CN111494545B - 一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药技术领域，具体公开了一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法，该中药组合物按重量份数计由以下中药原料制成：枸杞子10‑30份、银杏叶20‑40份、山萸肉10‑30份、黄精10‑30份、黄芪20‑40份、牡丹皮5‑20份、茯苓5‑20份、泽泻5‑20份、远志5‑20份、葛根5‑20份。本发明提供的中药组合物配伍合理，诸药合用共奏补肝肾、活血化瘀、补脾益气、泻浊通窍之效，药效实验表明对痴呆动物模型及相关功能有显著改善作用。
Description
技术领域
本发明属于中药技术领域，具体公开一种治疗老年痴呆症的中药组合物及其制备方法。
背景技术
老年痴呆症是一种多见疾病，且随着患者年龄的增长，其发病率在不断上升。老年痴呆的主要症状表现为记忆力、语言、认知、思维等多方面能力出现功能性障碍，而记忆力减弱则是老年痴呆的重要症状。在临床观察中，患者多隐匿起病，恶化程度严重，病程稳定性差，患者可出现不同情况的智能障碍，严重危害了患者的身体健康。
当代医学上认定老年痴呆的病理变化多数情况为脑组织弥漫性萎缩、退行性改变、大脑萎缩、脑回变狭、脑沟加深等，是导致老年患者出现智能障碍的主要因素。目前医学上把老年痴呆作为难以痊愈的疾病，虽然患者接受了脑循环代谢改善剂或使用了多种神经生长因子、神经生长肽类的药物，但其治疗效果一直不太理想。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提出以下技术方案：
本发明提供的治疗老年痴呆症的中药组合物，其按重量份数计由以下原料制成：枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份。
优选地，其按重量份数计由以下原料制成：枸杞子20份、银杏叶30份、山萸肉20份、黄精20份、黄芪30份、牡丹皮12份、茯苓12份、泽泻12份、远志12份、葛根12份。
上述中药组合物能够进一步制备成汤剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂。
所述中药组合物的制剂为汤剂，其制备方法包括以下步骤：称取枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份，混合，加水浸没药材，煎煮两次，每次0.5-1.0h，合并两次煎煮液。
所述中药组合物的制剂为颗粒剂，其制备方法包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份，混合后加入相当于药材总重量6-10倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成相对密度为1.30(60℃)的稠膏；
S3，将稠膏：糊精：蔗糖粉按照质量比1:1:2均匀混合，过14目筛，制成颗粒，在60℃干燥，分装。
所述中药组合物的制剂为片剂，其制备方法包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份，混合后加入相当于药材总重量6-10倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将S1中水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成相对密度为1.30(60℃)的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃减压干燥，制得药粉；
S3，将S2中干燥好的药粉过80目药典筛；
S4，按质量分数加入10％低聚麦芽糖、1.5％羧甲基淀粉钠、10％加糊精后混合均匀，加入质量分数85-95％的乙醇溶液进行制粒；
S5，制粒完成后在65℃进行烘干，使水分含量小于5％，然后采用20目筛进行整粒；
S6，整粒完成后按质量分数加入0.5％硬脂酸镁，混合均匀后压片、装封塑。
所述中药组合物的制剂为胶囊剂，其制备方法包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份，混合后加入相当于药材总重量6-12倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将S1中水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成相对密度为1.30(60℃)的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃减压干燥，制得药粉；
S3，将步骤S2得到的药粉粉碎，机械均化、过16-20目筛整粒，装入胶囊壳体内制成胶囊。
