CN112393961A - 一种消化染色液及结晶紫染色细胞核计数方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种消化染色液及结晶紫染色细胞核计数方法。针对现有技术在片状载体贴壁培养模式中胰酶消化液消化时间不易控制，且即使消化后的细胞也不能完全脱离网状空间的问题，本发明的技术方案是：提供一种消化染色液，其是包括结晶紫、柠檬酸与曲拉通X‑100的混合溶液。结晶紫染色细胞核计数方法包括如下步骤：(1)将载有细胞的载体与所述的消化染色液混合，进行染色和消化，得到染色液；(2)对染色液进行细胞核计数。本发明还提供曲拉通X‑100在细胞核计数过程中用于消化贴壁细胞的用途。本发明方法能够减少消化过程中时间过长导致的细胞受损甚至死亡的现象，从而提高细胞计数的准确性。
Description
技术领域
本发明生物化学技术领域，具体涉及一种消化染色液及结晶紫染色细胞核计数方法。
背景技术
目前，市场上主流疫苗厂家的细胞、病毒大规模培养，普遍采用微载体生物反应器、片状载体生物反应器、转瓶或者细胞工厂等培养方式。在固定床生物反应器中，片状载体被固定在一个篮子形状的区域，搅拌桨置于中间空腔，不与细胞直接接触，桨叶的转动使培养液通过载体装载区向上流动，并从中间空腔回流到底部，形成回路，通氧、pH调节均在中间空腔进行。固定床(片状载体)生物反应器培养的结构如图1所示。此类固定床生物反应器，搅拌系统不与细胞直接接触，对细胞的剪切力小；细胞完全处于液面以下，减少液面产生的泡沫对细胞的损伤；通气、pH调节在中间空腔进行，因为通气产生的气泡也在空腔，不会进入细胞载体区域，避免了气泡对细胞的损伤。因此固定床生物反应器在贴壁细胞大规模培养中的运用越来越广泛。
在应用固定床生物反应器培养细胞的过程中，为了了解细胞生长的阶段和生长的状态，需要通过细胞计数的方式实时对固定床生物反应器中的细胞密度进行检测。
现有技术中，对细胞悬液的计数方法非常地成熟和简便，因而在对贴壁的细胞进行计数时，需要先把贴壁生长的细胞制备成细胞悬液，然后进行细胞计数，可使用血小板或全自动细胞计数多种计数方式。该方法的关键就是确保生长的细胞都能被消化制备成细胞悬液。现有技术通常使用胰酶消化液或类似重组消化液进行细胞消化后计数，采用胰酶消化或重组消化液消化的缺点在于消化时间长短难以控制，时间过短不能完全消化，而如果消化时间过长又会导致细胞受损甚至死亡，对于常规的细胞悬液计数方法(例如电容法)，细胞死亡会影响计数的结果。此外，对于贴壁在网状空间中(如片状载体)细胞，由于空间结构导致即使消化后的细胞也不能完全脱离网状空间。这进一步导致了采用胰酶消化液或重组消化液的细胞计数方法准确性欠佳。
可见，目前对于固定床生物反应器中贴壁细胞的计数，由于消化液的缺陷影响了技术结果的准确性。
发明内容
针对现有技术中由于消化液的缺陷影响了技术结果的准确性的问题，本发明提供一种消化染色液及结晶紫染色细胞核计数方法，其目的在于：通过选用传统的细胞核计数方法中采用的传统消化染色试剂，并创新性地加入柠檬酸，有效提高了对固定床生物反应器中贴壁细胞的细胞计数的准确性。
一种消化染色液，其是包括结晶紫、柠檬酸与曲拉通X-100的混合溶液。
优选的，其是溶解有如下组分的水溶液：
结晶紫1.00～1.5g/L；
柠檬酸20～21.00g/L；
曲拉通X-100 0.5～1.00ml/L。
本发明还提供一种结晶紫染色细胞核计数方法，包括如下步骤：
(1)将载有细胞的载体与上述消化染色液混合，进行染色和消化，得到染色液；
(2)对步骤(1)得到的染色液进行细胞核计数。
优选的，步骤(1)所述染色和消化的过程为在37±1℃下加热30～35min。
优选的，加热过程中每10～15min对体系进行摇晃。
优选的，步骤(2)所述细胞核计数的过程为将所述染色液稀释10倍后在显微镜下计数。
优选的，步骤(1)中所用载体的数量为10片，消化染色液的体积为10ml；步骤(2)中所述显微镜下计数的方法为在显微镜下观察计数板8个大方格中的细胞核并计数，细胞密度的计算公式为：
式中:X为8大方格中的细胞核总数，Z为每克载体的片数，Y为培养容器中载体总重量，V为培养容器的体积。
优选的，计数时与大方格边线重合的细胞核遵循横线上的细胞核计入下方大方格，竖线上的细胞核计入右边大方格的原则。
优选的，载体为片状载体。
本发明还提供曲拉通X-100在细胞核计数过程中用于消化贴壁细胞的用途。
本申请通过曲拉通X-100、柠檬酸与结晶紫形成具有消化和染色作用的混合溶液，同时对贴壁细胞进行消化和细胞核染色。其中，曲拉通X-100和柠檬酸共同对贴壁细胞进行消化，使得细胞裂解释放出细胞核，同时通过结晶紫对细胞核进行染色，对染色的细胞核进行计数而得到细胞密度。本申请的技术方案中，不再是将贴壁的细胞消化后直接对细胞进行计数，而是采用曲拉通X-100破坏细胞后对细胞核进行染色和计数。因而本申请的技术方案中，不必再考虑消化时间过长而导致细胞受损死亡的情况对细胞计数结果的影响，切能够完全裂解贴壁细胞，使得细胞核充分释放出来与染色分子接触。
