CN112394127A - 一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和l-脯氨酰胺含量的方法 - Google Patents

一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和l-脯氨酰胺含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种测定维格列汀中3‑氨基‑1‑金刚烷醇和L‑脯氨酰胺含量的方法，属于化学物质检测技术领域，采用气相色谱法进行检测。本发明的检测方法专属性强，灵敏度高，3‑氨基‑1‑金刚烷醇和L‑脯氨酰胺和样品中其他成分能达到很好的分离，具有很好的线性关系(3‑氨基‑1‑金刚烷醇r=0.9956，L‑脯氨酰胺r=0.9966)，3‑氨基‑1‑金刚烷醇的定量限为2ng，L‑脯氨酰胺的定量限为5ng，每针样品检出时间较快，全程仅需12min，本发明的检测方法可作为有效测定维格列汀中3‑氨基‑1‑金刚烷醇和L‑脯氨酰胺含量的方法。

Description

一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量 的方法
技术领域
本发明涉及药品中杂质的检测，尤其涉及一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法。
背景技术
维格列汀是一种降糖药，能有效的控制2型糖尿病患者血糖的含量。根据维格列汀的API合成路线可知，由于合成路线较短，因此起始原料L-脯氨酰胺、3-氨基-1-金刚烷醇均可能在成品中有残留，基于药品质量及安全性的考虑，需对该两种杂质进行检测及控制。目前，在ChP、EP、BP、JP和USP中均未收载有维格列汀原料药的质量标准，现有技术中也还未开发出检测维格列汀中该两种杂质的检测方法，其中根据对维格列汀中该两种杂质的结构进行分析后可知，该两种杂质没有共轭体系的结构，故在紫外条件下没有吸收特征，不适用于液相色谱检测法，亟待开发出一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法。
发明内容
为解决上述现有技术中不足，本发明的主要目的在于提供一种利用气相色谱法测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法。
而其解决问题的技术方案是这样实现的：
一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，采用气相色谱法进行检测。
其中该方法还包括以下步骤，S1、供试品溶液配制：取本品约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
S2、对照品溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品和L-脯氨酰胺对照品各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg的混合溶液；
S3、系统适用性溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品、L-脯氨酰胺对照品及维格列汀各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg及维格列汀0.1g的混合溶液；
S4、系统适用性溶液的检测：精密量取2μl的系统适用性溶液注入气相色谱仪，按L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的顺序洗脱，记录色谱图；
S5、供试品溶液及对照品溶液的检测：精密量取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图；
S6、含量计算：按外标法以峰面积计算3-氨基-1-金刚烷醇及L-脯氨酰胺的含量。
其中，步骤S1至S3中的溶剂为甲醇及二甲基亚砜的混合物，甲醇及二甲基亚砜的体积比为75:25～85：15。
其中，进一步优选的，甲醇与二甲基亚砜的体积比为80：20。
其中，色谱条件为：色谱柱：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；柱温：190～200℃；维持时间：12～20min；进样口温度：200～250℃；检测器温度：220～295℃；柱流量：1～6ml/min；进样量：1～4μl；分流比：10：1；隔垫吹扫流量：5.0mL/min；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)。
其中，进一步优选的色谱条件为：色谱柱：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；柱温：190℃；维持时间：12min；进样口温度：225℃；检测器温度：290℃；柱流量：6ml/min；进样量：2μl；分流比：10：1；隔垫吹扫流量：5.0mL/min；检测器：氢火焰离子化检测器。
其中，气相色谱仪的载气为氢气与氮气的混合气体。
其中，氢气与氮气混合的体积比为1:1。
其中，该方法的检出时间为12min。
其中，该方法中，3-氨基-1-金刚烷醇的定量限为2ng/ml，L-脯氨酰胺的定量限为5ng/ml。
本发明的有益效果是：
(1)本发明的测定方法专属性强，3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺和样品中其他成分能达到很好地分离；在50％～150％的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系；L-脯氨酰胺的定量限为5ng，3-氨基-1-金刚烷醇的定量限为2ng，灵敏度较高；L-脯氨酰胺平均回收率为103.3％，3-氨基-1-金刚烷醇平均回收率为106.8％，准确度较高；每针样品检出时间较快，全程仅需12min。
(2)本发明的测定方法溶剂为甲醇及二甲基亚砜的混合物，其体积比为75:25～85：15，由于溶剂的挥发性减弱，无需严格要求进样瓶，简化了操作，同时检测的精密度提高，体积比过高时或过低时或采用100％甲醇或100％二甲基亚砜时，ARSD均增大，精密度、准确度降低。
(3)本发明的测定方法所使用的载气为氢气与氮气的混合气体，相较于单纯使用氢气或氮气，改善了色谱峰型及分离度。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1：实施例一的对照品溶液的检测色谱图；
