CN112213416A - 两种中药配方颗粒的指纹图谱构建方法和鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及两种中药配方颗粒的指纹图谱构建方法和鉴别方法。采用超高效液相色谱法构建了北苍术配方颗粒指纹图谱和麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱。构建的指纹图谱中色谱峰丰富，能更全面反应北苍术与麸炒北苍术中药配方颗粒的特征，进行更全面的整体的质量评价，所述鉴别方法能明显找出两者的差异所在，并解决了原有药材饮片性状显微鉴别点丢失的问题。

Description

两种中药配方颗粒的指纹图谱构建方法和鉴别方法

技术领域

本发明涉及分析检测领域，特别是涉及北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法、麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法和北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法。

背景技术

中药配方颗粒具有冲服、剂量调解方便，规格标准统一，且与相应传统饮片主治功效一致等特点。北苍术配方颗粒及麸炒北苍术配方颗粒分别是以水为溶媒提取北苍术饮片和麸炒北苍术饮片，并经浓缩、干燥(喷雾干燥)、制粒成型等生产工艺所制成的。在功效主治上，生品北苍术温燥辛烈，具有燥湿、祛风、散寒的功效。可用于治疗风湿痹痛，肌肤麻木不仁，脚膝疼痛、风寒感冒等症。麸炒北苍术辛味减弱、燥性缓和、气变芳香，增强了健脾和胃的作用。可用于脾胃不和，痰饮停滞，腕腹痞满等症。鉴于北苍术生品与炮制品功效及应用上的差异，两者的配方颗粒功效和应用上也有差异。但由于中药配方颗粒失去了原药材、饮片所具有的鉴别特征，已无法从药材原有的形状、色泽、质地、断面、气味等性状，或油点(“朱砂点”)、白毛状结晶(“起霜”)这些明显的显微的特征进行检查与鉴别，即，现有的北苍术及麸炒北苍术的配方颗粒已失去原有的外观性状及显微上的特征，肉眼上难以对两者做出鉴别。故建立一种可区分北苍术及麸炒北苍术配方颗粒的指纹图谱，用于对二者进行鉴别显得至关重要。

2015年版《中国药典》对北苍术及麸炒北苍术饮片的质量控制仅规定了苍术素这一指标成分。陈祥胜在“苍术麸炒前后的专属性HPLC特征指纹图谱”文中，以苍术素色谱峰为参照峰，构建了10批苍术生品和麸炒品的HPLC指纹图谱的共有模式。发现第47.36min和第46.35min色谱峰的峰面积比值在生品中＞1，但在麸炒品中却＜1；第51.70min和第49.25min色谱峰的峰面积比值在生品中＜1，但在麸炒品中却＞1，以此作为生苍术和麸炒苍术饮品的定性鉴别特征之一。刘苗苗在“苍术与麸炒苍术标准饮片制备技术及其质量评价研究”文中，对北苍术及其麸炒品饮片进行对比，采用HPLC特征图谱明确特征性差异，以1号峰(8.80min)与2号峰(11.56min)峰面积比值作为北苍术和麸炒北苍术的专属性质量评价指标。这些报道主要集中在苍术与麸炒苍术的饮片质量评价与鉴别上，多是用HPLC(高效液相色谱)进行相关质量研究，对UPLC(超高效液相色谱)指纹图谱这一块的研究相对空白，且均集中在药材饮片上的研究，尚未报道与传统煎液相似的北苍术及麸炒北苍术配方颗粒相关的研究。

而且，目前本领域对中药配方颗粒的进行质量控制与评价通常采用分析单个或几个指标成分，亦或是采用薄层鉴别，具有一定的局限性。然而北苍术及麸炒北苍术配方颗粒的化学成分均比较相似，鉴别二者存在一定的难度。

发明内容

基于此，本发明提供一种北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，所构建的指纹图谱中色谱峰丰富，能更全面反应北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的特征，进行更全面的整体的质量评价。

本发明所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

以溶剂溶解5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品，制备混合对照品溶液；

向溶剂中加入北苍术配方颗粒，回流后滤过，制备北苍术配方颗粒供试品溶液；

对所述混合对照品溶液和北苍术配方颗粒供试品溶液进行超高效液相色谱测定，建立北苍术配方颗粒指纹图谱；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B 的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相 B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相 B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为330nm～345nm。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

