CN108689905B - 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途 - Google Patents

一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN108689905B
CN108689905B CN201810519901.XA CN201810519901A CN108689905B CN 108689905 B CN108689905 B CN 108689905B CN 201810519901 A CN201810519901 A CN 201810519901A CN 108689905 B CN108689905 B CN 108689905B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
reaction
stirring
vildagliptin
prolinamide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810519901.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108689905A (zh
Inventor
石晓伟
张恺
陈兴贺
薛娜
郭冉
王亚博
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hebei Medical University
Original Assignee
Hebei Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hebei Medical University filed Critical Hebei Medical University
Publication of CN108689905A publication Critical patent/CN108689905A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108689905B publication Critical patent/CN108689905B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N24/00—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects
    • G01N24/08—Investigating or analyzing materials by the use of nuclear magnetic resonance, electron paramagnetic resonance or other spin effects by using nuclear magnetic resonance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/62—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • High Energy & Nuclear Physics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途。该维格列汀杂质化合物具有式(I)所示的结构，其中，R1为多卤代C1‑C4的低级烷基或CH2R3，R3为包含一个N原子的5‑6元杂环基，该杂环基任选地可以被CN或CONH2取代，该化合物作为有关物质的对照品或标准品，可以用于维格列汀制剂的质量控制中。

Description

一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途。
背景技术
维格列汀(Vildagliptin)是由瑞士诺华公司(Novartis)开发的一类取代的吡咯烷类化合物，是具有选择性、竞争性、可逆的二肽基酶Ⅳ(DPP- Ⅳ)抑制剂。该药物通过与DPP-Ⅳ结合形成DPP-Ⅳ复合物而抑制该酶的活性，在提高GLP-1(胰高血糖素样肽-1)浓度，促使胰岛B细胞产生胰岛素的同时，降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖，且对体重无明显影响。可用来治疗2型糖尿病，无论是单独用药还是和其他抗糖尿病药物联合使用，均能显著降低糖基化血红蛋白水平，具有良好的耐受性且无显著不良反应，是一个具有良好应用前景的糖尿病新药。2007年9月被欧盟批准低剂量用药，在巴西和墨西哥也已经被批准。
维格列汀的化学名称：(S)-1-[[(3-羟基-1-金刚烷基)氨基]乙酰基]-2-氰基四氢吡咯烷，结构式如下所示：
Figure GDA0002421803270000011
分子式为C17H25N3O2，分子量为303.40。
