CN104225417A - 一种辅助改善记忆力功能的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种辅助改善记忆力功能的中药组合物及其制备方法，属于保健食品、医药领域。是由人参、鹿茸、葛根、远志、石菖蒲、益智仁、肉苁蓉、银杏叶、黄芪、当归、川芎、五味子、山茱萸、山楂、大豆提取物等按一定比例配制而成，可以与药学上的适用载体混合，按照特定工艺制备而成的各种制剂。本发明还包括可工业化应用的制剂制备方法。采用本发明公布的制备方法制成的医学上可接受的辅料制成的固体或液体等口服制剂。本组合物具有改善记忆力的保健功能，对记忆力减退等老年性退化性疾病有预防和辅助治疗作用。

Description

一种辅助改善记忆力功能的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种辅助改善记忆力功能的中药组合物及其制备方法，属于保健食品、医药领域。 

背景技术

记忆力减退常见于老年或中老年人群中，其中有些人甚至发展成为老年痴呆症。老年痴呆症(又称阿尔茨海默病)是发生在老年期及老年前期的一种原发性退行性脑病，指的是一种持续性高级神经功能活动障碍，即在没有意识障碍的状态下，记忆、思维、分析判断、视空间辨认、情绪等方面的障碍。老年痴呆患者的日常生活能力下降，他们不认识配偶、子女，穿衣、吃饭、大小便均不能自理；有的还有幻听幻觉，给自己和周围的人带来无尽的痛苦和烦恼。老年痴呆症继心血管病、脑血管病和癌症之后，成了老人健康的“第四大杀手”；老年痴呆症的治疗是医学上的难题，目前尚无特效治疗或逆转疾病进展的治疗药物。我国有一亿以上65岁的老年人，有500万以上老年性痴呆患者，全球每分钟产生一名老年性痴呆患者。研制开发预防和治疗改善其症状的功能保健食品具有必要性，也可满足市场对此类功能保健食品的需求；人参是公认的具有良好的抗衰老、抗疲劳、提高人体的免疫力、调节神经系统和兴奋造血系统功能，改善中老年人的微循环，提高记忆、学习能力的中药，尤其适用于心脾气血两虚症；迄今为止，有关人参的化学成分人们做了大量研究，近三十余年来，人参成分的分离、提纯和结构鉴定得到了重大的进展，迄今已知人参根中含有人参皂苷、多糖、挥发油、脂肪酸、甾醇、维生素、蛋白质、多糖等多种有效成分。但研究主要集中于人参皂苷及挥发性成分，对蛋白质的研究相对较少。人参蛋白及多肽的研究始于六十年代，主要集中于人参多肽的提取方法和活性研究。进入90年代中期，由于现代生物技术在中药领域的广泛应用，对于人参蛋白的研究才日益增多。应用二维电泳技术现已表明人参中共有人参蛋白300多种；蛋白质是构成机体免疫系统的基本物质，与免疫系统的组织发生、器官发育有着极为密切的关系。正常情况下当抗原进人机体后，刺激机体产生不同水平的免疫反应——细胞免疫和体液免疫，无论是生成各种免疫细胞还是合成抗体都需要蛋白质参与；人参水溶蛋白是人参的主要成分，人参对人生长、发育及生物功能表达等方面都起着重要的作用，人参在生理过程调节中起主要作用的物质是酶类，而酶的组成中基本上是可溶性蛋白。进入90 年代中期，现代生物技术的广泛应用，人参水溶蛋白的研究日益增多。至今为止，应用二维电泳技术已表明人参中共有人参水溶蛋白300 多种，其中部分水溶性蛋白具有明确的生物活性，据文献报道，人参中蛋白质成分具有促进小鼠海马细胞增殖的作用，从侧面反应了人参具有改善记忆力的功效，分子量为24KD和57KD 人参水溶蛋白对小鼠海马细胞具有不同程度的增殖作用，人参蛋白具有促进轴突生成增加脑细胞数量作用，可明显改善记忆功能；人参蛋白开发成为具有增强大脑功能，延缓大脑衰老，改善失眠健忘，神经衰弱和提高智力等功效的保健食品，一定能为提高人类的健康水平作出贡献；鹿茸作为传统中药已经有2000多年历史，被视为加强肾功能、延长寿命和抗衰老的补品。鹿茸的化学成分比较复杂，目前已知的有上百种之多，其主要化学成分是氨基酸、多糖、脂肪酸、胆固醇、磷脂和矿物质。为常用滋补保健中药，主要具有温肾壮阳、益精补血、强筋健骨等功效。