CN109187796A - 一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测及鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种桑白皮与蜜桑白皮饮片质量检测及鉴别方法。本发明的桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测方法，建立了桑白皮与蜜桑白皮饮片HPLC指纹图谱，明确了桑白皮与蜜桑白皮饮片的化学成分差异，阐明了炮制对桑白皮化学成分的影响，且本法相较于已有报道的薄层层析法，稳定性更好，准确度更高。为桑白皮与蜜桑白皮饮片鉴别提供了新方法。

Description

一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测及鉴别方法

技术领域

本发明具体涉及一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测及鉴别方法。

背景技术

桑白皮为桑科植物桑(Morus alba L.))的干燥根皮，秋末叶落时至次春发芽前采挖根部，刮去黄棕色粗皮，纵向剖开，剥取根皮，晒干即得。其为临床常用中药，主要功效为泻肺喘、利水消肿，临床常用于治疗肺热喘咳、水肿、尿少以及面部肌肤浮肿等症。桑白皮中主要含有二苯乙烯类成分和黄酮类成分。古代本草如《名医别录》等记载其治消渴，单用即有效。相关报道其有利尿、降压、降糖、镇痛、镇静、镇咳、祛痰、平喘、抗炎、抗菌、及抗癌等作用。

蜜桑白皮为桑白皮的炮制加工品，寒泻之性缓和，偏于润肺止咳，多用于肺虚喘咳，并常与补气药或养阴药合用。由于桑白皮药材与蜜桑白皮的外观性状相似，并且与同属植物单纯从外形特征上很难区分。目前市场上有用同属植物的根皮作桑白皮入药，也易将桑白皮与蜜桑白皮混淆。

中药指纹图谱是一种多指标的质量控制模式，虽然它不能代替含量测定，但它比测定任何单一成分所提供的信息却丰富得多，可以比较全面地反映所含化学成分的种类和数量，能够更加有效地体现出中药成分的整体性和综合作用。HPLC法具有高效、快速、灵敏、重现性好、应用范围广等特点，在中药的质量控制及中药有效成分研究等方面都是重要的分析手段。目前对桑白皮与蜜桑白皮饮片的鉴定，局限于外观和薄层层析法。如任婧昱，姜文红，曹飞，张清波.桑白皮与蜜桑白皮及其相近品种的鉴别研究[J].方药研究，2015.2.61‐62.，采用显微鉴别、薄层色谱法对桑白皮与蜜桑白皮及其相近品种进行鉴别区分。但是未能明确桑白皮与蜜桑白皮饮片的主要化学成分，不能说明炮制对桑白皮化学成分的影响。且还需结合显微观察才能做出判断。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛对照品，加4050％甲醇制成参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：取待检样品粉末，加入60～70％甲醇提取，滤过，取滤液作为供试品溶液；

3)分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05～0.15％磷酸水溶液(v/v)为流动相B梯度洗脱；波长为280nm；梯度洗脱程序如下：

进一步地，步骤1)所述桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛的浓度为每1ml分别含80μg、30μgl、30μg、30μg、30μg、30μg的溶液。

进一步地，步骤2)所述桑白皮或蜜桑白皮饮片待测样品与60％甲醇的质量体积比为1g:200mL。

进一步地，步骤2)所述提取为超声提取，提取功率为600W，提取频率为25kHz，提取时间20min。

进一步地，步骤3)所述的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；所述流动相B为0.1％磷酸水溶液(v/v)；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；进样量为10μl。

本发明还提供了一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的鉴别方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)取待检桑白皮或蜜桑白皮饮片粉末制备供试品溶液；

(2)按前所述的高效液相色谱法检测；

(3)分析检测结果。

进一步地，所述的高效液相色谱法检测的桑白皮饮片指纹图谱中应呈现8个特征峰，其中与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相应的峰为峰1。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，相对保留时间分别为：0.759(峰2)、0.795(峰3)、1.000(峰4,S)、1.618(峰5)、1.802(峰6)、1.986(峰7)、2.218(峰8)。

更进一步地，所述的峰4,S为紫云英苷；峰5为桑根酮C；峰6为桑黄酮G；峰8为桑辛素。

进一步地，所述的高效液相色谱法检测的蜜桑白皮饮片指纹图谱中应呈现10个特征峰，其中与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相应的峰为峰3。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，相对保留时间分别为：0.165(峰1)、0.215(峰2)、0.752(峰4)、0.792(峰5)、1.000(峰6,S)、1.619(峰7)、1.808(峰8)、1.988(峰9)、2.248(峰10)。