图2：实施例一的供试品溶液的检测色谱图；
图3：实施例一的系统适用性溶液的检测色谱图；
图4：3-氨基-1-金刚烷醇的定位溶液的检测色谱图；
图5：L-脯氨酰胺的定位溶液的检测色谱图；
图6：空白溶剂的检测色谱图；
图7：3-氨基-1-金刚烷醇线性关系图；
图8：L-脯氨酰胺线性关系图。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明：
一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，采用气相色谱法进行检测，其中具体的包括以下步骤：
S1、供试品溶液配制：取本品约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
S2、对照品溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品和L-脯氨酰胺对照品各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg的混合溶液；
S3、系统适用性溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品、L-脯氨酰胺对照品及维格列汀各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg及维格列汀0.1g的混合溶液；
S4、系统适用性溶液的检测：精密量取2μl的系统适用性溶液注入气相色谱仪，按L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的顺序洗脱，记录色谱图；
S5、供试品溶液及对照品溶液的检测：精密量取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图；
S6、含量计算：按外标法以峰面积计算L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的含量。
其中，步骤S1至S3中的溶剂为甲醇及二甲基亚砜的混合物，甲醇及二甲基亚砜的体积比为75:25～85：15，进一步优选的，甲醇与二甲基亚砜的体积比为80：20。
其中，色谱条件为：
色谱柱：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定相的毛细管柱(例如KB-624 30m×0.53mm×3μm；或者TG-624 30m×0.32mm×1.8μm；或者DB-624 60m×0.530mm×3μm)；
柱温：190～200℃；
维持时间：12～20min；
进样口温度：200～250℃；
检测器温度：220～295℃；
柱流量：1～6ml/min；
进样量：1～4μl；
分流比：10：1；
隔垫吹扫流量：5.0mL/min；
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；
其中，进一步优选的色谱条件为：
色谱柱：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷(或极性相近)为固定相的毛细管柱(如KB-624 30m×0.53mm×3μm；或者TG-624 30m×0.32mm×1.8μm；或者DB-624 60m×0.530mm×3μm)；
柱温：190℃；
维持时间：12min；
进样口温度：225℃；
检测器温度：290℃；
柱流量：6ml/min；
进样量：2μl；
分流比：10：1；
隔垫吹扫流量：5.0mL/min
检测器：氢火焰离子化检测器(FID)。
其中，色谱检测中气相色谱仪所使用的载气为氢气与氮气的混合物，进一步优选的，氢气与氮气混合时的体积比为1:1。
其中，该方法的检出时间为12min，该方法中L-脯氨酰胺的定量限位5ng/ml，3-氨基-1-金刚烷醇的定量限为2ng/ml。
实施例一
1仪器与试剂
1.1仪器：气相色谱仪(Thermo Fisher Scientific，型号：Trace1300)、电子分析天平(梅特勒-托利多，型号：XS105)。
1.2试剂：3-氨基-1-金刚烷醇对照品(厂家：河北百灵威超精细材料有限公司，批号：L630S79)、L-脯氨酰胺对照品(厂家：MACKLIN，批号：C10057451)、维格列汀样品(自制，批号：160920)、甲醇(厂家:MACRON，批号:0000190281)、二甲基亚砜(厂家:aladdin，批号:11715093)。
2检测步骤
2.1色谱条件
色谱柱：6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱(具体型号：KB-624 30m×0.53mm×3μm)；柱温：190℃；维持时间：12min；进样口温度：225℃；检测器温度：290℃；柱流量：6ml/min；进样量：2μl；分流比：10：1；隔垫吹扫流量：5.0mL/min；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；载气：氢气与氮气的混合气体，其中，氢气与氮气混合的体积比为1:1。
2.2溶液的配制及检测
S1、供试品溶液配制：取本品约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
S2、对照品溶液配制：分别精密称取取3-氨基-1-金刚烷醇对照品和L-脯氨酰胺对照品各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg的混合溶液；
S3、系统适用性溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品、L-脯氨酰胺对照品及维格列汀各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg及维格列汀0.1g的混合溶液；
S4、系统适用性溶液的检测：精密量取2μl的系统适用性溶液注入气相色谱仪，按L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的顺序洗脱，记录色谱图；
S5、供试品溶液及对照品溶液的检测：精密量取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图；
S6、含量计算：按外标法以峰面积计算L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的含量。
其中，上述步骤中所选溶剂为：甲醇及二甲基亚砜的混合物，其体积比为80:20。