在衰老的过程中，特别是神经系统功能老化的过程中，单胺氧化酶(MAO)和过氧化物歧化酶(SOD)的活性与衰老有密切的关系。SOD可以清除体内自由基，而MAO却可以使脑和神经系统中的单胺类递质(多巴胺等)发生氧化脱氨作用，鹿茸的抗衰老作用与其对MAO和SOD这两种酶的作用密切相关，鹿茸醇提物可使用环磷酰胺处理的小鼠体内SOD活性增加及降低丙二醛(MDA)含量，提高机体的抗氧化作用，从而延缓机体衰老。鹿茸总脂和鹿茸水提物对MAO有明显的抑制作用，可明显降低老化小鼠脑和肝组织MDA含量，增强脑和肝组织SOD活性。葛迎春等还发现鹿茸提取物对人胚肺纤维细胞中琥珀酸脱氢酶(SDH)、多糖(PSR)含量有影响，证实鹿茸提取物能显著增加年轻细胞中SDH和PSR的含量，提示其具有延缓衰老的作用；葛根为常用中药，始载于《神农本草经》，性辛凉、味甘，归脾、胃经，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻之功。中医多用于治疗外感发热头痛、项背强痛、口渴、消渴、麻疹不透、热痢、泄泻、头晕等症，西医常用于治疗高血压、心绞痛、心肌梗死、视网膜动静脉阻塞、脑供血不足、偏头痛、颈椎病、突发性耳聋等病。对新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型腹腔内注射葛根素的实验表明，葛根素可以抑制NOS的表达，减少NO的过量生成，从而减轻脑组织神经元凋亡，对缺氧缺血性脑损伤后的脑神经起到保护作用。此外，葛根素的还具有抗痴呆作用。杨东旭等的研究证明，葛根素能保护神经细胞，改善痴呆动物学习记忆的疗效；远志始载于《神农本草经》，被视为上品，具有益智安神，消痰驱肿之功效。用于心肾不交、失眠多梦、健忘惊悸、神志恍惚、咳痰不畅、疮疡肿毒、乳房肿痛等症。研究表明，远志提取物、皂苷类和糖酯类化合物均有抗痴呆和脑保护活性。 远志提取物有助于修复因脑内胆碱能系统功能障碍引起的记忆缺陷，其对短期记忆的改善有助于修复东莨菪碱诱导的记忆缺陷。远志提取物BY-11不仅能够提高老年人的认知能力，还能提高成年人的记忆力。此外BT-11还能够通过增加小鼠脑内葡萄糖的利用及神经细胞黏附因子的水平，修复压力诱导的记忆缺陷；石菖蒲有效成分β-细辛醚和丁香酚通过调控凋亡基因的表达，对神经细胞的损伤具有一定的保护作用。β-细辛醚可能通过上调或下调α－烯醇化酶、钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶、尿激酶型纤溶酶原激活物和P₅₃抑癌基因等蛋白质的表达量，参与促进大鼠海马受损神经元保护作用 。β－细辛醚对三氯化铝引起的痴呆小鼠脑皮质神经元凋亡具有保护作用，其机制可能减轻脑组织神经元痴呆损伤和抑制神经元凋亡；抑制受损神经元细胞内钙离子浓度增高有关。β－细辛醚可抑制谷氨酸诱导的脑皮层神经元凋亡，其作用机制可能与稳定细胞线粒体膜电位有关；对谷氨酸所致PC12细胞和的皮层神经细胞损伤具有保护作用，其作用机制可能与钙拮抗作用有关；能改善脑水肿，提高小鼠血脑通透性和耐缺氧能力，明显抑制大鼠脑皮质和海马神经细胞凋亡，抑制Bax基因表达，增强Bcl－xl 基因表达，对大鼠缺血再灌注脑损伤具保护作用；益智仁是中医临床常用药材。益智仁性温，味辛，入脾胃经，有温脾止泻，摄唾涎，暖肾，固精缩尿的功效，用于脾寒泻泄，腹中冷痛，口多唾涎，肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊。稽志红等采用东蓑若碱造成大鼠记忆获得障碍模型，通过行为实验观察益智仁水提取物对大鼠学习记忆的影响，并以乙酞胆碱酷酶活力和海马脑蛋白含量为指标，进一步探讨了益智仁水提取物对改善学习记忆障碍的作用。实验结果表明益智仁水提取物能明显改善东蓑若碱导致的大鼠记忆获得障碍，并能有效抑制海马乙酞胆碱酯酶的活性，提高脑蛋白含量，证实益智仁水提取物能提高实验动物学习记忆能力，具有较好的益智作用。益智仁水提取物能显著改善D-半乳糖诱导的小鼠学习记忆能力减退，并能有效地提高海马SOD活力和海马脑蛋白含量，这说明益智仁水提取物具有抗脑老化作用。