CN105062990A - 一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

<b>本发明公开了一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂及其制备方法。它是由木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β</b><b>-</b><b>葡聚糖酶、α</b><b>-</b><b>淀粉酶成分组成，其各酶种的活力：木聚糖酶</b><b>3000IU/g</b><b>；纤维素酶</b><b>2000IU/g</b><b>；果胶酶</b><b>20000IU/g</b><b>；β</b><b>-</b><b>葡聚糖酶</b><b>5000IU/g</b><b>；α</b><b>-</b><b>淀粉酶</b><b>3000IU/g</b><b>。制备方法是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉按照一定比例经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成。与单独发酵生产各酶种，然后再复配相比，增加复合酶有效成分的回收率，简化生产工艺，缩短了生产周期，降低了生产成本，大大提高了生产效率，又保证了终产品活力品质稳定，使植物提取复合酶生产实现产业化。</b>

Description

一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于酶制剂制备技术领域，具体是一种用于提取人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙等有效功能性成分的复合酶制剂及其制备方法。
背景技术
植物中含有丰富的活性成分，被广泛用于药品、保健品和化妆品中。我国的植物资源十分丰富，是我国具有独特开发利用优势和发展战略产业的物资基础。大力发展农产品深加工，提高我国农产品加工业的技术创新能力和产品竞争力，是促进农业结构调整，增加农村第二、三产业的就业岗位和提升食品加工工业的整体水平的重要途径。人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物（苦瓜、南瓜、黄瓜等）中有效成分（多糖、皂甙等）在我国已成为支撑中药产业及健康产业发展的台柱。
植物的有效成分如多糖、皂甙等大多包裹在细胞壁中，对这些有效成分的提取，传统的提取方法如煎煮、有机溶剂浸出、醇处理方法等，提取时温度高、提取率低、浪费提取剂、成本高、不安全；而采用酶法提取选用适当的酶，可以通过酶反应温和地将植物组织结构分解，加速有效成分的释放提取。选用相应的酶可将影响液体制剂澄清度的杂质如淀粉、蛋白质、果胶等分解祛除，也可能使一些较低或无生理活性的成分结构发生转变，成为高活性分子，如可以使某些极性低的脂溶成分转化成糖苷类易溶于水的成分而有利于提取。酶法在植物有效成分的提取中有较大的应用潜力，但该技术也存在一定的局限性。目前常用的均为单一的液体剂型酶品种，加酶时要分部加入，因而生产工艺复杂，不便掌握及规模化生产。酶提取法对实验条件要求比较高，为使酶发挥最大作用，需先通过实验确定，掌握最适合的pH值、温度及作用时间等。还需综合考虑酶及底物浓度、抑制剂和激动剂等对提取得率的影响。
苦瓜为葫芦科苦瓜属植物,原产于印度东部,广泛分布于热带、亚热带和温带地区,我国各地均有栽培。苦瓜味苦性寒,无毒,其根、茎、叶、花、果实和种子在世界各地均有药用记载,有明显的清火明目、解毒、降血糖、滋养、益气之功效，是民间常用中药,同时也是一种常见的蔬菜。国内外对苦瓜药用价值的研究已经取得了重要进展,已证实苦瓜原汁、苦瓜的水提取物等具有抗菌、调节和提高机体免疫力、抗肿瘤、抑制爱滋病HIV的表面活性等功效。国内外不少学者从不同地区、不同品种苦瓜及其种子中分离出了多种生理活性物质,其中苦瓜多糖和苦瓜皂甙是苦瓜的两个主要有效成分。
皂甙是存在于植物界的一类比较复杂的甙类化合物,如人参、柴胡、三七、苦瓜、麦门冬、木通、茶叶等均含有皂甙。它是由甙元和糖两部分组成,由于分子量大、极性较高,难以分离提纯。苦瓜皂甙是苦瓜中有效成分之一,为四环三萜类化合物。
多糖是植物细胞的组成成分。近年来,多糖及其复合物在生物体功能方面的研究成为热点问题之一。在研究过程中,人们发现多糖作为一种几乎无毒副作用的天然提取物,在治疗肿瘤、免疫力低下、高血糖、衰老、病毒性疾病等方面疗效独特。苦瓜多糖是一种由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖，含β－D－吡喃糖苷键，具有提高免疫力、降血糖、抑菌、抗氧化等作用，是苦瓜中主要生物活性成分之一。