中医学上把老年痴呆归属为“呆病”、“善忘”、“健忘”等范畴，认为其病因在脑，与心肝脾肾功能失调有关，基本病机为肾气肾精亏虚。这一说法在张景岳处得到了验证，张景岳认为该病是“下气有余，对上气不足而言，非谓下之真实也。心肺虚于上，营卫留于下，则神气不能相周，故为善忘，阳衰于上之兆也”，“痴呆症凡平素无痰，而或以郁结，或以不遂，渐致痴呆”。由于老年人年高体衰，肾气肾精亏虚，气血不足，髓海空虚，脑失所养，痰阻经络于脑，气虚气滞血瘀于脑，脏腑功能失调，清窍受蒙，因虚可以致瘀，而瘀久则使虚更甚，最终造成神明失用。因此，从传统中医学角度来讲，其治疗原则应该抓住气虚血瘀，标本兼治，滋肝补肾，补气活血。
枸杞子：甘，平。归肝、肾经。具有滋补肝肾，益精明目等功效。用于肝肾阴虚证。研究表明有延缓衰老、降血糖、降血脂、降胆固醇、提高人体免疫功能等作用。常用于治疗老年痴呆肝肾亏虚症，兼治虚劳咳嗽、心烦消渴等症。
银杏叶：甘、苦、涩，平。归心、肺经。具有活血化瘀，通络止痛，敛肺平喘，化浊降脂等功效。研究发现可促进记忆力、改善脑功能，此外，还能降低血黏度、清除自由基。银杏叶不仅能改善大脑的血液循环，而且具有治疗老年痴呆症的作用，其主要机理与银杏叶中含有的某些化学成分有关，这些成分的“特殊作用”就是能够减少因年龄增长而受损或死亡的脑细胞数量。
山萸肉：酸、涩、微温。归肝、肾经。具有补益肝肾，涩精止汗等功效。用于肝肾不足之腰酸遗精、头晕目眩、月经过多以及尿频、自汗等症。研究发现山萸肉中含有抗氧化物质超氧化岐化酶，可以抑制体内氧化脂质的生成，能够增加机体的抗氧化能力，不仅可以缓解人的疲劳感，还对脑细胞起到一定的作用，能够增强人体的记忆力。
黄精：甘、平。归脾、肺、肾经。具有补脾益气，滋肾填精，养心安神等功效。常用于治疗老年痴呆心脾两虚，肝肾不足，筋骨软弱，食少口干等症，研究表明具有提高超氧化物歧化酶(SOD)、抗氧化、防治动脉硬化、预防心脑血管疾病等作用。
黄芪：甘，微温。归脾、肺经。具有健脾补中，升阳举陷，益卫固表，利尿，托毒生肌等功效。研究表明具有增强免疫和调节免疫等作用，也可扩张血管，抑制血小板聚集，降低血液黏度，改善血液循环和脑的灌流量。黄芪中含有锌等微量元素，对防治老年痴呆有一定作用。
牡丹皮：苦、辛，微寒。归心、肝、肾经。具有清热凉血，活血化瘀等功效。
茯苓：味甘、淡，性平。归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿，健脾，宁心等功效。研究表明具有抗氧化，防衰老，增加免疫力，提高大脑细胞活性等作用。茯苓有较强的利尿作用，可治疗肾炎、心衰水肿。另外，还有镇静作用，对神经衰弱有效。
泽泻：甘，寒。归肾、膀胱经。具有利水，渗湿，泄热等功效。
远志：苦、辛、温。归心、肾、肺经。具有安神益智，解郁等功效。研究表明具有增强记忆学习，抗抑郁症，安神，抗氧化，抗衰老等作用。适宜治疗老年痴呆、痰浊阻窍症。
葛根：味甘、辛，性凉。归肺、胃经。具有解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻等功效。研究发现葛根中提取的黄酮能增加脑及冠状血管血流量，另外，葛根具有益智作用，亦可升举阳气，营养心肌。经常服用葛根食品，能调理更年期综合症，姿容养颜，且对提高记忆力有一定效果。
本发明提供的治疗老年痴呆的组合物，以枸杞子、银杏叶为君药，可滋补肝肾、活血化瘀；山茱萸、黄精补肾填精益髓，二药助枸杞子补肝肾；黄芪补益肺脾之气，气行则血旺，助银杏叶活血化瘀；以上三味药为臣药，助君药补肝肾、活血化瘀；牡丹皮清热凉血、活血散瘀，配山萸肉可制其温涩，也可助银杏叶活血之力；茯苓可利水渗湿、健脾化痰、宁心安神，泽泻可利湿泻浊，远志泻肾浊、化痰通窍，四药共为佐药，与滋补肝肾药共收平补平泻，以补为主，达到调整肝肾功能失调的目的；葛根升举清阳之气，为使药。全方共收补肝肾、活血化瘀、补脾益气、泻浊通窍之功，从而使髓海充盈，保证血脉畅通,机体虚衰得到明显的改善。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
一种治疗老年痴呆的中药组合物，由以下药材制成：20g枸杞子、30g银杏叶、20g山萸肉、20g黄精、30g黄芪、12g牡丹皮、12g茯苓、12g泽泻、12g远志、12g葛根。
该中药组合物可制成汤剂，具体方法为：加水应超过药材表面一指许，煎前冷水浸泡0.5h，煎煮两次，每次0.5h，合并两次煎液，分早晚两次服用，服药以空腹或半空腹为佳，每次药量以150-200mL为宜。
实施例2
一种治疗老年痴呆的中药组合物，由以下药材制成：10g枸杞子、20g银杏叶、10g山萸肉、10g黄精、20g黄芪、5g牡丹皮、5g茯苓、5g泽泻、5g远志、5g葛根。
该中药组合物能够制成颗粒剂，具体制备方法如下：
S1、按照上述重量取各药材，清洗干净，加入相当于药材总重量6倍量的水，浸泡0.5h，水煎3次，每次0.5h，合并3次水煎液；
S2、将S1中得到的水煎液用滤膜过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成相对密度为1.30(60℃)的稠膏；
S3、将稠膏：糊精：蔗糖粉按照质量比1:1:2均匀混合，过14目筛，制成颗粒，在60℃下干燥，分装成10g规格的颗粒剂药包。
服用方法：饭前服用，一日2次，每次1袋，保质期2年，荫凉干燥处存放。
实施例3