在药物研制和生成过程中，安全性是最重要的研究内容。其中杂质是药物质量研究，安全性研究，质量控制的重点。维格列汀控制的杂质主要为药物生成过程中未反应的原料，生成的中间体，化合物降解杂质和副反应产物。现有研究已经发现多种维格列汀杂质化合物。现有的维格列汀杂质化合物的结构式列于下表：
Figure GDA0002421803270000021
规范地进行杂质的研究，并将其控制在一个安全、合理的限度范围之内，将直接关系到上市药品的质量及安全性。现有的规定对高毒或基因毒性杂质的规定不充足。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途，通过对维格列汀杂质的进一步研究，可以更好地控制维格列汀的质量，提高药品的安全性。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一方面，本发明提供一种式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
Figure GDA0002421803270000022
其中，R1为多卤代C1-C4的低级烷基或CH2R3，R3为包含一个N原子的5-6元杂环基，该杂环基任选地可以被CN或CONH2取代；
R2为CN或CONH2；
优选地，R1为多卤代甲烷或CH2R3，R3为包含一个N原子的5元杂环基，该杂环基任选地可以被CN或CONH2取代；
更优选地，R1为二氯甲烷、三氟甲烷或CH2R3，R3为
Figure GDA0002421803270000031
或
Figure GDA0002421803270000032
进一步优选地，式(I)所示化合物为下式(II)或式(III)的化合物：
Figure GDA0002421803270000033
其中，R1为多卤代C1-C4的低级烷基或CH2R3，R3为包含一个N原子的5-6元杂环基，该杂环基任选地可以被CN或CONH2取代；
优选地，R1为多卤代甲烷或CH2R3，R3为包含一个N原子的5元杂环基，该杂环基任选地可以被CN或CONH2取代；
更优选地，R1为二氯甲烷、三氟甲烷或CH2R3，R3为
Figure GDA0002421803270000034
或
Figure GDA0002421803270000035
最优选地，式(I)所示化合物选自如下的化合物：
Figure GDA0002421803270000036
Figure GDA0002421803270000041
另一方面，当R1为多卤代C1-C4的低级烷基时，式(I)所示化合物的制备方法包括如下步骤：
(1)使L-脯氨酰胺与R1COX或三氟乙酸酐进行反应，以生成式(II) 所示的化合物的步骤
Figure GDA0002421803270000042
(2)任选地，向式(II)所示的化合物中加入三氟乙酸酐，以生成式 (III)所示的化合物的步骤；
Figure GDA0002421803270000043
其中X为卤素。
在上述制备方法中，在步骤(1)中，反应溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃和乙腈中的一种或多种，优选为乙腈(反应物为R1COX)或四氢呋喃 (反应物为三氟乙酸酐)；
在上述制备方法中，在步骤(1)中，反应温度为-10～15℃，优选为 0～10℃；
在上述制备方法中，在步骤(2)中，反应溶剂选自二氯甲烷、N,N- 二甲基甲酰胺和四氢呋喃中的一种或多种，优选为四氢呋喃；
在上述制备方法中，在步骤(2)中，反应温度为-10～15℃，优选为 0～10℃；
在上述制备方法中，在步骤(1)中，R1COX或三氟乙酸酐与L-脯氨酰胺的摩尔比为1～3：1，优选1～1.5：1。
当R1为CH2R3时，式(I)所示化合物的制备方法包括如下步骤：
(1)使L-脯氨酰胺与氯乙酰基氯进行反应，以生成下式的化合物：
Figure GDA0002421803270000051
(2)向步骤(1)得到的化合物中加入三氟乙酸酐；
(3)向步骤(2)得到的产物中添加L-脯氨酰胺进行反应；以及
(4)任选地，向步骤(3)得到的化合物中加入三氟乙酸酐。
在上述制备方法中，在步骤(1)中，反应溶剂选自二氯甲烷、四氢呋喃和乙腈中的一种或多种，优选为乙腈；
在上述制备方法中，在步骤(1)中，反应温度为-10～15℃，优选为 0～10℃；
在上述制备方法中，在步骤(2)和(4)中，反应溶剂选自二氯甲烷、 N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃中的一种或多种，优选为四氢呋喃；
在上述制备方法中，在步骤(2)和(4)中，反应温度为-10～15℃，优选为0～10℃；
在上述制备方法中，在步骤(3)中，反应溶剂选自二氯甲烷、N,N- 二甲基甲酰胺和四氢呋喃中的一种或多种，优选为四氢呋喃；
在上述制备方法中，在步骤(3)中，反应温度为25～65℃，优选为 50～55℃。
在上述制备方法中，在步骤(2)和(4)中，三氟乙酸酐与步骤(1) 得到的化合物或步骤(3)得到的化合物的摩尔比为1～3：1，优选1～1.5： 1。
在一些具体实施方案中，本发明提供了五种具体的化合物，即化合物1、2、3、4、5，其结构及制备过程的反应条件如下：