发明内容
本发明采用的提取植物有效成分的复合酶制剂由木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶组成，是一种多菌种酶体系、固体剂型的新型食品级酶制剂。
植物细胞壁是由果胶质、纤维素和半纤维素等组成的网状结构,可阻止细胞内有效成分的渗出,要提取多糖、皂甙等植物有效成分,破除包围在这些有效成分外的屏障是要解决的首要问题。
本发明采用的植物提取复合酶的制备方法是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉按照一定比例经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成。创新点在于将目前分步、添加单一酶种对人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料的酶解过程，提升为多酶种的复合型酶制剂一步完成酶解过程，简化生产过程及周期，提高人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙等有效功能性成分的提取效率。
为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：
一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂，其特征在于它是由木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶成分组成，其各酶种的活力如下:
木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；
果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；
α-淀粉酶3000IU/g。
本发明所述用于提取植物有效成分的复合酶制剂的生产方法,其特征在于它是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成，其各菌粉的重量份数如下:
地衣芽孢杆菌3-4份；枯草芽孢杆菌1-2份；
黑曲霉2-3份；绿色木霉2-3份；
其中各组分的活菌含量分别为：
复合发酵剂活力总数≥108cfu/g。
具体包括：斜面菌种→液体种子培养→种子罐发酵→发酵罐发酵→离心分离菌体细胞→陶瓷膜超滤浓缩酶液→添加膨化植物蛋白载体→低温喷雾干燥→过筛→固体复合酶产品。
更加详细的描述如下：
（1）各菌株来源：
地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，编号CGMCC1970；
枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，编号AS1.1229；
黑曲霉Aspergillusniger，编号IFFI.02439；
绿色木霉Trichodermaviride，编号CCTCCAF.93252。
（2）斜面菌种培养：
地衣芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，酵母膏5，NaCl5，琼脂30，自来水配制，pH7.5，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；
枯草芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，琼脂20，pH值为7.2，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；
黑曲霉菌种使用斜面培养基（g/L）：土豆200，葡萄糖20，磷酸氢二钾3，七水硫酸镁1.5，pH自然，在28～30℃条件下静止培养20～48小时；
绿色木霉使用斜面培养基（g/L）：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)7.5，蛋白胨5.0，吐温-802.0mL，MgSO4·7H2O0.3，CaCl20.3，FeSO4·7H2O5.0mg，MnSO4·H2O1.6mg，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O2.0mg，自然pH，在28～30℃条件下静止培养48～72小时；