一种治疗老年痴呆的中药组合物，由以下药材制成：20g枸杞子、30g银杏叶、20g山萸肉、20g黄精、30g黄芪、12g牡丹皮、12g茯苓、12g泽泻、12g远志、12g葛根。
该中药组合物可制成片剂，具体制备方法如下：
S1、按照上述重量取各药材，清洗干净，加入相当于药材总重量8倍量的水，浸泡1h，水煎3次，每次1h，合并3次水煎液；
S2、将S1中得到的水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成相对密度为1.30(60℃)的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃下减压干燥，制得药粉；
S3、将S2中干燥好的药粉过80目药典筛，备用；
S4、在S3中过药典筛后的药粉中加入质量分数为10％的低聚麦芽糖、质量分数为1.5％的羧甲基淀粉钠、质量分数为10％的糊精混合均匀，再加入质量分数为85-95％的乙醇溶液，使混合物“手握成团、触之即散”，进行制粒；
S5、制粒完成后在65℃下进行烘干，使水分含量小于5％，然后使用20目药典筛进行整粒；
S6、整粒完成后加入质量分数为0.5％的硬脂酸镁，混合均匀后进行压片，每片药重量约0.4g，装封塑。
服用方法：饭前服用，一日3次，每次3-5片，保质期2年，荫凉干燥处存放。
实施例4
一种治疗老年痴呆的中药组合物，由以下药材原料制成：30g枸杞子、40g银杏叶、30g山萸肉、30g黄精、40g黄芪、20g牡丹皮、20g茯苓、20g泽泻、20g远志、20g葛根。
该中药组合物可制成胶囊剂，具体制备方法如下：
S1、按照上述重量取各药材，清洗干净，加入相当于药材总重量10倍量的水，浸泡1.5h，水煎3次，每次1.5h，合并3次水煎液；
S2、将S1中得到的水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩至相对密度为1.30(60℃)的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃下减压干燥，制得药粉；
S3、将步骤S2得到的药粉粉碎，机械均化、过16-20目筛整粒，装入胶囊壳体内制成胶囊。
服用方法：饭前服用，一日3次，每次3-5粒，每粒药重量约0.4g，保质期2年，荫凉干燥处存放。
由于实施例1-4提供的治疗老年痴呆的中药组合物的治疗效果基本相同，故以下仅采用实施例4制备得到的胶囊剂型的中药组合物进行效果说明。
一、对Aβ1-42致痴呆模型大鼠学习记忆障碍的影响
1.实验材料
1.1实验动物
雄性SD大鼠60只，SPF级，体重(200±20)g，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，实验动物质量许可证号SCXK(陕)2018-001。
1.2药品及试剂
阳性药：双益平，由上海复旦复华药业有限公司生产，国药准字H10960133，规格，50ug，一次0.1mg～0.2mg(2～4片)，一日2次。
试剂：Aβ1-42，由sigma公司生产。
1.3主要仪器和设备
Morris水迷宫测试系统(ZH-Morris，淮北正华生物仪器设备有限公司)；
2.实验方法
2.1模型制作
2.1.1 Aβ1-40溶于无菌生理盐水(1g/L)，用前37℃下孵育。以10％水合氯醛按照3mL/kg-1ip麻醉，将麻醉后大鼠固定于脑立体定位仪上，剪去头顶部的毛，消毒后取头顶部正中线切开头皮(矢状切口)，分离皮下组织充分暴露出前囟及其周围部分的颅骨，钻穿颅骨，注射针头挑破硬脑膜。选右侧海马齿状回背侧细胞带为注射区，定位坐标为前囟后3.3mm，右侧旁开2.0mm，硬脑膜下3.0mm，门齿钩平面低于耳间线平面2.4mm。微量注射器缓慢注入Aβ1-401μL，在5min内缓慢注完，注射完后留针5min，然后缓缓拔出微量进样器，用牙胶封住伤口，缝合头皮，将动物放回饲养笼内。术后给予青霉素20万U/只，1次/d，共3d，预防感染。假手术组操作同上，但注射等体积生理盐水。
2.1.2模型动物筛选：对SD大鼠进行水迷宫初步筛选，方法如下：
将平台置于第二象限，从对侧象限入水点依次放入大鼠。游泳时间为60秒，观察大鼠的游泳状态。体力不佳的SD大鼠(漂浮时间大于10秒)、游泳速度过慢的大鼠以及10秒内即登台的大鼠均被剔除。
2.2分组给药
实验共分为6组，假手术组10只，将筛选过的50只模型组大鼠随机分为模型组、阳性组、实施例4高、中、低剂量组，每组10只。各动物自术后1d起给药30d，每日1次，阳性组给予灌胃双益平片0.2mg/kg，实施例4高、中、低剂量组分别按照2g/kg、1g/kg、0.5g/kg给予相应的药液灌胃给药，假手术组和模型组均灌胃蒸馏水，灌胃容积为10ml/kg。
2.3检测指标
2.3.1一般情况观察
观察其外观、精神、毛发、饮食、开场行为(即大鼠在新环境中有探究活动，这些探究活动可通过动物在开场内行走、站立、理毛、排粪便等开场行为来观察)等变化。
2.3.2进行Morrsi水迷宫实验