化合物1，
Figure GDA0002421803270000061
R2＝CN。反应条件：①L-脯氨酰胺，氯乙酰氯，乙腈，0～10℃；②三氟乙酸酐，四氢呋喃，0～10℃；③L-脯氨酰胺，四氢呋喃，50～55℃。
化合物2，
Figure GDA0002421803270000062
R2＝CN。反应条件：①L-脯氨酰胺，氯乙酰氯，乙腈，0～10℃；②三氟乙酸酐，四氢呋喃，0～10℃；③L-脯氨酰胺，四氢呋喃，50～55℃；④三氟乙酸酐，四氢呋喃，0～10℃。
化合物3，R1＝CF3，R2＝CN。反应条件：L-脯氨酰胺，三氟乙酸酐，四氢呋喃，0～10℃。
化合物4，R1＝CHCl2，R2＝CN。反应条件：①L-脯氨酰胺，二氯乙酰氯，乙腈，0～10℃；②三氟乙酸酐，四氢呋喃，0～10℃。
化合物5：R1＝CHCl2，R2＝CONH2。反应条件：L-脯氨酰胺，二氯乙酰氯，乙腈，0～10℃。
在制备本发明的化合物时，其中的反应试剂及反应条件需要特别控制，这样获得的产物的纯度和收率较高。举例来说，在化合物1的制备过程中，发现L-脯氨酰胺与氯乙酰氯反应的溶剂选择很关键，当选择其他溶剂如二氯甲烷或四氢呋喃时，在后处理过程中会出现不能析晶的情况，导致不能通过过滤等操作将产物进行纯化处理；而以乙腈为反应溶剂，反应完毕，滤除无机盐，滤液浓缩至剩余一定体积即可析出固体，收率和纯度较高。
在化合物2的制备过程中，发现L-脯氨酰胺与氯乙酰氯反应得到中间体 -1，如果采用中间体-1继续与一分子的L-脯氨酰反应，会得到一个极性较大的分子，其在有机溶剂中的溶解度较差，不能很好地进行后续的脱水反应，从而导致不能得到化合物2。本专利巧妙地采用先将中间体-1的酰胺键脱水得到中间体-2，中间体-2与L-脯氨酰胺反应得到化合物1，化合物1在有机溶剂中的溶解度较好，其较易通过经脱水反应得到化合物2。
在化合物3的制备过程中，发现L-脯氨酰胺与三氟乙酸酐反应时，其会优先与L-脯氨酰胺五元环上的N反应，而不会将酰胺键脱水。
化合物4和化合物5的制备是由于参与合成维格列汀的原料氯乙酰氯中不可避免会有二氯乙酰氯的存在，因此L-脯氨酰胺会不可避免与二氯乙酰氯发生反应，导致化合物5的生成，化合物5继续参与后续反应会生成化合物4。
再一方面，本发明还提供式(I)所示化合物及其药学上可接受的盐作为有关物质的对照品或标准品，用于维格列汀制剂的质量控制中的用途。
又一方面，本发明还提供了一种检测维格列汀杂质化合物的方法，该检测方法包括采用高效液相色谱法进行检测，其中，所述高效液相色谱法的检测条件包括：
采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
以含20mmol/L磷酸二氢钾水溶液：乙腈＝95：5为流动相A；以含 20mmol/L磷酸二氢钾水溶液：乙腈＝50：50为流动相B进行梯度洗脱，其中，所述梯度洗脱的程序为：
0～25分钟，流动相A：流动相B＝100～75％：0～25％；
25～31分钟，流动相A：流动相B＝75～50％：25～50％；
31～45分钟，流动相A：流动相B＝50～100％：50～0％；
优选地，所述高效液相色谱法的检测条件还包括：检测波长为210nm；柱温为45℃；流速为1.0mL/min。
维格列汀杂质中有机杂质主要包括工艺中引入的杂质和降解产物等，可能是已知的或未知的、挥发性的或不挥发性的。由于这类杂质的化学结构一般与活性成分类似或具渊源关系，故通常又可称之为有关物质，而对于有关物质的控制更显得尤为重要。药品对于人们而言是必不可少的，如何控制药品的安全可靠，成为了今天社会中至关重要的问题，无论监管部门亦或企业都有责任提高药品的质量，随着对药品质量的要求越来越高，药物中杂质研究也变得越来越重要。
本发明通过对维格列汀杂质的详细研究，不仅获得了一类新的杂质，也成功地制备了这些杂质，为维格列汀杂质研究提供了更为全面准确的信息，也为更能精确地控制杂质，从而获得更加安全可靠、疗效确切的维格列汀提供了新的方向。
式(I)所示化合物作为维格列汀杂质检测对照品使用安全提供保证。式(I)所示化合物作为维格列汀杂质检测对照品可确定药物中是否含有上述成分。具体而言，本专利所列化合物可用于维格列汀原料药或制剂中的杂质定位，作为标准品定量分析原料药中相应杂质情况，确定原料药或制剂中是否含有所列化合物及其含量。
本发明还提供了相关化合物的制备方法，只有采用本发明的溶剂及反应条件获得的产品的收率才较高。
本发明还提供了一种检测方法，依据该检测方法可以检测到本发明所述的杂质化合物。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1为化合物1的核磁氢谱；
图2为化合物1的质谱图；
图3为化合物1的液相图；
图4为化合物2的核磁氢谱；
图5为化合物2的质谱图；
图6为化合物2的液相图；
图7为化合物3的核磁氢谱；
图8为化合物3的质谱图；
图9为化合物3的液相图；
图10为化合物5的核磁氢谱；
图11为化合物5的质谱图；
图12为化合物5的液相图；
图13为化合物4的核磁氢谱；
图14为化合物4的质谱图；
图15为化合物4的液相图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
