CN112379018B - 利拉列汀起始物料a中3-甲基黄嘌呤的检测方法 - Google Patents

利拉列汀起始物料a中3-甲基黄嘌呤的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物检测技术领域,具体涉及一种利拉列汀起始物料A中3‑甲基黄嘌呤的检测方法。本发明采用液相色谱法检测法来检测3‑甲基黄嘌呤类物质,步骤如下:(1)供试品溶液的制备:取起始物料A,精密称量,加流动相溶解并稀释;(2)对照品溶液的制备:取3‑甲基黄嘌呤对照品溶液,精密称定,加流动相溶解并稀释;(3)检测。本发明通过重复性实验RSD为1.75%;中间精密度为1.15%;3‑甲基黄嘌呤在0.001~0.242mg/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系;对于溶液稳定性考察试验,结果表明,供试品溶液室温放置8小时,溶液稳定性良好;当定量限浓度为0.032ng/µl时,检测限为0.011ng/µl。对于浓度为50%、80%、100%的样品进行回收,其平均回收率为99.8%,RSD为1.3%。

Description

利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法
技术领域
本发明属于药物检测技术领域,具体涉及一种利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法。
背景技术
利拉列汀的起始物料A的名称为8-溴-3-甲基黄嘌呤,结构如下所示。3-甲基黄嘌呤为8-溴-3-甲基黄嘌呤的起始物料,其文献报道比较少。
Figure BDA0002759601610000011
本发明人经过检索,查询到一篇相关的文献,刘晖等人在《药品鉴定》中的《高效液相法测定母液中的3-甲基黄嘌呤的含量》一文中,建立了母液中3-甲基黄嘌呤含量的测定方法,采用高效液相色谱法,分析柱为C18色谱柱,进行等度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长273nm,柱温为35度,结果表明3-甲基黄嘌呤浓度在100-800mg/L的范围内呈现良好的线形关系,实验有良好的精密度,其RSD为0.21%,平均回收率为98.38,RSD为0.29%。该方法可以用于生产母液中3-甲基黄嘌呤的含量测定。
以上的方法是针对于母液中的3-甲基黄嘌呤所进行的检测,而关于利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法鲜有文献披露。
发明内容
为了解决上述的技术问题,为了更好的控制起始物料A的质量,本发明提供了一种检出率高、简便精确的检测方法。
由于未见有报道利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法,因此,本发明人根据产品特性,为了抑制系统中样品的解离,确保所选的色谱条件较为稳定,初步选定采用色谱法进行检测,试验结果显示采用该检测方法可行,各组分间分离度良好,并能将杂质有效检出。
本发明的方法如下:
检测利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的方法,是通过采用液相色谱法检测法来检测3-甲基黄嘌呤所进行的,其检测的条件如下:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱;
流动相:0.02mol/L的磷酸二氢钾:甲醇:乙腈=60:20:20;
流速:1.0ml/min;
柱温:55℃;
检测波长:218nm;
主峰理论塔板数不低于4000。
上述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.4~2.6。
上述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.5。
优选的,上述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法,包括以下的步骤:
(1)供试品溶液的制备:取起始物料A,精密称量,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液;
(2)对照品溶液的制备:取3-甲基黄嘌呤对照品溶液,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液;
(3)采用高效液相色谱法检测,检测的条件如下:
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱;流动相为0.02mol/L的磷酸二氢钾:甲醇:乙腈=60:20:20;流速:1.0ml/min;柱温:55℃;检测波长:218nm;主峰理论塔板数不低于4000;
测定:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μL,注入液相色谱仪,测定,记录30-40min的色谱图,即得。
本发明的有益效果在于:操作简便;精密度高,专属性强;测定结果准确可靠,经验证适合该产品的质量控制与检测。
本发明中,通过重复性实验,结果表明,RSD为1.75%;中间精密度为1.15%;3-甲基黄嘌呤在0.001~0.242mg/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系;对于溶液稳定性考察试验,结果表明,供试品溶液室温放置8小时,溶液稳定性良好;
当定量限浓度为0.032ng/μl时,检测限为0.011ng/μl。
对于浓度为50%、80%、100%的样品进行回收,其平均回收率为99.8%,RSD为1.3%。
附图说明
图1为3-甲基黄嘌呤专属性检查HPLC图谱;
图2为3-甲基黄嘌呤检查线性试验结果。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明,现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
实施例1
实验材料的处理:
(1)供试品溶液的制备:取起始物料A适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液;
(2)对照品溶液的制备:取3-甲基黄嘌呤对照品溶液,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液;
(3)采用液相色谱法进行检测,HPLC检测条件如下:
色谱柱:安捷伦C18(250mm×4.6mm,5μm)
流动相A:水
流动相B:甲醇
等度洗脱:流动相A:流动相B(60:40);流动相1.0ml/min,柱温:35℃,进样体积:5μl,检测波长:218nm。
结果:主峰无保留,空白干扰检测,需优化。
实施例2
采用液相色谱法进行检测,HPLC检测条件如下:
色谱柱:安捷伦C18(250mm×4.6mm,5μm)
流动相A:0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)
流动相B:甲醇
等度洗脱:流动相A:流动相B(40:60);流动相1.0ml/min,柱温:35℃,进样体积:5μl,检测波长:218nm。
结果:主峰保留时间在7min左右,但峰型较差,再优化。
实施例3
采用液相色谱法进行检测,HPLC检测条件如下:
色谱柱:安捷伦C18(250mm×4.6mm,5μm)
流动相A:0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)
流动相B:甲醇:乙腈(50:50)
等度洗脱:流动相A:流动相B(40:60);流动相1.0ml/min,柱温:35℃,进样体积:5μl,检测波长:218nm。
结果:主峰与3-甲基黄嘌呤杂质峰分离度不好,再优化。
实施例4
采用液相色谱法进行检测,HPLC检测条件如下:
色谱柱:安捷伦C18(250mm×4.6mm,5μm)
流动相0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5):甲醇:乙腈(60:20:20)
等度洗脱;流动相1.0ml/min,柱温:55℃,进样体积:5μl,检测波长:218nm。
通过分析,结果表明:主峰与3-甲基黄嘌呤杂质峰分离良好,且杂质峰能有效检出,可以作为利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法。
实施例5
以下为本发明起始物料A中杂质3-甲基黄嘌呤的检测条件进行了考察和筛选,具体如下:
色谱条件选择,由于3-甲基黄嘌呤不溶于水,且考虑起始物料A8-溴-3-甲基黄嘌呤本身的溶解情况,检测条件不断筛选后最终选用0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5):甲醇:乙腈(60:20:20)作为流动相,Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)作为色谱柱,流速1.0ml/min,柱温55℃,杂质峰与主峰之间均达到良好的分离,暂定此方法作为起始物料A中杂质3-甲基黄嘌呤的检测方法。
检测方法确定后,进行验证以确认方法的准确性等。
(1)专属性
对照品溶液的制备:取3-甲基黄嘌呤对照品,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液;
供试品溶液的制备:取起始物料A适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液;
分别取空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,结果见图1,空白溶剂不干扰3-甲基黄嘌呤及起始物料A的出峰情况,且两者分离度良好,可有效准确检出。证明本发明检测方法的专属性较强。
(2)精密度试验
①重复性
取3-甲基黄嘌呤对照品适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液,作为对照品溶液。精密量取5μl注入液相色谱仪,记录色谱图,重复测定6次,结果如下:
表1 3-甲基黄嘌呤检查重复性试验结果
Figure BDA0002759601610000071
②中间精密度
改变分析日期、人员及设备后,溶液按“①重复性试验”配制方法制备供试品溶液,精密量取5μl注入液相色谱仪,记录色谱图,连续测定6次,结果如下:
表2 3-甲基黄嘌呤检查中间精密度试验结果
Figure BDA0002759601610000072
(3)线性及范围试验
精密称取3-甲基黄嘌呤适量,用流动相溶解并稀释制成一定浓度的对照溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见下表:
表3 3-甲基黄嘌呤检查线性试验结果
Figure BDA0002759601610000081
(4)溶液稳定性试验
供试品溶液的制备:取起始物料A适量,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液;摇匀,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
取供试品溶液于室温下放置,分别于0、2、4、6、8小时,取供试品溶液5μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,结果如下
表4供试品溶液中3-甲基黄嘌呤溶液稳定性试验结果
Figure BDA0002759601610000082
(5)定量限及检测限
取线性试验项下的供试品溶液再检测,当3-甲基黄嘌呤的信噪比约为3:1即为检测限;当3-甲基黄嘌呤的信噪比约为10:1即为定量限;
类型 定量限 检测限
浓度 0.032ng/μl 0.011ng/μl
(6)样品回收率试验
平行称取起始物料A样品9份,每3份分别按50%、80%、100%加入杂质3-甲基黄嘌呤对照液,作为供试品溶液,注入液相色谱仪,按外标法计算结果,结果见下表:
Figure BDA0002759601610000091
从以上的筛选实验来看,本发明中采用上述的检测方法起始物料A中的3-甲基黄嘌呤,测定结果准确可靠,线性范围宽,灵敏度高,专属性强,杂质峰与主峰分离度良好,可良好控制产品质量。

Claims (3)

1.利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法,其特征在于,所述的利拉列汀起始物料A为8-溴-3-甲基黄嘌呤;
采用液相色谱检测法来检测3-甲基黄嘌呤,其检测的条件如下:
色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱;色谱柱规格为250mm×4.6mm,5μm;
流动相:0.02mol/L的磷酸二氢钾:甲醇:乙腈=60:20:20;
流速:1.0ml/min;
柱温:55℃;
检测波长:218nm;
主峰理论塔板数不低于4000;
所述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.4~2.6。
2.如权利要求1所述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法,其特征在于,所述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.5。
3.如权利要求1所述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法,包括以下的步骤:
(1)供试品溶液的制备:取起始物料A,精密称量,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液;
(2)对照品溶液的制备:取3-甲基黄嘌呤对照品溶液,精密称定,加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液;
(3)采用高效液相色谱法检测,检测的条件如下:
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱;流动相为0.02mol/L的磷酸二氢钾:甲醇:乙腈=60:20:20;流速:1.0ml/min;柱温:55℃;检测波长:218nm;主峰理论塔板数不低于4000;
测定:分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μL,注入液相色谱仪,测定,记录30-40min的色谱图,即得。
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