（3）液体种子培养：
地衣芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：魔芋粉30，骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，Na2HPO44，KH2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，pH7.0，温度30℃，转速250～360r/min，培养48～72h。
枯草芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，氯化钠5，pH值为7.2，温度30℃，转速140r/min，培养24h；
黑曲霉摇瓶放大培养基（g/L）：半纤维素15～20，NH4NO32～4，酵母粉2～4，KCL0.4～0.6，K2HPO40.5～1.5，FeSO40.01～0.03，MgSO4·7H2O0.3～0.6，CoCL20.01～0.03，吐温0.5～1.5，pH5.5。温度28～30℃，转速180～250转/分钟，培养48～60h；
绿色木霉摇瓶放大培养基（g/L）：蛋白胨11.0，硫酸铵13，葡萄糖6，KH2PO410.5，稻草粉13.4，CaCl20.8，MgSO4·7H2O0.6，FeSO4·7H2O5，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O3.7mg，MnSO4·H2O1.6mg，吐温-800.3mL，接种斜面培养的孢子，28℃，150r/min，振荡培养72h左右；
（4）种子罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：黄豆饼粉10.1、玉米淀粉16.9、蛋白胨1.1、葡萄糖2.4、硫酸铵8.0、硫酸镁0.45、磷酸氢二钾0.45、氯化钠4.50,自然pH。
发酵罐内温度28～30℃，通风量9～13m3/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa，地衣芽孢杆菌接种量10%、枯草芽孢杆菌接种量3%、黑曲霉接种量6%、绿色木霉接种量6%，发酵48h。
(4)发酵罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，g，稻草粉13.4g，Na2HPO44，H2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，吐温-800.3mL，pH7.0，消泡油4，自来水配制；
发酵罐内温度28～30℃，通风量8～10m3/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa搅拌速率270r/min，接种量10%，发酵68～72h；
（5）离心分离菌体细胞：发酵液经管式离心机分离，收集滤液于储罐。
（6）陶瓷膜超滤浓缩酶液:将储罐中滤液进行超滤膜浓缩，超滤压力小于0.1Mpa，浓缩时间3小时/6吨滤液；
（7）添加载体：向浓缩酶液中加入膨化大豆颗粒作为载体，使其在浓缩酶液中的终浓度达到10%，并于匀浆中充分搅拌混匀；
（8）低温喷雾干燥:将已加入载体的浓缩酶液经过高速气流浓缩低温喷雾干燥机进行喷雾干燥制成固体复合酶产品。复合酶的有效成分收率90%以上。
本发明更进一步公开公开了用于提取植物有效成分的复合酶制剂在制备提高人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙有效功能性成分提取率方面的应用。本发明将目前分步、添加单一酶种对人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料的酶解过程，提升为多酶种的复合型酶制剂一步完成酶解过程，简化生产过程及周期，提高人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙等有效功能性成分的提取效率。实验结果显示：采用本发明的复合酶制剂对人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙等有效功能性成分的提取效率可提高近10%。
本发明制备的固体复合酶制剂产品的测定指标如下:
（1）产品酶活力木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；α-淀粉酶3000IU/g。
（2）感官指标:产品为黄色粉剂，色泽均一。