所用仪器：核磁共振(Bruker AVANCE III HD 500)；质谱(LTQ Orbitrap Elite)；液相色谱(Agilent 1260)。
实施例1化合物1的合成
Figure GDA0002421803270000091
2000mL反应瓶中加入80g L-脯氨酰胺、145.3g碳酸钾和1600ml乙腈，搅拌下降温至0～10℃，在2h内滴加102.9g氯乙酰氯和200ml乙腈的混合溶液，0～10℃保温搅拌2h，TLC检测反应完全，过滤，160ml乙腈洗涤。滤液减压浓缩至反应液剩余200～300ml，降温至-5～10℃，保温搅拌 2h，过滤，用80ml冷乙腈洗涤。滤饼40～50℃真空干燥，得中间体-1 107.5g，收率80.5％，纯度97.8％。
2000ml反应瓶中加入100g中间体-1和1000ml四氢呋喃，搅拌下降温至0～10℃，在1h内滴加137.7g三氟乙酸酐和100ml四氢呋喃的混合溶液，保温搅拌1h，TLC检测反应完全。反应液减压浓缩至近干，加入200 ml乙酸乙酯脱带，浓缩至近干后继续浓缩1h。反应液加入600ml乙酸乙酯，降温至15～25℃，慢速加入400ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌10min， pH1～2。用碳酸氢钠固体调节pH值至7～8(碳酸氢钠用去45g左右)，搅拌 0.5h，复测pH，静置分液。有机相保留，水相用200ml乙酸乙酯x 3次萃取。合并有机相加入400ml饱和氯化钠水溶液，搅拌1h，静置分相。有机相加入50g无水硫酸钠和2g活性炭，搅拌0.5h。过滤，50ml乙酸乙酯洗涤滤饼。滤液浓缩至近干，加入80ml乙酸乙酯，加热至40～45℃，搅拌至固体溶解，降温至25～35℃，滴加240ml异丙醚，20～35℃保温搅拌1h，降温至0～5℃保温搅拌1h。过滤，100ml异丙醚洗涤滤饼，滤饼35～45℃真空干燥3h，得中间体-2 75.8g，收率83.8％，纯度99.5％。
250ml反应瓶中加入5g中间体-2、4.0g L-脯氨酰胺、12.0g碳酸钾、 0.25g碘化钾和50mlTHF，搅拌加热至50～55℃，保温搅拌1～2h，TLC检测反应完全。降温至20～30℃，过滤，50mlTHF淋洗滤饼。合并滤液和洗液减压浓缩至近干，得到油状物，加入50ml乙酸乙酯拖带得浅黄色固体，加入60ml乙酸乙酯加热至70～80℃搅拌0.5h，降温至室温，抽滤，20ml 乙酸乙酯淋洗，滤饼45℃真空干燥，得4.6g浅黄色固体化合物1，收率 63.4％，纯度99.0％。
结构确定：
实验所得化合物物理性质测定结果为：
MS正离子：251(M+H)
1H-NMR(CDCl3)：1.89-1.93(m,2H)，1.93-2.03(m,1H)，2.10-2.45(m,5H)， 2.55-2.75(m,1H)，3.25-3.53(m,4H)，3.53-3.77(m,2H)，4.68-4.85(m,1H)， 5.75-6.10(brs,1H)，7.50-7.80(brs,1H)。
所得化合物的核磁氢谱、质谱及液相谱见图1-3。
实施例2化合物2的合成
Figure GDA0002421803270000101
250ml反应瓶中加入2.0g化合物1(由实施例1制备而来)和20mlTHF，搅拌得浅黄色悬浮液。控温0～10℃，滴加2.1g三氟乙酸酐和20ml四氢呋喃的溶液，滴加过程中固体渐溶解，滴加完毕，得浅黄色溶液。保温搅拌 1h，TLC检测反应完全。反应液减压浓缩至近干，加入50ml乙酸乙酯拖带。剩余物中加70ml乙酸乙酯和500ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌10min，pH1～2。用碳酸氢钠固体调节pH值至7～8，搅拌0.5h，复测pH，静置分液。有机相保留，水相用50ml乙酸乙酯萃取。合并有机相加入50ml饱和氯化钠水溶液，搅拌1h，静置分相。有机相加入无水硫酸钠干燥，搅拌 0.5h。过滤，30ml乙酸乙酯洗涤滤饼。滤液浓缩至近干，得油状物1.3g，柱层析得油状物1.1g化合物2，收率52.9％，纯度98.7％。
结构确定：
实验所得化合物物理性质测定结果为：
MS正离子：233(M+H)、255(M+Na)、271(M+Ka)
1H-NMR(CD3OD)：1.85-2.00(m,2H)，2.05-2.20(m,3H)，2.20-2.39(m,3H)， 2.60-2.82(m,1H)，2.88-3.05(m,1H)，3.40-3.67(m,3H)，3.67-3.80(m,1H)， 4.08-4.25(m,1H)，4.55-4.70(m,0.7H)，5.00-5.15(m,0.2H)
所得化合物的核磁氢谱、质谱及液相谱见图4-6。
实施例3化合物3的合成
Figure GDA0002421803270000111