更进一步地，所述的峰2为5‐羟甲基糠醛；峰6,S为紫云英苷；峰7为桑根酮C；峰8为桑黄酮G；峰10为桑辛素。

本发明的一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测方法，明确了桑白皮与蜜桑白皮饮片的化学成分差异，阐明了炮制对桑白皮化学成分的影响，且方法简单，稳定性好，精密度高，为桑白皮与蜜桑白皮饮片鉴别提供了新方法。防止临床上将桑白皮与蜜桑白皮饮片混用，保证了用药安全。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1桑白皮饮片特征图谱，峰1：桑皮苷A；峰4,S：紫云英苷；峰5：桑根酮C；峰6：桑黄酮G；峰8：桑辛素；

S1‐S27依次为：SBP180101、SBP180102、SBP180103、SBP180104、SBP180105、SBP180106、SBP180110、SBP180111、SBP180112、SBP180113、SBP180117、SBP180118、SBP180120、SBP180121、SBP180122、SBP180123、SBP180124、SBP180125、SBP180126、SBP180127、SBP180128、SBP180129、SBP180130、SBP180132、SBP180133、SBP180134、SBP180139。

图2蜜桑白皮饮片特征图谱，峰2:5‐羟甲基糠醛；峰3：桑皮苷A；峰6,S：紫云英苷；峰7：桑根酮C；峰8：桑黄酮G；峰10：桑辛素；

S1‐S27依次为：MSBP180101、MSBP180102、MSBP180103、MSBP180104、MSBP180105、MSBP180106、MSBP180110、MSBP180111、MSBP180112、MSBP180113、MSBP180117、MSBP180118、MSBP180120、MSBP180121、MSBP180122、MSBP180123、MSBP180124、MSBP180125、MSBP180126、MSBP180127、MSBP180128、MSBP180129、MSBP180130、MSBP180132、MSBP180133、MSBP180134、MSBP180139。

图3桑白皮饮片特征对照图谱，峰1：桑皮苷A；峰4,S：紫云英苷；峰5：桑根酮C；峰6：桑黄酮G；峰8：桑辛素。

图4蜜桑白皮饮片特征对照特征图谱，峰2：5‐羟甲基糠醛；峰3：桑皮苷A；峰6,S：紫云英苷；峰7：桑根酮C；峰8：桑黄酮G；峰10：桑辛素。

图5桑白皮饮片与蜜桑白皮饮片对照图谱叠加图，峰2：5‐羟甲基糠醛；峰3：桑皮苷A；峰6,S：紫云英苷；峰7：桑根酮C；峰8：桑黄酮G；峰10：桑辛素。

图6桑皮苷A紫外吸收光谱图

图7桑辛素紫外吸收光谱图

图8桑黄酮G紫外吸收光谱图

图9桑根酮C紫外吸收光谱图

图10紫云英苷紫外吸收光谱图

图11 5‐羟甲基糠醛紫外吸收光谱图

图12蜜桑白皮饮片3D色谱图

图13蜜桑白皮饮片不同波长色谱图

图14柱温考察

图15流速考察

图16提取溶剂考察

图17提取方法考察

图18提取时间考察

图19色谱峰指认

图20不同仪器考察

图21不同色谱柱考察

具体实施方式

1实验仪器与试剂

1.1实验仪器

高效液相色谱仪：安捷伦1200型高效液相色谱仪、安捷伦1260型高效液相色谱仪、岛津20‐AD型高效液相色谱仪；电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒‐托利多仪器有限公司)；超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；色谱柱：Agilent 5TC‐C18(2)4.6×250mm、、Inertsustain C18 5μm 4.6×250mm、Kromasil 100‐5‐C18 5μm 4.6×250mm。

1.2试剂

乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

桑皮苷A(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq18011403，含量以99.4％计)，桑辛素(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq17052603，含量以99.29％计)，桑根酮C(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq17091111，含量以98.44％计)，桑黄酮G(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq17110209，含量以98.23％计)，5‐羟甲基糠醛(中国食品药品检定研究院，批号：111626‐201509，含量以97.8％计)。紫云英苷(四川省维克奇生物科技有限公司，批号：wkq17111511)。

