CN114774513B - 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法 - Google Patents
一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物医药领域,特别涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法,即在第一试剂中改变非小而密脂蛋白的溶解特性,使其易于被清除并在第二试剂中特异性的定量小而密脂蛋白胆固醇(sdLDL‑C)的方法。本发明所述试剂包括第一试剂:10mmol/L~300mmol/L离液离子化合物、0.1~1.0%聚乙二醇、1.0~90mmol/L二价金属离子、1~10KU/L胆固醇酯酶、1~10KU/L胆固醇氧化酶、100~300KU/L过氧化氢酶、0.2~10mmol/L Trinder’s色原化合物、和0.05~3%表面活性剂A;第二试剂:0.1~10mmol/L4‑氨基安替比林、0.2~10KU/L过氧化物酶、0.01~0.3%叠氮钠和0.05~3%表面活性剂B,试剂无需采用磷脂酶,配制简单,能够应用于特异性检测sdLDL。其测定方法能够应用于全自动生化分析仪,特定、专一地定量试样中sdLDL的含量。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法。
背景技术
低密度脂蛋白(LDL)具有异质性,由一系列大小、密度和化学组成各异的颗粒组成。一般将LDL亚组份中颗粒较小密度较大的LDL称小而密LDL(smalldense Low-DensityLipoprotein,sdLDL);将颗粒较大、密度较小的LDL称大而轻LDL;介于二者之间的亚组份为中密度LDL。
近来研究发现sdLDL与普通LDL相比,sdLDL致动脉粥样硬化的能力更强,是公认的引发心血管病的重要危险因素之一,已被美国胆固醇教育计划(National CholesterolEducation Program,NCEP)委员会成人治疗组列入新发现的重要心血管病危险因素之一。
目前在临床检测应用中,测定sdLDL的方法有电泳法、超速离心法和分级沉淀法等。但这些方法检测时间很长,不能进行大规模自动化检测,且需要昂贵的仪器设备,故不能应用于一般的临床医学检测。近几年来出现了采用表面活性剂和磷脂酶清除试样中非小而密脂蛋白胆固醇,但该类方法采用磷脂酶,价格昂贵,国内尚无生产该酶的企业。
申请号为201810803320.9的中国专利公开了一种小而密脂蛋白的测定试剂、方法和试剂盒,其组合物包括聚乙二醇、表面活性剂A和脂蛋白酯酶,其采用与脂蛋白结合的聚阴离子化合物、脂蛋白酯酶和表面活性剂的组合,能够在第一试剂中排除乳糜颗粒的干扰,从而实现测定sdLDL的目的,所用试剂配制简单方便,能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性检测sdLDL。
但现有技术中并未对如何分散血液中的脂蛋白进行分析,其测试准确性有待进一步提高。
发明内容
针对目前对小而密脂蛋白的检测方法的不足,本发明提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂及测试方法,即在第一试剂中采用表面活性剂A、离液离子化合物和聚乙二醇(PEG),清除非小而密脂蛋白胆固醇,本发明所述的试剂无需使用磷脂酶,配制简单,能够高效、准确地定量试样中sdLDL。本发明所述的测定方法,能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL),该测定方法可靠性高、成本低,能够大规模特异性地检测试样中sdLDL。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法,包括在第一试剂中添加离液离子化合物、表面活性剂A和胆固醇酯酶,所述离液离子化合物通过电荷作用对脂蛋白进行分散,以使表面活性剂A和胆固醇酯酶选择性地作用于特定脂蛋白,从而达到测量特定脂蛋白中胆固醇的量。
本发明所述离液离子化合物选自溴化钠、硫氰酸钠、碘化钾中的一种或两种,所述离液离子化合物的含量为10mmol/L~300mmol/L,较佳地为10mmol/L~200mmol/L。
本发明所述第一试剂中Trinder’s色原化合物的含量为0.2~10mmol/L,较佳地为0.50~5.0mmol/L,更佳地为2.0~3.0mmol/L。
