CN112451554A - 一种三七茎叶提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种三七茎叶提取物的制备方法及其应用。一种三七茎叶提取物的制备方法，包括以下依次进行的步骤：S1提取步骤：使用乙醇热浸提取三七茎叶，获得提取液；S2转化前萃取步骤：使用石油醚萃取所述提取液，取水相获得萃取液Ⅰ；使用氯仿萃取所述提取液，取水相获得萃取液Ⅱ；将萃取液Ⅱ浓缩为待转化浸膏；S3微生物转化步骤：将待转化浸膏分散于转化液中，并使用解葡聚糖类芽胞杆菌发酵所述待转化浸膏，获得发酵转化液。通过本方案可以获得抗氧化性能佳的三七茎叶提取物，该提取物可以应用于保健品、药品和化妆品的制备中。
Description
技术领域
本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种三七茎叶提取物的制备方法及其应用。
背景技术
三七是五加科人参属植物，作为药物应用在祖国医学中已有悠久历史，但是，多年来国内外对三七的研究多限于根，对地上部分的开发应用较少。地上部分由三七花和三七茎叶组成，主要含Rb族皂苷等成分，对中枢有抑制作用，表现为镇静、安定与催眠等作用。但是，三七茎叶的总皂苷仅为4％左右，相较于三七根、剪口和三七花等部位，三七茎叶的总皂苷的含量较少，因此对三七茎叶的开发利用的进行远远比不上对三七其他部分的开发利用，大量三七茎叶被丢弃，造成了大量浪费。在自然资源日益减少的今天，人们受返朴归真影响，追求自然药品及保健品日趋增多，自然资源的开发利用现状已与社会的发展不相适应。因此，研究开发以往废弃的三七叶中的有效成分，综合利用三七各部分已成为势在必行。
发明内容
本发明意在提供一种三七茎叶提取物的制备方法，以解决三七茎叶由于总皂苷含量低而未被充分利用的技术问题。
为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种三七茎叶提取物的制备方法，包括以下依次进行的步骤：
S1提取步骤：使用乙醇热浸提取三七茎叶，获得提取液；
S2转化前萃取步骤：使用石油醚萃取所述提取液，取水相获得萃取液Ⅰ；使用氯仿萃取所述萃取液Ⅰ，取水相获得萃取液Ⅱ；将萃取液Ⅱ浓缩为待转化浸膏；
S3微生物转化步骤：将待转化浸膏分散于转化液中，并使用解葡聚糖类芽胞杆菌发酵所述待转化浸膏，获得发酵转化液。
本方案的原理及优点是：首先使用乙醇浸提法提取三七茎叶中的目的功效成分，然后使用石油醚和氯仿依次萃取所获得的提取液，将目的功效成分富集，再进行浓缩，获得待转化浸膏。接下来使用解葡聚糖类芽胞杆菌对待转化浸膏中的成分进行发酵和生物转化。解葡聚糖类芽胞杆菌在增殖生长的同时，可分解或者代谢浸膏中的一些化学物质，使得这些化学物质的亲电子性质加强，从而获得一定的自由基清除功能，通过生物转化，物质的抗氧化能力得以加强。
发明人经过对多种微生物的筛选，发现解葡聚糖类芽胞杆菌对三七茎叶的醇提物的生物转化功效最佳。通过上述生物转化，可以获得自由基清除能力强的三七茎叶提取物。而采用生物转化常见的酵母菌或者其他芽孢杆菌，它们均不能将经过纯化富集后的三七茎叶醇提物转化成为抗氧化能力较强的形式。并且，使用石油醚和氯仿先后进行萃取，能够将可被解葡聚糖类芽胞杆菌生物转化成高抗氧化活性的物质富集起来，进一步提高了最终产品的抗自由基能力。
本方案充分发掘了应用价值稍低的三七茎叶(相对于三七根和三七花等)的价值，通过本方案的操作手段，可以从三七茎叶中制备抗氧化效果好的三七茎叶提取物，进而拓展了三七茎叶的应用范围。
进一步，还包括S4转化后萃取步骤，使用水饱和正丁醇萃取所述发酵转化液，取正丁醇相，并经浓缩干燥处理后获得三七茎叶提取物Ⅰ。
采用上述技术方案，经过微生物转化后获得的发酵转化液中的抗氧化活性成分，可以通过水饱和正丁醇萃取的方式得以富集。发明人通过实验研究发现，大部分的抗氧化活性成分会集中到正丁醇相中。而当发明人尝试使用其他溶剂的时候，却不能有效实现活性成分和非活性成分的分离。
进一步，在S3微生物转化步骤中，每1g待转化浸膏使用20-40ml的转化液。
采用上述技术方案，上述料液比可保证对功效成分进行充分的生物转化。
进一步，在S3微生物转化步骤中，解葡聚糖类芽胞杆菌的接种量为4-6％。
采用上述技术方案，解葡聚糖类芽胞杆菌的接种量可保证对功效成分进行充分的生物转化。
