煮液离心过滤，滤液减压浓缩，然后加在吸附树脂上洗脱，经喷雾干燥得到大豆提取物；将淀粉、甜味剂与上述二提取物混合、制粒。本发明的药物具有明显提高机体免疫功能并且可改善血液中血小板、6-酮-PGF1和TXB2功能及改善红细胞指数作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种可提高机体免疫功能药物，特别是一种以中草药及其提取物为原料制备的中药组合物，本发明还涉及该药物的制备方法。
背景技术
本发明药物根据《治症准绳》和《古今录验方》中的枸杞丸，加减而成。同时，亦参照了《太平圣惠方》中枸杞粥。
无花果《纲目》“甘、平，无毒”归经“手足太阴，手阳明经”《随息居食谱》日“健胃、清热、润肠”等功能。有补益中气，养血安神，缓和药性，久服延年益寿之功。枸杞子，其性平味甘，入肝肾经，有滋肝补肾，益经养血，有延年益寿之功。甘草《本径》日性“味甘，平”；《别录》“无毒”《珍珠》“生甘，平，炙甘，温”，具有和中缓急，润肺，解毒，调和诸药的功效。甘草于无花果、枸杞子配伍可以提高疗效，降低毒性。大豆提取物含有大豆异黄酮类物质，是天然的植物雌激素，此外具有抗氧化、抗癌、改善血液流体动力学、降低血脂、防止骨质疏松等明显的保健作用，并且无毒物副作用。
发明内容
本发明药物是由下列组分为原料制成的：(用量为重量份)
无花果40-60，枸杞子20-30，甘草25，大豆提取物3，淀粉10，甜味剂1-3
制备本发明药物的原料优选重量(份)配比是：
无花果50，枸杞子25，甘草25，大豆提取物3，淀粉10，甜味剂2
所述大豆提取物是将大豆用水煮沸、离心过滤后，加在大孔吸附树脂上，用10％的乙醇洗脱，然后喷雾干燥而得到的；
所述甜味剂是蔗糖、葡萄糖、果糖、阿斯巴甜(Aspartame)低聚糖、木糖醇。
本发明药物中，无花果为君药，枸杞子为臣药，甘草为佐药，大豆提取物作为使药。
本发明所述药物的剂型是冲剂、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊。
将上述各组分制成本发明药物的制备方法是：
1、无花果、枸杞子、甘草有效成分提取
取无花果、枸杞子、甘草，加8倍药量的水煮沸，2小时后倾出上清液，反复3次；
将上述煎煮液离心过滤。滤液减压浓缩，加入95％乙醇至醇的浓度为50％，滤除上清液，沉淀用水溶解，再加入95％食用乙醇至醇的浓度为50％，沉淀经喷雾干燥得到有效成分；
2、大豆提取物的制备
将大豆加8倍药量的水煮沸，1小时后倾出上清液，反复3次。将上述煎煮液离心过滤；滤液减压浓缩，然后加在吸附树脂上，用10％的乙醇洗脱，经喷雾干燥得到大豆提取物；
3、制粒
将淀粉、甜味剂与上述二提取物混合、制粒，得到本发明药物。
本发明药物可用下述两种方法进行定性分析，方法是：
1、硫酸---苯酚反应
取本发明药物0.1g，用少量蒸馏水溶解，置试管中，加入10％的硫酸---乙醇液。水浴100℃10分钟，显红棕色。
2、三氯化铁反应
称三氯化铁0.1g，用30％的乙醇定容于50ml，将本发明药物0.1g用少量蒸馏水溶解，用毛细管点在滤纸上，喷洒三氯化铁试剂，加热，显蓝黑色斑点。
对本发明药物进行了下述药理、药效学实验，
1、抗体生成细胞(PFC)检测当小鼠口服剂量1.5g/日/kg时，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠剂量3g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)。
2、血清溶血素的测定当小鼠口服剂量3g/日/kg时，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠剂量10g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)。
3、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验当小鼠剂量3g/日/kg时，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠口服剂量10g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)。
4、小鼠碳廓清实验经口给予小鼠不同剂量的受试物4周后，与对照组比较，当计量10g/日/kg时，小鼠吞噬指数( )提高19％(p＜0.01)。
5、大鼠高血脂试验经口服给药3g/日/kg，4周后，与高血脂动物组比较血小板凝集率、6-酮-PGF1α和TXB2均有明显下降有显著性差异(p＜0.05)或非常显著性差异(p＜0.01)。
上述结果表明：本发明药物具有明显提高机体免疫功能并且可改善血液中血小板、6-酮-PGF1和TXB2功能及改善红细胞指数作用。
具体实施方式
实施例1药物(冲剂)的制备
取无花果500g、枸杞子250g、甘草250g，加8倍药量的水煮沸3次，每次2小时。煎煮液用栏式离心机离心滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度d＝1.18，加入95％食用乙醇至醇的浓度为50％，滤除上清液，沉淀用水溶解，再加入95％食用乙醇至醇的浓度为50％，沉淀经喷雾干燥得到有效部位。