（3）理化指标:制剂能通过3号标准筛;水分：含水量低于8%。
（4）卫生指标:固体酶制剂每克细菌总数小于1万个。
本发明所制备的固体复合酶制剂与现有技术相比具有如下的特点：
（1）目前大多数生产厂家所采用的提取植物有效成分的工艺主要是常规水煮发法、乙醇提取法以及微波提取等方法。再经过脱脂、脱蛋白、正丁醇萃取，然后经过多次浓缩，最后结晶，得到粗晶体。但是，这种方法不仅消耗大了得有机溶剂，造成严重的环境污染，而且产品的纯度不高，其生物活性也受到一定的影响。苦瓜果实中含有大量的纤维素、半纤维素、抗性淀粉、果胶和树胶等成分。酶具有催化底物水解的专一性,在其最佳的、温度和加酶量的条件下,破壁苦瓜细胞,使内容物充分的释放出来而不破坏细胞膜内的活性物质,虽然，也有企业采用酶解工艺来增加提取效率，但常用的均为单一的液体剂型品种，加酶时要分步加入，因而生产工艺复杂、周期，不便掌握及规模化生产。而本发明所提供的提取植物有效成分的复合酶制剂能够将目前分步添加单一酶种的酶解过程，提升为多酶种的复合型酶制剂一步完成酶解过程，简化生产过程及周期，提高植物有效成分的回收率。
（2）本发明采用的植物提取复合酶的制备方法是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉按照一定比例经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成。与单独发酵生产各酶种，然后再复配相比，增加复合酶有效成分的回收率，简化生产工艺，缩短了生产周期，降低了生产成本。
（3）发明采用的集酶液浓缩、低温喷雾制粉为一体化的技术，提高了酶浸液的的浓缩倍数，既减轻了后续干燥环节的负担，大大提高了生产效率，又保证了终产品活力品质稳定，使植物提取复合酶生产实现产业化。
（4）本发明产品的实施，将针对提取葫芦科植物如苦瓜、南瓜、黄瓜类原料的多糖、皂甙等有效功能性成分，提高其提取效率。将木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶合理搭配就可在极温和的条件下分解构成细胞壁及细胞间质的纤维素、半纤维素和果胶质,使细胞壁及细胞间质结构产生局部疏松、膨胀、崩溃等变化,从而增大了有效成分的扩散面积,减小了传质阻力,提高了有效成分的提取率，同时又可极大地降低提取液的粘度，成倍提高提取液的浓缩或干燥效率，使提取液的澄清度等质量指标得到明显的提高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行详细的说明。下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1
制备植物提取复合酶制剂
（1）各菌株来源：
地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，编号CGMCC1970；
枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，编号AS1.1229；
黑曲霉Aspergillusniger，编号IFFI.02439；
绿色木霉Trichodermaviride，编号CCTCCAF.93252。
（2）斜面菌种培养：
地衣芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，酵母膏5，NaCl5，琼脂30，自来水配制，pH7.5，在30℃条件下静止培养24小时；
枯草芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，琼脂20，pH值为7.2，在30℃条件下静止培养24小时；
黑曲霉菌种使用斜面培养基（g/L）：土豆200，葡萄糖20，磷酸氢二钾3，七水硫酸镁1.5，pH自然，在0℃条件下静止培养48小时；
绿色木霉使用斜面培养基（g/L）：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)7.5，蛋白胨5.0，吐温-802.0mL，MgSO4·7H2O0.3，CaCl20.3，FeSO4·7H2O5.0mg，MnSO4·H2O1.6mg，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O2.0mg，自然pH，在30℃条件下静止培养72小时；
（3）液体种子培养：