3检测结果
按上述方法，重复进样6次，3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的保留时间和峰面积的RSD分别见表1及表2，对照品溶液的检测色谱图请参见图1，供试品溶液的检测色谱图请参见图2，系统适用性溶液的检测色谱图请参见图3。
实施例二
实施例一与实施例二的不同点在于：(a)色谱条件不同；(b)溶剂配比不同。
其中，色谱条件中具体的不同点为：柱温：195℃；维持时间：16min；进样口温度：200℃；检测器温度：220℃；柱流量：1ml/min；进样量：1μl。
其中，溶剂配比的具体不同点为：甲醇与二甲基亚砜的体积比为75：25。
按实施例一的方法，重复进样6次，3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的保留时间和峰面积的RSD分别见表1及表2。
实施例三
实施例一与实施例三的不同点在于：(a)色谱条件不同；(b)溶剂配比不同。
其中，色谱条件中具体的不同点为：柱温：200℃；维持时间：20min；进样口温度：250℃；检测器温度：295℃；柱流量：4ml/min；进样量：2.5μl。
其中，溶剂配比的具体不同点为：甲醇与二甲基亚砜的体积比为85：15。
按实施例一的方法，重复进样6次，3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的保留时间和峰面积的RSD分别见表1及表2。
表1：3-氨基-1-金刚烷醇色谱检测结果
Figure BDA0002822646570000091
表2：L-脯氨酰胺色谱检测结果
Figure BDA0002822646570000092
由表1及表2可以看出，应用本发明的方法，实施一至实施例三中3-氨基-1-金刚烷醇及L-脯氨酰胺的ARSD的均较小，均满足小于10％的要求(根据中国药典2020版四部通则0861残留溶剂测定法的规定：以外标法测定时，所得待测物峰面积的RSD应不大于10％)，每针样品的检出时间为12min,可见该方法能快速、有效的检测维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的含量。
3评价试验
3.1空白溶剂干扰试验、定位试验、分离度试验
溶剂：甲醇与二甲基亚砜的混合溶液，两者体积比为80：20。
3.1.1 3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液的配制：取3-氨基-1-金刚烷醇约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.1.2L-脯氨酰胺对照品母液的配制：取L-脯氨酰胺约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.1.3 3-氨基-1-金刚烷醇定位溶液的配制：精密量取3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
3.1.4 L-脯氨酰胺定位溶液的配制：精密量取L-脯氨酰胺对照品母液1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
3.1.5系统适用性溶液的配制：取维格列汀约1g，精密称定，置10ml量瓶中，另分别精密量取3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液与L-脯氨酰胺对照品母液各1ml，同置上述量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
3.1.6供试品溶液的配制：取维格列汀约1g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.1.7混合溶液的配制：分别精密量取3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液与L-脯氨酰胺对照品母液各1ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述定位溶液、混合溶液、供试品溶液与空白溶剂各2μl，分别注入气相色谱仪，按实施例一中“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，结果见表3的色谱系统的检测结果及图4至图6。
表3：色谱系统的检测结果
Figure BDA0002822646570000111
试验结果表明：
(1)从检测色谱图(参见图6)中可看出，在该色谱条件下空白溶剂并未在3-氨基-1-金刚烷醇与L-脯氨酰胺峰的保留时间处有特征吸收峰出现，因此空白溶剂对本品的3-氨基-1-金刚烷醇、L-脯氨酰胺测定均无干扰。
(2)系统适用性溶液的出峰顺序为L-脯氨酰胺、3-氨基-1-金刚烷醇，其中L-脯氨酰胺与3-氨基-1-金刚烷醇峰的分离度(请参考表3，实测值为5.57)、拖尾因子及理论板数均较好(分离度最好大于1.5，拖尾因子最好小于1.5，理论板数最好大于5000)，因此可作为本品3-氨基-1-金刚烷醇、L-脯氨酰胺分析方法的色谱系统的评价指标。
(3)定位试验的检测色谱图可知：3-氨基-1-金刚烷醇约3.3分钟出峰(参见图4)，L-脯氨酰胺约2.2分钟出峰(参见图5)。
3.2线性与范围试验
溶剂：甲醇与二甲基亚砜的混合溶液，两者体积比为80：20
3.2.1 L-脯氨酰胺对照品母液的配制：取L-脯氨酰胺对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
3.2.2 3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液的配制：取3-氨基-1-金刚烷醇对照品约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