本实验首次发现益智仁水提取物对脑老化动物学习记忆能力的响，提示益智仁的抗脑老化作用可能与提高海马SOD活力，加速清除自由基，提高脑蛋白含量有关；肉苁蓉为著名的补益中药，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效，传统用于肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘，为历代使用频度最高的补肾阳药物。现代药理研究表明，肉苁蓉具有提高性功能、抗衰老、提高学习记忆能力、抗老年痴呆症、通便等多方面的作用，广泛用于中医临床处方、中成药和保健产品。近年来，屠鹏飞研究组发现肉苁蓉属植物所含的苯乙醇苷类成分具有明显的抗老年痴呆症、帕金森病和心肌缺血等作用，并阐明了其作用机制，为肉苁蓉临床新的应用和开发利用提供依据，引起了国际上的普遍关注。对于肉苁蓉药效作用的有效成分也不断得到阐明，其提高性功能和学习记忆能力、抗衰老、疲劳、老年痴呆症、帕金森病和心肌缺血、保肝等药效的有效成分为苯乙醇苷类；银杏叶味甘、苦、涩，性平。具有活血化瘀、通经止痛、敛肺平喘、化浊降脂等功效。用于瘀血阻络、胸痹心痛、中风偏瘫、肺虚咳喘和高脂血症。现代科学证明，银杏叶中含有200多种药用成分，其中黄酮类活性成分有46种，微量元素25种，17种氨基酸和生物碱等。以黄酮为主的有效成分，有保护毛细血管通透性、扩张冠状动脉、恢复动脉血管循环、解除心平滑肌痉挛等特别功效。银杏叶中的萜类化合物有：银杏萜内酯A、B、C、M和银杏内酯J。其有抗血小板活化因子作用，可以改善血液循环。有文献证明[8]银杏叶中部分黄酮类和6种萜类内酯化合物，是全球生物体内唯独银杏内特有的，是数亿年前特殊自然生态环境下的产物，这些成分具有抗氧化、清除自由基作用，能提高人体自身免疫力，防止老年斑、护肤、美容、光泽皮肤，在保护机体不受自由基上酶的抗氧化损伤方面具有十分重要的作用；黄芪含皂苷类、多糖类、黄酮类、氨基酸、微量元素、胆碱、叶酸等多种活性成分，其主要活性成分能干预细胞凋亡，在抗肿瘤、改善心血管系统功能及减少神经元损伤等方面发挥着重要的作用；归性柔而润， 补血调经，活血止痛、祛瘀消肿， 润燥滑肠；川芎辛温香窜， 行气活血， 祛风止痛。二药伍用， 互制其短而展其长， 气血兼顾， 养血调经、行气活血、散瘀止痛之力增强， 为临床常用补血活血药对；五味子味酸性温，《神农本草经》也有记载，有宁心安神、生津敛汗、益气滋肾等功效。现代研究发现五味子的多糖成分对于抗衰老有较好的作用。小鼠实验表明，其能使已经萎缩的胸腺和脾脏增大变厚，显著增多胸腺皮质细胞和脾淋巴细胞的数量，增大脾小结，这就表示多糖成分能有效促进神经细胞的发育及增强抗衰老的机能；山茱萸味酸、涩，微温，归肝、肾经。其功效为补益肝肾，涩精固脱。临床用于内热消渴，眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿、尿频，崩漏带下，大汗虚脱等，也是中医临床常用的抗衰老药物之一。给小鼠饮服山茱萸饮片6 ml/kg，连续60 d，硼砂法测定血红蛋白含量，以负重游泳法测定耐力，迷宫法测定记忆力，结果表明山茱萸能明显提高血红蛋白含量，明显增强小鼠体力和抗疲劳能力，提高记忆力。提示山茱萸能增强动物对外界适应能力，提高体力和脑力。服用山茱萸水提物的老年组小鼠与对照组相比，NK细胞活性提高30.6%，IL-2活性增强了14.9%，认为山茱萸的这一抗衰老作用可能与其影响了相关基因表达有关；山楂中的黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和调节免疫、防治血管硬化、降血糖、保肝等功能；大豆提取物：大豆的主要提取物为大豆异黄酮类，具有对血管的防护作用、类似女性雌激素作用以及抗激素作用、抑菌活性和预防骨质疏松症等。可近年来对大豆异黄酮生理功能的另一个研究热点是其在神经保护和抗神经退行性疾病方面的作用。例如 White 等研究了中年人豆腐摄入与脑老化及智力损伤的关系，证明长期食用豆腐是一个保护老年人智力，减轻脑萎缩的独立因素。 