在一个优选的实施例中，所述回流的时间为20min～40min。

在一个优选的实施例中，溶解所述5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品的溶剂为体积分数为40％～60％的甲醇水溶液。

在一个优选的实施例中，溶解所述北苍术配方颗粒的溶剂为体积分数为 40％～60％的甲醇水溶液。

在一个优选的实施例中，所述北苍术配方颗粒指纹图谱确定了20个共有峰，其中2号峰为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、7号峰为绿原酸、20号峰为苍术素，以上3个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同。与绿原酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各个特征峰与S峰的相对保留时间，并计算峰1、峰2 (5-HMF)与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定范围内，规定值为： 0.09～0.33(峰1)、0.13～0.48(峰2)。

本发明所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

以溶剂溶解5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品，制备混合对照品溶液；

向溶剂中加入麸炒北苍术配方颗粒，回流后滤过，制备麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液；

对所述混合对照品溶液和麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液进行超高效液相色谱测定，建立麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B 的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相 B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相 B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为 330nm～345nm。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

在一个优选的实施例中，所述回流的时间为20min～40min。

在一个优选的实施例中，溶解所述5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品的溶剂为体积分数为40％～60％的甲醇水溶液。

在一个优选的实施例中，溶解所述麸炒北苍术配方颗粒的溶剂为体积分数为40％～60％的甲醇水溶液。

在一个优选的实施例中，所述麸炒北苍术中药配方颗粒指纹图谱确定了18 个共有峰，其中2号峰为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、7号峰为绿原酸、20号峰为苍术素，以上3个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同。与绿原酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各个特征峰与S峰的相对保留时间，并计算峰1、峰2(5-HMF)与S峰的相对峰面积，其相对峰面积应在规定范围内，规定值为：0.70～3.24(峰1)、0.99～6.86(峰2)。

采用上述供试品制备方法，在上述的色谱条件、梯度洗脱条件下进样，得到的北苍术配方颗粒指纹图谱和麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱，两个指纹图谱共有峰的分离度均较好。

本发明还提供一种北苍术与麸炒北苍术配方颗粒鉴别方法。所述鉴别方法明显区别北苍术与麸炒北苍术配方颗粒，解决了原有药材饮片性状显微鉴别点丢失的问题，以期达到对北苍术与麸炒北苍术配方颗粒进行鉴别与整体质量控制的目的。

具体技术方案为：

一种北苍术与麸炒北苍术配方颗粒鉴别方法，包括以下步骤：

向溶剂中加入待测样品，回流后滤过，制备待测样品溶液；

对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱测定，将所述待测样品溶液的色谱图与上述北苍术配方颗粒指纹图谱和上述麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱进行对比；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B 的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相 B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相 B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

在一个优选的实施例中，若所述待测样品溶液的色谱图符合权利要求1-4任一项所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的特征，且峰1与峰7的相对峰面积在 0.09～0.33之间，峰2与7峰的相对峰面积在0.13～0.48之间，则所述待测样品为北苍术配方颗粒；

若所述待测样品溶液的色谱图符合权利要求5-8任一项所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的特征，且峰1与峰7的相对峰面积在0.70～3.24之间，峰2 与7峰的相对峰面积在0.99～6.86之间，则所述待测样品为麸炒北苍术配方颗粒。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为 330nm～345nm。

在一个优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

在一个优选的实施例中，所述回流的时间为20min～40min。

在一个优选的实施例中，溶解所述待测样品的溶剂为体积分数为40％～60％的甲醇水溶液。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明分别构建了北苍术与麸炒北苍术中药配方颗粒的UPLC指纹图谱，所构建的指纹图谱，充分全面反应样品的特征峰信息，共有峰的分离度均较好，且方法稳定，精密度，重现性较好。通过构建北苍术、麸炒北苍术配方颗粒的 UPLC指纹图谱，为北苍术、麸炒北苍术中药配方颗粒质量提供快速、全面的检测及鉴别手段，该鉴别方法能明显找出两者的差异所在，并解决了原有药材饮片性状显微鉴别点丢失的问题。