500ml反应瓶中加入20g L-脯氨酰胺和200ml THF，控温至0～10℃，滴加44.2g三氟乙酸酐和50mlTHF的溶液。加毕，保温搅拌1h，TLC检测反应完全。反应液减压浓缩至近干，加入300ml乙酸乙酯和300ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌10min，pH1～2。用碳酸氢钠固体调节pH值至7～8，搅拌0.5h，复测pH，静置分液。有机相保留，水相用300ml乙酸乙酯萃取。合并有机相加入300ml饱和氯化钠水溶液，搅拌1h，静置分相。有机相加入无水硫酸钠干燥，搅拌0.5h。过滤，50ml乙酸乙酯洗涤滤饼。滤液浓缩至近干，加入20ml乙酸乙酯，滴加80ml异丙醚，0～10℃保温搅拌 1h。过滤，20ml异丙醚洗涤滤饼，滤饼35～45℃真空干燥3h，白色固体18.9g化合物3，收率51.4％，纯度99.9％。
结构确定：
实验所得化合物物理性质测定结果为：
MS正离子：211(M+H)、228(M+NH4)、233(M+Na)、249(M+Ka)
1H-NMR(CDCl3)：1.90-2.10(m,2H)，2.15-2.40(m,2H)，3.60-3.90(m,2H)， 4.50-4.70(m,1H)，5.55-5.85(m,1H)，6.30-6.70(m,1H)
所得化合物的核磁氢谱、质谱及液相谱见图7-9。
实施例4化合物5的合成
Figure GDA0002421803270000121
1000ml反应瓶中加入20.0g L-脯氨酰胺、48.4g碳酸钾和400ml乙腈，搅拌下控温至0～10℃，滴加33.6g二氯乙酰氯和40ml乙腈的溶液。加毕， 0～10℃保温搅拌2h，TLC检测反应完全。升温至20～30℃，搅拌0.5h，抽滤，用乙腈洗涤两次，每次30ml。合并滤液和洗液减压浓缩至近干，得油状物，柱层析得油状物16.9g化合物5，收率42.9％，纯度99.6％。
MS正离子：225(M+H)、247(M+Na)
1H-NMR(DMSO)：1.75-1.98(m,3H)，2.02-2.13(m,1H)，3.51-3.60(m,1H)， 3.63-3.75(m,1H)，4.19-4.28(m,1H)，6.91-7.02(m,2H)，7.35-7.45(s,1H) 所得化合物的核磁氢谱、质谱及液相谱见图10-12。
实施例5化合物4的合成
Figure GDA0002421803270000122
500ml反应瓶中加入10g化合物5(由实施例4制备而来)和100ml THF，控温至0～10℃，滴加11.7g三氟乙酸酐和20mlTHF的溶液。加毕，保温搅拌1h，TLC检测反应完全。反应液减压浓缩至近干，加入200ml 乙酸乙酯和200ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌10min，pH1～2。用碳酸氢钠固体调节pH值至7～8，搅拌0.5h，复测pH，静置分液。有机相保留，水相用20ml乙酸乙酯萃取。合并有机相加入200ml饱和氯化钠水溶液，搅拌1h，静置分相。有机相加入无水硫酸钠干燥，搅拌0.5h。过滤，30ml 乙酸乙酯洗涤滤饼。滤液浓缩至近干，得6.9g浅黄色油状物化合物4，收率75.0％，纯度99.8％。
MS正离子：207(M++H)、229(M++Na)、245(M++Ka)
1H-NMR(DMSO)：1.92-2.12(m,2H)，2.12-2.30(m,2H)，3.50-3.65(m,1H)， 3.65-3.78(m,1H)，4.80-4.90(m,1H)，7.02(s,1H)
所得化合物的核磁氢谱、质谱及液相谱见图13-15。
对比例1：中间体-1的合成
Figure GDA0002421803270000131
1000mL反应瓶中加入40g L-脯氨酰胺、72.7g碳酸钾和800ml二氯甲烷，搅拌下控温至0～10℃，在2h内滴加51.5g氯乙酰氯和100ml二氯甲烷的混合溶液，0～10℃保温搅拌2h，TLC检测，L-脯氨酰胺不能反应完全。过滤，80ml二氯甲烷洗涤。滤液减压浓缩至近干，未有固体析出，为浅黄色油状物，需要进一步纯化，弃去。
对比例2：中间体-1的合成
Figure GDA0002421803270000132
1000mL反应瓶中加入40g L-脯氨酰胺、72.7g碳酸钾和800ml乙腈，搅拌下控温至25～30℃，在2h内滴加51.5g氯乙酰氯和100ml乙腈的混合溶液，20～25℃保温搅拌2h，TLC检测，L-脯氨酰胺不能反应完全。过滤， 80ml乙腈洗涤。滤液减压浓缩至反应液剩余100～150ml，降温至-5～10℃，保温搅拌2h，过滤，用40ml冷乙腈洗涤。滤饼40～50℃真空干燥，得中间体-1 11.8g，收率17.7％，纯度86.2％。
对比例3：化合物1的合成
250ml反应瓶中加入5g中间体-2、4.0g L-脯氨酰胺、12.0g碳酸钾、 0.25g碘化钾和50mlTHF，搅拌下控温至25～30℃，保温搅拌15h，TLC 检测反应完全。过滤，50mlTHF淋洗滤饼。合并滤液和洗液减压浓缩至近干，得到油状物，加入50ml乙酸乙酯拖带得浅黄色固体，加入60ml乙酸乙酯加热至70～80℃搅拌0.5h，降温至室温，抽滤，20ml乙酸乙酯淋洗，滤饼45℃真空干燥，得5.0g浅黄色固体化合物1，收率69.0％，纯度99.3％。