另取大豆1000g，加8倍药量的水煮沸3次，每次1小时。煎煮液用栏式离心机离心滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度d＝1.16，上大孔吸附树脂(型号AB-8，柱床φ10cm×50cm)用10％的乙醇洗脱，经喷雾干燥得到大豆提取物。
取药用淀粉，药用蔗糖，与上述二提取物混合，干法制粒，得到药物冲剂100袋×3克/袋。
实施例2药理、药效学实验
一、实验方法及条件
1.剂量小鼠效剂量分为三个剂量组。低1.5g/日/kg体重、中3.0g/日/kg体重、高10.0g/日/kg采取灌胃法，每日灌胃一次，对照组灌蒸馏水。各组小鼠连续给予受试物4周后，测定各项指标。
2.仪器与试剂
752分光光度计，AE100电子天平，电热三用水箱，隔水式恒温培养箱，螺旋测微器，KA-1000型台式离心机，80-2型台式离心机，玻片架，二氧化碳培养箱，超净工作台，24孔增养板，显微镜，实验数据用微软公司Excel软件进行方差分析统计。
二、实验项目与结果
1.抗体生成细胞(PFC)检测
腹腔注射0.2mL2％(V/V)SRBC免疫每只小鼠。5d后，取小鼠脾脏制成细胞浓度为5×106个/ml的脾细胞液。溶解琼脂糖制成1％的溶液，于48.0℃水浴保温，与等量2倍浓度的Hank’s液混合，分装至小试管中。每管0.50mL，加入0.050mL10％SRBC和0.010mL脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒在玻片上。于37.0℃恒温箱中温育1h，将补全体加在玻片槽中，再温育1.5h。计数空斑。
结果见表1。
表1 本发明药物对正常小鼠PFC的影响(X±SD)
单位：log10空斑数
| 组别 | 药物剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | PFC | P值 |
| 空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 01.53.010.0 | 12121212 | 5.32±0.295.60±0.37*5.53±0.11**5.58±0.21* | --0.03950.00890.0224 |
*：与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)
**：与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)
2.血清溶血素的测定
腹腔注射0.2mL2％(V/V)SRBC免疫每只小鼠。5d后，摘眼球取血于离心管内，放置1h，2000r/min离心10min，收集血清。小鼠血清用SA液稀释400倍，依次加入稀释的小鼠血清1.00mL、10％(v/v)的SRBC0.50mL、补体(用SA液1∶10稀释)1.00mL。另设不加血清的对照管(SA液代替)。置37.0℃水浴20min后冰水浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液1.00mL，都试剂3.00mL于试管内，同时取10％(v/v)的SRBC0.25ml加都试剂4.00mL作为半数溶血管。放置10min后，540nm波长处测定光密度值。试验结果以半数溶血值(HC50)表示。结果见表2
表2 本发明药物对正常小鼠血清溶血素的影响(X±SD)
| 组别 | 药物剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | HC50 | P值 |
| 空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 01.53.010.0 | 12121212 | 187.2±85.9276.2±54.1**245.9±36.7*265.6±29.3** | --0.00580.02890.0065 |
*：与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)
**：与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)
3.小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1.0mL，间隔30min，劲椎脱臼处死动物，剪开腹壁皮肤，腹腔注入Hank’s液2.0ml。按揉腹腔，吸出腹腔洗液1.0mL，分别滴于2张载玻片上，37.0℃恒温箱中温育30mi n然后经1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(v/v) Giesma-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数巨噬细胞，每张片计数100个。以吞噬百分率和吞噬指数表示小鼠巨噬细胞的吞噬能力。
结果见表3。
表3 本发明药物对正常小鼠的巨噬细胞吞噬率的影响
| 组别 | 药物剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬指数 | P值 |