地衣芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：魔芋粉30，骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，Na2HPO44，KH2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，pH7.0，温度30℃，转速360r/min，培养72h。
枯草芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，氯化钠5，pH值为7.2，温度30℃，转速140r/min，培养24h；
黑曲霉摇瓶放大培养基（g/L）：半纤维素15～20，NH4NO34，酵母粉4，KCL0.6，K2HPO41.5，FeSO40.03，MgSO4·7H2O0.6，CoCL20.03，吐温1.5，pH5.5。温度30℃，转速250转/分钟，培养60h；
绿色木霉摇瓶放大培养基（g/L）：蛋白胨11.0，硫酸铵13，葡萄糖6，KH2PO410.5，稻草粉13.4，CaCl20.8，MgSO4·7H2O0.6，FeSO4·7H2O5，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O3.7mg，MnSO4·H2O1.6mg，吐温-800.3mL，接种斜面培养的孢子，28℃，150r/min，振荡培养72h左右；
（4）种子罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：黄豆饼粉10.1、玉米淀粉16.9、蛋白胨1.1、葡萄糖2.4、硫酸铵8.0、硫酸镁0.45、磷酸氢二钾0.45、氯化钠4.50,自然pH。
发酵罐内温度30℃，通风量13m3/h，发酵罐压0.09Mpa，地衣芽孢杆菌接种量10%、枯草芽孢杆菌接种量3%、黑曲霉接种量6%、绿色木霉接种量6%，发酵48h。
(4)发酵罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，g，稻草粉13.4g，Na2HPO44，H2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，吐温-800.3mL，pH7.0，消泡油4，自来水配制；
发酵罐内温度0℃，通风量10m3/h，发酵罐压0.09Mpa搅拌速率270r/min，接种量10%，发酵72h；
（5）离心分离菌体细胞：发酵液经管式离心机分离，收集滤液于储罐。
（6）陶瓷膜超滤浓缩酶液:将储罐中滤液进行超滤膜浓缩，超滤压力小于0.1Mpa，浓缩时间3小时/6吨滤液。
（7）添加载体：向浓缩酶液中加入膨化大豆颗粒作为载体，使其在浓缩酶液中的终浓度达到10%，并于匀浆中充分搅拌混匀；
（8）低温喷雾干燥:将已加入载体的浓缩酶液经过高速气流浓缩低温喷雾干燥机进行喷雾干燥制成固体复合酶产品。复合酶的有效成分收率90%以上。
本发明制备的固体复合酶制剂产品的测定指标如下:
（1）产品酶活力木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；α-淀粉酶3000IU/g。
（2）感官指标:产品为黄色粉剂，色泽均一。
（3）理化指标:制剂能通过3号标准筛;水分：含水量低于8%。
（4）卫生指标:每克细菌总数小于1万个。
实施例2
制备植物提取复合酶制剂
（1）各菌株来源：
地衣芽孢杆菌Bacilluslicheniformis，编号CGMCC1970；
枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，编号AS1.1229；
黑曲霉Aspergillusniger，编号IFFI.02439；
绿色木霉Trichodermaviride，编号CCTCCAF.93252。
（2）斜面菌种培养：
地衣芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，酵母膏5，NaCl5，琼脂30，自来水配制，pH7.5，在28℃条件下静止培养20小时；
枯草芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，琼脂20，pH值为7.2，在28℃条件下静止培养20小时；
黑曲霉菌种使用斜面培养基（g/L）：土豆200，葡萄糖20，磷酸氢二钾3，七水硫酸镁1.5，pH自然，在28℃条件下静止培养20小时；
