CN112029822A - 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其包括试剂R1试剂、R2试剂和校准品,其中,试剂R1包括如下各组分及浓度:缓冲液、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、抗人高密度脂蛋白抗体、表面活性剂以及防腐剂;试剂R2包括如下各组分及浓度:缓冲液、表面活性剂、4‑氨基安替比林、过氧化物酶以及防腐剂;校准品包括如下各组分及浓度:缓冲液、甘油、稳定剂、sdLDL抗原以及防腐剂。本发明通过加入抗人高密度脂蛋白抗体,大大改善了试剂盒的性能,其可以使试剂稳定性更强,灵敏度更高,检测范围更广,检测成本降低。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体涉及一种蛋白酶检测试剂盒,尤其涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒。
背景技术
Lipoprint LDL亚组分快速分析系统是目前唯一由美国食品药品监督管理局认证的用于LDL亚组分分离检测的诊断设备。Lipoprint检测系统是根据LDL的颗粒大小和电荷的多少,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法来达到分离的目的,可在短时间内将LDL分成7个亚组分,其中组分1和2定义为ldLDL颗粒;组分3至7定义为sdLDL颗粒。该系统可高效地定量、定性检测LDL各亚组分,因而,更有利于在临床常规实验室中的普及应用。研究表明,在冠心病患者血浆中,代表sdLDL颗粒的LDL组分3的水平及其百分比显著高于对照者;在具有相近LDL水平的不同冠心病患者中,血浆LDL以组分3为主的患者,其预后较差,更易发生不良心血管事件。可见,对LDL亚组分水平的全面分析相较传统的单纯以LDL或LDL-C为检测目的的血脂分析,更能反映ASCVD患者体内致AS脂蛋白的真实水平,有望为临床ASCVD的危险评估提供更有价值的参考指标。
国外生物公司也推出了采用酶联免疫吸附试验竞争法检测人血清或血浆sdLDL的商品化试剂盒;该方法虽然有望实现sdLDL的快速检测,但是针对人sdLDL的特异性抗体并不能完全排除存在其他交叉反应的可能,且抗人sdLDL抗体的制备方法及其特异性位点仍需进一步验证,该法与其他传统sdLDL分离检测方法的相关性也需进一步评估;是否可应用于临床仍有待考证。
sdLDL-C的非匀相测定法主要包括肝素镁沉淀法和肝素锰沉淀法,原理是通过选择性沉淀lbLDL、中间密度脂蛋白和极低密度脂蛋白,收集含sdLDL和高密度脂蛋白的上清液,再测定上清液中LDL-C含量,从而实现对sdLDL-C的定量检测。该方法不需特殊仪器设备,较LDL亚组分传统检测方法简便;但存在预先沉淀处理容易产生不完全沉淀的缺点,易造成最终测定结果的不准确;且不适用于全自动生化分析仪,因此,研发一种完全自动化的sdLDL-C检测方法成为近年来LDL亚组分研究的热点之一。
sdLDL-C常规通过表面活性剂第一反应来进行改变LDL以外的(例如CM、VLDL以及HDL等)脂蛋白的结构,使诸如CM、VLDL以及HDL等的脂蛋白与酶起反应,LDL没有反应.而CM,VLDL,HDL等反应被促进,LDL以外的脂蛋白被消除,第二反应表面活性剂则促进各类脂蛋白的酶反应,与第一反应中没被消除LDL产生显色反应.此法所进行的利用表面活性剂在第一反应消除LDL以外的脂蛋白消除率只为30-40%。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒及其制备方法。本发明通过加入抗人高密度脂蛋白抗体,尤其是在试剂R1中加入一对高密度脂蛋白单克隆抗体,从而实现特异性结合血清中高密度脂蛋白,进而大大改善了试剂盒的性能,使试剂稳定性更强,灵敏度更高,检测范围更广,检测成本降低.
