CN112409309A - 一种制备翅荚决明素a的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种制备翅荚决明素A的方法，原料为翅荚决明的干燥细枝，包括提取物粗品的制备和提取物粗品的HSCCC分离；其中，提取物粗品使用乙醇水溶液提取后，使用液液萃取法萃取收集乙酸乙酯萃取液，回收溶剂；HSCCC分离的溶剂系统为体积比7:3:5:5的二氯甲烷/乙酸乙酯/无水乙醇/水。本发明提供的方法借助于溶剂萃取—高速逆流色谱即可从翅荚决明中分离得到高纯度的翅荚决明素A，比现有技术步骤简单。

Description

一种制备翅荚决明素A的方法

技术领域

本发明属于化学领域，涉及已知化合物的制备，具体涉及一种制备翅荚决明素A的方法。

背景技术

翅荚决明素A是一种2-芳基苯并呋喃结构的化合物，结构如下，最早从翅荚决明中分离得到(傣药翅荚决明细枝中一个新的2-芳基苯并呋喃类化合物及细胞毒活性，中草药，2016)。该化合物具有较好的抗肿瘤活性。

马航赢等运用硅胶、凝胶、MCI-GEL树脂及RP-HPLC等多种色谱技术从翅荚决明中分离纯化得到了翅荚决明素A(傣药翅荚决明细枝中一个新的2-芳基苯并呋喃类化合物及细胞毒活性，中草药，2016)，但是该方法依赖的分离手段太多，步骤繁琐。

高速逆流色谱是一种连续高效的液-液分配色谱技术。由于不需要固体支撑体，物质的分离依据其在互不相溶的两相液体中的分配系数的差异而实现，因而避免了固体固定相不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等问题，样品回收率高，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然产物中有效成分的分离。

为了简化从翅荚决明中分离纯化翅荚决明素A的方法，特提出本发明。

发明内容

本发明旨在提供一种制备翅荚决明素A的方法，克服现有技术依赖分离步骤繁琐的缺点。

实现本发明目的的技术方案为：

一种制备翅荚决明素A的方法，原料为翅荚决明的干燥细枝，包括提取物粗品的制备和提取物粗品的HSCCC分离；其中，提取物粗品使用乙醇水溶液提取后，使用液液萃取法萃取收集乙酸乙酯萃取液，回收溶剂；HSCCC分离的溶剂系统为体积比7:3:5:5的二氯甲烷/乙酸乙酯/无水乙醇/水。

优选地，提取物粗品的制备步骤中，提取方式为热回流，提取溶剂为75％乙醇水溶液。

优选地，乙酸乙酯萃取之前先用石油醚萃取除杂。

优选地，HSCCC分离步骤中，以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，主机转速为850r/min，流动相流速为2mL/min，分离温度为30℃，收集110min～121min洗脱液。

更优选地，紫外检测波长为312nm。

有益效果：

本发明提供的方法借助于溶剂萃取—高速逆流色谱即可从翅荚决明中分离得到高纯度的翅荚决明素A，比现有技术步骤简单。

附图说明

图1为翅荚决明素A的化学结构；

图2为高速逆流色谱图；

图3为HPLC色谱图。

具体实施方式

一、仪器和试剂

TBE-300B型高速逆流色谱仪为上海同田生物技术有限公司产品。

Agilent-1260型高效液相色谱仪为安捷伦公司产品。

色谱柱DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm)为迪马科技产品。

高速逆流所用有机溶剂均为常规的分析纯溶剂，高效液相色谱所用有机溶剂均为常规的色谱纯溶剂，水为去离子水。

翅荚决明素A对照品自制，纯度99.3％。

二、方法和结果

1、提取物粗品的制备

将翅荚决明的干燥细枝粉碎过40目筛，按照料液比1kg/5L加入75％乙醇水溶液，热回流提取2h，重复提取2次，合并3次提取液，过滤，减压浓缩得浸膏。浸膏加水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯等体积萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，回收溶剂，得提取物粗品。

2、提取物粗品HSCCC分离

以体积比为7:3:5:5的二氯甲烷/乙酸乙酯/无水乙醇/水为溶剂系统，按照比例配制，充分混匀后在常温下静置12h，将上相、下相分开，超声脱气30min备用。

以上相为固定相，下相为流动相，先将固定相泵入HSCCC的分离管中，待上相充满整个分离管后，调节主机的转速为850r/min，待转速稳定后，以2mL/min的流速泵入流动相。待两相平衡后，取10mL用流动相溶解的、浓度为30mg/mL的提取物粗品溶液注入HSCCC，同时开始记录色谱图，紫外检测波长为312nm，分离温度为30℃。

根据HSCCC色谱图(如图2所示)收集110min～121min洗脱液，减压浓缩至干，得图1化学结构的翅荚决明素A。HR-ESI-MSm/z:305.1176[M+Na]⁺，根据HR-ESI-MS确定分子式为C₁₈H₁₈O₃。¹³CNMR(CDCl₃,125MHz)δppm:126.8(s,C-1),144.5(s,C-2),151.8(s,C-3),111.6(d,C-4),135.2(s,C-5),116.5(d,C-6),25.4(q,C-7),121.6(s,C-1'),129.5(d,C-2'),115.4(d,C-3'),160.9(s,C-4'),115.4(d,C-5'),129.5(d,C-6'),153.0(s,C-7'),111.2(s,C-8'),9.2(q,C-9'),56.5(q,-OMe),56.2(q,-OMe).与文献记载的核磁数据一致。

使用HPLC测定翅荚决明素A的纯度，HPLC色谱条件如下：

色谱仪：Agilent-1260型高效液相色谱仪

色谱柱：DiamonsilC18(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：乙腈(A)-0.1％甲酸水(B)，二元梯度洗脱(0～60min，5％A→100％A)；

流速：1.0mL/min；

检测波长：210nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。供试品溶液为HSCCC制备的翅荚决明素A，浓度为0.5mg/mL；对照品溶液为翅荚决明素A对照品，浓度为0.1mg/mL。

HPLC色谱图如图3所示，供试品溶液与对照品溶液于相同保留时间出峰，基本未见杂质峰，HPLC归一化纯度99.3％。

上述方法仅借助于溶剂萃取—高速逆流色谱即可从翅荚决明中分离得到高纯度的翅荚决明素A，比现有技术步骤简单。

Claims (5)

1.一种制备翅荚决明素A的方法，原料为翅荚决明的干燥细枝，其特征在于：包括提取物粗品的制备和提取物粗品的HSCCC分离；其中，提取物粗品使用乙醇水溶液提取后，使用液液萃取法萃取收集乙酸乙酯萃取液，回收溶剂；HSCCC分离的溶剂系统为体积比7:3:5:5的二氯甲烷/乙酸乙酯/无水乙醇/水。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：提取物粗品的制备步骤中，提取方式为热回流，提取溶剂为75％乙醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：乙酸乙酯萃取之前先用石油醚萃取除杂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：HSCCC分离步骤中，以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，主机转速为850r/min，流动相流速为2mL/min，分离温度为30℃，收集110min～121min洗脱液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：紫外检测波长为312nm。

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