蜜桑白皮饮片(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：MSBP180101、MSBP180102、MSBP180103、MSBP180104、MSBP180105、MSBP180106、MSBP180110、MSBP180111、MSBP180112、MSBP180113、MSBP180117、MSBP180118、MSBP180120、MSBP180121、MSBP180122、MSBP180123、MSBP180124、MSBP180125、MSBP180126、MSBP180127、MSBP180128、MSBP180129、MSBP180130、MSBP180132、MSBP180133、MSBP180134、MSBP180139)。

桑白皮饮片(四川新绿色药业科技发展有限公司制备，批号：SBP180101、SBP180102、SBP180103、SBP180104、SBP180105、SBP180106、SBP180110、SBP180111、SBP180112、SBP180113、SBP180117、SBP180118、SBP180120、SBP180121、SBP180122、SBP180123、SBP180124、SBP180125、SBP180126、SBP180127、SBP180128、SBP180129、SBP180130、SBP180132、SBP180133、SBP180134、SBP180139)。

实施例1桑白皮饮片特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含80μg、30μg、30μg、30μg、30μg、30μg的溶液，即得参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取27个批次桑白皮粉末各0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率25kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

3)特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

色谱条件如下：

检测波长：280nm

色谱柱：C18色谱柱(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸水(v/v)(B)，梯度洗脱(0～5min，9％A；5～15min，9％～13％A；15～25min，13％～22％A；25～35min，22％～34％A；35～50min，34％～48％A；50～60min，48％～53％A；60～65min，53％～65％A；65～80min，65％A)；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

对27批桑白皮样品进行特征图谱分析，计算相对保留时间和相对峰面积比值。见图1，表1、2。

表1 27批桑白皮饮片相对保留时间比值

表2 27批桑白皮饮片相对峰面积比值

根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共有8个重复性较好的特征峰。结果表明，27批桑白皮饮片各特征峰相对峰面积RSD太大，而27批桑白皮饮片8个特征峰相对保留时间RSD均小于2.0％。供试品特征图谱中呈现了8个特征峰，其中与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相应的峰为峰1。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.759(峰2)、0.795(峰3)、1.000(峰4,S)、1.618(峰5)、1.802(峰6)、1.986(峰7)、2.218(峰8)。

实施例2蜜桑白皮饮片特征图谱

1)参照物溶液的制备：

取桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含80μg、30μg、30μg、30μg、30μg、30μg的溶液，即得参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：

分别取27个批次蜜桑白皮粉末各0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率600W，频率25kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

3)、特征图谱的测定

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定；

色谱条件如下：

检测波长：280nm

色谱柱：C18色谱柱(功率600W，频率25kHz)；

流动相:乙腈(A)和0.1％磷酸水(B)，梯度洗脱(0～5min，9％A；5～15min，9％～13％A；15～25min，13％～22％A；25～35min，22％～34％A；35～50min，34％～48％A；50～60min，48％～53％A；60～65min，53％～65％A；65～80min，65％A)；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

对27批蜜桑白皮样品进行特征图谱分析，计算相对保留时间和相对峰面积比值。见图2，表3、4。

表3 27批蜜桑白皮相对保留时间比值

表4 27批蜜桑白皮相对峰面积比值

根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共有10个重复性较好的特征峰。结果表明，27批蜜桑白皮各特征峰相对峰面积RSD太大，而27批蜜桑白皮10个特征峰相对保留时间RSD均小于3.0％。供试品特征图谱中呈现了10个特征峰，与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相对应的为峰3。计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.165(峰1)、0.215(峰2)、0.752(峰4)、0.792(峰5)、1.000(峰6,S)、1.619(峰7)、1.808(峰8)、1.988(峰9)、2.248(峰10)。

实施例3桑白皮饮片与蜜桑白皮饮片特征图谱鉴别

采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)分别对27批桑白皮饮片与蜜桑白皮饮片特征图谱进行合成，建立了桑白皮饮片与蜜桑白皮饮片特征图谱的对照图谱(图3、图4)，并进行叠加比较，见图5。结果表明：蜜桑白皮饮片中，在5～9分钟时，较桑白皮饮片多了两个峰，其中峰2经指认为5‐羟甲基糠醛，差异显示这两个峰为炮制之后产生新成分。建立的桑白皮与蜜桑白皮特征图谱检测法能够将两种饮片进行鉴别，其中蜜桑白皮饮片中的峰1和峰2为主要的鉴别点。