此外，本申请的优选方案中，在消化和染色的过程中不断摇晃体系，能够使消化的细胞离开载体形成的网状空间，减少载体阻碍细胞进入上层液体导致的细胞计数误差。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1固定床(片状载体)生物反应器的结构示意图；
图2为结晶紫染色细胞核计数结果与电容法在线细胞计数线性关系曲线。
具体实施方式
为了进一步说明本发明的技术方案，下面通过具体的实施例进行说明。
实施例1
本实施例所用消化染色液配方如下：
结晶紫1.00g/L；
柠檬酸21.00g/L；
曲拉通X-100 1.00ml/L。
进行细胞计数的具体过程为：
1)提前在水浴锅内加适量注射用水，接通电源，设置温度37℃。
2)待水浴锅温度达到37℃后，将结晶紫染色液置于水浴锅内，预热30min。
3)取样细胞培养后的片状载体10片置于50ml离心管内，加入上述消化染色液10ml，摇匀，置于水浴锅内，37℃水浴30min，每10min取出用力摇晃一次。
4)步骤3)完成后，取离心管中染色液1ml加入9ml水进行10倍稀释，摇匀。
5)取稀释后的染色液滴加至细胞计数板上，在显微镜下观察计数板8个大方格中的细胞核并计数，计数时在方格边线上的细胞核遵循“计上不计下，计左不计右”原则。
6)显微镜下观察计数后，对记得的数据进行处理，得出细胞密度。
细胞密度的计算公式为：
式中:X为8大方格中的细胞核总数，Z为每克载体的片数，Y为培养容器中载体总重量，V为培养容器的体积。
为了验证本发明方法的准确性，将本实施例方法的计数结果与电容法在线细胞计数的结果进行对比。电容法在线细胞计数的具体过程为：
1)测试固定床生物反应器中两个内电极之间的电容值P；
2)通过如下公式计算得到固定床生物反应器中的细胞密度N：
N＝KP，
式中：根据所采用的固定床生物反应器的规格，K的取值为1.0×105。
在固定床生物反应器接种阶段，细胞接种贴壁完成后，取出部分载体，使用本实施例方法进行细胞计数，同时记录电容法在线细胞计数数据。此后，每日取样进行结晶紫染色细胞核法计数并记录电容法在线细胞计数数据。
结果如下表所示：
表1结晶紫染色细胞核计数与电容法在线细胞计数结果对比表
对电容法在线细胞计数法和本实施例计数方法得到的两组细胞密度数据做统计学分析，两者呈典型的正相关关系，其线性关系如图2所示，其相关系数R2＝0.9828，且两组数据差别较小，证明发明的结晶紫染色细胞核计数方法准确可靠。
实施例2
本实施例的测试过程与实施例1相同，区别在于本实施例所用消化染色液配方如下：
结晶紫1.50g/L；
柠檬酸20.00g/L；
曲拉通X-100 1.50ml/L。
对比例1
本对比例的测试过程与实施例1相同，区别在于本实施例所用消化染色液配方如下：
结晶紫1.50g/L；
曲拉通X-100 1.50ml/L。
结果如下表所示：
表2不使用柠檬酸的结晶紫染色细胞核计数与电容法在线细胞计数结果对比表
该配方消化后的计数结果明显低于电容法在线细胞计数的结果，即明显低于真实值。在此基础上补充实验，将原消化时间由30min提升至50min后，结果如下表所示：：
表2不使用柠檬酸的结晶紫染色细胞核计数与电容法在线细胞计数结果对比表
结果表明，将消化时间延长到50min后，细胞核染色计数法的计数结果数值升高。通过对比例的实验数据可知，在没有柠檬酸的配方中，需要更长时间的消化才能保证细胞核染色计数结果的准确性。这说明柠檬酸是本发明配方中必要的组分，本发明配方通过三种组分的配合，用于染色计数具有非常优良的效果。
通过上述实施例可以看到，本发明提供的技术方案能够解决现有技术中胰酶消化剂消化时间难以掌握的问题，柠檬酸和曲拉通X-100共同作用下能够在30min的消化时间下完成对贴壁细胞的消化。且根据本发明方法技术得到的细胞计数结果准确可靠。
Claims (10)
1.一种消化染色液，其特征在于，其是包括结晶紫、柠檬酸与曲拉通X-100的混合溶液。
2.按照权利要求2所述的一种消化染色液，其特征在于，其是溶解有如下组分的水溶液：
结晶紫1.00～1.5g/L；
柠檬酸20～21.00g/L；
曲拉通X-100 1.00～1.5ml/L；
优选的，其是溶解有如下组分的水溶液：
结晶紫1.00g/L；
柠檬酸21.00g/L；
曲拉通X-100 1.00ml/L。
3.一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将载有细胞的载体与权利要求1或2所述的消化染色液混合，进行染色和消化，得到染色液；
(2)对步骤(1)得到的染色液进行细胞核计数。
4.按照权利要求3所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：步骤(1)所述染色和消化的过程为在37±1℃下加热30～35min。