造模后及连续灌药25d后，进行水迷宫训练5d，每天上午、下午各训练1次，训练期间继续给药。训练至第5天，训练时选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，观察并记录大鼠寻找并爬上平台的所需时间(即逃避潜伏期)。如果大鼠在120s未找到平台，需将其引入平台，这时潜伏期为120s。
2.4统计方法
采用SPSS16.软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
3.1动物一般情况
造模前各组动物均反应良好，毛发顺滑亮泽，腹肌紧收，精神状态良好。假手术组大鼠行为在实验前后无明显改变。实验后期的模型组大鼠逐渐呈现激惹状态，体毛发黄枯燥、不顺泽，四肢和尾巴苍白、感觉比较凉，后肢肌肉显得有些干瘪、僵硬；实施例4高、中、低剂量组虽也有上述行为学改变，但表现不明显。
3.2对大鼠学习记忆功能的影响
结果见表1。
表1对痴呆模型大鼠逃避潜伏期的影响
| 组别 | n | 剂量 | 逃避潜伏期(s) |
| 假手术组 | 10 | - | 33.1±6.7 |
| 模型组 | 10 | - | 65.1±8.8<sup>ΔΔ</sup> |
| 阳性组 | 10 | 0.2mg/kg | 46.7±6.1<sup>*</sup> |
| 高剂量组 | 10 | 2g/kg | 41.8±6.9<sup>**</sup> |
| 中剂量组 | 10 | 1g/kg | 47.9±6.2<sup>*</sup> |
| 低剂量组 | 10 | 0.5g/kg | 49.2±7.1<sup>*</sup> |
注:模型组与假手术组比较ΔΔ表示P＜0.01；高、中、低剂量组与模型组比较*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。
由表1可知，通过Morris水迷宫检测大鼠逃避潜伏期，模型组与假手术组比较，逃避潜伏期明显延长，具有显著性差异(P＜0.01)，实施例4高、中、低剂量组以及阳性组与模型组相比，逃避潜伏期明显缩短，具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。
综上，实施例4提供的中药制剂可明显缩短痴呆模型大鼠水迷宫实验逃避潜伏期时间，改善模型大鼠学习记忆障碍，提示本发明提供的中药组合物对老年痴呆引发的记忆障碍有明显的治疗作用。
二、本发明对D一半乳糖致痴呆模型大鼠学习记忆的影响
1.实验材料
1.1实验动物
SD大鼠，SPF级，60只，♀♂各半，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，体重180～220g，实验动物质量许可证号：SCXK-(陕)2018-001。
1.2药品及试剂
阳性药：双益平，见实验一。
试剂：D一半乳糖，由Sigma公司生产。
1.3仪器
电迷宫，Y型，江苏沙洲县三兴声电公司生产。
2.实验方法
2.1实验步骤
大鼠随机分为6组，每组10只，按体重均衡原则分为对照组、模型组、实施例4高、中、低剂量组、阳性组。高、中、低剂量组给予灌胃2g/kg、1g/kg、0.5g/kg，阳性组给予灌胃双益平片0.2mg/kg，对照组和模型组给予灌胃蒸馏水，灌胃体积为10ml/kg。在实验开始时，除对照组大鼠每日腹腔注射生理盐水，其余大鼠按每日50mg腹腔注射1％D-半乳糖生理盐水溶液。连续7天后，各用药组均以lml/kg体积灌服给药，模型组和对照组以等体积蒸馏水灌服。给药后，仍按原法继续腹腔注射1％D-半乳糖生理盐水溶液，在给药30天后，即D-半乳糖造模30后，开始采用Y型迷宫检测药物对大鼠学习记忆能力的影响。
2.2Y型水迷宫行为学检测
Y型电迷宫分三等分辐射式反射箱，通过电刺激控制仪电击动物足部，电击电压为7OV、延迟2秒。反射箱三个臂的顶端有信号灯，信号灯亮时此臂无电，另外两个臂通电，实验时根据动物所在位置设计其起步区左侧为安全无电区。凡大鼠受电击后能从起步区直接逃至不通电有信号灯的左侧臂为正确反应，否则为错误反应。测试前将大鼠放置起步区的反射臂中，不通电，让大鼠在三臂中进行探索，约2-3分钟后待其稳定后将大鼠抓至起步区，灯亮后2秒时，给予电刺激，直至大鼠最终逃到安全区后30秒，熄灯，作为一次测验。在对大鼠进行训练学习能力测试时，记录达到10次试验9次正确的所需训练次数。休息7天后进行记忆能力检测，每只大鼠共检测巧次，如大鼠在起步区延迟期内未受电击直接逃到安全区得2分，受电击后直接逃到安全区得1分，否则不得分，以总得分作为记忆成绩。
2.4统计方法
采用SPSS16.软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
在学习训练中，达到9/10训练标准的训练次数越多，则说明动物记忆障碍越严重，反之则记忆障碍减轻，结果见表2。
表2对D-半乳糖痴呆模型大鼠记忆的影响
注:模型组与对照组比较ΔΔ表示P＜0.01；高、中、低剂量组与模型组比较*表示P＜0.05；**表示P＜0.01