3.2.3系统适用性溶液的配制：取维格列汀约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，另分别精密量取3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液与L-脯氨酰胺对照品母液各1ml，同置上述量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.2.4 50％线性溶液的配制：分别精密量取L-脯氨酰胺对照品母液与3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液各0.5ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.2.5 80％线性溶液的配制：分别精密量取L-脯氨酰胺对照品母液与3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液各0.8ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.2.6 100％线性溶液的配制：分别精密量取L-脯氨酰胺对照品母液与3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液各1.0ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.2.7 120％线性溶液的配制：分别精密量取L-脯氨酰胺对照品母液与3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液各1.2ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.2.8 150％线性溶液的配制：分别精密量取L-脯氨酰胺对照品母液与3-氨基-1-金刚烷醇对照品母液各1.5ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
精密量取上述溶液各2μl，分别注入气相色谱仪，按实施例一中“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，以浓度为横坐标x，以峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线图，并计算回归方程和相关系数，3-氨基-1-金刚烷醇的线性试验结果见表4及图7，L-脯氨酰胺的线性试验结果见表5及图8。
表4：3-氨基-1-金刚烷醇的线性试验结果
Figure BDA0002822646570000131
表5：L-脯氨酰胺的线性试验结果
Figure BDA0002822646570000132
试验结果表明，3-氨基-1-金刚烷醇(r＝0.9956，R2＝0.9912)和L-脯氨酰胺(r＝0.9966,R2＝0.9933)对照品溶液在50％～150％的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
3.3定量限试验
溶剂：甲醇与二甲基亚砜的混合溶液，两者体积比为80：20。
3.3.1定量限溶液①配制：同“3.2线性与范围试验”项下的50％线性溶液；
3.3.2定量限溶液②配制：精密量取定量限溶液1 1ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.3.3定量限溶液③：精密量取定量限溶液1 1ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.3.4定量限溶液④：精密量取“3.2线性与范围试验”项下的L-脯氨酰胺对照品母液0.5ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液Ⅰ，另取“3.2线性与范围试验”项下的3-氨基-1-金刚烷醇母液0.5ml，置10ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液Ⅱ，另分别精密量取对照品溶液Ⅰ2.5ml与对照品溶液Ⅱ1.0ml，同置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
精密量取溶剂2μl注入气相色谱仪，进样测定，作为空白信噪；接着，精密量取定量限溶液①2μl，注入气相色谱仪，按实施例一中“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，依据色谱峰的峰高，再结合其浓度，以信噪比为10：1时的样品浓度作为定量限浓度，连续进样6次，结果见表6的定量限试验结果。
表6：L-脯氨酰胺与3-氨基-1-金刚烷醇的定量限
Figure BDA0002822646570000141
试验结果表明，该分析方法测定本品3-氨基-1-金刚烷醇、L-脯氨酰胺的专属性强，灵敏度良好，L-脯氨酰胺的定量限为5ng，3-氨基-1-金刚烷醇的定量限为2ng。
3.4准确度试验
溶剂：甲醇与二甲基亚砜的混合溶液，两者体积比为80：20。
3.4.1对照品母液配制：分别精密称取L-脯氨酰胺与3-氨基-1-金刚烷醇对照品各约25mg，置25ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
3.4.2系统适用性溶液配制：取维格列汀约1g，精密称定，置10ml量瓶中，精密量取对照品母液1ml，同置上述量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀；
3.4.3供试品溶液配制：取维格列汀约1g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
3.4.4 50％回收率供试品溶液配制：取维格列汀约2g，精密称定，置20ml量瓶中，精密量取对照品母液1ml，同置上述量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配制三份；
3.4.5 100％回收率供试品溶液：取维格列汀约2g，精密称定，置20ml量瓶中，精密量取对照品母液2ml，同置上述量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配制三份；
3.4.6 150％回收率供试品溶液：取维格列汀约2g，精密称定，置20ml量瓶中，精密量取对照品母液3ml，同置上述量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，同法配制三份；
精密量取上述溶液各2μl，分别注入气相色谱仪，按实施例一中“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，结果见表7及表8。
表7：L-脯氨酰胺对照品回收率试验结果
Figure BDA0002822646570000151
Figure BDA0002822646570000161
表8：3-氨基-1-金刚烷醇对照品回收率试验结果
Figure BDA0002822646570000162
试验结果表明，L-脯氨酰胺平均回收率为103.3％，RSD(％)为2.15，3-氨基-1-金刚烷醇平均回收率为106.8％，RSD(％)为1.23，说明本方法回收率良好，准确度较高。