本发明所述第一试剂中聚乙二醇的含量为0.1~1.0%,较佳地为0.1~0.6%,更佳地为0.1~0.5%。
本发明所述第一试剂中二价金属离子较佳地为镁离子或锰离子,更佳地为镁离子,最佳地为硫酸镁。所述二价金属离子的含量为1~90mmol/L,较佳地为2~30mmol/L,更佳地为5~10mmol/L。
本发明所述的第一试剂中,所述表面活性剂A的含量为0.05~3.0%,较佳地为0.05~2.0%,更佳地为0.10~1.0%。较佳地,所述表面活性剂A为与高密度脂蛋白相互作用的表面活性剂;较佳地,所述表面活性剂A为Sunnix FA-103,PTS,Nok,生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS-750-M、TPGS-1000中的一种或多种。较佳地为Nok、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS-750-M中的一种或两种,更较佳地为生育酚聚乙二醇琥珀酸酯TPGS-750-M。
本发明所述的第一试剂中,所述胆固醇酯酶的含量为1~10KU/L,较佳地为2~5KU/L。
本发明所述的第一试剂中,所述胆固醇氧化酶的含量为1~10KU/L,较佳地为2~5KU/L。
本发明所述的第一试剂中,所述过氧化氢酶的含量为100~300KU/L,较佳地为200~300KU/L。
本发明中,较佳地,所述第一试剂还包括缓冲液。所述缓冲液较佳地为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液,更佳地为MOPSO缓冲液。所述缓冲液的含量较佳地为25~120mmol/L,更佳地为30~50mmol/L。
本发明中,较佳地,所述第一试剂还包括稳定剂。所述稳定剂较佳地选自抗坏血酸氧化酶、牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种,更佳地为牛血清白蛋白、氯化钠或EDTA中的一种或多种,最佳地为牛血清白蛋白、氯化钠和EDTA。所述稳定剂的含量较佳地抗坏血酸氧化酶的含量为1~10KU/L;所述牛血清白蛋白的含量较佳地为0.1~1g/L,更佳地为0.1~0.3g/L;所述氯化钠的含量较佳地为5~150mmol/L,更佳地为5~100mmol/L;较佳地,所述EDTA的含量为0.5~3mmol/L。
本发明中,较佳地,所述第一试剂还包括防腐剂。所述防腐剂较佳地为Proclin-300。所述防腐剂的含量较佳地为0.01~0.5%。
本发明还提供了所述第一试剂的制备方法,其包括以下步骤:将所述离液离子化合物、聚乙二醇、二价金属离子、Trinder’s色原化合物和表面活性剂A依次加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50~7.00,然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶,即得第一试剂。
本发明中,较佳地,所述缓冲液、所述稳定剂和所述防腐剂在调节pH之前添加。
本发明所述第一试剂的形态为澄清液体。
其中,本发明所述第二试剂中,所述过氧化物酶的含量为0.2~10KU/L,较佳地为2.5~10KU/L,更佳地为2.5~6KU/L。
本发明所述第二试剂中,所述4-氨基安替比林的含量为1.0~10mmol/L,较佳地为2~5mmol/L,更佳地为2~3mmol/L。
本发明所述第二试剂中,所述表面活性剂B的含量为0.05~3.0%,较佳地为0.08~0.5%,更佳地为0.1~0.2%。较佳地,所述表面活性剂B为作用于小而密脂蛋白的表面活性剂。较佳地,所述表面活性剂B为陶氏公司的Tergitol TMN-6、陶氏公司的Tergitol15-S-7中的一种或两种,更佳地为陶氏公司的Tergitol TMN-6。
本发明中,较佳地,所述第二试剂还包括缓冲液。所述缓冲液较佳地为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液,更佳地为MOPS缓冲液。所述缓冲液的含量较佳地为30~75mmol/L,更佳地为30~50mmol/L。
本发明所述第二试剂中,所述叠氮钠的含量为0.01~0.3%,较佳地为0.1%。
本发明中,较佳地,所述第二试剂还包括稳定剂。所述稳定剂较佳地为牛血清白蛋白。所述稳定剂的含量较佳地为0.2~5g/L。