由表2可知，模型组大鼠在训练中达到9/10训练标准训练次数明显多于对照组，有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比，给予实施例4提供的中药制剂及双益平后，给药组大鼠达到9/10训练标准训练次数明显减少，具有显著性差异(P<0.05，P<0.01)。在记忆成绩测试中，对照组及高、中、低组及双益平大鼠的得分均较模型组大鼠提高，具有显著性差异(P<0.01)。提示本发明提供的中药组合物可明显缩短D-半乳糖致痴呆模型大鼠Y型水迷宫实验训练次数，增加记忆评分，改善模型大鼠学习记忆障碍，对老年痴呆引起的记忆障碍有明显的治疗作用。
三、对小鼠碳粒廓清功能的影响
1.实验材料
1.1实验动物
KM小鼠，SPF级，60只，♀♂各半，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，体重18～22g，实验动物质量许可证号：SCXK-(陕)2018-001。
1.2主要药品及试剂
阳性药A：六味地黄丸，由兰州佛慈制药股份有限公司生产，国药准H10910003，规格：每包8丸重1.44g，用量：一次8丸，一日3次。
阳性药B：双益平，见实验一。
印度墨水：Solarbio生产。
1.3仪器
BAS224S电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产；
METASH 722N分光光度计，上海元析仪器有限公司。
2.实验方法
2.1实验步骤
选取60只KM小鼠，♀♂各半，体重18～22g，按体重均衡原则分为6组：对照组、实施例4高、中、低剂量组、阳性药A六味地黄丸、阳性药B双益平。高、中、低剂量组分别灌胃实施例4提供的制剂2.6g/kg、1.3g/kg、0.65g/kg，阳性组A灌胃六味地黄丸1.44g/kg，阳性组B灌胃双益平0.2mg/kg，对照组灌胃蒸馏水，灌胃体积为20ml/kg。各组小鼠给药14天，于末次给药后30min，尾静脉注入生理盐水配制的10％印度墨汁0.1mL/10g，立即计时，于1(t1)min和5(t2)min后，分别从眼眶静脉丛准确取血20μL，将取得的血加入到2mL的0.1％NA2CO3溶液中，洗净吸管壁附着的血，摇匀。用分光光度计在675nm波长处测定t1和t2吸光度值(OD1和OD2)，取0.1％NA2CO3溶液校正零点。取血完毕同时，脱颈椎处死小鼠，取其肝脏、脾脏，称重。按下列公式计算吞噬指数K和吞噬系数(校正吞噬指数)α。K＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)
α＝K1/3×体重/(肝重+脾重)
2.2统计方法
采用SPSS16.软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
结果见表3。
表3对小鼠碳粒廓清功能的影响(x±s)
| 组别 | 剂量 | 动物数(只) | 吞噬指数(K) | 吞噬系数(α) |
| 对照组 | - | 10 | 0.023±0.004 | 4.26±0.61 |
| 高剂量组 | 2.6g/kg | 10 | 0.055±0.009** | 6.23±0.69<sup>**</sup> |
| 中剂量组 | 1.3g/kg | 10 | 0.041±0.018** | 6.15±0.98<sup>**</sup> |
| 低剂量组 | 0.65g/kg | 10 | 0.035±0.016* | 5.57±1.83<sup>*</sup> |
| 阳性组A | 1.44 | 10 | 0.046±0.022** | 6.06±0.948<sup>**</sup> |
| 阳性组B | 0.2mg/kg | 10 | 0.025±0.004 | 4.36±0.54 |
注：高、中、低剂量组与对照组比较*P<0.05，**P<0.01
由表3可见，阳性组A六味地黄丸及高、中、低剂量吞噬指数和吞噬系数明显高于对照组(P<0.05，P<0.01)，阳性组B双益平组与对照组比较无显著性差异。提示本发明提供的中药组合物可以提高小鼠吞噬指数和吞噬系数，增强小鼠碳粒廓清功能，有增强免疫作用，双益平不具有增强免疫作用，显示本发明提供的中药组合物具有补益肝肾的功效。
四、对小鼠耳廓微循环的影响
1.实验材料
1.1实验动物
KM小鼠，SPF级，60只，♀♂各半，西安交通大学医学部实验动物中心提供，体重18～22g，实验动物质量许可证号：SCXK-(陕)2018-001。
1.2药品及试剂
阳性药A：复方丹参片，广东白云山和记黄埔中药有限公司生产，国药准字Z44023372，规格，0.32g，一次3片，一日3次。
阳性药B：双益平，见实验一。
乌来糖，国药集团化学试剂有限公司生产。
1.3实验仪器
电子天平，型号：BS210S，精确度：0.1mg，生产厂家：北京赛多利斯；图像分析系统，型号：BI-2000，生产厂家：成都泰盟仪器有限公司。
2.实验方法
2.1实验步骤
