CN108410950A - 一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒 - Google Patents

一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，所述试剂盒为液体双试剂，由试剂R1和试剂R2按体积比3:1组成。本发明所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒中的多聚体组合—3‑苄氧基苯基醚、聚氧乙烯烷基醚和PEG800，作为试剂R1的中的重要组成部分，以更好的充分消除待检测样本中除sdLDL‑C以外的脂蛋白胆固醇对sdLDL‑C检测造成的影响；另外，在试剂R2中，经过变性剂Triton X‑100的加入，使得待测样本中被保护的sdLDL‑C被释放，而达到仅对sdLDL‑C的高效、特异检测，保证了检测结果的准确性。

Description

一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
背景技术
低密度脂蛋白(LDL)由一系列密度、体积、理化特性不同的颗粒组成，存在明显的异质性。小而密低密度脂蛋白(small dense LDL，sdLDL)为LDL亚组分之一，在动脉粥样硬化(As)、缺血性心脏病、动脉粥样硬化的发生、发展过程中起重要作用，是冠心病的危险因子，2002年美国国家胆固醇教育计划成人治疗方案Ⅲ将sd LDL作为冠心病新的危险因子，因而越来越重视对小而密低密度脂蛋白胆固醇的检测。
目前，对小而密低密度脂蛋白胆固醇的检测常用的方法为均相法，利用均相法，先对待检测的sdLDL进行保护，而对待检测样本中除sdLDL-C以外的脂蛋白胆固醇进行充分的清除后再对样本中sdLDL-C进行特异性的检测，该方法操作简单，因此，近几年受到了很好的推广，但是该方法的难点在于，如何选用适宜的表面活性剂，以达到对脂蛋白选择性的解离，从而保证检测结果的准确性。
发明内容
有鉴于此，本发明旨在提出一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，以完成对脂蛋白选择性的解离，从而保证检测结果的准确性。
为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，所述试剂盒为液体双试剂，由试剂R1和试剂R2按体积比3:1组成；所述试剂R1由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为2000-5000U/L的过氧化氢酶，浓度1400-2500U/L的胆固醇酯酶，浓度为1300-2000U/L的胆固醇氧化酶，浓度为50-100KU/L的磷脂酶，浓度为0.5-1.5g/L的表面活性剂A，浓度为0.1-0.5g/L的表面活性剂B，浓度为0.5-1.5g/L的聚乙二醇(PEG)，浓度为3-8mmol/L的2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠(TOOS)；所述试剂R2由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为1500-2500U/L的过氧化物酶，浓度为50-80mmol/L的聚氧乙烯辛基苯基醚(Triton X-100)，浓度为1.5-3.0mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)，浓度为0.05％的叠氮钠。
进一步的，所述表面活性剂A为甲氧基苯甲基丁二酯或3-苄氧基苯基醚中的一种。
进一步的，所述表面活性剂B为聚氧乙烯苄基苯乙烯醚(A3PK)或聚氧乙烯烷基醚中的一种。
进一步的，所述聚乙二醇为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000或聚乙二醇6000中的一种。
相对于现有技术，本发明所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒具有以下优势：
本发明所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒筛选了一种高效的选择性解离特定组分脂蛋白，而不解离小而密低密度脂蛋白胆固醇的非离子表面活性剂和多聚体组合—3-苄氧基苯基醚、聚氧乙烯烷基醚和PEG800，作为试剂R1的中的重要组成部分，以更好的充分消除待检测样本中除sdLDL-C以外的脂蛋白胆固醇对sdLDL-C检测造成的影响；另外，在试剂R2中，经过变性剂Triton X-100的加入，使得待测样本中被保护的sdLDL-C被释放，而达到仅对sdLDL-C的高效、特异检测，保证了检测结果的准确性。
附图说明
图1为本发明实施例所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的线性检测关系图。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明。
本发明所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测原理为：
(1)试剂R1中的非离子表面活性成份和多聚体使血清中的小而密低密度脂蛋白受到抑制，而高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、乳糜微粒和极低密度脂蛋白经胆固醇酶反应消耗掉，由于缺乏一个色源而不显色。
(2)试剂R2中的变性剂释放出小而密低密度脂蛋白后，仅对sdLDL进行测量。
本发明所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的制备：
一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，所述试剂盒为液体双试剂，由试剂R1和试剂R2按体积比3:1组成；所述试剂R1由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为2000-5000U/L的过氧化氢酶，浓度1400-2500U/L的胆固醇酯酶，浓度为1300-2000U/L的胆固醇氧化酶，浓度为50-100KU/L的磷脂酶，浓度为0.5-1.5g/L的表面活性剂A，浓度为0.1-0.5g/L的表面活性剂B，浓度为0.5-1.5g/L的聚乙二醇(PEG)，浓度为3-8mmol/L的2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠(TOOS)；所述试剂R2由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为1500-2500U/L的过氧化物酶，浓度为50-80mmol/L的聚氧乙烯辛基苯基醚(Triton X-100)，浓度为1.5-3.0mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)，浓度为0.05％的叠氮钠。
所述表面活性剂A为甲氧基苯甲基丁二酯或3-苄氧基苯基醚中的一种；所述表面活性剂B为聚氧乙烯苄基苯乙烯醚(A3PK)或聚氧乙烯烷基醚中的一种；所述聚乙二醇为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000或聚乙二醇6000中的一种。