进一步，在S3微生物转化步骤中，所述转化液包括酵母提取物0.75-1.50g/L、蛋白胨2.5-3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00-1.50g/L、硫酸镁0.25-0.50g/L、磷酸氢二钾1.20-1.50g/L和乙酸钠3.5-4.5g/L。
采用上述技术方案，解葡聚糖类芽胞杆菌在上述培养基中具有优良的生物转化活性。
进一步，在S3微生物转化步骤中，所述转化液包括酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.00g/L、柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。
采用上述技术方案，该转化液配比为最佳配比，解葡聚糖类芽胞杆菌在该转化液中具有最优的生物转化活性。
进一步，在S3微生物转化步骤中，解葡聚糖类芽胞杆菌在35-40℃的温度和100-120rpm的转速条件下，发酵所述待转化浸膏48h。
采用上述技术方案，上述发酵条件可保证对功效成分进行充分的生物转化。
进一步，在S1提取步骤中，将三七茎叶烘干至水分含量为10-15％，然后将烘干后的三七茎叶粉碎至30-50目筛，获得药粉。
采用上述技术方案，先将三七茎叶烘干，避免水分对后续提取过程的影响；将三七茎叶粉碎处理，将药粉处理成30-50目，药粉颗粒和提取溶剂乙醇之间可充分接触，增大接触面积进而提高提取效率。
进一步，在S1提取步骤中，使用体积分数为60-80％的乙醇，在60-80℃的温度条件下，对所述药粉进行热浸提取，获得提取液。
采用上述技术方案，使用乙醇浸提，可以将药粉中的具有抗氧化功能的功效成分充分溶出，具有较高的提取效率。
进一步，一种三七茎叶提取物的制备方法在制备抗氧化试剂中的应用。
采用上述技术方案，采用本方案制备的三七茎叶提取物具有优良的抗氧化性能，可以作为一种抗氧化试剂，并应用于保健品、药品和化妆品的制备中。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
实施例1
取三七地上部分(不含三七剪口，三七剪口位于三七主根和地上茎之间，起运输和贮存养分，支撑茎叶的作用)，并除去花序，获得三七茎叶，将三七茎叶烘干至水分含量为10％，然后粉碎处理烘干后的三七茎叶，过40目筛，获得药粉1kg。使用6倍量(1kg药粉对应6L乙醇)体积分数为75％的乙醇，在70℃的温度条件下浸泡药粉3h，然后过滤取滤液。乙醇热浸提取再重复2次，然后合并三次滤液，获得提取液。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对提取液进行减压蒸发处理，直至提取液的体积浓缩为原来体积的三分之一左右，获得浓缩提取液6L。
用浓缩提取液等体积的石油醚萃取浓缩提取液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。用萃取液Ⅰ等体积的氯仿萃取处理萃取液Ⅰ，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理，得到待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。将待转化浸膏分散于转化液中，每1g待转化浸膏使用20-40ml的转化液，然后将分散有待转化浸膏的转化液在121℃、0.1MPa的条件下湿热灭菌30min，冷却后接入解葡聚糖类芽胞杆菌(Paenibacilluspasadenensis，
BAA-1211TM)，接种量为5％(解葡聚糖类芽胞杆菌在转化体系中的质量分数)，完成接种后获得转化体系。转化液的成分为酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.00g/L、柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。将转化体系放置于37℃恒温摇床(100rpm)中培养48h。培养结束之后，将转化体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵转化液。