选取60只KM小鼠，♀♂各半，体重18～22g，按体重均衡原则分为6组：对照组、实施例4高、中、低剂量组、阳性药A复方丹参片组、阳性药B双益平组。高、中、低剂量组灌胃本发明2.6g/kg、1.3g/kg、0.65g/kg，阳性组A灌胃复方丹参片0.96g/kg，阳性组B灌胃双益平0.2mg/kg，对照组灌胃蒸馏水，灌胃体积为20ml/kg。给药前将小鼠用2％水合氯醛0.2ml/10g腹腔注射麻醉(严格消毒)，腹向下固定在小鼠观察台上，使耳廓平展在耳托上，并选定耳边界某处用苦味酸标记，在耳托上和耳廓表面滴加少许液体石蜡，将观察台置于BL-420生物机敏实验系统显微载物台上、调节泛光源适当亮度，在10倍镜下观察，启动微循环软件、调整镜下视野，使由摄像机传输到电脑屏幕上的图像清晰，在标记点附近选定某一边界，画出血管分布草图(以备下次观测时找到原测血管部位)，测量其毛细血管开放量，血流速度(微米/秒)，血管输入口径(微米)及血管输出口径(微米)，然后即日开始给药，连续给药14日。末次给药后，测10、20、30min小鼠原部位的血管开放量、血流速度、血管输入口径及血管输出口径，减去给药前的相应值即为血管开放量变化值，血流速度变化值，血管输入及输出口径变化值。
2.2统计方法
采用SPSS16.软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
3.1对小鼠耳廓微循环的影响
结果见表4-7。
表4对小鼠毛细血管开放量的影响
n＝10
注：高、中、低剂量组与对照组比较*P＜0.05，**P<0.01
表5对小鼠毛细血管血流速度的影响
n＝10
注：高、中、低剂量组与对照组比较*P＜0.05，**P<0.01
表6剂对小鼠毛细血管输入口径的影响
n＝10
注：高、中、低剂量组与对照组比较*P＜0.05，**P<0.01
表7剂对小鼠毛细血管输出口径的影响
n＝10
注：各给药组与对照组比较*P＜0.05，**P<0.01
由表4-7可见，与对照组比较，阳性组A和高剂量组可显著增加小鼠毛细血管开放量和血流速度(P<0.05或P<0.01)；阳性组A及高、中、低剂量组可显著增加小鼠毛细血管输入口径(P<0.05或P<0.01)；阳性组A及高、中剂量组可显著增加小鼠毛细血管输出口径(P<0.05或P<0.01)；阳性组B双益平与对照组比较无显著性差异。提示本发明提供的中药组合物有促进小鼠微循环的作用，说明本发明提供的中药组合物具有活血化瘀的功效。
五、对气虚小鼠耐缺氧实验的影响
1.试验材料
1.1实验动物
KM小鼠，SPF级，60只，♀♂各半，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，体重18～22g，实验动物质量许可证号：SCXK-(陕)2018-001。
1.2试剂
阳性药A：益气聪明丸，由陕西君碧莎制药有限公司生产，国药准字Z20063647，规格：4.5g/瓶，用量：一次9g，一日1次；
阳性药B：双益平，见实验一；
氯化镁：分析纯，国药集团化学试剂有限公司生产；
钠石灰：上海纳辉干燥试剂厂生产。
1.3仪器
电子天平：型号：AL104，精确度：0.1mg，METTLER TOLEDO生产；
电子天平：型号：YP1201N，精确度：0.1g，上海精密科学仪器有限公司。
2.实验方法
KM小鼠60只，雌雄各半，体重18g～22g，随机分为6组，对照组，实施例4高、中、低剂量组，阳性组A益气聪明丸组、阳性组B双益平组。高、中、低剂量组灌胃本发明2.6g/kg、1.3g/kg、0.65g/kg，阳性组A灌胃益气聪明丸3.0g/kg，阳性组B灌胃双益平0.2mg/kg，对照组灌胃蒸馏水，灌胃体积均为20ml/kg，每日1次，连续给药14天。末次给药60min后分别将每只小鼠置于底部预先放有70g新鲜钠石灰的300mL广口瓶(容积200ml)中，加盖密封，立即计时，以呼吸停止、翻正反射消失为死亡指征，各组交叉进行，组间比较。
2.2统计方法
采用SPSS16.软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，在正态分布且方差齐的情况下对其行单因素方差分析，两两比较采用LSD法，P＜0.05为差异有统计学意义。
3.实验结果
结果见表8。
表8对正常小鼠耐缺氧能力的影响(
n＝10)
| 组别 | 剂量 | 动物数 | 生存时间(min) |
| 空白对照组 | - | 10 | 24.54±5.19 |
| 益气聪明丸组 | 3.0g/kg | 10 | 31.01±6.44<sup>*</sup> |
| 双益平组 | 0.2mg/kg | 10 | 23.14±6.21 |
| 高剂量组 | 2.6g/kg | 10 | 33.35±4.79<sup>**</sup> |
| 中剂量组 | 1.3g/kg | 10 | 30.20±4.66* |
| 低剂量组 | 0.65g/kg | 10 | 26.05±4.87 |
注：各给药组与对照组比较*P＜0.05，**P<0.01
由表8可见，阳性药A益气聪明丸及本发明高、中剂量组能明显延长小鼠耐缺氧生存时间(P<0.05或P<0.01)，双益平组与对照组比较无显著性差异。提示本发明提供的中药组合物能明显延长缺氧状态下小鼠生存时间，对小鼠脑缺氧有一定的保护作用，具有耐缺氧能力，说明本发明提供的中药组合物具有补脾益气的功效。
六、急性毒性试验
1.实验条件