对比例1至对比例6
对比例1至对比例6为上述实施例一的对比试验，区别在于：对比例1中的溶剂为100％甲醇，对比例2、3、4、5中的溶剂均为甲醇与二甲基亚砜的混合物，其体积比分别为90:10、85:15、75:25、70:30，对比例6中的溶剂为100％二甲基亚砜，其余操作步骤及参数与实施例一相同，每个对比试验均重复进样6次，维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的保留时间和峰面积的RSD见表9、表10。
表9：3-氨基-1-金刚烷醇检测结果
Figure BDA0002822646570000171
表10：L-脯氨酰胺检测结果
Figure BDA0002822646570000172
对比结果表明，在各类溶液配制时，所使用的溶剂采用甲醇与二甲基亚砜的混合物后，由于溶剂的挥发性减弱，无需严格要求进样瓶，简化了操作，同时检测的精密度提高，从表9、表10还可以看出,甲醇及二甲基亚砜的体积比为75:25～85：15时ARSD的值相对较小，效果较好，其中甲醇及二甲基亚砜最佳的体积比为80:20，此时3-氨基-1-金刚烷醇的ARSD为最低值，仅为1.88％，L-脯氨酰胺的ARSD也是最低值，仅为1.52％。
对比例7、对比例8
对比例7、对比例8为上述实施例一的对比试验，区别在于：对比例7使用的载气为氢气、对比例8使用的载气为氮气，其余操作步骤及参数与实施例一相同，每个对比试验均重复进样6次，维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺的保留时间和峰面积的RSD见表11。
表11：色谱系统的检测结果
Figure BDA0002822646570000181
载气改用氢气与氮气的混合气体后，首先降低了单独使用氢气时发生爆炸的危险性，从上述对比结果表明，改用混合气体后由于改善了载气的粘度和扩散常数，从而改善了色谱峰型及分离度。从表11可以看出，实施例一的分离度大于对比例7及对比例8，说明当使用氢气与氮气的混合气体作为载气时，相较于单独使用氢气或氮气具有较好的分离度；实施例一中3-氨基-1-金刚烷醇及L-脯氨酰胺的拖尾因子均小于对比例7及对比例8，说明当使用氢气与氮气的混合气体作为载气时其色谱峰型较好。
以上说明内容仅为本发明较佳实施例，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，采用气相色谱法进行检测。
2.根据权利要求1所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、供试品溶液配制：取本品1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀；
S2、对照品溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品和L-脯氨酰胺对照品各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg的混合溶液；
S3、系统适用性溶液配制：分别精密称取3-氨基-1-金刚烷醇对照品、L-脯氨酰胺对照品及维格列汀各适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含3-氨基-1-金刚烷醇100μg、L-脯氨酰胺100μg及维格列汀0.1g的混合溶液；
S4、系统适用性溶液的检测：精密量取2µl的系统适用性溶液注入气相色谱仪，按L-脯氨酰胺及3-氨基-1-金刚烷醇的顺序洗脱，记录色谱图；
S5、供试品溶液及对照品溶液的检测：精密量取供试品溶液及对照品溶液各2µl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图；
S6、含量计算：按外标法以峰面积计算3-氨基-1-金刚烷醇及L-脯氨酰胺的含量。
3.根据权利要求2所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，步骤S1至S3中的溶剂为甲醇及二甲基亚砜的混合物，甲醇及二甲基亚砜的体积比为75:25～85：15。
4.根据权利要求3所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，甲醇与二甲基亚砜的体积比为80：20。
5.根据权利要求4所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，色谱条件为：
色谱柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；
柱温：190～200℃；
维持时间：12～20min；
进样口温度：200～250℃；
检测器温度：220～295℃；
柱流量：1～6ml/min；
进样量：1～4µl；
分流比：10：1；
隔垫吹扫流量：5.0mL/min；
检测器：氢火焰离子化检测器。
6.根据权利要求5所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，色谱条件为：
色谱柱：6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；
柱温：190℃；
维持时间：12min；
进样口温度：225℃；
检测器温度：290℃；
柱流量：6ml/min；
进样量：2µl；
分流比：10：1；
隔垫吹扫流量：5.0mL/min；
检测器：氢火焰离子化检测器。
7.根据权利要求6所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其中气相色谱仪的载气为氢气与氮气的混合气体。
8.根据权利要求7所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其中氢气与氮气混合的体积比为1:1。
9.根据权利要求8所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，该方法的检出时间为12min。
10.根据权利要求9所述的测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和L-脯氨酰胺含量的方法，其特征在于，该方法中，3-氨基-1-金刚烷醇的定量限为2ng/ml，L-脯氨酰胺的定量限为5ng/ml。
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