绿色木霉使用斜面培养基（g/L）：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)7.5，蛋白胨5.0，吐温-802.0mL，MgSO4·7H2O0.3，CaCl20.3，FeSO4·7H2O5.0mg，MnSO4·H2O1.6mg，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O2.0mg，自然pH，在28℃条件下静止培养72小时；
（3）液体种子培养：
地衣芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：魔芋粉30，骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，Na2HPO44，KH2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，pH7.0，温度30℃，转速250r/min，培养48h。
枯草芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，氯化钠5，pH值为7.2，温度30℃，转速140r/min，培养24h；
黑曲霉摇瓶放大培养基（g/L）：半纤维素15～20，NH4NO32，酵母粉2，KCL0.4，K2HPO40.5，FeSO40.01，MgSO4·7H2O0.3，CoCL20.01，吐温0.5，pH5.5。温度28℃，转速180转/分钟，培养48h；
绿色木霉摇瓶放大培养基（g/L）：蛋白胨11.0，硫酸铵13，葡萄糖6，KH2PO410.5，稻草粉13.4，CaCl20.8，MgSO4·7H2O0.6，FeSO4·7H2O5，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O3.7mg，MnSO4·H2O1.6mg，吐温-800.3mL，接种斜面培养的孢子，28℃，150r/min，振荡培养72h左右；
（4）种子罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：黄豆饼粉10.1、玉米淀粉16.9、蛋白胨1.1、葡萄糖2.4、硫酸铵8.0、硫酸镁0.45、磷酸氢二钾0.45、氯化钠4.50,自然pH。
发酵罐内温度28℃，通风量9m3/h，发酵罐压0.02Mpa，地衣芽孢杆菌接种量10%、枯草芽孢杆菌接种量3%、黑曲霉接种量6%、绿色木霉接种量6%，发酵48h。
(4)发酵罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，g，稻草粉13.4g，Na2HPO44，H2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，吐温-800.3mL，pH7.0，消泡油4，自来水配制；
发酵罐内温度28℃，通风量8～10m3/h，发酵罐压0.02Mpa搅拌速率270r/min，接种量10%，发酵68h；
（5）离心分离菌体细胞：发酵液经管式离心机分离，收集滤液于储罐。
（6）陶瓷膜超滤浓缩酶液:将储罐中滤液进行超滤膜浓缩，超滤压力小于0.1Mpa，浓缩时间3小时/6吨滤液，酶浸液浓缩倍数35倍；
（7）添加载体：向浓缩酶液中加入膨化大豆颗粒作为载体，使其在浓缩酶液中的终浓度达到10%，并于匀浆中充分搅拌混匀；
（8）低温喷雾干燥:将已加入载体的浓缩酶液经过高速气流浓缩低温喷雾干燥机进行喷雾干燥制成固体复合酶产品。复合酶的有效成分收率90%以上。
本发明制备的固体复合酶制剂产品的测定指标如下:
（1）产品酶活力木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；α-淀粉酶3000IU/g。
（2）感官指标:产品为黄色粉剂，色泽均一。
（3）理化指标:制剂能通过3号标准筛;水分：含水量低于8%。
（4）卫生指标:每克细菌总数小于1万个。
实施例4
对比试验：
实施例3
利用植物提取复合酶制剂提取苦瓜中皂甙成分的方法：
将新鲜苦瓜洗净去瓤、切片烘干、粉碎过80目筛，备用。
称取100g苦瓜果实干粉，加入1.5L柠檬酸缓冲液中,润胀。
加入植物提取复合酶制剂，酶用量5%，提取温度50℃,pH值6.0,酶解时间5h，灭酶后快速冷却离心,取上清液,测定苦瓜皂甙成分含量。
结果：苦瓜皂甙提取回收率达到92.7%
实施例4
利用植物提取复合酶制剂提取苦瓜中多糖成分的方法：
将新鲜苦瓜洗净去瓤、切片烘干、粉碎过80目筛，备用。
称取100g苦瓜果实干粉，加入1.5L柠檬酸缓冲液中,润胀。
加入植物提取复合酶制剂，酶用量5%，提取温度60℃,pH值7.0,酶解时间3h，灭酶后快速冷却离心,取上清液,测定苦瓜多糖成分含量。
结果：苦瓜多糖提取回收率达到94.1%。