使用与发酵转化液等体积的水饱和正丁醇萃取发酵转化液，静置分层之后取水相和正丁醇相，获得萃取液Ⅲ(水相部分)和萃取液Ⅳ(正丁醇相部分)。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪分别对萃取液Ⅲ和萃取液Ⅳ进行减压蒸发处理5h，得到相应的待干燥浸膏，然后分别对待干燥浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅰ(来自萃取液Ⅳ，水分含量控制在5％以下)和三七茎叶提取物Ⅱ(来自萃取液Ⅲ，水分含量控制在5％以下)。其中，1kg药粉可提取获得84.12g三七茎叶提取物Ⅰ和103.65g三七茎叶提取物Ⅱ。
实施例2
将三七茎叶烘干至水分含量为15％，然后粉碎处理烘干后的三七茎叶，过30目筛。使用6倍量(1kg药粉对应6L乙醇)体积分数为60％的乙醇，在60℃的温度条件下浸泡药粉3h，然后过滤取滤液。乙醇热浸提取再重复2次，然后合并三次滤液，获得提取液。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对提取液进行减压蒸发处理，直至提取液的体积浓缩为原来体积的三分之一左右，获得浓缩提取液6L。
用浓缩提取液等体积的石油醚萃取浓缩提取液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。用萃取液Ⅰ等体积的氯仿萃取处理萃取液Ⅰ，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理，得到待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。将待转化浸膏分散于转化液中，每1g待转化浸膏使用20ml的转化液，然后将分散有待转化浸膏的转化液在121℃、0.1MPa的条件下湿热灭菌30min，冷却后接入解葡聚糖类芽胞杆菌(Paenibacilluspasadenensis，
BAA-1211TM)，接种量为4％(解葡聚糖类芽胞杆菌在转化体系中的质量分数)，完成接种后获得转化体系。转化液的成分为：酵母提取物0.75g/L、蛋白胨2.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00g/L、硫酸镁0.25g/L、磷酸氢二钾1.20g/L、乙酸钠3.5g/L。将转化体系放置于35℃恒温摇床(100rpm)中培养48h。培养结束之后，将转化体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵转化液。
使用与发酵转化液等体积的水饱和正丁醇萃取发酵转化液，静置分层之后取水相和正丁醇相，获得萃取液Ⅲ(水相部分)和萃取液Ⅳ(正丁醇相部分)。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪分别对萃取液Ⅲ和萃取液Ⅳ进行减压蒸发处理5h，得到相应的待干燥浸膏，然后分别对待干燥浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅰ(来自萃取液Ⅳ，三七茎叶提取物Ⅰ的水分含量控制在5％以下)和三七茎叶提取物Ⅱ(来自萃取液Ⅲ，三七茎叶提取物Ⅱ的水分含量控制在5％以下)。其中，1kg药粉可提取获得90.10g三七茎叶提取物Ⅰ和108.76g三七茎叶提取物Ⅱ。
实施例3
将三七茎叶烘干至水分含量为10％，然后粉碎处理烘干后的三七茎叶，过30-50目筛，获得药粉1kg。使用6倍量(1kg药粉对应6L乙醇)体积分数为80％的乙醇，在80℃的温度条件下浸泡药粉3h，然后过滤取滤液。乙醇热浸提取再重复2次，然后合并三次滤液，获得提取液。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对提取液进行减压蒸发处理，直至提取液的体积浓缩为原来体积的三分之一左右，获得浓缩提取液6L。
用浓缩提取液等体积的石油醚萃取浓缩提取液，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅰ。用萃取液Ⅰ等体积的氯仿萃取处理萃取液Ⅰ，静置分层之后取水相，重复三次，获得萃取液Ⅱ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅱ进行减压蒸发处理，得到待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。将待转化浸膏分散于转化液中，每1g待转化浸膏使用40ml的转化液，然后将分散有待转化浸膏的转化液在121℃、0.1MPa的条件下湿热灭菌30min，冷却后接入解葡聚糖类芽胞杆菌(Paenibacilluspasadenensis，