以下通过试验例具体说明本发明的有益效果：

试验例1蜜桑白皮饮片特征图谱法

1、色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)以0.1％磷酸水为流动相A；以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按桑皮苷A峰计算应不低于3000，如表5所示。

表5拟定的流动相梯度

1.1波长选择

在以上拟定的实验条件基础上，利用二极管阵列检测器分别对5‐羟甲基糠醛、桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷供试品溶液进行全波段扫描，并分别提取供试品溶液在260nm、280nm、310nm、340nm波长下的色谱图。见图6‐13。结果表明，在检测波长为280nm时色谱峰信息量较大，色谱图基线更平稳，故检测波长确定为280nm。

1.2柱温考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对柱温为20℃、30℃、40℃时进行考察。见图14，表6。结果表明，柱温对色谱峰的相对保留时间有一定影响，柱温在30℃时，色谱图峰形均较为对称，分离度均好，故最终选择30℃作为桑白皮饮片特征图谱方法的柱温。

表6柱温考察—特征峰相对保留时间比值

1.3流速考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2 ml/min时进行了考察。见图15，表7。结果表明，流速分别为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时，各特征峰的相对保留时间RSD为1.39％～12.81％，在流速为1.0ml/min时，色谱图峰形较好，分离度适中。故流速确定1.0ml/min。

表7流速考察—特征峰相对保留时间

2、供试品溶液的制备考察

2.1提取溶剂考察

取蜜桑白皮饮片(批号MSBP180130)0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别对供试品提取溶剂为乙醇、50％乙醇、70％乙醇、甲醇、90％甲醇、70％甲醇、60％甲醇、50％甲醇、水50ml时进行考察，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图16。结果表明，60％甲醇提取溶剂条件下的色谱峰分离度更好，色谱峰信息更丰富。故供试品提取溶剂确定为60％甲醇。

2.2提取方法考察

取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，密塞，称定重量，分别对供试品提取方法为回流、超声时进行考察，提取时间20min，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图17。结果表明，对供试品分别进行超声提取与回流提取时效果一致。因超声提取操作更为简便，故供试品提取方法确定为超声提取。

2.3提取时间考察

取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)，分别对供试品提取时间为10分钟、20分钟、30分钟、40分钟时进行考察，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。见图18。结果表明，在提取时间为20分钟时，即可充分提取。故供试品提取时间确定为20分钟。

综上所述，蜜桑白皮饮片特征图谱供试品溶液的制备方法确定为：取本品0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3蜜桑白皮饮片特征图谱方法

3.1色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)以0.1％磷酸水为流动相A；以乙腈为流动相B，按下表8中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm。理论板数按桑皮苷A峰计算应不低于3000。

表8流动相梯度

3.2参照物溶液的制备

取桑皮苷A、5‐羟甲基糠醛、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含80μg、30μg、30μg、30μg、30μg、30μg的溶液，即得。

3.3供试品溶液的制备

取蜜桑白皮饮片粉末0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率600W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4测定法

精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

4方法学考察

4.1色谱峰指认

供试品溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备蜜桑白皮饮片供试品溶液。

参照物溶液的制备：取桑皮苷A、5‐羟甲基糠醛、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含80μg、30μg、30μg、30μg、30μg、30μg的溶液，即得。

阴性对照溶液的制备：按以上拟定的实验条件，制备缺蜜桑白皮饮片阴性对照溶液。

对蜜桑白皮饮片特征图谱峰进行定位。见图19。

4.2精密度试验

取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)供试品溶液，按拟定实验方法连续进样6次，每次10μl，计算各特征峰的相对保留时间及相对峰面积。见表9、10。结果表明，该仪器精密度良好。

表9精密度考察‐保留时间

表10精密度考察‐峰面积

4.3重复性考察

精密称取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)6份，按拟定实验方法进行制备及测定。见表11、12。结果表明，该方法重复性良好。

表11重复性考察‐相对保留时间比值

表12重复性考察‐相对峰面积比值

4.4中间精密度考察

4.4.1不同仪器考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别精密称取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)三份，制备供试品溶液，分别在安捷伦1200、安捷伦1260型高效液相色谱仪、岛津20‐AD型高效液相色谱仪上进行测定。见图20、表13、14。结果表明，用上述3种仪器对供试品进行检测时，各特征峰相对保留时间的RSD小于5.09％

