CN111272904A - 诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法和应用 - Google Patents

诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法和应用。诃子药材特征图谱的构建方法包括以下步骤：以没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸和诃子次酸为对照品，制备对照品溶液；取诃子药材，加溶剂溶解，超声提取，提取液过滤，取续滤液，得诃子供试品溶液；对所述对照品溶液、诃子供试品溶液分别进行超高效液相色谱检测；所述超高效液相色谱的色谱条件包括：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。本发明为诃子(统称)药材质量控制及评价提供较为全面、有效和快速的方法。

Description

诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法和应用
技术领域
本发明涉及药物分析和药物质量控制的技术领域，特别是涉及诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法和应用。
背景技术
诃子(统称)是中药的常用药，也是藏药、蒙药等民族药的常用药，据2015年版《中国药典》第一部记载，诃子(统称)为使君子科植物诃子Terminalia chebula Retz.或绒毛诃子Terminalia chebula Retz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实。诃子(统称)性苦、酸、涩，平，归肺、大肠经。具有涩肠止泻，敛肺止咳，降火利咽的功效，临床用于久泻久痢，便血脱肛，肺虚喘咳，久嗽不止，咽痛音哑等症。诃子(统称)含有多酚类，黄酮类、多糖类、萜类和甾醇类等多种化学成分，其中含量最多的是鞣质类，现代药理研究表明诃子(统称)的药理作用主要有抑菌、抗病毒、抗氧化、抗诱变、抗癌、止泻、强心等。
目前，有关诃子(统称)的文献研究多以产地研究为主，与基原相关的研究较少。2015年版《中国药典》收载了该品种的两个基原，在性状上，并未对两个基原进行区分。两种基原的诃子(统称)药材目前在临床应用上并未作区分，两者的质量是否存在差异尚缺乏研究，因此从提高药材质量和确保临床用药安全提供参考依据出发，有必要对诃子与绒毛诃子的质量进行对比研究。
发明内容
基于此，本发明提供一种诃子和绒毛诃子药材特征图谱的构建方法，采用UPLC(超高效液相色谱)建立了诃子及绒毛诃子药材的特征图谱，结合相似度评价、聚类分析、主成分分析等方法，挖掘特征图谱中蕴含的信息，比较不同基原诃子(统称)样品的差异，寻找区分不同基原诃子(统称)的标志性成分，为诃子(统称)药材质量控制及评价提供较为全面、有效和快速的方法。
本发明所述的诃子药材特征图谱的构建方法的具体技术方案为：
一种诃子药材特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
以没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸和诃子次酸为对照品，制备对照品溶液；
取诃子药材，加溶剂溶解，超声提取，提取液过滤，取续滤液，得诃子供试品溶液；
对所述对照品溶液、诃子供试品溶液分别进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
在一些优选的实施例中，流动相B为体积分数为0.2％的磷酸水溶液
在一些优选的实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为30℃；流速为0.35mL/min；检测波长为270nm。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为70％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为20min～40min。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为30min。
在一些优选的实施例中，所述对照品溶液包括混合对照品溶液和诃子次酸对照品溶液；
所述混合对照品溶液为没食子酸对照品溶液、没食子酸乙酯对照品溶液、柯里拉京对照品溶液、诃藜勒酸对照品溶液和诃子酸对照品溶液的混合溶液。
在一些优选的实施例中，所述诃子的特征图谱确定具有9个共有峰，其中6个峰应分别与相应对照品参照物峰的保留时间相对应；与柯里拉京参照物峰相对应的峰为S1峰，计算峰3、峰4与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，所述规定值为：0.65(峰3)、0.75(峰4)；与诃子酸参照物峰相对应的峰为S2峰，计算峰9与S2峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，规定值为：1.02(峰9)。
本发明所述的绒毛诃子药材特征图谱的构建方法的具体技术方案为：
一种绒毛诃子药材特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
以没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸和诃子次酸为对照品，制备对照品溶液；
取绒毛诃子药材，加溶剂溶解，超声处理，提取液过滤，取续滤液，得绒毛诃子供试品溶液；
对所述对照品溶液、绒毛诃子供试品溶液分别进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
在一些优选的实施例中，流动相B为体积分数为0.2％的磷酸水溶液
在一些优选的实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为30℃；流速为0.35mL/min；检测波长为270nm。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为70％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为20min～40min。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为30min。