1.1动物品系KM小鼠，SPF级，44只，♀♂各半，西安交通大学医学部实验动物中心提供，体重18～22g，实验动物质量许可证号：SCXK-(陕)2018-001。
1.2饲养管理
实验动物购回后即可使用，实验动物分组后标记样品名称、实验动物种类、性别及组别。实验环境：净化室温度保持在20～25℃；相对湿度保持在45～70％。保持门窗密闭，使用空气净化系统，送新风全口开启，送风机隔日换机一次，人流、物流和废弃物按照规定的方向运行，不得逆转。饲料和垫料由钴60照射处理，每天清扫地面、笼具架和墙壁，并用紫外线消毒一次，实验前后认真洗手和用75％酒精棉球消毒。试验结束后，对处死动物的尸体、垃圾应袋装后及时清理和焚烧。
1.3受试药物
按上述实施例4方法制备的样品进行试验。临床用量：每日3次，每次3-5粒。每粒0.4g，人日用量为0.1g/kg(体重按60kg计，每次按5粒计)。
1.4药液制备
实验时取实施例4提供的去掉胶囊壳的中药制剂10g，边加水边研磨，加水至20mL，配成约50％的最大浓度(最大浓度为供试品药液恰好能够通过灌胃针头的浓度，计算方法为：药物质量/溶剂总体积×100％＝10g/20ml×100％＝50％)。
2.实验方法
2.1预试
取KM小鼠4只，雌雄各2只，给药前禁食12小时，按50％的最大给药浓度，按40mL/kg的最大给药体积，24小时内灌胃给药3次，给药量为：40mL/kg×50％×2次＝40g/kg。给药后观察小鼠一般情况。观察24小时，4只小鼠大便正常，无死亡，活动自如，进食、饮水正常，也无明显中毒反应，提示本品难以测出LD50，故选择最大受试药物量实验。
2.2最大受试药物量实验
取小鼠40只，♀♂各半，体重18～22g，按体重均衡原则分为正常对照组及给药组，每组各20只小鼠(♀♂各半)，给药前禁食12小时，给药组以50％浓度的本发明混悬液，按40mL/kg灌药体积，24小时内3次灌胃给药，对照组给与同体积蒸馏水，连续观察14天，详细记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物等。根据公式(最大受试药物量＝浓度×体积×给药次数)计算最大受试药物量。
3、实验结果
给药后，小鼠大便正常呈湿润颗粒状，无死亡，活动自如，进食、饮水均正常，皮毛光洁，口、鼻、眼及肛门清洁无分泌物，连续观察两周，体重有增加，给药7天后，各组体重无明显差异，给药14天后，各组体重也无明显差异，体重见表9。解剖所见：胸腔，腹腔未见异常液体，肠管未见胀气，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见颜色、形态异常，没有出血点或其它病理改变，胃粘膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。
表9本发明急性毒性试验小鼠体重
n＝20
注：给药组与对照组比较P>0.05。
本发明提供的中药制剂给KM种小鼠灌胃未测出LD50，遂以50％浓度，按40mL/kg灌药体积，24小时内2次灌胃给药，其最大受试药物量为40g/kg，为临床人拟用量(0.1g/kg)的400倍，观察14天，小鼠无死亡，也未见其他不良发应，在此剂量下未观察到本发明的急性毒性反应。
当代医学上认定老年痴呆的病理变化多数情况为脑组织弥漫性萎缩、退行性改变、大脑萎缩、脑回变狭、脑沟加深等，从而导致老年患者出现智能障碍。本发明通过“对Aβ1-42致痴呆模型大鼠学习记忆障碍的影响”(实验1)、“对D-半乳糖致痴呆模型大鼠学习记忆的影响”(实验2)，观察到本发明提供的中药组合物明显改善痴呆模型大鼠学习记忆障碍，从而提示本发明提供的中药组合物可以明显改善老年痴呆患者的记忆能力，改善智能障碍，用于老年痴呆症的治疗。
中医学上把老年痴呆归属为“呆病”、“善忘”、“健忘”等范畴，认为其病为在脑，与心肝脾肾功能失调有关，基本病机为肾气肾精亏虚。通过“对小鼠碳粒廓清功能的影响实验”(实验3)，提示本发明提供的中药组合物具有增强免疫、补益肝肾的功效，从而发挥对老年痴呆有治疗作用。
由于老年人年高体衰，肾气肾精亏虚，气血不足，髓海空虚，脑失所养，痰阻经络于脑，气虚气滞血瘀于脑，脏腑功能失调，清窍受蒙，因虚可以致瘀，而瘀久则使虚更甚，最终造成神明失用，因此，从传统中医学角度来讲，其治疗原则应该抓住气虚血瘀，标本兼治，滋肝补肾，补气活血。通过活血化瘀实验“对小鼠耳廓微循环的影响实验”(实验4)，“对气虚小鼠耐缺氧实验的影响”(实验5)，可以提示本发明提供的中药组合物具有活血化瘀和健脾补气功效，从而发挥对老年痴呆有治疗作用。
本发明提供的中药组合物的制备方法为传统工艺，也无毒性药材，方中也无十八反十九畏，小鼠急性毒性试验也表明本发明提供的中药组合物的最大给药量为40g/kg，为临床人拟用量的400倍，在此剂量下未发现毒性反应。
综上，本发明提供的中药组合物具有补肝肾、活血化瘀、补脾益气、泻浊通窍的功效，能够用于预防和治疗老年痴呆症。
需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例相同，为了防止赘述，本发明描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (7)
