CN112379018B - 利拉列汀起始物料a中3-甲基黄嘌呤的检测方法 - Google Patents

利拉列汀起始物料a中3-甲基黄嘌呤的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种利拉列汀起始物料A中3‑甲基黄嘌呤的检测方法。本发明采用液相色谱法检测法来检测3‑甲基黄嘌呤类物质，步骤如下：（1）供试品溶液的制备：取起始物料A，精密称量，加流动相溶解并稀释；（2）对照品溶液的制备：取3‑甲基黄嘌呤对照品溶液，精密称定，加流动相溶解并稀释；（3）检测。本发明通过重复性实验RSD为1.75%；中间精密度为1.15%；3‑甲基黄嘌呤在0.001～0.242mg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系；对于溶液稳定性考察试验，结果表明，供试品溶液室温放置8小时，溶液稳定性良好；当定量限浓度为0.032ng/µl时，检测限为0.011ng/µl。对于浓度为50%、80%、100%的样品进行回收，其平均回收率为99.8%，RSD为1.3%。

Description

利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法
技术领域
本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法。
背景技术
利拉列汀的起始物料A的名称为8-溴-3-甲基黄嘌呤，结构如下所示。3-甲基黄嘌呤为8-溴-3-甲基黄嘌呤的起始物料，其文献报道比较少。
Figure BDA0002759601610000011
本发明人经过检索，查询到一篇相关的文献，刘晖等人在《药品鉴定》中的《高效液相法测定母液中的3-甲基黄嘌呤的含量》一文中，建立了母液中3-甲基黄嘌呤含量的测定方法，采用高效液相色谱法，分析柱为C18色谱柱，进行等度洗脱，流速为1.0mL/min，检测波长273nm，柱温为35度，结果表明3-甲基黄嘌呤浓度在100-800mg/L的范围内呈现良好的线形关系，实验有良好的精密度，其RSD为0.21％，平均回收率为98.38，RSD为0.29％。该方法可以用于生产母液中3-甲基黄嘌呤的含量测定。
以上的方法是针对于母液中的3-甲基黄嘌呤所进行的检测，而关于利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法鲜有文献披露。
发明内容
为了解决上述的技术问题，为了更好的控制起始物料A的质量，本发明提供了一种检出率高、简便精确的检测方法。
由于未见有报道利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法，因此，本发明人根据产品特性，为了抑制系统中样品的解离，确保所选的色谱条件较为稳定，初步选定采用色谱法进行检测，试验结果显示采用该检测方法可行，各组分间分离度良好，并能将杂质有效检出。
本发明的方法如下：
检测利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的方法，是通过采用液相色谱法检测法来检测3-甲基黄嘌呤所进行的，其检测的条件如下：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；
流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾：甲醇：乙腈＝60：20：20；
流速：1.0ml/min；
柱温：55℃；
检测波长：218nm；
主峰理论塔板数不低于4000。
上述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.4～2.6。
上述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.5。
优选的，上述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法，包括以下的步骤：
(1)供试品溶液的制备：取起始物料A，精密称量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液；
(2)对照品溶液的制备：取3-甲基黄嘌呤对照品溶液，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液；
(3)采用高效液相色谱法检测，检测的条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；流动相为0.02mol/L的磷酸二氢钾：甲醇：乙腈＝60：20：20；流速：1.0ml/min；柱温：55℃；检测波长：218nm；主峰理论塔板数不低于4000；
测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录30-40min的色谱图，即得。
本发明的有益效果在于：操作简便；精密度高，专属性强；测定结果准确可靠，经验证适合该产品的质量控制与检测。
本发明中，通过重复性实验，结果表明，RSD为1.75％；中间精密度为1.15％；3-甲基黄嘌呤在0.001～0.242mg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系；对于溶液稳定性考察试验，结果表明，供试品溶液室温放置8小时，溶液稳定性良好；
当定量限浓度为0.032ng/μl时，检测限为0.011ng/μl。
对于浓度为50％、80％、100％的样品进行回收，其平均回收率为99.8％，RSD为1.3％。
附图说明
图1为3-甲基黄嘌呤专属性检查HPLC图谱；
图2为3-甲基黄嘌呤检查线性试验结果。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
实施例1
实验材料的处理：
(1)供试品溶液的制备：取起始物料A适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液；
(2)对照品溶液的制备：取3-甲基黄嘌呤对照品溶液，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液；
(3)采用液相色谱法进行检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：安捷伦C18(250mm×4.6mm，5μm)
流动相A：水
流动相B：甲醇
等度洗脱：流动相A：流动相B(60:40)；流动相1.0ml/min，柱温：35℃，进样体积：5μl，检测波长：218nm。
结果：主峰无保留，空白干扰检测，需优化。
实施例2
采用液相色谱法进行检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：安捷伦C18(250mm×4.6mm，5μm)
流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)
流动相B：甲醇
等度洗脱：流动相A：流动相B(40:60)；流动相1.0ml/min，柱温：35℃，进样体积：5μl，检测波长：218nm。
结果：主峰保留时间在7min左右，但峰型较差，再优化。
实施例3
采用液相色谱法进行检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：安捷伦C18(250mm×4.6mm，5μm)
流动相A：0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)
流动相B：甲醇：乙腈(50:50)
等度洗脱：流动相A：流动相B(40:60)；流动相1.0ml/min，柱温：35℃，进样体积：5μl，检测波长：218nm。
结果：主峰与3-甲基黄嘌呤杂质峰分离度不好，再优化。
实施例4
采用液相色谱法进行检测，HPLC检测条件如下：
色谱柱：安捷伦C18(250mm×4.6mm，5μm)
流动相0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)：甲醇：乙腈(60:20:20)
等度洗脱；流动相1.0ml/min，柱温：55℃，进样体积：5μl，检测波长：218nm。
通过分析，结果表明：主峰与3-甲基黄嘌呤杂质峰分离良好，且杂质峰能有效检出，可以作为利拉列汀起始物料A中的3-甲基黄嘌呤的检测方法。
实施例5
以下为本发明起始物料A中杂质3-甲基黄嘌呤的检测条件进行了考察和筛选，具体如下：
色谱条件选择，由于3-甲基黄嘌呤不溶于水，且考虑起始物料A8-溴-3-甲基黄嘌呤本身的溶解情况，检测条件不断筛选后最终选用0.02mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.5)：甲醇：乙腈(60:20:20)作为流动相，Agilent C18(250mm×4.6mm，5μm)作为色谱柱，流速1.0ml/min，柱温55℃，杂质峰与主峰之间均达到良好的分离，暂定此方法作为起始物料A中杂质3-甲基黄嘌呤的检测方法。
检测方法确定后，进行验证以确认方法的准确性等。
(1)专属性
对照品溶液的制备：取3-甲基黄嘌呤对照品，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液；
供试品溶液的制备：取起始物料A适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液；
分别取空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，结果见图1，空白溶剂不干扰3-甲基黄嘌呤及起始物料A的出峰情况，且两者分离度良好，可有效准确检出。证明本发明检测方法的专属性较强。
(2)精密度试验
①重复性
取3-甲基黄嘌呤对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密量取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，重复测定6次，结果如下：
表1 3-甲基黄嘌呤检查重复性试验结果
Figure BDA0002759601610000071
②中间精密度
改变分析日期、人员及设备后，溶液按“①重复性试验”配制方法制备供试品溶液，精密量取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，连续测定6次，结果如下：
表2 3-甲基黄嘌呤检查中间精密度试验结果
Figure BDA0002759601610000072
(3)线性及范围试验
精密称取3-甲基黄嘌呤适量，用流动相溶解并稀释制成一定浓度的对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见下表：
表3 3-甲基黄嘌呤检查线性试验结果
Figure BDA0002759601610000081
(4)溶液稳定性试验
供试品溶液的制备：取起始物料A适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液；摇匀，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取供试品溶液于室温下放置，分别于0、2、4、6、8小时，取供试品溶液5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如下
表4供试品溶液中3-甲基黄嘌呤溶液稳定性试验结果
Figure BDA0002759601610000082
(5)定量限及检测限
取线性试验项下的供试品溶液再检测，当3-甲基黄嘌呤的信噪比约为3:1即为检测限；当3-甲基黄嘌呤的信噪比约为10:1即为定量限；
类型 定量限 检测限
浓度 0.032ng/μl 0.011ng/μl
(6)样品回收率试验
平行称取起始物料A样品9份，每3份分别按50％、80％、100％加入杂质3-甲基黄嘌呤对照液，作为供试品溶液，注入液相色谱仪，按外标法计算结果，结果见下表:
Figure BDA0002759601610000091
从以上的筛选实验来看，本发明中采用上述的检测方法起始物料A中的3-甲基黄嘌呤，测定结果准确可靠，线性范围宽，灵敏度高，专属性强，杂质峰与主峰分离度良好，可良好控制产品质量。

Claims (3)

1.利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法，其特征在于，所述的利拉列汀起始物料A为8-溴-3-甲基黄嘌呤；
采用液相色谱检测法来检测3-甲基黄嘌呤，其检测的条件如下：
色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm；
流动相：0.02mol/L的磷酸二氢钾：甲醇：乙腈=60：20：20；
流速：1.0ml/min；
柱温：55℃；
检测波长：218nm；
主峰理论塔板数不低于4000；
所述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.4~2.6。
2.如权利要求1所述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法，其特征在于，所述的0.02mol/L的磷酸二氢钾用磷酸调节pH值至2.5。
3.如权利要求1所述的利拉列汀起始物料A中3-甲基黄嘌呤的检测方法，包括以下的步骤：
（1）供试品溶液的制备：取起始物料A，精密称量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.1mg/ml的溶液；
（2）对照品溶液的制备：取3-甲基黄嘌呤对照品溶液，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg/ml的溶液；
（3）采用高效液相色谱法检测，检测的条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充柱；流动相为0.02mol/L的磷酸二氢钾：甲醇：乙腈=60：20：20；流速：1.0ml/min；柱温：55℃；检测波长：218nm；主峰理论塔板数不低于4000；
测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录30-40min的色谱图，即得。
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