本发明所述第二试剂的形态为澄清液体。
本发明还提供了所述第二试剂的制备方法,其包括以下步骤:将4-氨基安替比林和表面活性剂B加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入过氧化物酶,即得第二试剂。
本发明中,较佳地,所述缓冲液、所述稳定剂和所述防腐剂在调节pH之前添加。
进一步地,一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定试剂的测定方法,包括以下的步骤:
(1)、将样品与第一试剂混合反应,得反应液1;
(2)、读取步骤(1)所得的反应液1在546nm和700nm波长处的吸光度值;
(3)、将步骤(1)所得的反应液1与第二试剂混合反应,得反应液2;
(4)、读取步骤(3)所得的反应液2在546nm和700nm波长处的吸光度值;
(5)、计算步骤(4)与步骤(2)所得吸光度的差值;
(6)、通过与标准品吸光度值的比较,求得样品中sdLDL的含量。
上述测定方法所使用的仪器为全自动生化分析仪,更佳地为日立7180全自动生化分析仪或贝克曼系列全自动生化分析仪。
其中,步骤(1)为:将样品与上述第一试剂混合反应,得反应液1。其中,所述混合反应的时间为本领域常规的条件。所述混合反应的温度较佳地为37℃。所述样品与上述第一试剂的体积比较佳地为1:75~1:120,更佳地为1:110。
步骤(3)为:将步骤(1)所得的反应液1与上述第二试剂混合反应,得反应液2。其中,所述混合反应的时间为本领域常规的条件。所述混合反应的温度为本领域常规的温度。所述反应液1与上述第二试剂的体积比较佳地为5:1~2:1,更佳地为3:1。
步骤(4)为:读取步骤(2)所得的反应液2在546nm和700nm波长处的吸光度值,计算步骤(4)与步骤(2)所得吸光度的差值,通过与同样参数定标的标准液样品进行比较计算,从而得出小而密脂蛋白的含量。其中,所述计算的方法是自动生化分析仪中的计算方法,较佳地,spline方法。
较佳地,所述的测定方法是以非疾病诊断或治疗目的的测定方法。
在符合本领域常识的基础上,上述各优选条件,可任意组合,即得本发明各较佳实例。
本发明具有如下有益效果:
离液离子化合物在特定的浓度下,能够改变脂蛋白的表面电荷,增加脂蛋白的水溶性,并分解特定的脂蛋白。本发明通过广泛深入的研究,发现将血清或血浆试样与包括适宜浓度的离液离子化合物和聚乙二醇(PEG)等其他成分组成的第一试剂反应,能够较为完全地清除非sdLDL;再与组分及其含量经特殊选择的第二试剂反应,从而达到准确测定血清或血浆试样中sdLDL的含量的目的。
本发明所述的测定方法,能够特定、专一地检测小而密脂蛋白(sdLDL),并且该检测方法可靠性高、成本低、效率高,能够大规模自动化特异性检测sdLDL。所述的测定小而密脂蛋白的试剂配制简单方便,能够高效、准确地应用于所述方法中进行特异性测定sdLDL。
附图说明
图1为本发明实施例1临床标本测试结果;
图2为本发明实施例2临床标本测试结果;
图3为本发明实施例3临床标本测试结果。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明,但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,按照常规方法和条件,或按照商品说明书选择。
实施例中所述缓冲液购自苏州贝克生物科技有限公司、Trinders色原购自东仁化学科技(上海)有限公司、所有的酶购自旭化成株式会社、4-氨基安替比林购自西格玛奥德里奇中国,其它试剂购自上海化学试剂商店。
本发明提到的百分比均为质量百分比。
实施例1
第一试剂:
将MOPSO缓冲液、硫酸镁、溴化钠、聚乙二醇、EDTA、BSA、TOOS和TPGS-750-M加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶,并使上述物质达到下列的浓度:
其中,聚乙二醇分子量为2000。
第二试剂:
将MOPSO缓冲液、4-氨基安替比林、叠氮钠和Tergitol TMN-6加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入过氧化物酶入水中混合,并使上述物质达到下列的浓度:
在日立7180全自动生化分析仪上,180μL上述第一试剂与2.4μL人血清样品反应5分钟,然后加入60μL第二试剂,在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法,读点16~34点。与采用同样测定参数的朗道Acusera血脂质控品定标曲线比对计算,测定13例临床标本结果如附图1所示,并与市售采用磷脂酶法的试剂对照,实施例1测定的相关系数为0.9782,说明采用实施例1所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。
实施例2
第一试剂:
将MOPS缓冲液、TOPS、聚乙二醇、硫酸镁、溴化钠、EDTA、Nok、TPGS-1000和BSA加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶,并使上述物质达到下列的浓度:
第二试剂:
将MOPS缓冲液、4-氨基安替比林、Tergitol 15-S-7和叠氮钠入水中混合,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入过氧化物酶,并使上述物质达到下列的浓度:
在日立7180全自动生化分析仪上,180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5min,然后加入60μL第二试剂,在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法,读点16~34点。与采用同样测定参数的标准品定标曲线比对计算,测定15例临床标本结果如图2所示,并与市售磷脂酶法试剂对照,实施例2测定的相关系数为0.9838。说明采用实施例2所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白
实施例3
第一试剂:
将MOPS缓冲液、TOOS、聚乙二醇、硫酸镁、溴化钠、EDTA、Sunnix FA-103、TPGS-750-M和BSA加入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和过氧化氢酶,并使上述物质达到下列的浓度:
第二试剂:
将MOPS缓冲液、4-氨基安替比林、Tergitol TMN-6和叠氮钠入水中,搅拌至完全溶解,调节pH至6.50-7.50,然后加入过氧化物酶,并使上述物质达到下列的浓度:
在日立7180全自动生化分析仪上,180μL上述第一试剂与2.4μL临床人血清样品反应5min,然后加入60μL第二试剂,在主/副546nm/700nm波长处采用两点终点法,读点16~34点。与采用同样测定参数的标准品定标曲线比对计算,测定9例临床标本结果如图3所示,并与市售磷脂酶法试剂比对,实施例3测定的相关系数为0.9533。说明采用实施例3所述的第一试剂和第二试剂能够可靠地检测出小而密脂蛋白。
脂蛋白主要是由脂质和蛋白质以疏水作用、范德华力和静电引力等非共价键结合而成的一种球状微粒,根据密度大小不同可以将人体血液中存在的各组分脂蛋白大致分为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白以及乳糜微粒。脂蛋白表面镶嵌有众多载脂蛋白,不同分类的脂蛋白表面镶嵌有不同的载脂蛋白,比如高密度脂蛋白其载脂蛋白大多为载脂蛋白A,低密度脂蛋白均含有载脂蛋白B。现有技术中,对小而密脂蛋白的测定往往采用表面活性剂结合其它组分的方法,将其它脂蛋白清除或隐蔽使其不参与后续反应,但脂蛋白其表面电荷使其具有凝聚的特性,导致测定结果不准确。因此在本发明中创造性的引入了离液离子化合物,离液离子具有较强分散脂蛋白的作用,离液离子通过改变蛋白质表面电荷的作用,使蛋白质表面带负电荷并产生较强的斥力,促使其分散,将集聚在一起的脂蛋白打开,分散成脂蛋白单体,使其在试样中呈相对游离的状态,为后续工序中表面活性剂和工具酶更加有效的作用提供了一个前序的优势条件。
作为一种测定小而密脂蛋白的试剂,通过选用特定的胆固醇酯酶、聚阴离子化合物和表面活性剂的组合,从而达到定量小而密脂蛋白胆固醇的目的。本发明选用特定的表面活性剂为介质,生育酚聚乙二醇琥珀酸酯作为一种新型表面活性剂,生物相容性好,环境友好,对人畜无害,相比于现有的有机高分子表面活性剂对环境污染性强,难降解,选用生育酚聚乙二醇琥珀酸酯作为表面活性剂使用后可直接排入环境。