| 空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 01.53.010.0 | 12121212 | 27.5±6.524.5±19.238.5±9.4*40.8±9.8* | --0.42280.01600.0036 |
*：与对照组比较有显著性差异(p＜0.05)
**：与对照组比较有非常显著性差异(p＜0.01)
4.小鼠碳廓清实验
对每只小鼠尾静脉注射稀释4倍的印度墨汁，0.1mL/10g体重。待墨汁注入后立即记时。分别于注入墨汁后1、10min取血0.020mL加至2.00mL碳酸钠溶液中，600nm波长处测定光密度值，以碳酸钠溶液作对照。另取肝脏和脾脏称重。以吞噬指数( )来表示巨噬细胞吞噬功能。结果见表4。
表4 本发明药物对正常小鼠的碳廓清的影响(X±SD)
| 组别 | 药物剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | P值 | |
| 空白对照组低剂量组中剂量组高剂量组 | 01.53.010.0 | 12121212 | 6.57±0.716.55±0.506.57±0.407.79±0.53** | --0.67820.13760.0174 |
**：与对照组比较有显著性差异(p＜0.01)
5.大鼠血小板凝聚试验
大鼠分为三组。I组正常基础饲料，II组高脂肪饲料(正常饲料+5％猪油+1.5％胆固醇)，III组高脂肪饲料+“本发明药物”冲剂，3g/日/kg，4周。采用ADP诱导比浊法，测定各组大鼠血小板凝聚率，ADP诱导浓度为4μM。血浆中6-酮-PGF1α和TXB2水平的测定在试验进行4周时取血，用放免分析方法测定。
结果见表5。
表5 本发明药物对大鼠血小板凝聚的影响
| 组别 | I组 | II组 | III组 |
| 血小板凝聚率(％) | 40.28±3.5 | 51.23±5.1** | 42.34±4.1## |
| 6-酮-PGF1α(ng/l) | 97.23±37 | 136.34±23 | 104±26 |
| TXB2(ng/l) | 518±247 | 1123±653** | 634±319## |
| TXB2/6-酮-PGF1α | 4.25±p1.78 | 9.34±3.71* | 4.35±2.17## |
**：与I组比较有显著性差异(p＜0.01)
##：与II组比较有显著性差异(p＜0.01)
三、结论
上述药理研究表明：
1、本发明药物剂量1.5g/日/kg时，能够显著提高小鼠抗体生成细胞(PFC)数，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠剂量3g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)；
2、本发明药物能够提高小鼠血清溶血素的百分数，当小鼠口服剂量3g/日/kg时，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠剂量10g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)；
3、本发明药物能够提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，当小鼠剂量3g/日/kg时，与对照相比较有显著性差异(p＜0.05)，当小鼠口服剂量10g/日/kg时与对照相比较有非常显著性差异(p＜0.01)；
4、本发明药物能够提高小鼠吞噬指数( )，当计量10g/日/kg时，小鼠吞噬指数( )提高19％(p＜0.01)；本发明药物经大鼠口服给药3g/日/kg，4周后，与高血脂动物组比较血小板凝集率、6-酮-PGF1和TXB均有明显下降，且有非常显著性差异(p＜0.01)。
Claims (5)
1、一种提高机体免疫功能药物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制成：
无花果40-60，枸杞子20-30，甘草25，大豆提取物3，淀粉10，甜味剂1-3；
所述大豆提取物是将大豆用水煮沸、离心过滤后，加在大孔吸附树脂上，用10％的乙醇洗脱，然后喷雾干燥而得到的。
2、根据权利要求1所述的药物，其原料重量配比是：
无花果50，枸杞子25，甘草25，大豆提取物3，淀粉10，甜味剂2。
3、根据权利要求1所述的药物，所述甜味剂是蔗糖、葡萄糖、果糖、阿斯巴甜、低聚糖、木糖醇。
4、根据权利要求1所述的药物，其剂型是冲剂、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊。
5、根据权利要求1所述的药物的制备方法是：
取无花果、枸杞子、甘草，加8倍药量的水煮沸，2小时后倾出上清液，反复3次；
将上述煎煮液离心过滤，滤液减压浓缩，加入95％乙醇至醇的浓度为50％，滤除上清液，沉淀用水溶解，再加入95％食用乙醇至醇的浓度为50％，沉淀经喷雾干燥得到有效成分；
将大豆加8倍药量的水煮沸，1小时后倾出上清液，反复3次，将上述煎煮液离心过滤，滤液减压浓缩，然后加在大孔吸附树脂上，用10％的乙醇洗脱，经喷雾干燥得到大豆提取物；
将淀粉、甜味剂与上述二提取物混合、制粒。
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