CN112198123A - 修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医疗器械技术领域,具体涉及一种可修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统及检测方法,该检测系统主要包括糖化血红蛋白检测试剂盒和糖化血红蛋白分析仪,检测试剂盒包括R1‑A试剂、R1‑B试剂、R2试剂和层析卡,R1‑A试剂为干粉;利用该检测系统进行检测时,糖化血红蛋白分析仪采用反射原理读取颜色信号然后自动计算得出HbA1c的值,当检测到贫血样本时,分析仪可以给出报警提示“血色素过低”,告知该样本测试存在异常,据此调整并增大加样量,可以修正贫血样本的HbA1c测值,使其与空腹血糖测值相关性更大,更具有临床指导意义;并且该检测方法操作简单,耗时短。
Description
技术领域
本发明属于医疗器械技术领域,具体涉及一种可修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统及检测方法。
背景技术
糖尿病是一种内分泌代谢疾病,发病率仅次于心血管疾病和肿瘤,其病因和发病机制至今尚未完全阐明。最近几年糖尿病的发病率呈不断上升趋势,是严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。传统的糖尿病诊断和治疗监测采用空腹血糖、餐后血糖和口服葡萄糖耐量试验等方法,但是血糖参数仅代表抽血时的瞬间血糖水平,测量不准确。近年来,糖化血红蛋白(HbA1c)的检测日益受到临床的高度重视。
糖化血红蛋白是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物。总血红蛋白可以分为A,A2,F三种组分,其中F主要在胎儿期,而成人主要为A,是由两个α链和两个β链构成。A2由两个α链和两个δ链形成,F由两个α链和两个γ链形成。成人HbA占97%,又可分为HbA0和HbA1两种,HbA0为没有被糖基化部分,而HbA1为被糖基化部分。正常人平均HbA1c水平约为5%,总HbA1约占6%左右,而HbA1a和HbA1b总和尚低于1%。血糖和血红蛋白结合生成的糖化血红蛋白是不可逆反应,糖化血红蛋白与血糖浓度成正比,并且保持120天左右,所以,测试糖化血红蛋白可以观测到此前120天的血糖浓度,即患者近8~12周的血糖控制情况。因此,糖化血红蛋白作为糖尿病标志物,在临床检查中进行日常测定作为血糖控制的指标。
体内HbA1c的合成是不可逆的,HbA1c的水平与该时期内血红蛋白(Hb)的质和量以及葡萄糖(GLU)的平均水平均有关系。张红荣等在医学新知杂志上曾经报导:贫血对临床HbA1c水平测定有显著影响,具体试验数据如下表所示:
组别 | 例数 | 空腹血糖含量(mmol/L) | 糖化血红蛋白水平(%) |
对照组 | 300 | 10.08±2.20 | 8.22±1.45 |
合并轻度贫血组 | 140 | 10.22±2.08 | 7.88±1.25 |
合并中度贫血组 | 94 | 9.98±2.31 | 6.49±1.21 |
合并重度贫血组 | 66 | 10.40±2.30 | 5.44±1.29 |
r | 3.976 | 4.832 | |
P | 0.041 | 0.037 |
从上述数据比较可以看出,贫血对于临床HbA1c水平的测量的影响是非常大的,但是在实际临床工作中,往往只关注了GLU对HbA1c的影响,而忽略了Hb因素对HbA1c水平的影响,从而导致测量结果不准确。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中存在的上述问题,提出了一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统及检测方法,该检测系统主要包括糖化血红蛋白检测试剂盒和糖化血红蛋白分析仪,糖化血红蛋白分析仪采用反射原理读取颜色信号然后自动计算得出HbA1c的值,当检测贫血样本时,设置仪器报警提示“血色素过低”,告知该样本测试存在异常,然后据此增大加样量,修正贫血对检测结果的影响。
本发明的技术方案是:
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,所述检测系统由糖化血红蛋白分析仪和检测试剂盒组成,所述检测试剂盒包括R1-A试剂、R1-B试剂、R2试剂和层析卡;