表13仪器耐用性考察‐相对保留时间比值

表14仪器耐用性考察‐相对峰面积比值

4.4.2不同人员和时间考察

在以上拟定的实验条件基础上，由不同人员(A、B)在不同时间(T1、T2)分别精密称取蜜桑白皮饮片(批号：MSBP180130)各两份，制备供试品，进行测定。见表15、16。结果表明，由不同的人员在不同的时间对同一个样品进行测定，方法稳定性较好。

表15人员和时间考察‐相对保留时间比值

表16人员和时间考察‐相对峰面积比值

4.5耐用性考察

4.5.1色谱柱耐用性考察

在以上拟定的实验条件基础上，分别对色谱柱为Agilent 5TC‐C18(2)4.6×250mm、Inertsustain C18 5μm 4.6×250mm、Kromasil 100‐5‐C18 5μm 4.6×250mm进行考察。见图21，表17、18。结果表明，用上述3种色谱柱对样品进行检测，特征峰相对保留时间的RSD在1.85％～13.66％，特征峰相对峰面积的RSD在3.53％～60.28％。

表17色谱柱耐用性考察‐相对保留时间比值

表18色谱柱耐用性考察‐相对峰面积比值

4.5.2稳定性考察

在以上拟定的实验条件基础上，取同一供试品溶液，分别于0h，2h，6h，12h，16h，24h时测定。见表19、20。结果表明，其相对应的特征峰保留时间的RSD在0.03％～0.40％，样品溶液在24小时内较稳定。

表19稳定性考察‐保留时间

表20稳定性考察‐峰面积

综上所述，各特征峰相对保留时间的RSD在以上各项考察中均符合要求，该方法良好。

Claims (10)

1.一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的质量检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛对照品，加40～50％甲醇制成参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：取待检样品粉末，加入60～70％甲醇提取，滤过，取滤液作为供试品溶液；

3)分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙腈为流动相A，以0.05～0.15％磷酸水溶液为流动相B梯度洗脱；波长为280nm；梯度洗脱程序如下：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述桑皮苷A、桑辛素、桑黄酮G、桑根酮C、紫云英苷、5‐羟甲基糠醛的浓度为每1ml分别含80μg、30μgl、30μg、30μg、30μg、30μg；所述甲醇浓度为50％。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述桑白皮或蜜桑白皮饮片待测样品与60％甲醇的质量体积比为1g:200mL；所述甲醇浓度为60％。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述提取为超声提取，提取功率为600W，提取频率为25kHz，提取时间20min。

5.根据权利要求1所述的鉴别检测方法，其特征在于：步骤3)所述的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；所述流动相B为0.1％磷酸水溶液；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；进样量为10μl。

6.一种桑白皮与蜜桑白皮饮片的鉴别方法，其特征在于：它包括如下步骤：

(1)取待检桑白皮或蜜桑白皮饮片粉末制备供试品溶液；

(2)按权利要求1‐5项所述的高效液相色谱法检测；

(3)分析检测结果。

7.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法检测的桑白皮饮片指纹图谱中应呈现8个特征峰，其中与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相应的峰为峰1；计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，相对保留时间分别为：0.759(峰2)、0.795(峰3)、1.000(峰4,S)、1.618(峰5)、1.802(峰6)、1.986(峰7)、2.218(峰8)。

8.根据权利要求7所述的鉴别方法，其特征在于：所述的峰4,S为紫云英苷；峰5为桑根酮C；峰6为桑黄酮G；峰8为桑辛素。

9.根据权利要求6所述的鉴别方法，其特征在于：所述的高效液相色谱法检测的蜜桑白皮饮片指纹图谱中应呈现10个特征峰，其中与紫云英苷参照物相应的峰为S峰，与桑皮苷A参照物相应的峰为峰3；计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，相对保留时间分别为：0.165(峰1)、0.215(峰2)、0.752(峰4)、0.792(峰5)、1.000(峰6,S)、1.619(峰7)、1.808(峰8)、1.988(峰9)、2.248(峰10)。

10.根据权利要求9所述的鉴别方法，其特征在于：所述的峰2为5‐羟甲基糠醛；峰6,S为紫云英苷；峰7为桑根酮C；峰8为桑黄酮G；峰10为桑辛素。