5.按照权利要求4所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：所述加热过程中每10～15min对体系进行摇晃。
6.按照权利要求3所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：步骤(2)所述细胞核计数的过程为将所述染色液稀释10倍后在显微镜下计数。
7.按照权利要求6所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：步骤(1)中所用载体的数量为10片，消化染色液的体积为10ml；步骤(2)中所述显微镜下计数的方法为在显微镜下观察计数板8个大方格中的细胞核并计数，细胞密度的计算公式为：
细胞密度
式中:X为8大方格中的细胞核总数，Z为每克载体的片数，Y为培养容器中载体总重量，V为培养容器的体积。
8.按照权利要求7所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：计数时与大方格边线重合的细胞核遵循横线上的细胞核计入下方大方格，竖线上的细胞核计入右边大方格的原则。
9.按照权利要求3-8任一项所述的一种结晶紫染色细胞核计数方法，其特征在于：所述载体为片状载体。
10.曲拉通X-100在细胞核计数过程中用于消化贴壁细胞的用途。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113564051A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-10-29 | 广东乾晖生物科技有限公司 | 促细胞团消化解离液及细胞计数方法 |
| CN114544468A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-27 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 一种用于固定床生物反应器中的电容法细胞计数方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008212066A (ja) * | 2007-03-05 | 2008-09-18 | Juntendo | 染色組織標本の陽性細胞の計数方法 |
| US20110229879A1 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | University Of Rochester | Methods and compositions for nuclear staining |
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2020
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008212066A (ja) * | 2007-03-05 | 2008-09-18 | Juntendo | 染色組織標本の陽性細胞の計数方法 |
| US20110229879A1 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | University Of Rochester | Methods and compositions for nuclear staining |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ANDY A.LIN ET AL.: "A rapid method for counting cell nuclei using a particle sizer/counter", 《BIOTECHNOLOGY TECHNIQUES》 * |
| 李树民等: "一种改良的细胞计数方法", 《动物学杂志》, pages 37 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113564051A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-10-29 | 广东乾晖生物科技有限公司 | 促细胞团消化解离液及细胞计数方法 |
| CN114544468A (zh) * | 2022-02-25 | 2022-05-27 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 一种用于固定床生物反应器中的电容法细胞计数方法 |
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