发明内容

本发明的目的就是提供一种具有辅助改善记忆力功能的中药组合物。 

本发明的另外一个目的是提供了该制剂的制备方法。 

本发明是通过以下几种技术方案实现的: 

技术方案一包括以下步骤：

（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，合并，滤过；滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.00～1.20（50～90℃）的清膏，放冷；取上述浓缩液，加乙醇至含醇量达50～80%，静置，滤过；滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度约1.10～1.40（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉 。

（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:15称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液，40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用。 

（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

技术方案二包括以下步骤： 

（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，加水浸泡，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，与上述水溶液合并，膜过滤；将滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉。

（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:12称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液（1:1），40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用。 

（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

技术方案三包括以下步骤： 

（1）提取：按比例称取药材，取除大豆提取物外的药材，加药材重量4倍-12倍的40%-90%乙醇，加热回流提取1-3次，合并提取液，膜过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉Ⅲ。

（2）将浸膏粉Ⅲ、大豆提取物混合均匀，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

具体实施方式：

以下通过实验例来说明本发明的有益效果。

用本发明具体实施例的片剂进行实验。 

本发明功能学动物实验结果：

1 急性毒性试验 

通过测定本发明制剂急性毒性确定半数致死量(LD₅₀)或最大给药量，为临床用药提供安全性依据。

1.1 材料   

1.1.1 动物 

昆明种小鼠，雌雄各半，18-22g，由长春高新医学实验动物中心提供，合格证号:12-0511。每盒 10 只，雌雄分盒，购进后适应性饲养观察一天。

1.1.2 实验药品 

采用实施案例1中的片剂，临用前研粉，用蒸馏水配制成最大浓度的混悬液（以注射器不发生堵塞，不影响正常灌胃为准），即可供灌胃的最大浓度为0.6g/ml（相当于人日服用量的180倍）。

1.1.3 仪器 

T-1000电子天平(常熟双杰测试仪器厂)；1ml灌胃器；BD-125D 型电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)。

1.2 方法与结果 

1.2.1 预试验测定 

取禁食不禁水12h小鼠10 只，雌雄各半，以小鼠灌胃可承受的最大容积0.4ml/10g和最大浓度0.6g/ml，灌胃给予急性毒性试验用药液。观察14d，8只小鼠均未出现中毒症状及死亡情况，初步预试验提示该制剂临床用药安全范围较大，无法测定 LD₅₀，故进行最大给药量测定。

1.2.2 小鼠最大给药量测定 

取健康昆明小鼠80只，雌雄各半，随机分4组，每组10只，分别为空白对照组、给药组50、100、150g/Kg（分别相当于临床用药量的60、120、180倍剂量），小鼠给药前禁食不禁水12h，给药组小鼠以最大容积0.4ml/10g。空白对照组给予等剂量的生理盐水。随后观察小鼠的外观、行为、活动、精神活动、食欲、大小便及其颜色、皮毛、呼吸、鼻、眼、口腔有无异常分泌物，体重变化以及死亡情况。

