CN111122866A - 一种胃蛋白酶原ⅱ检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括磷酸钠缓冲液50‑150mmol/L、牛血清白蛋白2‑3g/L、浓度为2‑3%甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物1.0‑5.0g/L、氯化镁3‑5mmol/L、甲酸铵20‑30mmol/L,其余为去离子水;所述R2试剂包括胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液1.3‑2mg/ml、牛血清白蛋白2‑3g/L、浓度为2‑3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水;制成一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒及其制备方法,其具有可有效解决乳糜问题,抗干扰能力强,同时具有稳定性以及灵敏度高的效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
胃蛋白酶原(pepsinogen),由泌酸腺的主细胞合成,在胃腔内经盐酸(HCL)或已有活性的胃蛋白酶(pepsin)作用变成胃蛋白酶,将蛋白质分解成膘、胨及少量多肽,血清胃蛋白酶原水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能:PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针,胃酸分泌增多PGI升高,分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低;PGII与胃底粘膜病变的相关性较大(相对于胃窦粘膜),其升高与胃底腺管萎缩、胃上皮化生或假幽门腺化生、异型增值有关;PGI/II比值进行性降低与胃粘膜萎缩进展相关,胃蛋白酶原(PG)对胃部疾病的发展历程,一般可表述为:浅表性胃炎——胃粘膜糜烂溃疡——萎缩性胃炎——胃癌,及其它疾病具有良好的诊断和筛选作用。
一般的胃蛋白酶原Ⅱ采用的是市面上比较常见的胶乳增强免疫比浊法进行,而此类方法最主要的就是乳糜干扰,拒不完全统计,在抽血检测中,乳糜血的占比在0.5-1%之间,这与现代人们常常吃一些高油炸、高热量食品有关,但市面上消除此类问题都是加入大量的消糜剂进行,虽然可以把乳糜问题进一步降低,但大量的外来物质加入势必会对检测数据带来一定的影响,因此,市面上需要一种既可以把乳糜问题解决也可以不会对最终检测结果造成影响的测试盒。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种可有效解决乳糜问题,抗干扰能力强,同时具有稳定性以及灵敏度高的胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒及其制备方法。
为解决上述问题,本发明采用如下技术方案:一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括磷酸钠缓冲液50-150mmol/L、牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物1.0-5.0g/L、氯化镁3-5mmol/L、甲酸铵20-30mmol/L,其余为去离子水;所述R2试剂包括胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液1.3-2mg/ml、牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水。
进一步的方案为:所述胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液包含有15%抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体包被的胶乳颗粒的溶液,所述胶乳颗粒为采用聚苯乙烯为原料的单克隆抗体交联高分子纳米微球,所述单克隆抗体采用鼠或牛的抗体。
进一步的方案为:所述脂肪醇与环氧乙烷缩合物制备由在反应釜中环氧乙烷开环聚合,并与醇缩合生成脂肪醇聚氧乙烯醚,反应釜为真空状态,且压力值为0.3MPa,温度控制在130-150℃之间,时间为1小时,在1小时后继续保温2小时。
进一步的方案为:所述R1试剂和R2试剂中磷酸钠缓冲液温度为为20±1℃,PH为8的溶液。
进一步的方案为:所述磷酸钠缓冲液制备方法是取磷酸钠溶于1L蒸馏水中,然后用1mol/L的KCl滴加配置,直至PH为8后,再用蒸馏水稀释,再在紫外线杀菌柜内存储30min中,然后在135℃高温杀菌箱中存储10min。
进一步的方案为:所述R1试剂和R2试剂体积比为2:1.5。
本发明还公开了一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
1)、将牛血清白蛋白、浓度为甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、氯化镁、甲酸铵和加入到磷酸钠缓冲液中,漩涡震荡10min,4-5℃放置2h后800r/min离心20min,再静置2小时后取上清液3-5℃备用,制得R1试剂;
2)、先把牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水加入到胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液中,漩涡震荡20min,超声破碎10min,4-5℃放置2h后后取上清液3-5℃备用制得R2试剂;
3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒。
本发明的有益效果是:
本发明采用R1试剂和R2试剂,R1试剂中加入了脂肪醇与环氧乙烷缩合物,作为一种表面活化剂可以消除试剂的乳糜干扰,以及在R1试剂中加入了牛血清白蛋白、浓度为、氯化镁、甲酸铵,可以保持试剂对于检测胃病的稳定性,使制得的胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒在稳定和抗干扰能力上有着显著的提升,可在相关生化试剂领域进行推广使用。
具体实施方式
下面对本发明的优选实施例进行详细阐述,以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解,从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例一
一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括Good’s缓冲液100mmol/L、氯化钠80mmol/L、氯化镁12mmol/L、α-葡萄糖苷酶3kU/L、抗唾液淀粉酶单克隆抗体27mg/L、牛血清白蛋白3g/L、聚乙烯吡咯烷酮50mg/L、N一乙酰半胱氨酸50mmol/L,其余为蒸馏水;所述R2试剂包括Good’s缓冲液150mmol/L、4,6-亚乙基-α,D-麦芽7糖苷-对硝基酚(EPS-G7)1.6mmol/L、牛血清白蛋白4g/L、抗坏血酸氧化酶1200U/L,其余为蒸馏水。
试剂R1试剂和R2试剂制备:
1)、将牛血清白蛋白、浓度为甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、氯化镁、甲酸铵和加入到磷酸钠缓冲液中,漩涡震荡10min,4-5℃放置2h后800r/min离心20min,再静置2小时后取上清液3-5℃备用,制得R1试剂;
2)、先把牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水加入到胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液中,漩涡震荡20min,超声破碎10min,4-5℃放置2h后后取上清液3-5℃备用制得R2试剂;
3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒。
脂肪醇与环氧乙烷缩合物制备:由在反应釜中环氧乙烷开环聚合,并与醇缩合生成脂肪醇聚氧乙烯醚,反应釜为真空状态,且压力值为0.3MPa,温度控制在130℃之间,时间为1小时,在1小时后继续保温2小时。
不同乳糜浓度对血清造成的影响
胃蛋白酶原Ⅱ正常值范围为0-20ug/L,特取一人其乳糜所含量以每次百分之5%递增至50%并与市面上常用试剂进行对比,采用连续监测法中间隔60S重复进行检测,计算均值、偏差。
表1为试剂盒以乳糜添加量5%递增后与市面上普通检测剂对比的结果
表1所示,虽然两侧检测的数据相差不大,说明两者产品每次检测稳定性好,但比对产品在5%-50%乳糜添加过程中,其与实际未添加乳糜检测效果相差比较明显,因此,板产品配比对于消除乳糜在血清中的影响明显优于对比产品。
实施例二
一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括磷酸钠缓冲液100mmol/L、牛血清白蛋白2g/L、浓度为3%甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物3g/L、氯化镁4mmol/L、甲酸铵25mmol/L,其余为去离子水;所述R2试剂包括胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液2mg/ml、牛血清白蛋白2g/L、浓度为3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水。
试剂R1试剂和R2试剂制备:
1)、将牛血清白蛋白、浓度为甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、氯化镁、甲酸铵和加入到磷酸钠缓冲液中,漩涡震荡10min,5℃放置2h后800r/min离心20min,再静置2小时后取上清液5℃备用,制得R1试剂;
2)、先把牛血清白蛋白、甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水加入到胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液中,漩涡震荡20min,超声破碎10min,4-5℃放置2h后后取上清液3℃备用制得R2试剂;
3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒。
脂肪醇与环氧乙烷缩合物制备:由在反应釜中环氧乙烷开环聚合,并与醇缩合生成脂肪醇聚氧乙烯醚,反应釜为真空状态,且压力值为0.3MPa,温度控制在130℃之间,时间为1小时,在1小时后继续保温2小时。
不同乳糜浓度对血清造成的影响
胃蛋白酶原Ⅱ正常值范围为0-20ug/L,特取一人其乳糜所含量以每次百分之5%递增至50%并与市面上常用试剂进行对比,采用连续监测法中间隔60S重复进行检测,计算均值、偏差。
表1为试剂盒以乳糜添加量5%递增后与市面上普通检测剂对比的结果
表1所示,虽然两侧检测的数据相差不大,说明两者产品每次检测稳定性好,但比对产品在5%-50%乳糜添加过程中,其与实际未添加乳糜检测效果相差比较明显,因此,板产品配比对于消除乳糜在血清中的影响明显优于对比产品。
实施例三
一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括磷酸钠缓冲液100mmol/L、牛血清白蛋白3g/L、浓度为2%甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物3g/L、氯化镁3mmol/L、甲酸铵30mmol/L,其余为去离子水;所述R2试剂包括胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液2mg/ml、牛血清白蛋白2g/L、浓度为3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水。