附图说明

图1为18批北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱叠加图；

图2为18批麸炒北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱叠加图；

图3为北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗的指纹图谱的对照图谱；

图4为北苍术与麸炒北苍术配方颗粒OPLS-DA得分图；

图5为色谱峰VIP值大小排列结果示意图；

图6为待测中药配方颗粒的UPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

仪器

Thermo Vanquish型超高效液相色谱仪(赛默飞公司)；ME204E型万分之一天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，XP26型百万分之一天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；Milli-Q-Direc型超纯水系统(默克股份有限公司)；Acquity UPLC HSS-T3色谱柱(规格：100×2.1mm,1.8μm；厂家：沃特世公司)；HWS28 型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)。

试药

药材具体信息见表1。

5-羟甲基糠醛对照品来自中国食品药品检定研究院，绿原酸对照品来自中国食品药品检定研究院，苍术素对照品来自中国食品药品检定研究院，甲酸、乙腈为色谱级、水为超纯水，其他试剂为分析纯。

表1药材来源

北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗粒的制备方法分别取表1中18批北苍术饮片和18批麸炒北苍术饮片，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏，加入辅料适量，干燥，再加入辅料适量，混匀，制粒，即得18批北苍术配方颗粒和18 批麸炒北苍术配方颗粒。

实施例1北苍术中药配方颗粒UPLC指纹图谱的构建

1试验方法

1.1对照品溶液的制备：取5-HMF、绿原酸、苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含5-HMF 27μg、绿原酸5μg、苍术素29μg的溶液，摇匀，即得混合对照品溶液。

1.2色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以 0.1％(体积分数)甲酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波长为：0～10min，280nm，10min～45min，340nm，进样量为2μL。梯度洗脱程序见下表2。

表2梯度洗脱表

1.3供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％ (体积分数)甲醇25mL，称定重量，回流30分钟，放冷，用50％(体积分数) 甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得中药配方颗粒供试品溶液。

2.测定法：分别精密吸取混合对照品溶液、中药配方颗粒供试品溶液2uL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.指纹图谱共有峰的确定

3.1取18批北苍术配方颗粒，参照本实施例1.3项下方法制备18批北苍术配方颗粒供试品溶液，参照本实施例1.2项下的色谱条件下获得18批北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱(图1)。

3.2实验结果：18批北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱均显示相同的20个共有峰，因此选择上述20个共有峰作为北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱的特征峰，并以峰7(绿原酸)为参照峰进行标准研究。

4.供试品溶液稳定性考察

取北苍术配方颗粒(对应批号：CZ01)，参照本实施例1.3项下的方法，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0小时，2小时，4小时，8小时， 12小时，16小时，20小时，24小时进样，进样体积2μl。以绿原酸色谱峰为参照峰S，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。

结果显示，供试品溶液在24小时内20个共有峰相对保留时间的RSD<0.8％，相对峰面积的RSD范围为<2.0％，表明该方法下供试品溶液在24小时内基本稳定。

5.指纹图谱的建立

5.1北苍术配方颗粒指纹图谱的建立：对18批北苍术配方颗粒的共有峰信息进行分析。最终规定北苍术配方颗粒指纹图谱标准为：供试品指纹图谱中应有20个共有峰。其中2号峰为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、7号峰为绿原酸、20 号峰为苍术素，以上3个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同；与绿原酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，见表3；并计算峰1、峰2(5-HMF)与S峰的相对峰面积，见表4，其相对峰面积应在规定范围内，规定值为：0.09～0.33(峰1)、0.13～0.48(峰2)。

表3 18批北苍术配方颗粒指纹图谱相对保留时间

表4 18批北苍术配方颗粒指纹图谱峰1、峰2与S峰的相对峰面积

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对18批北苍术配方颗粒图谱进行合成，建立了北苍术配方颗粒指纹图谱的对照图谱(见图3)，建立的指纹图谱检测方法可以用于北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗粒的质量分析与鉴别。

实施例2麸炒北苍术中药配方颗粒UPLC指纹图谱的构建

1.试验方法

1.1对照品溶液的制备：取5-HMF、绿原酸、苍术素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含5-HMF 27μg、绿原酸5μg、苍术素29μg的溶液，摇匀，即得混合对照品溶液。

1.2色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％(体积分数)甲酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为0.3mL/min，柱温为30℃，检测波长为：0～10min，280nm，10min～45min，340nm，进样量为2μL。梯度洗脱程序见实施例1中表1。