BAA-1211TM)，接种量为6％(解葡聚糖类芽胞杆菌在转化体系中的质量分数)，完成接种后获得转化体系。转化液的成分为：酵母提取物1.50g/L、蛋白胨3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.50g/L、磷酸氢二钾1.50g/L、乙酸钠4.5g/L。将转化体系放置于40℃恒温摇床(120rpm)中培养48h。培养结束之后，将转化体系过滤取上清，然后以5000rpm的转速离心处理上清20min，弃沉淀部分，获得发酵转化液。
使用与发酵转化液等体积的水饱和正丁醇萃取发酵转化液，静置分层之后取水相和正丁醇相，获得萃取液Ⅲ(水相部分)和萃取液Ⅳ(正丁醇相部分)。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪分别对萃取液Ⅲ和萃取液Ⅳ进行减压蒸发处理5h，得到相应的待干燥浸膏，然后分别对待干燥浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅰ(来自萃取液Ⅳ，水分含量控制在5％以下)和三七茎叶提取物Ⅱ(来自萃取液Ⅲ，水分含量控制在5％以下)。其中，1kg药粉可提取获得79.34g三七茎叶提取物Ⅰ和109.62g三七茎叶提取物Ⅱ。
对比例1
本对比例基本同实施例1，不同点在于，使用等量的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae，
18824)代替解葡聚糖类芽胞杆菌。1kg药粉可提取获得72.37g三七茎叶提取物Ⅰ和117.60g三七茎叶提取物Ⅱ。
对比例2
本对比例基本同实施例1，不同点在于，使用等量的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis，
6051)代替解葡聚糖类芽胞杆菌。1kg药粉可提取获得93.70g三七茎叶提取物Ⅰ和98.43g三七茎叶提取物Ⅱ。
对比例3
本对比例基本同实施例1，不同点在于，使用等量的巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium，
14581)代替解葡聚糖类芽胞杆菌。1kg药粉可提取获得102.67g三七茎叶提取物Ⅰ和93.73g三七茎叶提取物Ⅱ。
对比例4
本对比例基本同实施例1，不同点在于，对浓缩提取液的萃取过程不同于实施例1，具体为：用浓缩提取液等体积的石油醚萃取浓缩提取液，静置分层之后取水相，重复三次，合并水相，获得萃取液Ⅰ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅰ进行减压蒸发处理，获得待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。使用该待转化浸膏重复实施例1的解葡聚糖类芽胞杆菌转化过程、后续的水饱和正丁醇萃取过程以及浓缩干燥过程。在本对比例中，1kg的药粉可获得176.47g三七茎叶提取物Ⅰ(来自水饱和正丁醇萃取的正丁醇相，三七茎叶提取物Ⅰ的水分含量控制在5％以下)。因为活性成分富集在水饱和正丁醇萃取的水相中的量很少，本对比例未对水饱和正丁醇萃取的水相进行收集。
对比例5
本对比例基本同实施例1，不同点在于，对浓缩提取液的萃取过程不同于实施例1，具体为：用浓缩提取液等体积的氯仿萃取浓缩提取液，静置分层之后取水相，重复三次，合并水相，获得萃取液Ⅰ。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对萃取液Ⅰ进行减压蒸发处理，获得待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。使用该待转化浸膏重复实施例1的解葡聚糖类芽胞杆菌转化过程、后续的水饱和正丁醇萃取过程以及浓缩干燥过程。在本对比例中，1kg的药粉可获得131.35g三七茎叶提取物Ⅰ(来自水饱和正丁醇萃取的正丁醇相，三七茎叶提取物Ⅰ的水分含量控制在5％以下)。
对比例6