1.一种治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于，其按重量份数计由以下原料制成：枸杞子10-30份、银杏叶20-40份、山萸肉10-30份、黄精10-30份、黄芪20-40份、牡丹皮5-20份、茯苓5-20份、泽泻5-20份、远志5-20份、葛根5-20份。
2.根据权利要求1所述的治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于，其按重量份数计由以下原料制成：枸杞子20份、银杏叶30份、山萸肉20份、黄精20份、黄芪30份、牡丹皮12份、茯苓12份、泽泻12份、远志12份、葛根12份。
3.根据权利要求1或2所述的治疗老年痴呆症的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物能够进一步制备成为汤剂、颗粒剂、片剂或胶囊剂。
4.根据权利要求3所述的治疗老年痴呆症的中药组合物的汤剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：称取枸杞子、银杏叶、山萸肉、黄精、黄芪、牡丹皮、茯苓、泽泻、远志、葛根，混合，加水浸没药材，煎煮两次，每次0.5-1.0h，合并两次煎煮液。
5.根据权利要求3所述的治疗老年痴呆症的中药组合物的颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子、银杏叶、山萸肉、黄精、黄芪、牡丹皮、茯苓、泽泻、远志、葛根，混合后加入相当于药材总重量6-10倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成60℃下相对密度为1.30的稠膏；
S3，将稠膏：糊精：蔗糖粉按照质量比1:1:2均匀混合，过14目筛，制成颗粒，在60℃干燥，分装。
6.根据权利要求3所述的治疗老年痴呆症的中药组合物的片剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子、银杏叶、山萸肉、黄精、黄芪、牡丹皮、茯苓、泽泻、远志、葛根，混合后加入相当于药材总重量6-10倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将S1中水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成60℃下相对密度为1.30的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃减压干燥，制得药粉；
S3，将S2中干燥好的药粉过80目药典筛；
S4，按质量分数加入10%低聚麦芽糖、1.5%羧甲基淀粉钠、10%加糊精后混合均匀，再加入质量分数85-95%的乙醇溶液进行制粒；
S5，制粒完成后在65℃下烘干，使水分含量小于5%，然后采用20目筛进行整粒；
S6，整粒完成后按质量分数加入0.5%硬脂酸镁，混合均匀后压片、装封塑。
7.根据权利要求3所述的中药组合物的胶囊剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，按照重量份数称取枸杞子、银杏叶、山萸肉、黄精、黄芪、牡丹皮、茯苓、泽泻、远志、葛根，混合后加入相当于药材总重量6-12倍量的水，浸泡0.5-1.5h，煎煮3次，每次0.5-1.5h，合并3次水煎液；
S2，将S1中水煎液过滤，取滤液于-0.09Mpa、55℃的条件下减压浓缩成60℃下相对密度为1.30的稠膏；取稠膏在-0.09Mpa、55℃减压干燥，制得药粉；
S3，将步骤S2得到的药粉粉碎，机械均化、过16-20目筛整粒，装入胶囊壳体内制成胶囊。
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|---|---|---|---|---|
| CN1333029A (zh) * | 2000-07-10 | 2002-01-30 | 张孝庆 | 一种治疗心脑血管疾病的药品 |
| CN103127382A (zh) * | 2013-02-22 | 2013-06-05 | 广西迪泰制药有限公司 | 一种中药制剂的制备方法 |
| CN105521279A (zh) * | 2014-10-24 | 2016-04-27 | 王双双 | 治髓海不足型老年痴呆的中药配方 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 六味地黄丸对痴呆模型小鼠学习记忆及细胞因子的影响;冯炯等;《山东中医杂志》;20100430;第29卷(第4期);第264-264页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111494545A (zh) | 2020-08-07 |
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