1.3供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％ (体积分数)甲醇25mL，称定重量，回流30分钟，放冷，用50％(体积分数) 甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得中药配方颗粒供试品溶液。

2.测定法：分别精密吸取混合对照品溶液、中药配方颗粒供试品溶液2uL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.指纹图谱共有峰的确定

3.1取18批麸炒北苍术配方颗粒，参照本实施例1.3项下方法制备麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液，参照本实施例1.2项下的色谱条件下获得18批麸炒北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱(见图2)。

3.2实验结果：18批麸炒北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱均显示相同的18 个共有峰，因此选择上述18个共有峰作为麸炒北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱的特征峰，并以峰7(绿原酸)为参照峰进行标准研究。

4.供试品溶液稳定性考察

取麸炒北苍术配方颗粒(对应批号：FCCZ01)，参照本实施例1.3项下的方法，制备供试品溶液，在规定色谱条件下，分别在0小时，2小时，4小时，8 小时，12小时，16小时，20小时，24小时进样，进样体积2μl。以绿原酸色谱峰为参照峰S，计算各特共有峰的相对保留时间和相对峰面积。

结果显示，供试品溶液在24小时内18个共有峰相对保留时间的RSD<1.0％，相对峰面积的RSD范围为<2.0％，表明该方法下供试品溶液在24小时内基本稳定。

5.指纹图谱的建立

5.1麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的建立：对18批麸炒配方颗粒共有峰信息进行分析，最终规定麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱标准为：供试品指纹图谱中应有18个共有峰。其中2号峰为5-羟甲基糠醛(5-HMF)、7号峰为绿原酸、 18号峰为苍术素，以上3个峰应分别与相应的对照品参照物峰保留时间相同；与绿原酸参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，见表5；并计算峰1、峰2(5-HMF)与S峰的相对峰面积，见表6，其相对峰面积应在规定范围内，规定值为：0.70～3.24(峰1)、0.99～6.86(峰2)。

表5 18批麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱相对保留时间

表6 18批麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱峰1、峰2与S峰的相对峰面积

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)对18批麸炒北苍术配方颗粒图谱进行合成，建立了麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的对照图谱(见图3)，建立的指纹图谱检测方法可以用于北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗粒的质量分析鉴别。

实施例3北苍术配方颗粒和麸炒北苍术配方颗粒的鉴别

1.参照实施例1中1.3项下方法和实施例2中1.3项下方法制备18批北苍术配方颗粒供试品溶液和麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液，分别按照实施例1 中1.2项下的色谱条件和实施例2中1.2项下的色谱条件测定，获得18批北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱和18批麸炒北苍术配方颗粒UPLC指纹图谱，将测定后的北苍术与麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱中色谱峰的峰面积进行偏正交最小二乘判别分析(OPLS-DA)，18批麸炒北苍术的配方颗粒中有3批未检测到 18、19号色谱峰，故以0记其峰面积，将生品北苍术标定的20个共有峰的峰面积和麸炒北苍术标定的18个共有峰面积导入SIMCA14.0软件进行分析， OPLS-DA得分图见图4。OPLS-DA模型R2Y(表示OPLS-DA模型拟合程度) 达到0.911，Q2(表示该模型预测能力)达到0.847。表明北苍术与麸炒北苍术配方颗粒在OPLS-DA模型中分类聚集明显。对OPLS-DA模型中20个色谱峰的峰面积投影重要度(Variable Importance for the Projection，VIP)进行分析，对区分北苍术与麸炒北苍术配方颗粒20个色谱峰的VIP值大小进行排列，结果见图5。其中VIP值大于1的色谱峰且对样品分类的影响大小排序为峰 1>5-HMF>峰9>峰19>峰6>绿原酸>峰11>苍术素，共计8个色谱峰，可作为区分北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的指标成分峰。由于峰1，峰2的的VIP值影响排名前二，此处优选峰1、5-HMF作为北苍术与麸炒北苍术配方颗粒鉴别的重要特征峰，以绿原酸作为参照物峰(S)，北苍术配方颗粒中峰1、峰2(5-HMF) 与S峰的相对峰面积应在规定范围内，规定值为：0.09～0.33(峰1)、0.13～0.48 (峰2)，麸炒北苍术配方颗粒中峰1、峰2(5-HMF)与S峰的相对峰面积应在规定范围内，规定值为：0.70～3.24(峰1)、0.99～6.86(峰2)。