试剂R1试剂和R2试剂制备:
1)、将牛血清白蛋白、浓度为甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、氯化镁、甲酸铵和加入到磷酸钠缓冲液中,漩涡震荡10min,5℃放置2h后800r/min离心20min,再静置2小时后取上清液5℃备用,制得R1试剂;
2)、先把牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水加入到胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液中,漩涡震荡20min,超声破碎10min,4℃放置2h后后取上清液5℃备用制得R2试剂;
脂肪醇与环氧乙烷缩合物制备:由在反应釜中环氧乙烷开环聚合,并与醇缩合生成脂肪醇聚氧乙烯醚,反应釜为真空状态,且压力值为0.3MPa,温度控制在140℃之间,时间为1小时,在1小时后继续保温2小时。
不同乳糜浓度对血清造成的影响
胃蛋白酶原Ⅱ正常值范围为0-20ug/L,特取一人其乳糜所含量以每次百分之5%递增至50%并与市面上常用试剂进行对比,采用连续监测法中间隔60S重复进行检测,计算均值、偏差。
表1为试剂盒以乳糜添加量5%递增后与市面上普通检测剂对比的结果
表1所示,虽然两侧检测的数据相差不大,说明两者产品每次检测稳定性好,但比对产品在5%-50%乳糜添加过程中,其与实际未添加乳糜检测效果相差比较明显,因此,板产品配比对于消除乳糜在血清中的影响明显优于对比产品。
综上所述,实施例一的方案为最优方案。
特取以实施例一为例,抽取10组血清样品,其中包括5组正常人血清以及5组患有胃炎血清分别以市面上普通产品与本产品分开进行检测,正常值为0-20ug/L单位范围内,胃炎≧20ug/L采用液体包括血清,且采用连续检测法进行检测,间隔时间为60S,如下表所示:
由上述表所示,本产品在测试是否患有胃炎的检测中趋于稳定,比对比产品稳定性更好。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何不经过创造性劳动想到的变化或替换,都应涵盖在本实用新保护范围为准。
Claims (7)
1.一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:包括R1试剂和R2试剂,所述R1试剂包括磷酸钠缓冲液50-150mmol/L、牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物1.0-5.0g/L、氯化镁3-5mmol/L、甲酸铵20-30mmol/L,其余为去离子水;所述R2试剂包括胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液1.3-2mg/ml、牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水。
2.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:所述胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液包含有15%抗人胃蛋白酶原Ⅱ抗体包被的胶乳颗粒的溶液,所述胶乳颗粒为采用聚苯乙烯为原料的单克隆抗体交联高分子纳米微球,所述单克隆抗体采用鼠或牛的抗体。
3.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:所述脂肪醇与环氧乙烷缩合物制备由在反应釜中环氧乙烷开环聚合,并与醇缩合生成脂肪醇聚氧乙烯醚,反应釜为真空状态,且压力值为0.3MPa,温度控制在130-150℃之间,时间为1小时,在1小时后继续保温2小时。
4.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:所述R1试剂和R2试剂中磷酸钠缓冲液温度为为20±1℃,PH为8的溶液。
5.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:所述磷酸钠缓冲液制备方法是取磷酸钠溶于1L蒸馏水中,然后用1mol/L的KCl滴加配置,直至PH为8后,再用蒸馏水稀释,再在紫外线杀菌柜内存储30min中,然后在135℃高温杀菌箱中存储10min。
6.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒,其特征在于:所述R1试剂和R2试剂体积比为2:1.5。
7.根据权利要求1所述的一种胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)、将牛血清白蛋白、浓度为甲基异噻唑啉酮、脂肪醇与环氧乙烷缩合物、氯化镁、甲酸铵和加入到磷酸钠缓冲液中,漩涡震荡10min,4-5℃放置2h后800r/min离心20min,再静置2小时后取上清液3-5℃备用,制得R1试剂;
2)、先把牛血清白蛋白2-3g/L、浓度为2-3%甲基异噻唑啉酮,其余为去离子水加入到胃蛋白酶原Ⅱ抗体乳状溶液中,漩涡震荡20min,超声破碎10min,4-5℃放置2h后后取上清液3-5℃备用制得R2试剂;
3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得胃蛋白酶原Ⅱ检测试剂盒。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20200508 |
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