在一些优选的实施例中，所述对照品溶液包括混合对照品溶液和诃子次酸对照品溶液；
所述混合对照品溶液为没食子酸对照品溶液、没食子酸乙酯对照品溶液、柯里拉京对照品溶液、诃藜勒酸对照品溶液和诃子酸对照品溶液的混合溶液。
在一些优选的实施例中，所述绒毛诃子的特征图谱确定具有8个共有峰，其中6个峰应分别与相应对照品参照物峰的保留时间相对应，与柯里拉京参照物峰相对应的峰为S峰，计算峰3、峰4与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，所述规定值为：0.65(峰3)、0.75(峰4)。
本发明还提供一种药材的检测方法。
具体技术方案为：
一种药材的检测方法，包括以下步骤：
取待测药材，加溶剂溶解，超声提取，提取液过滤，取续滤液，得待测样品溶液；
对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
在一些优选的实施例中，流动相B为体积分数为0.2％的磷酸水溶液
在一些优选的实施例中，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
在一些优选的实施例中，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为30℃；流速为0.35mL/min；检测波长为270nm。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述溶剂为体积分数为70％的甲醇水溶液。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为20min～40min。
在一些优选的实施例中，所述超声处理的时间为30min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明采用超高效液相色谱法建立了诃子药材的特征图谱和绒毛诃子药材的特征图谱，所述特征图谱能够充分反应样品的特征峰信息，分别展示诃子药材和绒毛诃子药材的化学成分特征。
(2)本发明运用了相似度评价、聚类分析、主成分分析对不同基原的诃子(统称)药材特征图谱和绒毛诃子药材特征图谱进行了分析，较全面地评价了不同基原诃子(统称)药材的质量，为诃子(统称)药材的质量控制及评价提供参考。
附图说明
图1为17批诃子药材的UPLC特征图谱叠加图和对照特征图谱S1；
图2为13批绒毛诃子药材的UPLC特征图谱叠加图和对照特征图谱S2；
图3为诃子和绒毛诃子的特征图谱共有峰对照品归属图(A为对照品溶液的图谱；B为混合对照品溶液的图谱；C为诃子的特征图谱；D为绒毛诃子的特征图谱；峰1为诃子次酸；峰2为没食子酸；峰5为没食子酸乙酯；峰6(S)为柯里拉京；峰7为诃藜勒酸；峰8为诃子酸)；
图4为聚类分析结果；
图5为待测样品UPLC特征图谱。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
应当理解地，“诃子”和“绒毛诃子”为诃子药材品种的两个基原。本领域中将两者统称为“诃子”，为区分“诃子(统称)”与“诃子(基原)”，以及描述方便，本发明在描述本领域通常理解的“诃子”时，将其标注为“诃子(统称)”。若无标注，“诃子”统一理解为“诃子(基原)”。以上称呼仅为避免混淆的一种手段，不应理解为对保护范围的限定。
实施例1
1仪器与试药
1.1仪器 Waters H-Class型超高效液相色谱仪(美国沃特世有限公司)，WatersCORTECS T3色谱柱(2.1mm×150mm，1.6μm)，KQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，ME204E型万分之一天平，XP26型百万分之一天平(梅特勒-托利多公司)，Milli-QDirect型超纯水系统(默克股份有限公司)。
1.2试药 30批诃子(统称)药材经广东一方制药有限公司魏梅主任中药师鉴定为使君子科植物诃子Terminalia chebu1a Retz.及绒毛诃子Terminalia chebu1aRetz.var.tomentella Kurt.的干燥成熟果实。样品编号及详细信息见表1。
没食子酸(批号：110831-201805，含量：90.8％)；柯里拉京(批号：29111623-200301，含量：100％)，为中国食品药品检定研究院提供；诃藜勒酸(批号：23094-71-5，含量：97％)为上海诗丹德标准技术服务有限公司；没食子酸乙酯(批号：wkq18020206，含量：≥98％)；诃子酸(批号：wkq17031305，含量：98％)；诃子次酸(批号：wkq18061402，含量：98％)，为四川省维克奇生物科技有限公司提供。
表1样品信息表
Figure BDA0002421700380000081
Figure BDA0002421700380000091
2方法与结果
2.1色谱条件 采用Waters CORTECS T3(2.1mm×150mm，1.6μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.2％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～3min，0％A；3～5min，0％→3％A；5～12min，3％→10％A；12～20min，10％A；20～25min，10％→14％A；25～35min，14％→17％A；35～40min，17％→21％A；40～45min，21％→60％A；45～50min，60％A)；柱温为30℃；流速为0.35mL/min；检测波长为270nm。
2.2供试品溶液制备 取诃子药材粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3对照品溶液制备 取没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸对照品适量，精密称定，置于20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得每1mL分别含没食子酸98.15μg，没食子酸乙酯240.98μg，柯里拉京90.16μg，诃藜勒酸245.12μg，诃子酸198.45μg的混合对照品溶液。另取诃子次酸对照品适量，精密称定，置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制得每1mL含诃子次酸205.02μg的对照品溶液。