其中,R1-A试剂为干粉,包括:0.1~0.3mg/L硼酸盐衍生物,0.3~0.45mg/L促溶剂,甲醇和二氯甲烷组合试剂1000mL/L;R1-B试剂包括:1~5g/L甘氨酰胺盐酸盐,10~50g/L3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐,0.1~10g/L表面活性剂,1~10g/L硫酸钠,0.1~1g/L氯化锌,1~25g/L氯化钠,3~15g/L硫酸镁;R2试剂包括:0.5~5g/L吗啉乙磺酸,5~50g/L三羟甲基氨基甲烷,0.1~10g/L表面活性剂,1~25g/L氯化钠,0.1~0.2g/LProclin300,0.1~5g/L硫酸钠,0.01~10g/L乙二胺二乙酸二钠盐;
糖化血红蛋白分析仪采用反射原理读取颜色信号然后自动计算得出HbA1c的值;试剂盒中主要成分为硼酸盐衍生物的R1-A试剂以及用于复溶R1-A试剂的R1-B试剂组合使用,用于裂解红细胞、释放并结合糖化血红蛋白、沉淀总血红蛋白;R2试剂是用于洗脱未与糖化血红蛋白结合的多余的硼酸盐衍生物;
所述R1-A试剂为干粉,该干粉的制备不能进行普通的冻干制备,因为冻干会影响该试剂的性能,使之不易复溶,影响测定结果。考虑到该试剂本身的性能,经过考察和筛选,我们发现使用易挥发的甲醇和二氯甲烷组合可以溶解R1-A的主要成分硼酸盐衍生物,并且易烘干、好复溶,不影响后期使用效果,为了增加该试剂的复溶效果,还加入了促溶剂。所述R1-A干粉的制备方法为:将硼酸盐衍生物及促溶剂充分溶解于甲醇和二氯甲烷混合试剂中,200μL/支分装于棕色圆底离心管,置于专用烘干试剂架上45℃真空干燥2~4h得到干粉,常温储存,备用。
通过将R1-A试剂作成干粉,克服了行业内普遍的R1试剂为液体单组分,需要2~8℃储存的缺点。本发明所制备的R1-A试剂干粉,能够常温储存、性质稳定,使用时现用现混。
上述采用的层析卡的尺寸大小与糖化血红蛋白分析仪的检测卡槽一致。糖化血红蛋白分析仪还包括检光学模块(RGB三色灯)、显示屏、滑块、电路板、上下壳、电源按钮等,其中检测卡槽位于光学模块上端、滑块下端,其尺寸与层析卡一致。
进一步的,所述硼酸盐衍生物的含量为100~300mg/L,所述硼酸衍生物的结构式如下:
其中,R应满足具有磺酸基和氨基,其碳原子数为12~18。
进一步的,所述表面活性剂为Tween20、Tween80或TweenX-100中的一种或多种。
进一步的,所述促溶剂为N-乙烯基酰胺类聚合物。
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,包括如下步骤:
(1)在糖化血红蛋白分析仪中设置临床分析得到的血红素范围数值,超出这一范围值时即提示“血色素过低”并作出相应报警;
报警设置方法为:收集临床上不同贫血程度糖尿病病人的全血样本,测试其血色素值,以及糖化血红蛋白比值,根据直接体现的血色素含量进行判断,根据检测结果得出血色素含量低于多少的范围值时,会导致糖化血红蛋白的测值偏差比较大,样本量取200例左右或更多,取不同程度的贫血样本中血色素含量最高的、且偏差又比较大的设定为我们这个报警范围值,当低于这一数值范围时,设置仪器报警。
(2)将R1-A试剂干粉和R1-B试剂混合,充分溶解后加入全血样本,充分反应得到反应液;然后将反应液滴加到层析卡中,待充分吸收后,再移取R2试剂滴加到层析卡中,待充分吸收后,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪内进行检测;
(3)当糖化血红蛋白分析仪报警提示时,调整加样量,重新检测,即可得到修正的HbA1c测值。
进一步的,所述步骤(2)的具体步骤如下:
取一支R1-A试剂干粉,加入适量R1-B试剂,上下颠倒10~15次左右,保证充分溶解,得到R1-A和R1-B复合检测试剂;
将待测全血样本加入上述充分溶解好的R1-A和R1-B复合检测试剂中,上下颠倒10~15次,充分混匀,于室温下静置,得到反应液;
移取上述反应液滴加到层析卡中间的加样孔内;待充分吸收后,再移取R2试剂滴加在层析卡中间的加样孔内;待充分吸收,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测。
检测原理如下:
检测系统包括糖化血红蛋白分析仪和检测试剂盒,检测试剂盒的检测系统包括层析卡、试剂R1-A、R1-B和R2。R1-A试剂包括可与糖化血红蛋白的顺式-二醇基结合的蓝色硼酸结合物,R1-B中含有可溶解红细胞并使血红蛋白沉淀的物质。当将血液滴入R1-A、R1-B复配的反应试剂时,血红细胞将立即被溶解,所含的血红蛋白随即沉淀,硼酸结合物即可与糖化血红蛋白的顺式-二醇基结合。一定量的反应混合物加入到层析卡中,所有已沉淀的血红蛋白,无论其是否被硼酸结合物所结合,都将残留在层析卡中的滤膜之上;然后使用R2试剂,除去多余的有色结合物。最后使用糖化血红蛋白分析仪对蓝色(糖化血红蛋白)和红色(总血红蛋白)的颜色色谱进行分析计算二者的比率,该比率代表了样品中HbA1c的浓度,具体的糖化血红蛋白分析仪是通过光学部件测试反射率,来识别颜色,当测试贫血样本时,总血红蛋白(留在滤膜上的红色)就会少,仪器可以识别出来红色的反射率超限,已经过改进设置的分析仪通过限定界限值使仪器提示“血色素减少”,并作出相应报警,此时调整加样量,重新测试,即可修正HbA1c测值。
本发明的有益效果:
(1)本发明所提供的修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,主要包括糖化血红蛋白检测试剂盒和糖化血红蛋白分析仪,将试剂盒中的R1-A试剂利用真空干燥的方法做成干粉,克服了现有技术中试剂必须2~8℃冷藏储存的缺陷,通过改进将R1拆分为两种组分,使得试剂运输和储存更加方便;(2)本发明所提供的修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,采用糖化血红蛋白分析仪与糖化血红蛋白检测试剂盒组成的检测系统,通过设置分析仪器进行报警提示,当检测到贫血样本时,分析仪可以给出报警提示“血色素过低”,告知该样本测试存在异常,据此调整并增大加样量,可以修正贫血样本的HbA1c测值,使其与空腹血糖测值相关性更大,更具有临床指导意义;并且该检测方法操作简单,耗时短。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下,所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
为了进一步理解本发明,下面结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,由糖化血红蛋白分析仪和检测试剂盒组成,检测试剂盒包括R1-A试剂、R1-B试剂、R2试剂和层析卡;
R1-A试剂:
上述硼酸盐衍生物的R为含有磺酸基和氨基的双苯环结构,碳原子数为12;
将R1-A试剂充分溶解后按200μL每支分装到圆底棕色离心管中,置于提前45℃预热好的真空干燥箱中,烘干2h,取出扣盖,做好标识,常温储存,备用;
R1-B试剂:
纯化水定容至1L;
R1-B试剂配制完成后,按5mL/瓶分装到预先准备好的试剂瓶中,做好标识,常温储存备用。
R2试剂:
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,包括如下步骤:
(1)收集临床上200例不同贫血程度糖尿病病人的全血样本,测试其血色素值以及糖化血红蛋白比值,取不同程度的贫血样本中血色素含量最高的、且偏差又比较大的设定为报警范围值;在糖化血红蛋白分析仪中设置临床分析得到的血红素范围数值,超出这一范围值时即提示“血色素过低”并作出相应报警;
使用时,打开仪器电源开关,仪器启动并开始自检;正常开机后进入主菜单,提示开始校准,放入校准卡合上上盖,点击“开始校准”按键,开始校准,校准完成自动进入测试界面,取出校准卡,空出检测卡槽,准备进行测试,其中校准卡为空白的未滴加样本的层析卡;
(2)取一支R1-A试剂干粉,加入200μLR1-B试剂,上下颠倒10次左右,保证充分溶解,得到R1-A和R1-B的复合检测试剂;用毛细采血管吸取5μL全血样本,加入上述充分溶解好的R1-A、R1-B复合检测试剂中,上下颠倒10次,充分混匀,于室温下静置2min,得到反应液;
用移液器吸取25μL上述反应液滴加到层析卡中间的加样孔内;待约5~10s充分吸收后,再吸取25μLR2试剂滴加在层析卡中间的加样孔内;待约5~10s后充分吸收,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测;