为实现上述目的,本发明通过以下技术方案实现:
第一方面,本发明提出了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其包括试剂R1试剂、R2试剂和校准品,其中,
试剂R1包括如下各组分及浓度:
试剂R2包括如下各组分及浓度:
校准品包括如下各组分及浓度:
需要说明的是,上述方案中,试剂R1的pH值为4.0-6.0;试剂R2的pH值为6.0-8.0。
优选地,所述试剂R1中的抗人高密度脂蛋白抗体包括一对单克隆抗体,所述单克隆抗体的亚型为IgG1,κ。
优选地,所述单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生:CCTCC-C200923、CCTCC-C200924或CCTCC-C200925。
优选地,所述的高密度脂蛋白是用原核表达系统制得的。
优选地,所述试剂R1中,表面活性剂为烷基胺类表面活性剂;优选地采用烷基胺类的作为表面活性剂,这是因为它们既能与阴离子表面活性剂相容,也能与非离子表面活性剂和阳离子表面活性剂相容,尤其是在中性和碱性溶液中显示出其非离子特性,在酸性介质中显示出弱离子特性,再加上本身的特性:稳定性高,生物降解性好。所述试剂R1的表面活性剂包括如下所述的一种或多种:十二烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、三辛基甲基氯化铵、双十烷基二甲基氯化铵、十八烷基三甲基氯化铵、双十八烷基二甲基氯化铵;所述防腐剂包括proclin-300。
更为优选地,试剂R1的表面活性剂包括如下如下所述的一种或多种:Triton X-100、烷基聚甲基溴化铵二胺、(EO/PO)嵌段共聚物胺类功能性表面活性剂,十二烷基硫酸钠。
优选地,所述试剂R2中,缓冲液包括GOODS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、AMPSO缓冲液中的一种或多种;稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、聚乙二醇、甘露醇、螯合剂类中的一种;所述防腐剂包括叠氮钠或proclin系列防腐剂。
优选地,所述试剂R1中的胆固醇脂酶经过化学修饰,以使得试剂的冷藏稳定性、热稳定性有了显著提高。
优选地,在所述校准品中,缓冲液包括GOODS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、AMPSO缓冲液中的一种或多种;校准品中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、聚乙二醇、甘露醇、螯合剂EDTA类中的一种;防腐剂包括叠氮钠或proclin系列防腐剂;sdLDL抗原来源于人工表达。
在本发所述的技术方案中,试剂R1中的抗人高密度脂蛋白抗体由于抗体抗原的特异性结合从而起到选择性抑制sdLDL以外的脂蛋白,而试剂R1中的适量的表面活性剂在胆固醇脂酶(CHE),胆固醇氧化酶(CHOD)以及过氧化氢酶(Catalase)存在下消除非sdLDL脂蛋白中的胆固醇,而R2中的另一种表面活性剂能特异性,并在胆固醇脂酶,胆固醇氧化酶,过氧化物酶以及显色剂的作用下发生显色反应,与标准对比算出sdLDL-C的含量。
需要说明的是,本案通过试剂R1加入抗人高密度脂蛋白抗体,可以进行选择性的抑制sdLDL以外的脂蛋白,特定的表面活性剂在酶的催化下消除非sdLDL脂蛋白中的胆固醇,上述皆是本案较之于现有技术的区别之处,也是本案与其他专利的新颖之处,因为现在高血脂的血越来越多,以往的检测试剂未能够及时有效的检测准确,而本案的发明能显著的提高检测的准确性。
第二方面,本发明是提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,并采用以下技术方案,试剂含量为:
胆固醇脂酶(CHE)含量为400-1000U/L,胆固醇氧化酶(CHOD)含量为400-1000U/L,过氧化氢酶(Catalase)含量为400-1000U/L,特级抗人高密度脂蛋白抗体含量为5-20mg/L,试剂R2中缓冲液为哌嗪-1,4-双(2-乙磺酸)含量为50-200mmol/L,4-氨基安替比林的含量为2-10mmol/L,过氧化物酶POD的含量为400-1000U/L,校准品成分中TRIS缓冲液含量为100mmol/L,SDLDL抗原含量为5-10mg/L.
与现有技术相比,本发明具有如下的有益效果:
本发明特异性好,试剂稳定,灵敏度高,操作简便,测定快速、测定结果准确可靠。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法,除非另行定义,文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外,任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1原核表达系统的基本流程
获得目的基因,通过PCR方法,以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物,在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点,PCR循环获得所需基因片段。
需要说明的是,单克隆抗体1和单克隆抗体2分别针对高密度脂蛋白第82-192肽段和202-35肽段特异性位点设计,单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备,例如单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生:CCTCC-C200923、CCTCC-C200924或CCTCC-C200925(具体制备方法可以参见:欧兰香等人,国际检验医学杂志,2019,40(22),重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备;王卉等人,细胞与分子免疫学杂质,2020,36(2),重组载体免疫小鼠制备抗人CD33单克隆抗体;公开号为CN101891815,名称为“CK19”单克隆抗体、其制备方法及用途”的中国专利文献)。
构建重组表达载体:1).载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2).PCR产物双酶切后回收,在T4-DNA连接酶作用下连接入载体。
获得含重组表达质粒的表达菌种:1)将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽取质粒,双酶切初步鉴定。2)测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确进入下步操作。3)以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
4.诱导表达:1)挑取含重组质粒的菌体单斑至2mlLB(含Amp50ug/ml)37度过夜培养。2)按1:50比例稀释过夜菌加入到含50mlLB培养基的300ML培养瓶中,37度震荡培养3H,3)取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作实验组,37度震荡培养3H。4)分别取菌体1ml,离心12000g*30S收沉淀,用100ul1%SDS重悬,混匀.5)离心,上清作样品,做SDS-PAGE分析。
实施例2
在本实施例中,对抗人高密度脂蛋白抗体消除高密度脂蛋白的干扰效果进行了评估,方案如下参见表1:
表1.