2.4方法学考察
2.4.1精密度试验 取同一批诃子样品按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件重复进样测定6次，以柯里拉京峰为参照峰S1，计算1～6号共有峰的相对保留时间及1～9号共有峰相对峰面积的RSD，以诃子酸峰为参照峰S2，计算7～9号共有峰的相对保留时间。结果表明，9个色谱峰的相对保留时间及相对峰面积RSD均小于3％，说明仪器精密度良好。
2.4.2重现性试验 取同一批诃子样品，按“2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项色谱条件分别进样测定，以柯里拉京峰为参照峰S1，计算1～6号共有峰的相对保留时间及1～9号共有峰相对峰面积的RSD，以诃子酸峰为参照峰S2，计算7～9号共有峰的相对保留时间。结果表明，9个色谱峰的相对保留时间及相对峰面积RSD均小于3％，表明本方法重现性良好。
2.4.3稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2.1”项色谱条件，分别于0，2，4，6，8，12h进样，以柯里拉京峰为参照峰S1，计算1～6号共有峰的相对保留时间及1～9号共有峰相对峰面积的RSD，以诃子酸峰为参照峰S2，计算7～9号共有峰的相对保留时间。结果表明，9个色谱峰的相对保留时间及相对峰面积RSD均小于3％，表明供试品在12h内稳定。
2.5特征图谱的建立及相似度评价 取17批诃子及13批绒毛诃子药材样品，各约0.25g，精密称定，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件分析，将所得色谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会，2012.0版)，分别以H1及RH1为参照图谱，采用平均数法生成对照图谱，分别标定共有峰9个及8个，并分别生成对照特征图谱S1、S2，结果见图1、图2。以柯里拉京峰为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，结果见表2、表3。经对照品保留时间定位及色谱峰紫外光谱图分析，指认出6个共有峰，分别为1号峰诃子次酸，2号峰没食子酸，5号峰没食子酸乙酯，6号峰柯里拉京，7号峰诃藜勒酸，8号峰诃子酸，见图3。
以共有模式作为对照特征图谱，将17批诃子及13批绒毛诃子药材样品分别进行相似度评价，结果所有批次样品相似度均大于0.87，来源为诃子基原的样品(H1～H17)相似度高于来源为绒毛诃子(RH1～RH13)，结果见表4。将已建立的诃子对照图谱与绒毛诃子进行相似度评价，两者相似度为0.730，特征图谱上存在明显差异，所建立的特征图谱可用于诃子(统称)药材的基原鉴别和整体质量评价。
最终根据17批诃子药材的相对保留时间均值确定诃子药材特征图谱标准为：供试品色谱中应呈现9个特征峰，其中6个峰应分别与相应对照品参照物峰的保留时间相对应。与柯里拉京参照物峰相对应的峰为S1峰，计算峰3、峰4与S1峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.65(峰3)、0.75(峰4)；与诃子酸参照物峰相对应的峰为S2峰，计算峰9与S2峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，规定值为：1.02(峰9)。
最终根据13批绒毛诃子药材的相对保留时间均值，同时结合诃子药材特征图谱标准，在尽可能保持两个标准一致的前提下，确定绒毛诃子药材特征图谱标准为：供试品色谱中应呈现8个特征峰，其中6个峰应分别与相应对照品参照物峰的保留时间相对应。与柯里拉京参照物峰相对应的峰为S峰，计算峰3、峰4与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应该在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.65(峰3)、0.75(峰4)。
表2特征图谱共有峰相对保留时间结果
Figure BDA0002421700380000111
表3特征图谱共有峰相对峰面积结果
Figure BDA0002421700380000112
Figure BDA0002421700380000121
注：H1～H17基原为诃子，RH1～RH13基原为绒毛诃子。
表4特征图谱相似度评价
Figure BDA0002421700380000122
注：H1～H17基原为诃子，RH1～RH13基原为绒毛诃子。
2.6聚类分析 运用SPSS 20.0软件对17批诃子及13批绒毛诃子药材样品进行系统聚类，采用组间平均数联结法，以夹角余弦作为样品相似度的距离公式，样品被清晰地聚为两类，结果见图4。H1～H17基原为诃子的样品聚为一类，RH1～RH13基原为绒毛诃子的样品聚为一类。总体来看，同基原药材样品之间具有一定的相似性，不同基原样品之间具有明显差异。
2.7主成分分析和因子分析 用SPSS20.0软件对17批诃子及13批绒毛诃子药材特征图谱所得的8个共有峰进行主成分分析，得出相关矩阵的特征值及其方差，见表5。由表5可知，前2个成分的特征值分别为4.319和1.189，对总方差的累积贡献率达78.683％，基本保留了原样本的信息，所以确定提取的主成分数为2个。初始因子载荷矩阵见表6，第一主成分主要反映了来自原始指标色谱峰7的信息，第二主成分主要反映了来自原始指标色谱峰1，2的信息，故仅用前2个主成分就可表示原UPLC数据的主要信息。前2名变量的权重值分别为0.944、0.936、0.919，对应峰1、峰2和峰7，说明峰1，峰2和峰7是判断诃子(统称)药材质量的重要性因素，分别为诃子次酸、没食子酸、诃藜勒酸。从样品得分图中，样品可以分为2类，诃子样品(H1～H17)分为一类，绒毛诃子样品(RH1～RH13)分为一类，结果见图5。计算各样品综合得分，结果表明，多数来源为诃子的样品排名较绒毛诃子样品得分高，说明诃子的质量整体优于绒毛诃子，见表7。
表5特征根、各主成分的贡献率
Figure BDA0002421700380000131
表6各因子初始因子载荷矩阵