2.应用

取待测中药配方颗粒适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50％(体积分数)甲醇25mL，称定重量，回流30分钟，放冷，用50％ (体积分数)甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得待测中药配方颗粒供试品溶液。

精密吸取待测中药配方颗粒供试品溶液2uL，注入超高效液相色谱仪，参照本实施例1中1.2项下的色谱条件或实施例2中的1.2项下的色谱条件测定，得色谱图，如图6所示，图6中，峰1峰面积值为1.864mAu*min，峰2的峰面积值为7.122mAu*min，峰7的峰面积值为1.594mAu*min。以峰7为参照物峰(S)，计算峰1、峰2与S峰的相对峰面积：1.169(峰1)，4.468(峰2)。

结果显示，待测中药配方颗粒为麸炒苍术配方颗粒。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (13)

1.一种北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

以溶剂溶解5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品，制备混合对照品溶液；

向溶剂中加入北苍术配方颗粒，回流后滤过，制备北苍术配方颗粒供试品溶液；

对所述混合对照品溶液和北苍术配方颗粒供试品溶液进行超高效液相色谱测定，建立北苍术配方颗粒指纹图谱；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

2.根据权利要求1所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为330nm～345nm。

3.根据权利要求1所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

4.根据权利要求1-3任一项所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述回流的时间为20min～40min。

5.一种麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

以溶剂溶解5-羟甲基糠醛对照品、绿原酸对照品和苍术素对照品，制备混合对照品溶液；

向溶剂中加入麸炒北苍术配方颗粒，回流后滤过，制备麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液；

对所述混合对照品溶液和麸炒北苍术配方颗粒供试品溶液进行超高效液相色谱测定，建立麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

6.根据权利要求5所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为330nm～345nm。

7.根据权利要求5所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

8.根据权利要求5-7任一项所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述回流的时间为20min～40min。

9.一种北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

向溶剂中加入待测样品，回流后滤过，制备待测样品溶液；

对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱测定，将所述待测样品溶液的色谱图与权利要求1-4任一项所述的北苍术配方颗粒指纹图谱和权利要求5-8任一项所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱进行对比；

所述超高效液相色谱的色谱条件包括：

以乙腈为流动相A，以体积分数为0.08％～0.12％的甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，所述梯度洗脱包括如下程序：

0min～5min，所述流动相A的体积分数由0％上升到2％，所述流动相B的体积分数由100％下降到98％；

5min～9min，所述流动相A的体积分数由2％上升到8％，所述流动相B的体积分数由98％下降到92％；

9min～15min，保持所述流动相A的体积分数为8％，所述流动相B的体积分数为92％；

15min～22min，所述流动相A的体积分数由8％上升到25％，所述流动相B的体积分数由92％下降到75％；

22min～40min，所述流动相A的体积分数由25％上升到80％，所述流动相B的体积分数由75％下降到20％；

40min～40.1min，所述流动相A的体积分数由80％下降到0％，所述流动相B的体积分数由20％上升到100％；

40.1min～45min，保持所述流动相A的体积分数为0％，所述流动相B的体积分数为100％。

10.根据权利要求9所述的北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，若所述待测样品溶液的色谱图符合权利要求1-4任一项所述的北苍术配方颗粒指纹图谱的特征，且峰1与峰7的相对峰面积在0.09～0.33之间，峰2与峰7的相对峰面积在0.13～0.48之间，则所述待测样品为北苍术配方颗粒；

若所述待测样品溶液的色谱图符合权利要求5-8任一项所述的麸炒北苍术配方颗粒指纹图谱的特征，且峰1与峰7的相对峰面积在0.70～3.24之间，峰2与峰7的相对峰面积在0.99～6.86之间，则所述待测样品为麸炒北苍术配方颗粒。

11.根据权利要求9或10所述的北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

0min～10min，检测波长为278nm～285nm，10min～45min，检测波长为330nm～345nm。

12.根据权利要求9或10所述的北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件还包括：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流速为0.28mL/min～0.32mL/min；柱温为28℃～32℃。

13.根据权利要求9或10所述的北苍术与麸炒北苍术配方颗粒的鉴别方法，其特征在于，所述回流的时间为20min～40min。

Images