通过采用表面活性剂结合离液离子的方式,利用离液离子较强的分散脂蛋白的作用,为后续表面活性剂进一步有针对性的作用于特定部位提供了前序保障,使得后续工序中实现了表面活性剂对特定脂蛋白的精准清除和被测脂蛋白的精准保护,保证了测试的准确性。
另外,在测试试剂中添加的聚阴离子聚乙二醇,具有协助分散清除乳糜微粒、极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白的作用,使其不参与后续反应。
在本发明中,利用表面活性剂、离液离子、聚阴离子和酶的组合,实现了清除非小而密脂蛋白,特征性的测定小而密脂蛋白胆固醇,在处理样品时,利用离液离子对脂蛋白进行分散,使其在血液中呈相对游离的状态,更有利于后续表面活性剂对特定脂蛋白的清除和对特定被测脂蛋白的保护;本发明提供的表面活性剂、离液离子、聚阴离子和酶的组合形成了一个有效的清除和测定的特征性的方法,选用独特的表面活性剂、离液离子和酶的组合,作用于特定的脂蛋白,从而进行准确的测定,聚乙二醇的加入进一步扩充了离液离子、脂蛋白酯酶和表面活性剂结合之间的作用;本测试方法操作简单,可应用于临床生化分析仪,大大缩短了测试时间,适合于大批量样本的临床检测应用。
相关测试:
一、抗干扰试验:
溶血干扰实验:将血红蛋白溶液分别加入到血清样本中,使含血红蛋白分别为5g/L、4g/L、3g/L、2g/L、1g/L。对上述各干扰物的5个不同稀释比例的样品检测3次,计算均值。以未加入血红蛋白的样本为基准值,记作100%,计算干扰度,以此干扰度来判断该检测项目试剂受干扰的有无。规定实验结果在90%~110%区间之内为无显著干扰区间,超过此区间为有显著干扰。
测试1
测试2
测试3
二、试剂空白吸光度
用空白样本加入试剂进行测试,结果如下。标准要求:试剂空白吸光度值应不大于0.0500。
三、分析灵敏度
当样品中sdLDL-C浓度为0.65mmol/L时,测试吸光度变化值,结果如下。
标准要求:吸光度值差值应不小于0.0100。
四、线性范围
取接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品,混合成5个稀释浓度样品(xi),每个稀释浓度样品测试3次,结果如下。
标准要求:在[0.10~2.60]mmol/L线性范围内,线性相关系数(r)应不小于0.990,在[0.10~0.80]mmol/L范围内,线性绝对偏差应不超过±0.10mmol/L,在(0.80~2.60]mmol/L范围内的线性相对偏差应不超过±15.0%。
测试1
测试2
测试3
五、精密度试验
测试1
次数 | 样本1 | 样本2 |
1 | 0.74 | 1.71 |
2 | 0.72 | 1.60 |
3 | 0.68 | 1.68 |
4 | 0.74 | 1.71 |
5 | 0.68 | 1.71 |
6 | 0.67 | 1.65 |
7 | 0.74 | 1.65 |
8 | 0.69 | 1.71 |
9 | 0.72 | 1.65 |
10 | 0.74 | 1.66 |
均值 | 0.71 | 1.67 |
标准差 | 0.029 | 0.037 |
<![CDATA[CV<sub>批内</sub>(%)]]> | 4.07 | 2.24 |
测试2
测试3
次数 | 样本1 | 样本2 |
1 | 0.68 | 1.69 |
2 | 0.68 | 1.66 |
3 | 0.69 | 1.61 |
4 | 0.73 | 1.68 |
5 | 0.67 | 1.63 |
6 | 0.67 | 1.67 |
7 | 0.74 | 1.65 |
8 | 0.67 | 1.60 |
9 | 0.73 | 1.63 |
10 | 0.67 | 1.67 |
均值 | 0.69 | 1.65 |
标准差 | 0.029 | 0.030 |
<![CDATA[CV<sub>批内</sub>(%)]]> | 4.14 | 1.84 |
六、精确度试验
回收试验:取高浓度样本A适量,加入到低浓度的人源样本B中,混合成体积比为1:9、1:19的两个样本,各重复检测3次,取平均值,计算出回收率。标准要求:回收率应在85.0%-115.0%之间。
测试1
测试2
测试3
七、检测限试验
以5%牛血清白蛋白(BSA)溶液作为测定样本,重复测定20次。
经统计数据分析,该产品的最低检测限(均值+2SD)为0.001mmol/L。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不构成对权利要求范围的限制,本领域技术人员可以想到的其他实质上等同的替代,均在本发明保护范围内。