Figure BDA0002421700380000132
表7主成分得分、综合得分及排序
Figure BDA0002421700380000133
Figure BDA0002421700380000141
实施例2
本实施例提供一种诃子(统称)药材的检测方法，步骤如下：
待测样品溶液的制备 取待测诃子(统称)药材粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定 按实施例1“2.1”项色谱条件进样至超高效液相色谱仪。
结果如图5所示，与实施例1构建的诃子药材和绒毛诃子药材的特征图谱对比可知，该药材属于诃子。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (17)

1.一种诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
以没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸和诃子次酸为对照品，制备对照品溶液；
取诃子药材，加溶剂溶解，超声提取，提取液过滤，取续滤液，得诃子供试品溶液；
对所述对照品溶液、诃子供试品溶液分别进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
3.根据权利要求1所述的诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
4.根据权利要求1所述的诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
5.根据权利要求1所述的诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超声处理的时间为20min～40min。
6.根据权利要求1-5任一项所述的诃子药材特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液包括混合对照品溶液和诃子次酸对照品溶液；
所述混合对照品溶液为没食子酸对照品溶液、没食子酸乙酯对照品溶液、柯里拉京对照品溶液、诃藜勒酸对照品溶液和诃子酸对照品溶液的混合溶液。
7.一种绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
以没食子酸、没食子酸乙酯、柯里拉京、诃藜勒酸、诃子酸和诃子次酸为对照品，制备对照品溶液；
取绒毛诃子药材，加溶剂溶解，超声处理，提取液过滤，取续滤液，得绒毛诃子供试品溶液；
对所述对照品溶液、绒毛诃子供试品溶液分别进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
8.根据权利要求7所述的绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
9.根据权利要求7所述的绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
10.根据权利要求7所述的绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
11.根据权利要求7所述的绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，所述超声处理的时间为20min～40min。
12.根据权利要求7-11任一项所述的绒毛诃子特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液包括混合对照品溶液和诃子次酸对照品溶液；
所述混合对照品溶液为没食子酸对照品溶液、没食子酸乙酯对照品溶液、柯里拉京对照品溶液、诃藜勒酸对照品溶液和诃子酸对照品溶液的混合溶液。
13.一种药材的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
取待测药材，加溶剂溶解，超声提取，提取液过滤，取续滤液，得待测样品溶液；
对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱检测；
所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1％～0.3％的磷酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱。
14.根据权利要求13所述的药材的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱包括如下程序：
0min～3min，流动相A保持体积百分比为0％，流动相B保持体积百分比为100％；
3min～5min，流动相A的体积百分比由0％上升至3％，流动相B的体积百分比由100％下降至97％；
5min～12min，流动相A的体积百分比由3％上升至10％，流动相B的体积百分比由97％下降至90％；
12min～20min，流动相A保持体积百分比为10％，流动相B保持体积百分比为90％；
20min～25min，流动相A的体积百分比由10％上升至14％，流动相B的体积百分比由90％下降至86％；
25min～35min，流动相A的体积百分比由14％上升至17％，流动相B的体积百分比由86％下降至83％；
35min～40min，流动相A的体积百分比由17％上升至21％，流动相B的体积百分比由83％下降至79％；
40min～45min，流动相A的体积百分比由21％上升至60％，流动相B的体积百分比由79％下降至40％；
45min～50min，流动相A保持体积百分比为60％，流动相B保持体积百分比为40％。
15.根据权利要求13所述的药材的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件包括：
柱温为28℃～32℃；流速为0.33mL/min～0.37mL/min；检测波长为250nm～290nm。
16.根据权利要求13所述的药材的检测方法，其特征在于，所述溶剂为体积分数为60％～80％的甲醇水溶液。
17.根据权利要求13-16任一项所述的药材的检测方法，其特征在于，所述超声处理的时间为20min～40min。
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