本对比例基本同实施例1，不同点在于，直接对获得的发酵转化液进行干燥处理，不进行正丁醇萃取，具体为：获得发酵转化液后，在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对发酵转化液进行减压蒸发处理5h，得到待干燥浸膏，然后对待干燥浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅲ(水分含量控制在5％以下)。在本对比例中，1kg的药粉可获得183.65g三七茎叶提取物Ⅲ。
对比例7
本对比例基本同实施例1，不同点在于，对发酵转化液的萃取方法不一样，具体为：获得发酵转化液后，使用与发酵转化液等体积的乙酸乙酯萃取发酵转化液，静置分层之后取水相和乙酸乙酯相，获得萃取液Ⅴ(水相部分)和萃取液Ⅵ(乙酸乙酯相部分)。在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪分别对萃取液Ⅴ和萃取液Ⅵ进行减压蒸发处理5h，得到相应的待干燥浸膏，然后分别对待干燥浸膏进行冷冻干燥，获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅳ(来自萃取液Ⅵ，水分含量控制在5％以下)和三七茎叶提取物Ⅴ(来自萃取液Ⅴ，水分含量控制在5％以下)。1kg药粉可提取获得63.09g三七茎叶提取物Ⅳ和121.22g三七茎叶提取物Ⅴ。
对比例8
本对比例基本同实施例1，不同点在于，获得提取液之后直接使用解葡聚糖类芽胞杆菌发酵，不进行石油醚和氯仿的萃取过程，具体如下：取提取液，在温度为60℃、真空度为-0.06Mpa的条件下，使用旋转蒸发仪对提取液进行减压蒸发处理，得到待转化浸膏(密度控制在1.10±0.05g/ml)。再使用解葡聚糖类芽胞杆菌对上述待转化浸膏进行微生物辅助转化，转化过程和干燥处理过程参见实施例1。本对比例获得干粉状的三七茎叶提取物Ⅰ(来自正丁醇相部分，水分含量控制在5％以下)和三七茎叶提取物Ⅱ(来自水相部分，水分含量控制在5％以下)。1kg药粉可提取获得183.11g三七茎叶提取物Ⅰ和210.87g三七茎叶提取物Ⅱ。
对比例9
参照实施例1的方法提取获得提取液，经过旋蒸和冷冻干燥之后获得三七茎叶提取物Ⅵ。在本方案中，未进行微生物辅助的生物转化过程。
实验例
本实验例对实施例1-3和对比例1-9制备的干粉状的产品来进行自由基清除实验。采用ABTS自由基清除法来测试上述干粉状的产品的生物活性。该法是常见的评价药物的抗氧化活性的方法，原理为：含ABTS自由基的甲醇溶液呈深紫红色，并在734nm有最大吸收峰。向含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测样品，自由基被清除后，含ABTS自由基的甲醇溶液在734nm波长处的吸收值降低，从而计算该待测药物的自由基清除率，计算公式为：清除率(％)＝[1-A/A0]×100％，其中，A0表示含ABTS自由基的甲醇溶液的吸光光度值，A表示含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测样品后的吸光光度值。ABTS自由基用K2S2O8与ABTS(2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)直接反应生成。具体的操作流程为：将7.4mmol/L的ABTS溶液2ml和2.6mmol/L的K2S2O8溶液0.2ml混合，室温条件下在暗室中放置12h，然后用甲醇稀释50倍获得工作液。取0.8ml工作液，加入0.2ml甲醇，混合均匀后静置10min，测734nm吸光光度，获得A0。取0.8ml工作液，加入0.2ml待测样品，混合均匀后静置10min，测734nm吸光光度，获得A。待测样品的配置方法为：将实施例1-3和对比例1-9制备的干粉状的产品0.2mg溶于1ml的双蒸水中。对每种干粉状的产品进行自由基清除率检测，每个产品重复3次，实验结果如表1所示。
表1：对实施例1-3和对比例1-9制备的产品的自由基清除率的检测结果
注：*表示与实施例1-3中，三七茎叶提取物Ⅰ组和三七茎叶提取物Ⅱ组相比有显著差异(T检验，p＜0.05)；#表示与实施例1的三七茎叶提取物Ⅰ组相比有显著差异(T检验，p＜0.05)
根据表1的数据可知，实施例1-3中的三七茎叶提取物Ⅰ有较为理想的自由基清除率，此部分物质来源于正丁醇相，而来自于水相的三七茎叶提取物Ⅱ的自由基清除率不佳，这说明在经过微生物转化获得的发酵转化液中，具有抗氧化活性的成分位于正丁醇相中。