实施例1
一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的液体双试剂具体成分如表1：
表1一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的液体双
试剂具体成分
1)选用2份样本，稀释5个梯度，同时选用国际上已上市质量较好的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，做比对，检测参数及程序见表2，检测结果及与对比试剂的相对偏差见表3。
表2检测参数及程序
表3检测结果及与对比试剂的相对偏差
从结果可以看出，实施例1试剂与国际上已上市质量较好的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒检测结果的相对偏差在10％以内，具备较高的准确度。
2)对上述试剂进行空白吸光度、灵敏度、线性、重复性和准确度进行检测，结果如下：
(1)线性范围
按照如下表4所示的浓度，用高浓度样本和低浓度样本，混合成5个稀释浓度(Xi)，分别用来测试试剂盒(测试温度37℃)，每个稀释浓度测试3次，测定均值(Yi)，以稀释浓度(Xi)为自变量，以测定均值(Yi)为因变量求出线性回归方程，试验数据如表4，Xi和Yi的理论值以及绝对偏差和相对偏差见表5。
表4线性范围数据表
通过上表的结果得到该试剂检测结果的线性相关系数为r＝0.9998线性方程为：y＝1.0167x-23.654说明该试剂的线性情况良好。
表5Xi和Yi的理论值以及绝对偏差和相对偏差
根据表5数据所知，在线性围内，可计算得出该试剂在[100,500]mmoL/L范围内，线性绝对偏差应未超过±20umoL/L，在(500,3000]umoL/L范围内，线性相对偏差应未超过±10.0％。
(2)重复性，
用本实施例所述的试剂连续检测同一样本10次计算其重复性，结果如表6所示，
表6重复性试验数据
序号 测得浓度(μmol/L)
1 552.3
2 557.7
3 552.1
4 535.8
5 537.6
6 547.1
7 557.8
8 538.2
9 564.8
10 546.2
平均值 548.96
SD 9.75
CV％ 1.78％
由表6所示，本实施例所述的试剂的重复性检验数据为1.78％，<5％，说明本试剂对同一样本的检测重复性较好。
(3)准确度
选取40份样本，用本实施例所述的试剂与国际上已上市质量较好的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒同时检测，对检测结果进行线性相关分析，试验数据见表7，依据测得数据，做出两种产品检测结果线性回归拟合图，如图1所示。得到的直线方程为：Y＝0.9939X+1.3832；同时求得R2＝0.9813，R＝0.9906值>0.990，表明两种产品的检测结果显著相关。
表7准确度试验数据
样本号 本实施例试剂检测结果(μ) 国际已上市产品检测结果(μ)
1 1406.9 1393.3
2 547.9 530.7
3 637.9 701.2
4 845.6 924.5
5 526.2 490.9
6 1337.4 1309.6
7 634.7 636.2
8 1125.0 1109.4
9 1449.7 1521.5
10 321.6 329.5
11 627.0 583.2
12 753.8 757.3
13 729.2 678.5
14 339.7 318.7
15 457.9 453.0
16 1218.9 1127.6
17 1181.3 1280.9
18 1106.5 1013.1
19 1427.6 1323.7
20 1392.0 1371.7
21 1432.0 1378.0
22 597.5 605.4
23 562.6 530.6
24 1167.5 1193.3
25 537.4 532.7
26 1003.3 1058.2
27 940.4 1025.8
28 468.6 460.0
29 1316.7 1381.3
30 357.9 333.0
31 1291.9 1212.5
32 880.7 794.8
33 466.7 504.0
34 1375.0 1375.0
35 1130.5 1224.0
36 273.8 256.3
37 260.7 270.7
38 1377.6 1375.9
39 824.6 750.9
40 574.9 631.2
实施例2-12
实施例2-12中的表面活性剂A、表面活性剂B、聚乙二醇如表8所示，其他试剂与实施例1相同，
选用2份样本，稀释5个梯度，同时选用国际上已上市质量较好的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，做比对，检测参数及程序表2，检测结果见表9，与对比试剂的相对偏差见表10。
表8实施例2-12中的试剂
表9实施例2-12的检测结果表
表10实施例2-12的相对偏差表
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为液体双试剂，由试剂R1和试剂R2按体积比3:1组成；
所述试剂R1由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为2000-5000U/L的过氧化氢酶，浓度1400-2500U/L的胆固醇酯酶，浓度为1300-2000U/L的胆固醇氧化酶，浓度为50-100KU/L的磷脂酶，浓度为0.5-1.5g/L的表面活性剂A，浓度为0.1-0.5g/L的表面活性剂B，浓度为0.5-1.5g/L的聚乙二醇(PEG)，浓度为3-8mmol/L的2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠(TOOS)；
所述试剂R2由以下组分组成：浓度为60-120mmol/L的MOPS缓冲液，浓度为1500-2500U/L的过氧化物酶，浓度为50-80mmol/L的聚氧乙烯辛基苯基醚(Triton X-100)，浓度为1.5-3.0mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)，浓度为0.05％的叠氮钠。
2.根据权利要求1所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂A为甲氧基苯甲基丁二酯或3-苄氧基苯基醚中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂B为聚氧乙烯苄基苯乙烯醚(A3PK)或聚氧乙烯烷基醚中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种高效、特异的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述聚乙二醇为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000或聚乙二醇6000中的一种。
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