表2为特异性实验评价。其中,表2所采用的实验条件参数如下:
验证试剂批号:20190601
校准品
公司配套校准品批号:20190601
所用机器和参数设置:
迪瑞CS-600B全自动生化分析仪,参数设置如下
SDLDL:660nm/546nm;两点终点法;3/270/90
表2.
因此,由表1和表2可以看出:添加抗人高密度脂蛋白抗体(如方案2-4所示)对抑制高密度脂蛋白有显著效果,其中单克隆抗体2效果优于单克隆抗体1,单克隆抗体1和单克隆抗体2联合使用的抑制效果要好于单独使用效果
实施例3
本实施案例主要对2个抗体使用的浓度进行评估。方案如下表3所示:
表3.
表4显示了表3所采用的方案的特异性实验评价。
表4.
结论:抗体使用的浓度越高效果,对高密度脂蛋白的抑制率就越高,达到12mg/L时,抑制率达到最佳
实施例4:SDLDL抗原人工表达流程
半抗原的设计与合成(具体可以参见李容庆等,中国生物工程杂质,2018,38(12)65-75,人工抗原合成研究进展):
磷酸化组氨酸+π-磷酸化组氨酸连接在组氨酸咪唑环的氮原子上,形成的N-P键在酸性条件下极不稳定,kee引以三唑环和吡唑环替代T-phis中的咪唑环,以稳定性质的C-P键替代n-p键得到PTZE和PPYE,以其作为半抗原制备的抗体。
半抗原连接臂的选择:
从酚羟基部位引入连接臂,保留半抗原的的特异性结构,增强特异性,6个碳原子长度,增加偶联率。
半抗原制备,纯化,鉴定:
柱层析系统,通过GE公司的AKTA FPLC系统自动层析分离,紫外光谱法鉴定蛋白抗原。
实施例5:
本案例对采用化学修饰的胆固醇脂酶(CHE)的试剂的稳定性进行了评估。胆固醇脂酶(CHE)化学修饰方案如下:配制缓冲液,然后加入对氨基苯磺酸和AEO-9两种物质作为激活剂,然后加入载体PEG20000(sigma),再加入保护剂以及乳化剂和离子物质搅拌均匀后,依次加入胆固醇氧化酶和胆固醇脂酶,慢中速搅拌10分钟,然后使用低转速离心机离心后,取出上清液即可为PEG修饰酶。配方组成成分:对氨基苯磺酸、AEO-9、PEG20000、保护剂、乳化剂、离子物质、胆固醇氧化酶、胆固醇脂酶、异硫氰酸甲酯。
以配制1L为例:
对氨基苯磺酸5mmol,AEO-9 1.2g,PEG20000(sigma)5g,磷脂血清1.5ml,曲拉通-100 2ml,氯化钠3g,胆固醇氧化酶3KU,胆固醇脂酶1.2KU,异硫氰酸甲酯0.5g.
采用修饰的胆固醇脂酶(CHE)配制sdLDL试剂,采用国内某公司试剂(采用未经修饰的胆固醇脂酶(CHE))进行37度和2-8度冷藏稳定性对比。
其中,37度加速稳定性方法:试剂盒在加热(37℃)条件下保存7天后,取出试剂盒做分析性能评估(与4℃保存的试剂进行比较),参见下表5。
表5.
冷藏稳定性试验方法:试剂盒在冷藏(2~8℃)条件下,每2个月取出试剂盒做分析性能评估,最终结果参见表6和表7。
表6.
表7.
实施例6:
将一定浓度的胆红素、血红蛋白、乳糜干扰物质按照一定比例添加到血清中,形成一定的干扰物质浓度梯度,测定样本各3次,计算回收率,回收率在初始值的±10%以内,干扰属于可接受。
乳糜干扰物质的配制如表8所示:
表8.乳糜蛋白
胆红素干扰物质的配制如表9所示:
表9.胆红素
血红蛋白干扰物质的配制如表10所示:
表10.血红蛋白
表11显示了最终的抗干扰结果
表11.