对比例4：化合物3的合成
500ml反应瓶中加入15g L-脯氨酰胺和150ml THF，控温至20～30℃，滴加36.8g三氟乙酸酐和30mlTHF的溶液。加毕，保温搅拌1h，TLC检测反应完全。反应液减压浓缩至近干，加入250ml乙酸乙酯和250ml饱和碳酸氢钠水溶液，搅拌10min，pH1～2。用碳酸氢钠固体调节pH值至 7～8，搅拌0.5h，复测pH，静置分液。有机相保留，水相用250ml乙酸乙酯萃取。合并有机相加入250ml饱和氯化钠水溶液，搅拌1h，静置分相。有机相加入无水硫酸钠干燥，搅拌0.5h。过滤，35ml乙酸乙酯洗涤滤饼。滤液浓缩至近干，加入15ml乙酸乙酯，滴加50ml异丙醚，0～10℃保温搅拌1h。过滤，10ml异丙醚洗涤滤饼，滤饼35～45℃真空干燥3h，白色固体13.5g化合物3，收率36.7％，纯度95.2％。
对比例5：化合物5的合成
Figure GDA0002421803270000151
1000ml反应瓶中加入20.0g L-脯氨酰胺、48.4g碳酸钾和400ml乙腈，搅拌下控温至30～35℃，滴加33.6g二氯乙酰氯和40ml乙腈的溶液。加毕， 30～35℃保温搅拌2h，TLC检测，L-脯氨酰胺不能反应完全。抽滤，用乙腈洗涤两次，每次30ml。合并滤液和洗液减压浓缩至近干，得3.5油状物， TLC检测目标物较少，弃去。
实施例6化合物的生物活性测试
实验用材：昆明小鼠(河北医科大学实验动物中心)、维格列汀(河北仁合益康药业有限公司)、雅培利舒坦血糖试纸(美国Abbott Diabetes Care公司)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)、实验室血液离心机(西安超杰仪器设备有限公司)
化合物1～5的生物活性测试由河北医科大学医学院药理测试中心通过降糖靶点通用的小鼠内口服糖耐量模型实验测定，化合物1～5和维格列汀样品以质量分数为2％的CMC-Na混合制成0.1mg/mL的悬浮液，给药量为每10g体重给予0.2mL，相当于2mg/kg的剂量。选择体重20～25g的健康小鼠，雌雄各半，禁食12h，化合物1～5和维格列汀阳性对照药给药后的2h腹腔注射3g/kg的葡糖糖水溶液。分别在1h、2h、3h、4h和5h 定时在小鼠球后静脉丛采血，离心分离血清，用葡糖糖氧化酶法测定各时间点血清葡萄糖含量。通过抑制率来衡量化合物的降糖活性。
Figure GDA0002421803270000152
其中，AUC为“血糖浓度-时间”曲线的曲线下面积；AUC(样品)为化合物1～5各个化合物的AUC值，AUC(对照)为维格列汀的AUC值。化合物1～5的抑制率如下表：
Figure GDA0002421803270000161
生物活性测试采用小鼠体内口服糖耐量模型实验测定，对化合物1～5 分别进行降血糖的实验，降糖结果显示：化合物1～5均无明显降低血糖的作用。
实施例7化合物的毒性测试
采用一次最大限量给药法评价化合物1～5的小鼠经口毒性，实验结果表明：化合物1～3的雄性、雌性小鼠经口LD50(半数致死量)分别为1.95、2.21、 2.56g/kg b.w.，均属于低毒级别；化合物4和5的雄性、雌性小鼠经口LD50 (半数致死量)分别为0.57、0.70g/kgb.w，属于中等毒性。化合物1～5的毒性属于低毒或中等毒性，因此，需要从维格列汀产品中将其除去，否则会对人体带来副作用。
实施例8本发明的化合物的检测方法
照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含20mmol/L磷酸二氢钾水溶液(20％氢氧化钾调pH为6.55)：乙腈＝95：5为流动相A；以含20mmol/L磷酸二氢钾水溶液(20％氢氧化钾调pH为6.55)：乙腈＝50：50为流动相B；按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为210nm，流速为1.0mL/min，柱温45℃。
Figure GDA0002421803270000162
Figure GDA0002421803270000171
最开始方法选择时采用甲醇-乙腈-磷酸二氢钾三相色谱系统进行梯度洗脱，发现该方法分离度较差，导致某些杂质不能完全分离，且基线噪音干扰杂质检出，故通过调节柱温、改变流动相pH、变更流动相比例等方法，调整液相色谱条件，保证杂质灵敏度同时，使各杂质及主峰能够达到基线分离。
具体摸索过程如下：
(1)流动相的选择
采用三相色谱系统(甲醇-乙腈-磷酸二氢钾)进行梯度洗脱，根据实验结果显示，基线波动较大，噪音较高，干扰杂质检出，故将流动相系统改为乙腈-磷酸二氢钾，噪音明显降低。
(2)磷酸二氢钾水溶液浓度的选择
通过考察不同磷酸二氢钾浓度(10、20、30和40mmol/L)，结果表明，当磷酸二氢钾为20mmol/L时，杂质灵敏度最高。故确定磷酸二氢钾的浓度选择20mmol/L。
(3)波长的选择
通过在190～400nm下进行全波长扫描，发现在210nm波长下维格列汀有最大吸收，且各杂质的响应值较高，故为了兼顾维格列汀和杂质的检出，选择210nm波长作为检测波长。