给药 14d后，于禁食12h 后脱颈处死小鼠，剖开腹腔检查主要脏器外观，肉眼观察小鼠各内脏变化情况。剥离心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、胸腺系数，电子天平精密称重，计算脏器系数，进行组间统计学比较。 

1.2.3 结果 

    连续观察14d，小鼠活动自如，无惊厥、运动失调、流涎、流泪、流鼻涕、呼吸困难、腹泻、便秘、肠胀气等现象发生。动物皮毛光泽，给药后14d内动物无一死亡。

如表1所示，给药前小鼠组间体重比较无明显差异(P>0.05)，具有可比性，给药后，给药组小鼠体重与空白对照组比较，均未表现出明显差异(P>0.05) 。 

肉眼观察解剖后脏器，结果未发现肝脏、肾脏、脾脏等脏器组织部位有肿胀、萎缩、出血、颜色异常、粘连、硬化等异常改变。给药组与对照组脏器系数无明显的统计学差异(P>0.05)，如表2 所示。 

 脏器系数=(脏器重量÷体重)×100% 

表1 　雌性小鼠体重的影响( x±s， n=10)

表2 　雄性小鼠体重的影响( x±s， n=10)

表3   雌性小鼠脏器系数(X±S，n=40)

组别

心脏系数

肝脏系数

脾脏系数

肺脏系数

肾脏系数

胸腺系数

对照组

5.87± 1.45

55.7± 4.35

5.68± 1.19

9.04± 1.77

11.8±0.98

4.11±1.81

给药组（60倍）

5.47± 0.43

58.3± 3.46

7.66± 1.68

9.99± 2.07

13.3± 3.37

4.04± 0.71

给药组（120倍）

5.63±0.68

54.7± 7.23

7.45± 1.45

9.76± 1.48

13.8± 1.10

4.62±2.28

给药组（180倍）

5.53± 0.90

56.2± 5.07

7.49± 2.94

9.86± 1.14

13.2± 1.85

4.55±1.19

表4   雄性小鼠脏器系数(X±S，n=40)

组别

心脏系数

肝脏系数

脾脏系数

肺脏系数

肾脏系数

胸腺系数

对照组

5.95± 1.05

62.1± 4.03

8.03± 2.15

8.91± 1.19

14.2±1.91

3.92±0.54

给药组（60倍）

6.19± 0.87

60.5± 5.70

7.10± 1.53

9.32±2.55

13.8± 1.44

4.15±1.34

给药组（120倍）

6.45±0.92

62.1± 4.03

7.47± 2.28

9.21± 1.19

14.4± 1.91

4.55±1.01

给药组（180倍）

6.25± 0.85

63.1 ± 4.03

8.03± 2.15

9.71± 2.12

13.9±2.11

1.36±0.56

1.3 结论

急性毒性试验结果提示，本制剂对小鼠体重无明显的影响，对重要脏器无明显病理性损伤。本发明物对小鼠的最大耐受量不小于150g/kg，表明本品安全性好，毒性很低。此结果为后面实验使用剂量问题排除了药物毒性影响的可能性。

药效学实验

2.1材料与仪器

2.1.1动物:  Wistar大鼠、昆明小鼠均由长春高新医学动物研究中心提供。合格证号：SCXK（吉）20120511。

药品与试剂：人参蛋白片：长春中医学院附属医院实验中心提供，规格：0.5g/片。脑安胶囊：吉林省辽源亚东药业股份有限公司，规格：0.4g/粒。超氧化物歧化酶（SOD）和ATP酶测试药盒由南京建成生物工程研究所提供。樟柳碱。0.5%戊巴比妥钠，磷酸盐缓冲液生理盐水；肝素， TXB2、6-K-PGF1a放射免疫分析药盒，均购自北京普尔伟业生物科技有限公司，纯水(自制)。 

仪器：八道生理记录仪RM-6000：日本光电产品；电磁血液流量计 HFV—3200：日本光电产品；脑立体定位仪：江湾二型，上海第四军医大学产品；微量电子天平：MP—120—1，上海第二天秤仪器厂；尼龙单纤维；STT-2 小鼠跳台仪：北京药研；Lambda25紫外—可见光分光度计：美国PE公司产品。FS-1 高速电动匀浆机：华普达仪器有限公司；低温离心机：Lettich universal 32R；WR-1 恒温水浴振荡器：上海思尔达科学仪器有限公司 

2.2方法与结果

2.2.1改善记忆力获得性障碍的实验

本实验采用跳台法考察小鼠在口服药物后，对樟柳碱引起的记忆获得性障碍能否有所改善。在跳台实验中，当动物在一次训练中受到电击时，可以跳上跳台避免电击，此时很容易获得记忆。模型组动物由于注射樟柳碱后而产生记忆力获得性障碍，在一定时间内记忆力下降，表现为一定时间内错误次数增多 。 

分组造模给药

2.2.1.1.1分组

实验用小鼠随机分为6组，每组 10 只。组别与剂量分别为：模型组：蒸馏水10ml·kg^-1体重；阳性对照组（脑安胶囊）：2g·kg^-1体重；人参蛋白片高剂量组：1.0g·kg^-1体重；人参蛋白片中剂量组：0.7g·kg^-1体重；人参蛋白片低剂量组：0.4g·kg^-1体重；另取10只作为对照组，给予同体积蒸馏水。

造模给药

樟柳碱可导致小鼠记忆获得性障碍。给药14d，口服给药，对照组和模型组给予等量生理盐水。于末次给药后 20min，模型组、阳性对照组、给药组小鼠于另一侧腹腔注射樟柳碱 10mg.kg-1。给樟柳碱 10min 开始训练，24h后测试记忆成绩。

小鼠跳台法

实验装置为被动回避反射箱。训练时，同时将 5 只小鼠分别放于反射箱内，先适应 3min，然后通电。动物受到电击时，其正常反应是跳回跳台以躲避电击，小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应。训练 5min 并记录 3min 内错误次数。24h 后重新测试，观察其记忆情况。先把小鼠放到跳台上。记录小鼠 3min 内的错误次数。

实验结果

人参蛋白片中、高剂量组与模型组樟柳碱所导致的记忆获得性障碍相比较具有明显的改善作用(P<0.001)，小鼠触电次数明显减少。见表5。

表5 对樟柳碱引起的小鼠记忆获得障碍的改善作用 

(X±S，n=10)

组别	训练期（均数±SD）	测试期（均数±SD）
			对照组	3.4± 1.76*	1.4± 0.7**
模型组	5.8±1.94	4.5±1.27
			阳性对照组	2.9±2.01**	2.3±1.18**
给药组（低剂量）	4.4± 1.88	3.0± 1.57
			给药组（中剂量）	3.0± 2.03**	2.5± 1.23**
给药组（高剂量）	2.7± 2.06**	2.3± 1.29**

2.2.2对脑缺血再灌注损伤的保护作用

2.2.2.1分组给药    

筛选符合实验要求的大鼠进行分组，分别为假手术组、模型组、阳性对照组和给药组。给药时间为 21天。给药量同2.2.1.1。   

2.2.2.2 实验模型     

MCA-IR 模型采用线栓法。大鼠用 0.5%戊巴比妥钠(38mg.kg-1 体重)麻醉后仰卧固定，取颈正中切口，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)。结扎并剪断 ECA，剪口将尼线栓插入，并稍结扎以防溢出。将线栓插入，经颈内动脉到大脑前动脉起始处，阻断自颈内动脉和大脑前动脉流向大脑总动脉的血流，插入前栓子涂布肝素、插入深度约为自颈总动脉分叉处起约 18—20mm。假手术组插入栓子 15mm，防止因栓子过长导致闭塞大脑总动脉起始位置，阻断 MCA 供血，其它步骤同手术组。灌注结束后，动物断头处死， 收集血液制备血清，按TXB2 和 6-K-PGF1a  放免药盒说明书测定。取脑组织并沿脑正中沟切开。其中一侧用于测定脑组织ATP活力，即取脑组织制成2%的组织匀浆液，用分光光度法测定脑组织匀浆液ATP酶（Na-ATP酶）的活力和SOD活力；另一侧脑组织称湿重后，将其放入烤箱（100℃）内2小时，取出，称干重。计算脑含水量{脑含水量=（脑组织湿重-脑组织干重）/体重×100%}。