由上表可以得出结论:本发明试剂盒乳糜浓度在4000浊度以内,胆红素浓度在40mg/dl以内,血红蛋白浓度在400mg/dl以内,检测结果与对照的变差小于5%,表明对检测结果无明显干扰。
实施例:7:
以某公司试剂的与本发明交叉进行对比,验证本试剂表面活性剂,
以朗道质控(靶值:1.03mmol/L)为例,以下三个方案同时定标,测朗道质控,来验证表面活性剂稳定性。其中,方案1为本发明嵌段聚合物表面活性剂R1+本发明试剂R2;方案2为采用甲氧基苯甲基丁二酯为表面活性剂其他成分与方案1相同的R1+与方案1相同成分的本发明试剂R2;方案3.为本发明嵌段聚合物表面活性剂R1+宁波美康诊断试剂;方案4采用宁波美康诊断试剂。
需要说明的是,所述的嵌段聚合物表面活性剂采用的是进口烷基聚甲基溴化铵二胺(EO/PO)嵌段共聚物胺类功能性表面活性剂。
表11列出了各个方案的定标数据。
表11.
表12列出了朗道质控的测定数值。
表12.
结合表11和表12可以看出:加入了进口烷基聚甲基溴化铵二胺(EO/PO)嵌段共聚物胺类功能性表面活性剂的R1,灵敏度更好,本底更低,CV值稳定,不跳值,与别的公司试剂混合实验,兼容性也很好。
本发明具体应用途径很多,以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出,以上实施例仅用于说明本发明,而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进,这些改进也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
2.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中的抗人高密度脂蛋白抗体包括一对单克隆抗体,所述单克隆抗体的亚型为IgG1,κ。
3.根据权利要求2所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,单克隆抗体由选自下组的杂交瘤细胞株产生:CCTCC-C200923、CCTCC-C200924或CCTCC-C200925。
4.根据权利要求2所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,所述的高密度脂蛋白是用原核表达系统制得的。
5.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中,表面活性剂为烷基胺类表面活性剂;所述防腐剂包括proclin-300。
6.根据权利要求5所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,所述试剂R1的表面活性剂包括如下所述的一种或多种:Triton X-100、烷基聚甲基溴化铵二胺、EOPO嵌段共聚物胺类活性表面活性剂及十二烷基硫酸钠。
7.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,在所述试剂R2中,缓冲液包括GOODS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、AMPSO缓冲液中的一种或多种;稳定剂包括牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、聚乙二醇、甘露醇、螯合剂类中的一种;所述防腐剂包括叠氮钠或proclin系列防腐剂;表面活性剂为吐温-20。
8.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,所述试剂R1中的胆固醇脂酶经过化学修饰。
9.根据权利要求1所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒,其特征在于,在所述校准品中,缓冲液包括GOODS缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、AMPSO缓冲液中的一种或多种;校准品中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、聚乙二醇、甘露醇、螯合剂类中的一种;防腐剂包括叠氮钠或proclin系列防腐剂;sdLDL抗原来源于人工表达。
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Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112255395A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-01-22 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法和免疫浊度法试剂盒及应用 |
CN112710609A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-27 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 抗乳糜干扰的尿酸测定试剂盒 |
CN112710656A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-27 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种测定葡萄糖含量的试剂盒及其应用 |
CN112941144A (zh) * | 2021-03-01 | 2021-06-11 | 江西英大生物技术有限公司 | 小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1427257A (zh) * | 2001-12-18 | 2003-07-02 | 杜凤鸣 | 人尿中高密度脂蛋白含量酶联免疫吸附试验试剂盒及制备方法 |
CN101891815A (zh) * | 2009-05-22 | 2010-11-24 | 中国科学院上海生命科学研究院 | Ck19单克隆抗体、其制备方法及用途 |
-
2020
- 2020-08-21 CN CN202010851985.4A patent/CN112029822A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1427257A (zh) * | 2001-12-18 | 2003-07-02 | 杜凤鸣 | 人尿中高密度脂蛋白含量酶联免疫吸附试验试剂盒及制备方法 |
CN101891815A (zh) * | 2009-05-22 | 2010-11-24 | 中国科学院上海生命科学研究院 | Ck19单克隆抗体、其制备方法及用途 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112255395A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-01-22 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种消除脂血样本中乳糜干扰的方法和免疫浊度法试剂盒及应用 |
CN112710609A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-27 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 抗乳糜干扰的尿酸测定试剂盒 |
CN112710656A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-04-27 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种测定葡萄糖含量的试剂盒及其应用 |
CN112941144A (zh) * | 2021-03-01 | 2021-06-11 | 江西英大生物技术有限公司 | 小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒 |
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