(4)柱温的选择
通过对不同柱温30、35、40、45和50℃的考察，实验结果表明，柱温在30～40℃时，由于某些杂质极性较小，导致保留时间较长，检出能力降低；通过调整柱温至45和50℃，能缩短杂质的保留时间，保证杂质分离度。当柱温为50℃时，柱温较高可能会损坏色谱柱，因此，我们选择 45℃为较好的柱温条件。

Claims (8)

1.下式所示的化合物：
Figure FDA0002421803260000011
2.一种权利要求1所述的化合物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
(1)使L-脯氨酰胺与氯乙酰基氯进行反应，以生成下式的化合物：
Figure FDA0002421803260000012
(2)向步骤(1)得到的化合物中加入三氟乙酸酐；
(3)向步骤(2)得到的产物中添加L-脯氨酰胺进行反应；以及
(4)任选地，向步骤(3)得到的化合物中加入三氟乙酸酐；
在步骤(1)中，反应溶剂为乙腈，反应温度为-10～15℃；
在步骤(2)和(4)中，反应溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃中的一种或多种，反应温度为-10～15℃；
在步骤(3)中，反应溶剂选自二氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃中的一种或多种，反应温度为50～55℃；
在步骤(2)和(4)中，三氟乙酸酐与步骤(1)得到的化合物或步骤(3)得到的化合物的摩尔比为1～3：1。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，反应温度为0～10℃。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)和(4)中，反应溶剂为四氢呋喃。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)和(4)中，反应温度为0～10℃。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，反应溶剂为四氢呋喃。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)和(4)中，三氟乙酸酐与步骤(1)得到的化合物或步骤(3)得到的化合物的摩尔比为1～1.5：1。
8.权利要求1所述化合物作为有关物质的对照品或标准品，用于维格列汀制剂的质量控制中的用途。
CN201810519901.XA 2017-12-27 2018-05-28 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途 Active CN108689905B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711456050 2017-12-27
CN2017114560500 2017-12-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108689905A CN108689905A (zh) 2018-10-23
CN108689905B true CN108689905B (zh) 2020-07-28

Family

ID=63846866

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810519901.XA Active CN108689905B (zh) 2017-12-27 2018-05-28 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108689905B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2803455C1 (ru) * 2019-11-06 2023-09-13 Юхань Корпорейшн Пирролидиновые и пиперидиновые соединения

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109776372A (zh) * 2019-01-18 2019-05-21 珠海联邦制药股份有限公司 维格列汀有关物质及其制备方法
CN109827984B (zh) * 2019-02-27 2022-05-17 南京江北新区生物医药公共服务平台有限公司 一种测定l-脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法
CN114867719A (zh) * 2019-11-06 2022-08-05 柳韩洋行 吡咯烷和哌啶化合物
CN111122719B (zh) * 2019-12-12 2022-06-17 杭州民生药物研究院有限公司 一种二甲双胍维格列汀片杂质的分离检测方法