Claims (5)

1.一种用于提取植物有效成分的复合酶制剂，其特征在于它是由木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、α-淀粉酶成分组成，其各酶种的活力如下:
木聚糖酶3000IU/g；纤维素酶2000IU/g；
果胶酶20000IU/g；β-葡聚糖酶5000IU/g；
α-淀粉酶3000IU/g。
2.权利要求1所述用于提取植物有效成分的复合酶制剂的生产方法,其特征在于它是由地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉、绿色木霉经过共生培养，浸提、浓缩后加膨化植物蛋白载体，经低温喷雾制成，其各菌粉的重量份数如下:
地衣芽孢杆菌3-4份；枯草芽孢杆菌1-2份；
黑曲霉2-3份；绿色木霉2-3份；
其中各组分的活菌含量分别为：
复合发酵剂活力总数≥108cfu/g。
3.权利要求2所述的生产方法,其特征在于按如下的步骤进行：斜面菌种→液体种子培养→种子罐发酵→发酵罐发酵→离心分离菌体细胞→陶瓷膜超滤浓缩酶液→添加膨化植物蛋白载体→低温喷雾干燥→过筛→固体复合酶产品。
4.权利要求2-3所述的生产方法,其特征在于按如下的步骤进行：
斜面菌种培养：
地衣芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，酵母膏5，NaCl5，琼脂30，自来水配制，pH7.5，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；
枯草芽孢杆菌使用斜面培养基（g/L）：蛋白胨10，牛肉膏5，氯化钠5，琼脂20，pH值为7.2，在28～30℃条件下静止培养20～24小时；
黑曲霉菌种使用斜面培养基（g/L）：土豆200，葡萄糖20，磷酸氢二钾3，七水硫酸镁1.5，pH自然，在28～30℃条件下静止培养20～48小时；
绿色木霉使用斜面培养基（g/L）：羧甲基纤维素钠(CMC-Na)7.5，蛋白胨5.0，吐温-802.0mL，MgSO4·7H2O0.3，CaCl20.3，FeSO4·7H2O5.0mg，MnSO4·H2O1.6mg，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O2.0mg，自然pH，在28～30℃条件下静止培养48～72小时；
液体种子培养：
地衣芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：魔芋粉30，骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，Na2HPO44，KH2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，pH7.0，温度30℃，转速250～360r/min，培养48～72h；枯草芽孢杆菌摇瓶放大培养基（g/L）：牛肉膏5，蛋白胨10，氯化钠5，pH值为7.2，温度30℃，转速140r/min，培养24h；
黑曲霉摇瓶放大培养基（g/L）：半纤维素15～20，NH4NO32～4，酵母粉2～4，KCL0.4～0.6，K2HPO40.5～1.5，FeSO40.01～0.03，MgSO4·7H2O0.3～0.6，CoCL20.01～0.03，吐温0.5～1.5，pH5.5；
温度28～30℃，转速180～250转/分钟，培养48～60h；
绿色木霉摇瓶放大培养基（g/L）：蛋白胨11.0，硫酸铵13，葡萄糖6，KH2PO410.5，稻草粉13.4，CaCl20.8，MgSO4·7H2O0.6，FeSO4·7H2O5，ZnSO4·7H2O1.4mg，CoCl2·6H2O3.7mg，MnSO4·H2O1.6mg，吐温-800.3mL，接种斜面培养的孢子，28℃，150r/min，振荡培养72h；
种子罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：黄豆饼粉10.1、玉米淀粉16.9、蛋白胨1.1、葡萄糖2.4、硫酸铵8.0、硫酸镁0.45、磷酸氢二钾0.45、氯化钠4.50,自然pH；
发酵罐内温度28～30℃，通风量9～13m3/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa，地衣芽孢杆菌接种量10%、枯草芽孢杆菌接种量3%、黑曲霉接种量6%、绿色木霉接种量6%，发酵48h；
(4)发酵罐发酵：
种子罐发酵培养基（g/L）：骨胨30，玉米浆5，（NH4）2SO45，g，稻草粉13.4g，Na2HPO44，H2PO40.3，MgCl20.6，CaCl23，FeSO40.01，Na2CO33，吐温-800.3mL，pH7.0，消泡油4，自来水配制；
发酵罐内温度28～30℃，通风量8～10m3/h，发酵罐压0.02～0.09Mpa搅拌速率270r/min，接种量10%，发酵68～72h；
离心分离菌体细胞：发酵液经管式离心机分离，收集滤液于储罐；陶瓷膜超滤浓缩酶液:将储罐中滤液进行超滤膜浓缩，超滤压力小于0.1Mpa，浓缩时间3小时/6吨滤液；
添加载体：
向浓缩酶液中加入膨化大豆颗粒作为载体，使其在浓缩酶液中的终浓度达到10%，并于匀浆中充分搅拌混匀；
低温喷雾干燥:
将已加入载体的浓缩酶液经过高速气流浓缩低温喷雾干燥机进行喷雾干燥制成固体复合酶产品。
5.权利要求1所述的用于提取植物有效成分的复合酶制剂在制备提高人参皂甙、银杏皂甙及葫芦科植物类原料中的多糖、皂甙有效功能性成分提取率方面的应用。
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CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Chuai Yuduo

Inventor after: Yang Yang

Inventor after: Ma Zhigang

Inventor after: Liu Hao

Inventor after: Song Jitian

Inventor before: Chuai Yuduo

Inventor before: Yang Yang

Inventor before: Ma Zhigang

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Application publication date: 20151118

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