CN112451588A - 一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物 - Google Patents

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Abstract

一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，包括5‑FU和升白汤。本发明使用升白汤和5‑FU联用，该药物组合物中的升白汤成分不仅本身具有抗结肠癌功效，而且能够较好的协同5‑FU对结肠癌具有抑制作用，且本发明采用中药药物，毒副作用低，避免对病患造成二次影响。

Description

一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物
技术领域
本发明属于结肠癌治疗领域，具体地说是一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物。
背景技术
结肠癌是常见的消化道肿瘤之一，流行病学研究表明，因结肠癌和/或结肠癌相关并发症导致的死亡约占所有肿瘤致死人数的10％左右。结肠癌是一种复杂的异质性多阶段肿瘤，其特征是肠上皮分化，增殖和凋亡失调。结肠癌主要涉及结肠组织恶性肿瘤，其每年在全球范围内的发病率呈逐年增加及年轻化的趋势，约60-70％结肠癌患者分布广泛，该发病特点暗示着该疾病进展或预防所涉及的风险因素的重要性，包括生活方式，饮食，吸烟和定期运动等。目前以手术切除为主的多学科综合性治疗是结肠癌的重要治疗原则，包括手术治疗、化学治疗、免疫治疗、放射治疗和传统中医药治疗等，但结肠癌手术易复发转移，其年生存率低于10％，此外超过50％的结肠癌患者往往错过最佳诊治时间，就诊时已到Ⅲ～Ⅳ期，因此，大部分中晚期和术后患者均需接受化疗。然而，结肠癌对多数化疗药物不敏感，经常使用也会产生不同程度的耐药性，大剂量使用又会导致患者出现较严重的毒副作用，因此，探索更有效的治疗策略以及新的药物组合物的应用，对结肠癌的治疗具有突破性意义。
氟尿嘧啶(5-FU)是临床上治疗结肠癌的主要化疗药之一，其在细胞内转变为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸，而抑制脱氧胸苷酸合成酶，阻止脱氧尿苷酸甲基化转变为脱氧胸苷酸，从而干扰肿瘤细胞DNA的合成，引起G1期和S早期阻滞，导致肿瘤细胞死亡，然而5-FU用于肿瘤治疗时也会产生较强的毒副作用，如严重骨髓抑制，表现为白细胞和血小板计数减少或贫血，也有患者会引起致死性腹泻等。越来越多研究表明中药是用于癌症预防和治疗有希望的药物来源，因为它们可以攻击许多分子靶标，而且中药比合成药物副作用更少。而且，有很多研究聚焦于中西药联合应用于肿瘤的治疗，中国专利公开了二氢小檗碱协同苏尼替尼治疗肺癌的研究【申请号201510889592.1】，中国专利也公开了桂皮醛联合达卡巴嗪抗黑色素瘤药物组合物的研究【申请号201910700578.0】。升白汤是中医根据症状开具的方剂，常用于缓解恶性肿瘤放化疗后所致的白细胞减少症并提高机体免疫，我们之前研究表明升白汤能够协同环磷酰胺对小鼠黑色素瘤具有治疗作用【申请号201911049529.1】。目前，尚未有应用升白汤和5-FU组成药物组合物治疗结肠癌的相关报道。
发明内容
本发明提供一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，用以解决现有技术中的缺陷。
本发明通过以下技术方案予以实现：
一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，包括5-FU和升白汤。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的5-FU药物采用腹腔注射的方式进行给药。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的5-FU药物剂量的给药量为20mg/kg/天。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤采用口服的方式进行给药。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤给药量以生药重量计，所述的升白汤给药量为生药重量210g/人/天。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤包括以下重量份数的药物：
黄芪16-20份，人参12-15份，熟地10-15份，当归10-15份，白芍10-12份，川芎10-15份。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤包括以下重量份数的药物：
黄芪18份，人参12份，熟地12份，当归12份，白芍12份，川芎10份。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤的制备方法包括如下步骤：
步骤一：按照配比称量各原料中药；
步骤二：将各原料中药放入煎煮器中，加入中药原料总质量的12-20倍质量体积比的水浸泡30min，煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤三：将滤渣继续加入中药原料总质量的9-15倍质量体积比的水继续煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤四：将步骤二和步骤三所得滤液混合后减压浓缩得升白汤药液。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的升白汤药液的浓度为1.1g/mL或2.2g/mL或3.3g/mL。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，本抗结肠癌药物组合物可以与其他药用辅剂制备成颗粒剂、片剂等现有已知药物制剂的形式给药。
如上所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，所述的结肠癌为MC38细胞株。
本发明的优点是：本发明使用升白汤和5-FU联用，该药物组合物中的升白汤成分不仅本身具有抗结肠癌功效，而且能够较好的协同5-FU对结肠癌具有抑制作用，且本发明采用中药药物，毒副作用低，避免对病患造成二次影响。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1.各组小鼠肿瘤生长情况及抑瘤率结果(n＝10，
Figure BDA0002809294880000045
)。a.各种小鼠肿瘤剥离后其大小情况；b.各组小鼠肿瘤剥离后重量结果；c.各给药组小鼠抑瘤率结果；d.各组小鼠给药期间肿瘤体积变化结果；。注：与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与5-FU组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。
图2.各组小鼠给药期间血常规检测结果(n＝10，
Figure BDA0002809294880000041
)。A.各组小鼠给药期间白细胞数量变化结果图；B.各组小鼠给药期间红细胞数量变化结果图；C.各组小鼠给药期间血红蛋白水平变化结果图；D.各组小鼠给药期间血小板计数变化结果图。注：与正常对照组相比，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01；与模型组相比，#P＜0.05，##P＜0.01；与5-FU组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。
图3.各组小鼠胸腺和脾脏指数计算结果(n＝10，
Figure BDA0002809294880000042
)。A.各组小鼠胸腺指数结果；B.各组小鼠脾脏指数结果。注：与正常对照组相比，ΔΔP＜0.01；与5-FU组相比，＊＊P＜0.01。
图4.各组小鼠血清中SOD和MDA利用ELISA法检测结果(n＝10，
Figure BDA0002809294880000043
)。A.各组小鼠血清SOD水平结果；B.各组小鼠血清MDA水平结果。注：与正常对照组相比，ΔΔP＜0.01；与模型组相比，##P＜0.01；与5-FU组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。
图5.各组小鼠炎性因子血清学ELISA检测结果(n＝10，
Figure BDA0002809294880000044
)。A.IL-6因子血清学ELISA检测结果；B.IL-1β因子血清学ELISA检测结果；C.TNF-α因子血清学ELISA检测结果。注：与正常对照组相比，与正常对照组相比，ΔΔP＜0.01；与模型组相比，##P＜0.01；与5-FU组相比，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。
图6.肿瘤组织HE染色病理学结果(200X光学显微镜下观察)。A.模型组肿瘤组织HE染色病理学结果；B.5-FU组肿瘤组织HE染色病理学结果；C.5-FU联合升白汤低剂量组肿瘤组织HE染色病理学结果；D.5-FU联合升白汤中剂量组肿瘤组织HE染色病理学结果；E.5-FU联合升白汤高剂量组肿瘤组织HE染色病理学结果。
图7.肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果(200X光学显微镜下观察)。A.模型组肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果；B.5-FU组肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果；C.5-FU联合升白汤低剂量组肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果；D.5-FU联合升白汤中剂量组肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果；E.5-FU联合升白汤高剂量组肿瘤组织TUNEL染色细胞凋亡结果。
图8.脾脏HE染色形态学变化结果(200X光学显微镜下观察)。A.模型组脾脏HE染色形态学结果；B.5-FU组脾脏HE染色形态学结果；C.5-FU联合升白汤低剂量组脾脏HE染色形态学结果；D.5-FU联合升白汤中剂量组脾脏HE染色形态学结果；E.5-FU联合升白汤高剂量组脾脏HE染色形态学结果。
图9.胸腺HE染色形态学变化结果(200X光学显微镜下观察)。A.模型组胸腺HE染色形态学结果；B.5-FU组胸腺HE染色形态学结果；C.5-FU联合升白汤低剂量组胸腺HE染色形态学结果；D.5-FU联合升白汤中剂量组胸腺HE染色形态学结果；E.5-FU联合升白汤高剂量组胸腺HE染色形态学结果。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
中药汤剂的制备
中药汤剂原料药组成：黄芪18克，人参12克，熟地12克，当归12克，白芍12克，川芎10克，共76g生药(康美药业股份有限公司)。
中药汤剂煎煮法制备：
步骤一：向上述76g生药中加入1200mL水浸泡30min，继续煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤二：将各原料中药放入煎煮器中，加入中药原料总质量的12-20倍质量体积比的水浸泡30min，煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤三：将滤渣继续加入中药原料总质量的9-15倍质量体积比的水继续煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤四：将步骤二和步骤三所得滤液混合后减压浓缩得升白汤药液。
小鼠与人药物剂量换算：以中药汤剂原料药人临床用量210g/人/天，按照体表面积换算为小鼠的等效剂量为10.66g/kg，即0.213g/20g小鼠。每只小鼠灌胃量0.2mL，折算后生药的浓度是1.1g/mL。设计中药汤剂低剂量组：10.66g/kg(生药浓度1.1g/mL)，中药汤剂中剂量组：21.32g/kg(生药浓度2.2g/mL)，中药汤剂高剂量组：31.98g/kg(生药浓度3.3g/mL)。
1实验材料
1.1实验试剂
升白汤是实验室自制而成；5-FU，购自上海旭东海普药业有限公司；RPMI1640细胞培养液、胎牛血清(FBS)、0.25％胰酶，购自美国Gibco公司；SOD、MDA、大鼠白介素-6(IL-6)、大鼠白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)五种ELISA试剂盒，购自上海蓝基生物科技有限公司；甲醛、乙醇、二甲苯，购自天津市凯通化学试剂有限公司。
1.2实验仪器
酶标仪，BioTek，SYNERGY H1；CO2培养箱，上海新苗医疗器械制造有限公司；电子天平，上海佑科仪器仪表有限公司；生物显微镜，上海佑科仪器仪表有限公司；超净工作台，苏州净化设备有限公司；台式低速离心机，湖南赫西仪器装备有限公司；全自动组织脱水仪，天津爱华医疗器械有限公司；包埋仪，天津爱华医疗器械有限公司；切片机，德国SLEE；光学显微镜，上海佑科仪器仪表有限公司。
1.3细胞株
小鼠结肠癌细胞MC38，购自中国科学院上海细胞库，实验室液氮中保存。
1.4实验动物
BALB/c小鼠，雄性，6-8周龄，体重18-22g，购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，生产许可证号SCXK(鲁)20140007。
所有动物到达后，适应期至少一周，按要求进行检疫观察，检疫期间,观察动物的活动、饮食等表现，动物在试验前需检查合格，检疫合格的动物方可用于试验。动物检疫合格后，给每只动物指定一个单一的动物号，在动物被毛上用颜色加以标记。检疫观察期笼卡上标明专题编号、动物号、笼号、性别、动物接收日期和专题负责人；分组后，笼卡上标明专题编号、动物号、笼号、性别、组别、试验起止日期和专题负责人。
实验动物饲养管理的环境条件：室温20～26℃，日温差≤4℃，相对湿度40～70％，明暗交替时间为12/12h。动物饲养于标准小鼠笼中，每笼5只。
检疫期及实验期，自由摄食、饮水。饲料为SPF级大小鼠生长繁育饲料，由江苏省协同医药生物工程有限公司生产(批号：20181028)。饮用水是经过高温消毒的城市自来水。
2动物模型构建
2.1MC38结肠癌细胞培养
细胞复苏：从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴锅中，反复摇动使其融化，用75％消毒乙醇消毒冻存管表面，将其转移至超净工作台中。将冻存管中的细胞悬液转移至无菌离心管中，加入RPMI1640细胞培养液，1000rpm离心5min，弃上清。用10％FBS-RPMI1640细胞培养液重悬细胞，反复吹打后，转移至细胞培养瓶中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。
细胞传代：细胞生长至对数生长期时，半悬浮生长的MC38细胞达到80-90％，1000rpm离心5min，弃上清，加入含10％FBS-RPMI1640细胞培养液重悬细胞，吹打均匀，按1：3的比例稀释细胞悬液，分装于3个细胞培养瓶，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。
细胞收集：1000rpm离心5min，弃上清，加入RPMI1640细胞培养液吹打均匀，细胞计数器计数，调整细胞浓度至2×107个/mL。
2.2动物分组及模型建立
小鼠常规饲养一周后根据体重用SPSS随机分为7组，正常对照组(N组)，模型组(M组)，5-FU组(F组)，升白汤高剂量组(H组)，5-FU+升白汤低剂量组(LF组)，5-FU+升白汤中剂量组(MF组)，5-FU+升白汤高剂量组(HF组)，每组10只。
除正常对照组(给与等体积生理盐水)外每只小鼠右腋下接种注射结肠癌细胞悬液0.1mL/10g(浓度为2×107个/mL)。注射5天后，待肿瘤直径约为5mm时定义为造模成功，造模成功第2天开始给药，正常对照组和模型组给于等体积的生理盐水，给药体积为0.1mL/10g.bw，连续4周。
给药期间每3天称一次小鼠体重并测量肿瘤大小，肿瘤体积＝长边长度×短边长度2/2。
给药期间，小鼠每7d眼眶取血，用于检测血常规。末次给药后第2天摘眼球取血，离心取血清-80℃冻存，用于检测血清因子；脱臼处死荷瘤小鼠，剥离瘤体称重，计算肿瘤的抑制率，肿瘤抑制率＝(1-各给药组肿瘤质量/模型组肿瘤质量)×100％；剥离小鼠脏器并称重，脏器指数＝脏器(mg)/体重(g)。
3实验方法
3.1通过ELISA实验检测血清中SOD、MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α含量。
保存于-80℃冰箱的血清样品按照如下步骤进行ELISA检测血清SOD、MDA、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量。
1)使用前，将所有试剂充分混匀。但不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2)根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50μL于反应孔内。
3)加入稀释好后的标准品50μL于反应孔、加入待测样品50μL于反应孔内。立即加入50μL的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4)甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5)每孔加入80μL的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6)甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50μL，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8)取出酶标板，迅速加入50μL终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9)在450nm波长处测定各孔的OD值。
10)根据标准品浓度和OD值绘制标准曲线，计算样品中各因子的含量。
3.2组织病理学HE染色检查
小鼠处死后解剖取小鼠组织，用4％多聚甲醛固定后，依次进行常规脱水、石蜡包埋、切片烤片(5μm)、HE染色。显微镜下(×200)观察组织病理变化并拍照。
3.3TUNEL染色检测细胞凋亡
各组肿瘤组织石蜡切片脱蜡、水合，乙醇水合，处理好后浸入磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗，加入蛋白酶K工作液，室温混合作用30min。浸置PBS中漂洗，浸入封闭液，室温下10min，PBS漂洗，滤纸吸干，加TdT酶反应液，于37℃中避光湿润60min，荧光胶封片，镜下观察，激发波长450～500nm，发射波长515～565nm。
3.4数据统计处理方法
所有实验数据以均数
Figure BDA0002809294880000101
即
Figure BDA0002809294880000102
表示，SPSS统计软件处理，组内数据分析采用单样本T检验，组间数据分析采用独立样本T检验，组间差异以P<0.05判定为有显著性差异。
4实验结果
4.1升白汤单独给药组以及联合给药组对肿瘤生长的影响