CN111141845A (zh) * 2019-12-30 2020-05-12 卓和药业集团有限公司 维格列汀的分析检测方法
CN112394127B (zh) * 2020-12-08 2022-05-10 海南通用三洋药业有限公司 一种测定维格列汀中3-氨基-1-金刚烷醇和l-脯氨酰胺含量的方法
CN115124435A (zh) * 2021-03-25 2022-09-30 扬子江药业集团有限公司 一种阿片类化合物及其制备方法和用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4206041A1 (de) * 1992-02-27 1993-09-02 Bayer Ag Sulfonylbenzyl-substituierte imidazolylpropensaeurederivate
CN105884669B (zh) * 2014-09-15 2020-05-15 深圳翰宇药业股份有限公司 制备取代的(s)-吡咯烷-2-甲腈及维格列汀的方法
CN104817482B (zh) * 2015-03-17 2017-05-10 宁波百思佳医药科技有限公司 2‑取代吡咯烷类化合物、制备方法及其在制备维格列汀中的应用
CN106699627A (zh) * 2016-12-29 2017-05-24 青岛黄海制药有限责任公司 一种多相复式非连续生产法制备1‑(2‑氯乙酰基)‑2‑(s)‑氰基吡咯烷的方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2803455C1 (ru) * 2019-11-06 2023-09-13 Юхань Корпорейшн Пирролидиновые и пиперидиновые соединения

Also Published As

Publication number Publication date
CN108689905A (zh) 2018-10-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108689905B (zh) 一种维格列汀杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途
CN106188139B (zh) 替诺福韦单苄酯磷酸酰胺前药、其制备方法及应用
US8796279B2 (en) 4′-demethylepipodophyllotoxin derivative, preparation method and use thereof
CN114805478A (zh) 氘代拟肽类化合物及其用途
JP2023543729A (ja) 環修飾プロリンショートペプチド化合物及びその使用
CN103012430A (zh) 美洛西林钠化合物及其药物组合物
CN114591315A (zh) 一种组织蛋白酶c小分子抑制剂
CN105001195B (zh) R(+)‑硫辛酸‑l‑赖氨酸盐的新晶型及其制备方法
CN110372557B (zh) 环己烷胺类d3/d2受体部分激动剂
CN112920064A (zh) 一种沙丁胺醇杂质化合物及其制备方法、检测方法和用途
JP4566128B2 (ja) イリノテカン塩酸塩の結晶多形の製造方法
CN109400577B (zh) 利伐沙班有关化合物及其制备方法和用途
EA015269B1 (ru) Моносоль малеиновой кислоты антивирусного агента и содержащая ее фармацевтическая композиция
CN110540542A (zh) 一种苯乙酸类化合物的钠盐、结晶形式及其制备方法
CN113004244A (zh) 一种曲格列汀杂质及其制备方法和用途
WO2015179759A1 (en) Nampt inhibitors and methods
CN104844604B (zh) 一种别嘌醇钠的制备方法
CN108929269B (zh) 苄异喹啉类非去极化肌松剂及其制备方法和用途
CN111909174A (zh) 吡啶酮衍生物的晶型及制备方法和应用
CN108912018B (zh) 一种用于合成舒必利的关键中间体中杂质化合物的制备方法及其用途
CN113264863A (zh) 一种高手性纯度(s)-1-(2-氯乙酰基)吡咯烷-2-甲腈的制备方法
CN107056753B (zh) 一种兰索拉唑粗品精制方法
US10221185B2 (en) Crystal form of substituted aminopyran derivativek
CN106977561B (zh) Sutherlandin-5-p-hydroxybenzoate的制备及其在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用
CN114380834B (zh) 一种酮咯酸衍生物及制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant