CN112255395B - 一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法和免疫浊度法试剂盒及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及体外检测技术领域,尤其涉及一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法和免疫浊度法试剂盒及应用,所述试剂盒中包含乳糜消除剂和缓冲液,所述乳糜消除剂为多种非离子型表面活性剂,所述缓冲液用于维持加入乳糜消除剂后试剂pH值的稳定。本发明基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标,提出一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法及免疫浊度法试剂盒;当脂血样本中,甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法和免疫浊度法试剂盒可以有效消除脂血浊度对特定生化指标测定结果的干扰,从而提高特定生化指标测定结果的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及体外检测技术领域,尤其涉及一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法和免疫浊度法试剂盒及应用。
背景技术
目前临床生化检测项目中以很多项目以可见-紫外光分光光度法利用朗伯-比尔定律作为化学反应定量的基础,其中免疫浊度方法测定的基本原理是抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物或介质(胶乳、纳米颗粒等)凝集放大的复合物,使反应液出现浊度,通过浊度的变化用来测定血清和血浆样本中物质,主要包括炎性反应蛋白(C-反应蛋白、前白蛋白)、免疫球蛋白(免疫球蛋白G、M、A)、补体C3及微量蛋白(β2-微球蛋白)等物质;用于炎症性疾病、肝脏疾病及肾脏疾病的诊断或辅助诊断指标。高脂血症时,血液中血脂升高,尤其乳糜微粒和极低密度脂蛋白是悬浮颗粒,使血清或血浆呈一定的浊度或乳糜状态,对基于可见-紫外光分光光度法检测的各种生化检验项目造成一定程度的干扰,导致测定结果不准确,影响临床上对疾病的判断。对于脂血样本,由于样本的本底吸光度过高,必须对样本进行预处理,常用的方法包括:1、生理盐水稀释法:大部分全自动生化分析仪都具有自动稀释、自动换算功能;也可以先手工稀释,再将测定结果乘以稀释倍数。这种方法可以在一定程度上降低样本空白而提高测定的准确性,但是该法并不能完全消除脂浊对测定结果的影响,特别是要注意样本稀释后由于基质效应而导致测定结果出现一定的误差。2、乙醚抽提法:在高脂血样本中加入有机溶剂乙醚,震荡混匀后离心,可有效地将样本中的甘油三酯等脂溶物质萃取出来,但是由于该方法加入了新的化学物质,会对有些检验项目的测定产生影响。3、沉淀分离法:该方法来源于沉淀法测定HDL,即联合使用磷钨酸-镁沉淀剂和聚乙二醇-硫酸葡聚糖沉淀剂,沉淀血清中的乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、脂蛋白(a),该方法对部分检验项目的测定会产生影响,且操作繁琐,因此该法也有一定的局限性。4、干化学法:干化学分析仪是采用以Kubleka-Munk理论为主要理论基础的多层薄膜的固相试剂技术,将发生在液相反应物中的反应,转移到一个固相载体上,利用反射光度法和基于离子选择电极(ISE)的差示电位法进行检测的一类新型仪器。当全血通过多层薄膜的固相时,血细胞、脂浊微粒等物质可以被阻截,因此该法亦可有效地去除脂浊对生化检验结果的干扰;但干化学法需要特殊的干化学分析仪、测定的是全血样本,不适合某些特定生化指标的检测,在实际检测中应用的比较少。5、高速离心法:将脂浊血清加盖密封,经高速离心后,血清可以分成两层,吸取下层的血清进行临床生化测定,适用大部分临床生化测定指标的测定。但该法设备要求较高,中小医疗机构没有高速离心机,限制了该法的使用。
中国专利CN 103698525和CN103713140分别公布了一种消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅰ检测试剂盒和一种消除乳糜干扰的胶乳免疫比浊法胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒;通过胶乳凝集作用放大样本中待测物质与试剂中特异性抗体的结合反应,在给定的波长下,测定反应形成物浊度的胶乳免疫比浊法。
发明内容
为了至少解决一种现有技术存在的问题,本发明提供一种消除脂血样本中乳糜(Intralipid)干扰的方法和免疫比浊法试剂盒及应用。本发明基于分光光度法原理,采用免疫浊度方法检测血清和血浆样本中的特定生化指标,提出一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法及免疫比浊法试剂盒;在对脂血样本中特定生化指标进行检测前,向所述试剂组合中加入乳糜消除剂和缓冲液,可以有效减少样本中脂血成分引起的浊度干扰,进而准确测定特定生化指标的含量。
第一方面,本发明提供一种用于消除脂血样本中乳糜干扰的试剂盒,所述试剂盒中包含乳糜消除剂和缓冲液,所述乳糜消除剂包括:
多聚环氧乙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、多聚环氧乙烷-环氧丙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、聚乙二醇烷基醚类非离子型表面活性剂、混合脂肪酸甘油酯类非离子型表面活性剂中一种或多种;
所述缓冲液包括:
磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)、2-(环己胺)乙磺酸(CHES)、3-(环己胺)-1-丙磺酸(CAPS)、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)、N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、2-氨基-2-甲基-1-正丙醇(AMP)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)、氯化铵或甘氨酸中的一种或多种。
进一步地,所述乳糜消除剂包括:
多聚环氧乙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、多聚环氧乙烷-环氧丙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、聚乙二醇烷基醚类非离子型表面活性剂、混合脂肪酸甘油酯类非离子型表面活性剂中的至少一种;
所述缓冲液包括:
磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)、2-(环己胺)乙磺酸(CHES)、3-(环己胺)-1-丙磺酸(CAPS)、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸(CAPSO)、N-三(羟甲基)-3-氨基丙烷磺酸(TAPS)、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸(TAPSO)、2-氨基-2-甲基-1-正丙醇(AMP)、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)氯化铵或甘氨酸中的一种或多种。
进一步地,所述多聚环氧乙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂是包含8~10 EO的聚合物,优选ZUSOLAT 1008/85和/或OXETAL 800/85;
所述多聚环氧乙烷-环氧丙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂是包含8~10 EO-PO的聚合物,优选PROPETAL 100、PROPETAL 200、PROPETAL 105、PROPETAL 120、PROPETAL 130、PROPETAL 140、PROPETAL 150和PROPETAL 160中的至少一种;
所述聚乙二醇烷基醚类非离子型表面活性剂,优选聚乙二醇单烷基醚和/或乙基苯基聚乙二醇;
所述混合脂肪酸甘油酯类非离子型表面活性剂为乙氧基化三酸甘油酯类化合物,优选RT7和/或RT163。
进一步地,所述试剂盒中针对不同检测对象有更为优选的试剂组合,例如:用于免疫比浊法检测C-反应蛋白的试剂组合1,其中,乳糜消除剂包括OXETAL 800/85和PROPETAL140,缓冲液包括三(羟甲基)氨基甲烷;
用于免疫增强比浊法检测β2-微球蛋白含量的试剂组合2,在所述试剂组合2中,所述乳糜消除剂包括OXETAL 800/85和PROPETAL130,所述缓冲液包括氯化铵缓冲液;
用于免疫比浊法检测免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白免疫球蛋白M、补体C3的试剂组合3,其中乳糜消除剂包括ZUSOLAT 1008/85和RT7;缓冲液包括三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液。
本发明发现,在特定的缓冲液中,非离子型表面活性剂对脂血样本中难溶的悬浮颗粒有增溶作用,可以增加其溶解性从而降低其引起的浊度,但是针对不同检测方法以及检测指标,使用不同的消除剂以及缓冲液可以起到更优的效果,其中任一成分的改变都会导致消除乳糜干扰的效果在一定程度上的下降。
进一步地,在所述试剂组合1中,所述OXETAL 800/85的含量(质量比)为0.01%~10%,所述PROPETAL140的含量(质量比)为0.01%~10%;
在所述试剂组合2中,所述OXETAL 800/85的含量(质量比)为0.01%~10%,所述PROPETAL130的含量(质量比)为0.01%~10%;
在所述试剂组合3中,所述ZUSOLAT 1008/85的含量(质量比)为0.01%~10%,所述RT7的含量(质量比)为0.01%~10%。
本发明进一步提供所述试剂盒在基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的准确性中的应用。
进一步地,所述基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的方法包括:免疫比浊法和/或免疫增加比浊法。
进一步地,所述特定的生化指标包括:C-反应蛋白、免疫球蛋白G、免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、补体C3、β2-微球蛋白中的一种。进一步地,所述脂血样本为甘油三脂、胆固醇和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)升高的血清或血浆样本。在这样的血清或血浆样本中,不同浓度的乳糜可以反应脂血样本引起的浊度。
进一步地,所述应用为:
在对所述脂血样本中的特定生化指标进行检测前,根据检测方法和特定生化指标,加入相应的试剂组合。
第二方面,本发明提供一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法,包括:
在通过基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的方法,对所述脂血样本进行检测前,使用所述试剂盒进行处理;
所述处理为在对所述脂血样本中的特定生化指标进行检测前,根据检测方法和特定生化指标,加入相应的试剂组合。
本发明具备如下有益效果:
本发明基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标,提出一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法及试剂盒;当脂血样本中,甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法均可以有效消除脂血浊度对特定生化指标测定结果的干扰,从而提高特定生化指标测定结果的准确性。
具体实施方式
在以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1消除乳糜干扰的C-反应蛋白测定试剂
试剂盒包括试剂R1、试剂R2两个组份,试剂R1和试剂R2的组成见表1。
C-反应蛋白测定试剂检测方法:采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪测定,使用中生北控生物科技股份有限公司C-反应蛋白的校准品,具体的操作步骤如下见表2。主/副波长:340/700nm,温度:37℃,比色杯光径:1cm。
当待测样本中甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法均可以有效消除脂血浊度对C-反应蛋白测定结果的干扰,从而提高C-反应蛋白测定结果的准确性。
实施例2消除乳糜干扰的β2-微球蛋白测定试剂
试剂盒包括试剂R1、试剂R2两个组份,试剂R1和试剂R2的组成见表3。
β2-微球蛋白测定试剂检测方法:采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪测定,使用中生北控生物科技股份有限公司β2-微球蛋白校准品,具体的操作步骤如下见表4。主/副波长:540/700nm 温度:37℃ 比色杯光径:1cm。
当待测样本中甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法均可以有效消除脂血浊度对β2-微球蛋白测定结果的干扰,从而提高β2-微球蛋白测定结果的准确性。
实施例3 消除乳糜干扰的免疫球蛋白G测定试剂
试剂盒包括:试剂R1、试剂R2两个组份,试剂R1和试剂R2的组成见表5。
免疫蛋白G测定试剂检测方法:采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪测定,使用中生北控生物科技股份有限公司特种蛋白校准品,具体的操作步骤如下见表6。波长:700nm 温度:37℃ 比色杯光径:1cm。
当待测样本中甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法均可以有效消除脂血浊度对免疫球蛋白G测定结果的干扰,从而提高免疫球蛋白G测定结果的准确性。
实施例4 消除乳糜干扰的补体C3测定试剂
试剂盒包括:试剂R1、试剂R2两个组份,试剂R1和试剂R2的组成见表7。
补体C3测定试剂检测方法:采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪测定,使用中生北控生物科技股份有限公司特种蛋白校准品,具体的操作步骤如下见表8。波长:600nm温度:37℃ 比色杯光径:1cm。
当待测样本中甘油三酯含量≤11.29mmol/L、乳糜含量≤1000mg/dL时,该方法均可以有效消除脂血浊度对补体C3测定结果的干扰,从而提高免疫球蛋白G测定结果的准确性。
试验例1
本试验例采用多组对比例验证本申请实施例1的技术效果:
对比例1和实施例1方法相同,区别仅在于,不加入非离子型表面活性剂。
对比例2和实施例1方法相同,区别仅在于,表面活性剂选择阳离子型表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵。
对比例3和实施例1方法相同,区别仅在于,表面活性剂选择非离子型表面活性剂聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)。
试验方法和结果判断标准:配制系列浓度的甘油三酯样本和乳糜干扰样本,以水平1样本中C-反应蛋白的测值为基值,计算干扰样本中C-反应蛋白的测值与基值的偏差%,偏差%≥±10%为有干扰。结果见表9。
结果显示:对比例1,待测样本中甘油三酯的浓度为3.80mmol/L、乳糜为125mg/dL时,对C-反应蛋白测定结果会产生干扰;对比例2和对比例3,待测样本中甘油三酯的浓度为6.27mmol/L、乳糜为500mg/dL时,对C-反应蛋白测定结果会产生干扰;实施例1,待测样本中甘油三酯的浓度为11.29mmol/L、乳糜为1000mg/dL时,对C-反应蛋白测定结果没有干扰。
试验例2
本试验例采用多组对比例验证本申请实施例2的技术效果:
对比例1和实施例2方法相同,区别仅在于,不加入非离子型表面活性剂。
对比例2和实施例2方法相同,区别仅在于,表面活性剂选择阳离子型表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵。
对比例3和实施例2方法相同,区别仅在于,表面活性剂选择非离子型表面活性剂曲拉通X-100。
试验方法和结果判断标准:配制系列浓度的甘油三酯样本和乳糜干扰样本,以水平1样本中β2-微球蛋白的测值为基值,计算干扰样本中β2-微球蛋白的测值与基值的偏差%,偏差%≥±10%为有干扰。结果见表10。
结果显示:对比例1的待测样本中甘油三酯的浓度为3.80mmol/L、乳糜为125mg/dL时,对β2-微球蛋白测定结果会产生干扰;对比例2和对比例3的待测样本中甘油三酯的浓度为6.27mmol/L、乳糜为500mg/dL时,对β2-微球蛋白测定结果会产生干扰;实施例1,待测样本中甘油三酯的浓度为11.29mmol/L、乳糜为1000mg/dL时,对β2-微球蛋白测定结果没有干扰。
试验例3
以临床认可的免疫球蛋白G检测试剂为对照组,与实施例3同时测定系列浓度的甘油三酯样本和乳糜干扰样本,以水平1样本中免疫球蛋白G的测值为基值,计算干扰样本中免疫球蛋白G的测值与基值的偏差%,偏差%≥±10%为有干扰。试验结果见表11。
结果显示,当样本中甘油三酯和乳糜的浓度分别11.29mmol/L和1000mg/dL时,实施例3测定结果的偏差与对照组的偏差接近,说明实施例3测定脂血样本中免疫球蛋白G的准确度,可满足临床需求。
试验例4
以临床认可的补体C3检测试剂为对照组,与实施例4同时测定系列浓度的甘油三酯样本和乳糜干扰样本,以水平1样本中补体C3的测值为基值,计算干扰样本中补体C3的测值与基值的偏差%,偏差%≥±10%为有干扰。试验结果见表12。
结果显示,当样本中甘油三酯和乳糜的浓度分别11.29mmol/L和1000mg/dL时,实施例4测定结果的偏差与对照组的偏差接近,说明实施例4测定脂血干扰样本中补体C3的准确度,可满足临床需求。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种用于消除脂血样本中乳糜干扰的免疫浊度法试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中包含乳糜消除剂和缓冲液,具体包括:
用于免疫比浊法检测C-反应蛋白的试剂组合1,在所述试剂组合1中,所述乳糜消除剂包括1g/L 聚乙二醇6000、0.8g/L 乙基苯基聚乙二醇、质量比为0.1%~10%的OXETAL 800/85和质量比为0.1%~10%的PROPETAL140,所述缓冲液包括三(羟甲基)氨基甲烷;
用于免疫增强比浊法检测β2-微球蛋白含量的试剂组合2,在所述试剂组合2中,所述乳糜消除剂包括15g/L 聚乙二醇6000、质量比为0.1%~10%的OXETAL 800/85和质量比为0.1%~10%的PROPETAL130,所述缓冲液包括氯化铵缓冲液;
用于免疫比浊法检测补体C3的试剂组合3,在所述试剂组合3中,所述乳糜消除剂包括1g/L 聚乙二醇4000、质量比为1%~10%的ZUSOLAT 1008/85和质量比为1%~10%的RT7;所述缓冲液包括三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液;
用于免疫比浊法检测免疫球蛋白G的试剂组合4,在所述试剂组合4中,所述乳糜消除剂包括1g/L 聚乙二醇4000、质量比为2%~10%的ZUSOLAT 1008/85和质量比为2%~10%的RT7;所述缓冲液包括三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液。
2.权利要求1所述试剂盒在基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的方法的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的方法包括免疫比浊法和/或免疫增强比浊法中。
4.根据权利要求2或3所述的应用,其特征在于,所述特定的生化指标包括:C-反应蛋白、免疫球蛋白G、补体C3、β2-微球蛋白中的一种或多种。
5.根据权利要求2或3所述应用,其特征在于,所述血清和血浆样本为甘油三脂和类脂升高的血清或血浆样本。
6.根据权利要求2或3所述的应用,其特征在于,所述应用为:
在对所述脂血样本中的特定生化指标进行检测前,根据检测方法和特定生化指标,加入相应的试剂组合。
7.一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法,其特征在于,包括:
在通过基于分光光度法原理,采用免疫浊度法检测血清和血浆样本中的特定生化指标的方法,对所述脂血样本进行检测前,使用权利要求1所述试剂盒进行处理;
所述处理为在对所述脂血样本中的特定生化指标进行检测前,根据检测方法和特定生化指标,加入相应的试剂组合。
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