本发明通过将小鼠结肠癌细胞悬液MC38注入BALB/c小鼠右腋下构建小鼠结肠癌模型，建模成功后通过升白汤灌胃给药、5-FU腹腔注射给药评价升白汤单独给药或与5-FU联合给药对肿瘤生长的影响。结果显示，与模型组相比，高剂量升白汤单独给药具有显著肿瘤抑制作用(P<0.05)；与5-FU单独给药组相比，高剂量升白汤联合5-FU组肿瘤抑制作用显著增强(P<0.05)；各组抑瘤率大小为：HF组>MF组>LF组>F组>H组，结果见表1、图1。
表1各组小鼠肿瘤质量和抑瘤率结果
Figure BDA0002809294880000111
Figure BDA0002809294880000112
注：M组：模型组；H组：升白汤高剂量给药组；F组：5-FU给药组；LF组：低剂量升白汤联合5-FU给药组；MF：中剂量升白汤联合5-FU给药组；HF组：高剂量升白汤联合5-FU给药组。
4.2各组小鼠血常规检测结果
本发明给药期间通过小鼠眼眶采血并进行血常规检测以探索不同给药情况对小鼠血细胞的影响。结果表明，对于白细胞而言，与正常对照组相比，肿瘤和5-FU均会显著降低小鼠白细胞数量(P＜0.05，P＜0.01)，且随着给药时间的延长5-FU降低白细胞的作用越强；
与正常对照组相比，高剂量升白汤给药14天后能显著提高因肿瘤引起的白细胞降低现象(P<0.05)。联合给药组相对于单独5-FU给药组，升白汤能显著提高5-FU引起的白细胞降低现象(P＜0.05，P＜0.01)，且升白汤提高白细胞水平随着浓度和用药时间的延长其作用越强，见图2A。
对于红细胞而言，肿瘤、5-FU以及升白汤对红细胞技术无明显影响(P>0.05)，见图2B。
对于血红蛋白而言，与正常对照组相比，肿瘤对血红蛋白含量没有显著性影响，而5-FU给药14天后会明显降低血红蛋白的水平(P＜0.01)，且随着5-FU用药时间的延长小鼠血红蛋白水平越低；联合给药组相对于单独5-FU给药组，升白汤给药14天后能显著提高由5-FU引起的血红蛋白水平下降现象(P＜0.05，P＜0.01)，且随着升白汤浓度的升高和用药的时间延长其提高血红蛋白水平的作用越强，见图2C。
对于血小板而言，肿瘤、5-FU、各剂量升白汤均会显著提高其水平(P＜0.05，P＜0.01)，见图2D。
4.3药物对脾脏和胸腺指数的影响
本发明处死小鼠后快速剥离了小鼠的胸腺和脾脏，并计算了各组小鼠这两个器官的指数用以探索药物对器官的影响。结果表明，对于胸腺而言，与正常对照组相比，肿瘤对胸腺指数无明显影响(P>0.05)，5-FU能显著降低小鼠的胸腺指数(P＜0.01)，单独高剂量升白汤组给药组对胸腺指数无明显影响(P>0.05)，联合给药组小鼠胸腺指数无显著变化(P>0.05)，联合给药组中的升白汤可以显著提高由5-FU引起的胸腺指数降低现象(P＜0.01)，对小鼠胸腺具有保护作用，见图3A。对于脾脏而言，与正常对照组相比，肿瘤对脾脏指数无明显影响(P>0.05)，5-FU能显著降低小鼠的脾脏指数(P＜0.01)，单独高剂量升白汤组给药组对脾脏指数无显著影响(P>0.05)，联合给药组小鼠脾脏指数无显著变化(P>0.05)，联合给药组中的升白汤可以显著提高由5-FU引起的脾脏指数降低现象(P＜0.01)，对小鼠脾脏具有保护作用，见图3B。
4.4药物对各组小鼠血清中SOD和MDA水平的影响
本发明利用ELISE实验检测了各组小鼠血清中SOD和MDA的水平。结果表明，对于SOD而言，与正常对照组相比，肿瘤会显著降低小鼠血清中SOD的含量(P＜0.01)，5-FU能显著提高由肿瘤引起的SOD水平的降低(P＜0.01)，但5-FU组SOD水平与正常对照组相比还是具有显著性差异(P＜0.01)；此外，单独升白汤高剂量组也能显著提高由肿瘤引起的SOD水平的降低(P＜0.01)，但升白汤高剂量组与正常对照组相比还是具有显著性差异(P＜0.01)；与单独5-FU组相比，联合给药组SOD水平显著升高(P＜0.05，P＜0.01)，而且三个联合给药组SOD水平与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)，见图4A。
对于MDA而言，与正常对照组相比，肿瘤会显著升高小鼠血清中MDA的含量(P＜0.01)，5-FU能显著降低由肿瘤引起的MDA水平的升高(P＜0.01)，但5-FU组MDA水平与正常对照组相比还是具有显著性差异(P＜0.01)；此外，单独升白汤高剂量组也能显著降低由肿瘤引起的MDA水平的降低(P＜0.01)，但升白汤高剂量组与正常对照组相比还是具有显著性差异(P＜0.01)；与单独5-FU组相比，中、高升白汤联合5-FU给药组MDA水平显著降低(P＜0.01)，而且中、高升白汤联合5-FU给药组MDA水平与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)见图4B。
4.5药物对各组小鼠血清中炎性因子水平的影响