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本申请的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本申请的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本申请的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (1)
1.一种小而密低密度脂蛋白胆固醇的非疾病诊断或治疗目的的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)、将样品与第一试剂混合反应,得反应液1;
(2)、读取步骤(1)所得的反应液1在546nm和700nm波长处的吸光度值;
(3)、将步骤(1)所得的反应液1与第二试剂混合反应,得反应液2;
(4)、读取步骤(3)所得的反应液2在546nm和700nm波长处的吸光度值;
(5)、计算步骤(4)与步骤(2)所得吸光度的差值;
(6)、通过与标准品吸光度值的比较,求得样品中sdLDL的含量;
其中,第一试剂中添加了离液离子化合物、表面活性剂A和胆固醇酯酶,所述离液离子化合物通过电荷作用对脂蛋白进行分散,以使表面活性剂A和胆固醇酯酶选择性地作用于特定脂蛋白,从而达到测量特定脂蛋白中胆固醇的量;
所述离液离子化合物的浓度为10mmol/L~300mmol/L;所述离液离子化合物为溴化钠;
所述第一试剂还包括添加胆固醇测量的酶,包括胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶;所述胆固醇酯酶的含量为1~10KU/L,所述胆固醇氧化酶的含量为1~10KU/L,所述过氧化氢酶的含量为100~300KU/L;
所述第一试剂包括添加聚乙二醇,含量为0.1~1.0%,以分散乳糜微粒及极低密度脂蛋白,协同离液离子化合物和脂蛋白酯酶以及表面活性剂A之间的结合作用;
所述表面活性剂A为生育酚聚乙二醇琥珀酸酯,含量为0.05~3.0%;
所述第一试剂还包括添加Trinder’s色原化合物和二价金属离子;所述第一试剂中Trinder’s色原化合物的含量为0.2~10mmol/L;所述二价金属离子为镁离子,含量为1~90mmol/L;
所述第一试剂还包括添加缓冲液、防腐液、稳定剂中的一种或多种;所述缓冲液为MOPSO缓冲液,所述缓冲液的含量为25~120mmol/L;所述稳定剂为牛血清白蛋白、氯化钠和EDTA,所述防腐剂为Proclin-300,含量为0.01~0.5%;
所述缓冲液、所述稳定剂和所述防腐剂在调节pH之前添加;
其中,第二试剂中添加了过氧化物酶、4-氨基安替比林、叠氮钠和表面活性剂B;所述过氧化物酶的含量为0.2~10KU/L,所述4-氨基安替比林的含量为1.0~10mmol/L,所述叠氮钠的含量为0.01~0.3%,所述表面活性剂B为陶氏公司的Tergitol TMN-6;
所述第二试剂还包括缓冲剂和/或稳定剂;所述缓冲液较佳地为MOPS缓冲液或MOPSO缓冲液,所述缓冲液的含量为30~75mmol/L;所述稳定剂较佳地为牛血清白蛋白;含量为0.2~5g/L。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
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Denomination of invention: A small and dense low-density lipoprotein cholesterol determination reagent and testing method Effective date of registration: 20231229 Granted publication date: 20230512 Pledgee: Zhejiang Juzhou Commercial Bank Co.,Ltd. Wenzhou Ouhai Branch Pledgor: ZHEJIANG ERKN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023980074162 |