对比例1-对比例3使用了非解葡聚糖类芽胞杆菌的其他微生物，在这些微生物的转化获得的三七茎叶提取物Ⅰ和三七茎叶提取物Ⅱ的抗氧化活性不佳，说明转化方式和菌种的使用对获得的产物的抗氧化性能有较大的影响。
对比例4在获得提取液后，只使用了石油醚萃取，导致具有抗氧化活性潜力的物质没有得到有效富集，即使后续进行了解葡聚糖类芽胞杆菌介导的生物转化，获得的三七茎叶提取物Ⅰ的抗氧化活性不理想。对比例5在获得提取液后，直接使用了氯仿进行萃取，而不是依次进行石油醚和氯仿的萃取，导致具有抗氧化活性潜力的物质没有得到有效富集，即使后续进行了解葡聚糖类芽胞杆菌介导的生物转化，获得的三七茎叶提取物Ⅰ的抗氧化活性不理想。对比例8直接对提取液进行了生物转化，由于没有经过石油醚和氯仿的萃取过程，导致具有抗氧化活性潜力的物质没有得到有效富集，即使后续进行了解葡聚糖类芽胞杆菌介导的生物转化，获得的三七茎叶提取物Ⅰ的抗氧化活性不理想。
对比例6没有使用水饱和正丁醇进行发酵转化液的萃取，抗氧化功效成分没有得到富集，获得的三七茎叶提取物Ⅲ的抗氧化活性不佳。对比例7使用的是乙酸乙酯萃取发酵转化液，乙酸乙酯不能有效地将抗氧化活性成分和非活性成分分开，分离和富集的效果不佳。对比例9未进行微生物辅助的生物转化，获得的三七茎叶提取物Ⅵ的抗氧化活性差，说明生物转化过程对提高提取物的抗氧化活性非常有帮助。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：
S1提取步骤：使用乙醇热浸提取三七茎叶，获得提取液；
S2转化前萃取步骤：使用石油醚萃取所述提取液，取水相获得萃取液Ⅰ；使用氯仿萃取所述萃取液Ⅰ，取水相获得萃取液Ⅱ；将萃取液Ⅱ浓缩为待转化浸膏；
S3微生物转化步骤：将待转化浸膏分散于转化液中，并使用解葡聚糖类芽胞杆菌发酵所述待转化浸膏，获得发酵转化液。
2.根据权利要求1所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，还包括S4转化后萃取步骤，使用水饱和正丁醇萃取所述发酵转化液，取正丁醇相，并经浓缩干燥处理后获得三七茎叶提取物Ⅰ。
3.根据权利要求2所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S3微生物转化步骤中，每1g待转化浸膏使用20-40ml的转化液。
4.根据权利要求3所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S3微生物转化步骤中，解葡聚糖类芽胞杆菌的接种量为4-6％。
5.根据权利要求4所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S3微生物转化步骤中，所述转化液包括酵母提取物0.75-1.50g/L、蛋白胨2.5-3.5g/L、柠檬酸氢二铵1.00-1.50g/L、硫酸镁0.25-0.50g/L、磷酸氢二钾1.20-1.50g/L和乙酸钠3.5-4.5g/L。
6.根据权利要求5所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S3微生物转化步骤中，所述转化液包括酵母提取物1.00g/L、蛋白胨3.00g/L、柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。
7.根据权利要求6所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S3微生物转化步骤中，解葡聚糖类芽胞杆菌在35-40℃的温度和100-120rpm的转速条件下，发酵所述待转化浸膏48h。
8.根据权利要求7所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S1提取步骤中，将三七茎叶烘干至水分含量为10-15％，然后将烘干后的三七茎叶粉碎至30-50目筛，获得药粉。
9.根据权利要求8所述的一种三七茎叶提取物的制备方法，其特征在于，在S1提取步骤中，使用体积分数为60-80％的乙醇，在60-80℃的温度条件下，对所述药粉进行热浸提取，获得提取液。
10.根据权利要求9所述的一种三七茎叶提取物的制备方法在制备抗氧化试剂中的应用。
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