统计学方法：各组数据经计算机处理，以均数加减标准差（x±s）表示，组间差异的显著性检验用t检验。 

实验结果

  表6  人参蛋白片对脑缺血大鼠脑组织ATP酶活力的影响（x±s）

组别	例数	Na-ATP	Ca++-ATP
				假手术对照组	10	20.733±5.263***	24.513±5.737***
模型对照组	10	13.769±2.943	17.122±2.816
				阳性对照组	10	17.362±2.335**	20.776±2.855**
人参蛋白片（高）	10	18.370±1.907***	22.187±2.248**
				人参蛋白片（中）	10	17.616±2.985**	20.202±1.808**
人参蛋白片（低）	10	16.074±2.930	18.954±1.591

与模型组比较：**P＜0.01，***P＜0.001。

人参蛋白片高、中剂量组中大鼠脑组织Na-ATP酶和Ca⁺⁺-ATP活力明显高于模型对照组（P＜0.05，0.01，0.001）。提示人参蛋白片可提高缺血脑组织的ATP酶活力，从而改善缺血脑组织的能量代谢，在减轻脑缺血对脑组织的损伤方面有一定保护意义。 

表7  人参蛋白片对脑缺血大鼠脑组织SOD酶活力的影响（x±s） 

组别	例数	SOD
			假手术对照组	10	118.497±3.736***
模型对照组	10	97.303±5.546
			阳性对照组	10	106.840±5.909**
人参蛋白片（高）	10	109.178±5.791***
			人参蛋白片（中）	10	106.013±7.258**
人参蛋白片（低）	10	102.602±5.340

与模型组比较：**P＜0.01，***P＜0.001。

人参蛋白片高、中剂量组中大鼠脑组织SOD酶活力明显高于模型对照组，提示人参蛋白片可提高缺血脑组织的SOD酶活力，提高清除氧自由基的能力，对缺血所致的脑组织损伤起一定的保护作用。 

 

3讨论

缺血再灌流后脑组织含水量增加，会引起脑水肿。本实验用药后能够明显改善脑组织中的含水量，从而说明其对脑组织损伤有保护作用。 

TXB2 和 6-K-PGF1A 是血栓烷 A2(TXA2)和前列环素(PGI2)两种不稳定的生物活性物质转变而来的较稳定的产物。在 TXA2生成过程中，会生成大量的自由基，自由基又会进一步激活磷脂酶 A2，同时破坏细胞膜系统，形成恶性循环，实验结果显示用药后脑组织中 TXB2的含量较模型组均有显著的减少(P<0.001)。PGI2 和 TXA2 在体内处于一种拮抗的作用，如果二者比例失衡就能推测出脑组织内的钙离子通道活跃，会对脑组织造成损伤。 

具体实施方式

结合实施例对本发明做进一步说明如下： 

实施例1

本发明按下述重量配比称取药物组份：

人参50g、鹿茸10g、葛根100g、远志50g、石菖蒲50g、益智仁30g、肉苁蓉60g、银杏叶100g、黄芪200g、当归100g、川芎100g、五味子50g、山茱萸100g、山楂90g、大豆提取物100mg。

    其制备工艺为：（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，合并，滤过；滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.00～1.20（50～90℃）的清膏，放冷；取上述浓缩液，加乙醇至含醇量达50～80%，静置，滤过；滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度约1.10～1.40（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉。 

（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:15称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液，40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用。 

（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

实施例2

本发明按下述重量配比称取药物组份：人参50g、鹿茸10g、葛根100g、远志50g、石菖蒲50g、益智仁30g、肉苁蓉60g、银杏叶100g、黄芪200g、当归100g、川芎100g、五味子50g、山茱萸100g、山楂90g、大豆提取物100mg。

（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，加水浸泡，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，与上述水溶液合并，膜过滤；将滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉。 

（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:12称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液（1:1），40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用。 

（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

实施例3

    人参50g、鹿茸10g、葛根100g、远志50g、石菖蒲50g、益智仁30g、肉苁蓉60g、银杏叶100g、黄芪200g、当归100g、川芎100g、五味子50g、山茱萸100g、山楂90g、大豆提取物100mg。

（1）提取：按比例称取药材，取除大豆提取物外的药材，加药材重量4倍-12倍的40%-90%乙醇，加热回流提取1-3次，合并提取液，膜过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉Ⅲ。 

（2）将浸膏粉Ⅲ、大豆提取物混合均匀，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。 

实施例4

   不同比例的分别实施1、2、3。

  

Claims (9)

1.一种辅助改善记忆力的中药组合物，它属于中药技术领域；其特征在于其是由主要成分为人参、鹿茸、葛根、远志、石菖蒲、益智仁、肉苁蓉、银杏叶、黄芪、当归、川芎、五味子、山茱萸、山楂、大豆提取物等按一定比例配制而成，通过特定工艺与药学上适用载体混合制备成的片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、合剂等其他口服制剂。

2.根据权利要求1所述的辅助改善记忆力的中药组合物的制备方法，其特征在于所属组合物包括下述重量份的原料：人参30-90份、鹿茸10-20份、葛根100-150份、远志30-100份、石菖蒲30-100份、益智仁30-100份、肉苁蓉60-100份、银杏叶90-120份、黄芪90-300份、当归60-120份、川芎30-100份、五味子20-60份、山茱萸60-120份、山楂90-120份、大豆提取物50-300mg。

3.根据权利要求 1-2 中任何一项所述的辅助改善记忆力组合物的制备方法，其特征在于按照上述配比称取原料；取银杏叶、石菖蒲、当归和川芎提取挥发油，挥发油包合备用；取除大豆提取物外的其它原料，与上述提取挥发油后的药渣合并，加热提取，分取并合并提取液；取上述提取液，减压浓缩，得浓缩液；取上述浓缩液，加乙醇进行沉淀，分取上清液，减压回收，得浓缩液，将挥发油包合物与浓缩液混合得到有效成分。

4.根据权利要求1-2  中任何一项所述的辅助改善记忆力组合物的制备方法，其特征在于按照上述配比称取原料；取银杏叶、石菖蒲、当归和川芎提取挥发油，挥发油包合备用；取除大豆提取物外的其它原料，加水浸泡，与上述提取挥发油后的药渣合并，加热提取，分取并合并提取液；取上述提取液，膜过滤，合并滤液，浓缩；将挥发油包合物与浓缩液混合得到有效成分。

5.根据权利要求1-2  中任何一项所述的辅助改善记忆力组合物的制备方法，其特征在于按照上述配比称取原料；取除大豆提取物外的40%-90%乙醇，加热回流提取，分取并合并提取液，膜过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩，得到有效成分。

6.根据权利3所述辅助改善记忆力组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，合并，滤过；滤液与上述水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.00～1.20（50～90℃）的清膏，放冷；取上述浓缩液，加乙醇至含醇量达50～80%，静置，滤过；滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度约1.10～1.40（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉 ；（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:15称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液，40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用；（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。

7.根据权利4所述辅助改善记忆力组合物的另一种制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：将银杏叶、石菖蒲、当归、川芎药材加水保持微沸4～10h，水蒸气蒸馏法提取混合挥发油，将挥发油、药渣及银杏叶、石菖蒲、当归、川芎水溶液备用；取其它原料，加水浸泡，与提挥发油后的药渣合并，煎煮提取1～3次，分别分取提取液，与上述水溶液合并，膜过滤；将滤液减压浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉；（2）挥发油包合：按照挥发油（ml）:环糊精（g）比例为1:4～1:12称取适量的β-环糊精，加水制成饱和水溶液后，加入混合挥发油的乙醇溶液（1:1），40～60℃温度下水浴搅拌1～6h，包合完成后静置、滤过，所得包合物干燥后粉碎成细粉为挥发油包合物备用；（3）将浸膏粉、挥发油的包合物、大豆提取物混合，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。

8.根据权利5所述辅助改善记忆力组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：按比例称取药材，取除大豆提取物外的药材，加药材重量4倍-12倍的40%-90%乙醇，加热回流提取1-3次，合并提取液，膜过滤，合并滤液，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.10-1.45（50～90℃）的清膏，减压干燥，粉碎，得浸膏粉Ⅲ；（2）将浸膏粉Ⅲ、大豆提取物混合均匀，加入适当辅料，按常规工艺制成颗粒剂、片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、滴丸剂、糖浆剂、合剂等口服制剂。

9.根据权利要求2-8制成的组合物制剂具有辅助改善记忆力的保健功能，对记忆力减退等老年性退化性疾病有预防和辅助治疗作用。