本发明利用ELISA实验检测了各组小鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α水平。结果表明，对于IL-6而言，与正常对照组相比，肿瘤会显著引起IL-6水平的升高(P＜0.01)，而5-FU能显著降低由肿瘤引起的IL-6水平的升高(P＜0.01)，但5-FU组IL-6水平与正常对照组相比还是有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，升白汤单独给药组也会显著降低IL-6水平，差异有统计学意义(P＜0.01)；与单独5-FU组相比，联合给药组IL-6水平显著降低(P＜0.01)，见图5A。
对于IL-1β而言，与正常对照组相比，肿瘤会显著引起IL-1β水平的升高(P＜0.01)，而5-FU能显著降低由肿瘤引起的IL-1β水平的升高(P＜0.01)，但5-FU组IL-1β水平与正常对照组相比还是有显著性差异(P＜0.01)；与模型组相比，升白汤单独给药组也会显著降低IL-1β水平，差异有统计学意义(P＜0.01)；与单独5-FU组相比，联合给药组IL-1β水平显著降低(P＜0.01)，见图5B。
对于TNF-α而言，与正常对照组相比，肿瘤能够提高血清中TNF-α水平，但提高幅度不大，而5-FU能够大幅度显著提高TNF-α水平(P＜0.01)；与模型组相比，单独升白汤高剂量组也会显著提高血清中TNF-α水平(P＜0.01)；与单独5-FU组相比，联合给药组会进一步显著提高血清中TNF-α水平(P＜0.01)，见图5C。
4.6组织病理学检测结果
肿瘤组织HE染色病理学结果：HE染色玻片上镜下观察可见，模型组肿瘤组织主要由大小较为一致、胞质嗜碱性、核质比大的肿瘤细胞组成，间质少，组织致密；5-FU组肿瘤组织，细胞相对少、间质多、疏松，见较多的坏死细胞；5-FU联合低剂量升白汤组，肿瘤细胞呈片状分布，片状区域间见坏死细胞带；5-FU联合中剂量升白汤组，片状肿瘤细胞灶减小，坏死细胞带面积增加；5-FU联合高剂量升白汤组，仍然可以区分肿瘤细胞分布灶和坏死细胞带，但肿瘤细胞分布灶内可见较多的坏死肿瘤细胞，见图6。
肿瘤组织TUNEL染色结果：Tunnel染色结果显示，模型组肿瘤细胞几乎无细胞凋亡，5-FU组、5-FU联合低剂量升白汤组、5-FU联合中剂量升白汤组和5-FU联合高剂量升白汤组均存在细胞凋亡，且凋亡细胞数量呈现5-FU组<5-FU联合低剂量升白汤组<5-FU联合中剂量升白汤组<5-FU联合高剂量升白汤组的趋势，见图7。
脾脏HE染色形态学变化结果：脾脏实质由红髓和白髓组成，5-FU组、5-FU联合低剂量升白汤组、5-FU联合中剂量升白汤组和5-FU联合高剂量升白汤组脾脏组织结构均较清晰，未见异常结构和肿瘤细胞转移灶，见图8。
胸腺HE染色形态学变化结果：胸腺表面见薄层被膜，实质由皮质和髓质构成，5-FU组、5-FU联合低剂量升白汤组、5-FU联合中剂量升白汤组和5-FU联合高剂量升白汤组，均未见异常结构和肿瘤细胞转移灶，见图9。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：包括5-FU和升白汤。
2.根据权利要求1所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：
所述的5-FU药物采用腹腔注射的方式给药；
所述的5-FU药物剂量的给药量为20mg/kg/天；
所述的升白汤采用灌胃方式给药；
所述的升白汤给药量以升白汤中生药重量计，所述的升白汤给药量为生药重量210g/人/天。
3.根据权利要求1所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：所述的升白汤包括以下重量份数的药物：
黄芪16-20份，人参12-15份，熟地10-15份，当归10-15份，白芍10-12份，川芎10-15份。
4.根据权利要求1所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：所述的升白汤包括以下重量份数的药物：
黄芪18份，人参12份，熟地12份，当归12份，白芍12份，川芎10份。
5.根据权利要求3和4所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：所述的升白汤的制备方法包括如下步骤：
步骤一：按照配比称量各原料中药；
步骤二：将各原料中药放入煎煮器中，加入中药原料总质量的12-20倍质量体积比的水浸泡30min，煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤三：将滤渣继续加入中药原料总质量的9-15倍质量体积比的水继续煎煮90min，过滤，滤液备用；
步骤四：将步骤二和步骤三所得滤液混合后减压浓缩得升白汤药液。
6.根据权利要求5所述的一种具有协同作用的抗结肠癌药物组合物，其特征在于：所述的升白汤药液中生药浓度为1.1g/mL或2.2g/mL或3.3g/mL。
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