(3)当糖化血红蛋白分析仪报警提示“血色素过低”时,说明该样本为贫血样本,调整加样量,将上述全血样本加样量改为10μL,然后重新上述检测步骤,即可得到该样本的正常的HbA1c测值。
实施例2
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,由糖化血红蛋白分析仪和检测试剂盒组成,检测试剂盒包括R1-A试剂、R1-B试剂、R2试剂和层析卡;
R1-A试剂:
上述硼酸盐衍生物的R基团为含有磺酸基和氨基的双苯环结构,碳原子数为18;
R1-A试剂充分溶解后按200μL每支分装到圆底棕色离心管中,置于提前45℃预热好的真空干燥箱中,烘干2h,取出扣盖,做好标识,常温储存,备用;
R1-B试剂:
纯化水定容至1L;
R1-B试剂配制完成后,按5mL/瓶分装到预先准备好的试剂瓶中,做好标识,常温储存备用。
R2试剂:
一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,包括如下步骤:
(3)收集临床上250例不同贫血程度糖尿病病人的全血样本,测试其血色素值以及糖化血红蛋白比值,取不同程度的贫血样本中血色素含量最高的、且偏差又比较大的设定为报警范围值;在糖化血红蛋白分析仪中设置临床分析得到的血红素范围数值,超出这一范围值时即提示“血色素过低”并作出相应报警;
使用时,打开仪器电源开关,仪器启动并开始自检;正常开机后进入主菜单,提示开始校准,放入校准卡合上上盖,点击“开始校准”按键,开始校准,校准完成自动进入测试界面,取出校准卡,空出检测卡槽,准备进行测试,其中校准卡为空白的未滴加样本的层析卡;
(4)取一支R1-A试剂干粉,加入200μLR1-B试剂,上下颠倒10次左右,保证充分溶解,得到R1-A和R1-B的复合检测试剂;用毛细采血管吸取5μL全血样本,加入上述充分溶解好的R1-A、R1-B复合检测试剂中,上下颠倒10次,充分混匀,于室温下静置2min,得到反应液;
用移液器吸取25μL上述反应液滴加到层析卡中间的加样孔内;待约5~10s充分吸收后,再吸取25μLR2试剂滴加在层析卡中间的加样孔内;待约5~10s后充分吸收,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测;
(3)当糖化血红蛋白分析仪报警提示“血色素过低”时,说明该样本为贫血样本,调整加样量,将上述全血样本加样量改为10μL,然后重新上述检测步骤,即可得到该样本的正常的HbA1c测值。
试验例
利用本发明提供的检测系统进行检测,测试贫血糖尿病患者样本30例,非贫血糖尿病患者样本30例,修正前后与GLU的测值比对结果如下:
由上述实验数据可得出,当测试糖尿病患者的样本时,正常不贫血的病人,糖化血红蛋白测值与空腹血糖测值相关性好,差别不大,以糖化血红蛋白测值为基准进行临床诊断和指导用药是可行的;但贫血组糖尿病人的糖化血红蛋白测值明显偏低,这时再以糖化血红蛋白测值为基准进行临床诊断和指导用药就会有一定的盲目性和差异性,而本发明改进后的试剂盒克服了这一缺点,使得贫血组糖尿病人的糖化血红蛋白测值与空腹血糖测值较接近,较改进前,相关性提高了很多,具有更好的临床指导意义。
上述说明仅为本发明的优选实施例,并非是对本发明的限制,凡在本发明的内容范围内所做出的任何修改、等同替换、改型等,均应包含在本发明的专利保护范围之内。
Claims (6)
1.一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,其特征在于,所述检测系统由糖化血红蛋白分析仪和检测试剂盒组成,所述检测试剂盒包括R1-A试剂、R1-B试剂、R2试剂和层析卡;
其中,R1-A试剂为干粉,包括:0.1~0.3mg/L硼酸盐衍生物,0.3~0.45mg/L促溶剂,甲醇和二氯甲烷组合试剂1000mL/L;R1-B试剂包括:1~5g/L甘氨酰胺盐酸盐,10~50g/L 3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐,0.1~10g/L表面活性剂,1~10g/L硫酸钠,0.1~1g/L氯化锌,1~25g/L氯化钠,3~15g/L硫酸镁;R2试剂包括:0.5~5g/L吗啉乙磺酸,5~50g/L三羟甲基氨基甲烷,0.1~10g/L表面活性剂,1~25g/L氯化钠,0.1~0.2g/L Proclin300,0.1~5g/L硫酸钠,0.01~10g/L乙二胺二乙酸二钠盐;
所述R1-A试剂为干粉,所述R1-A干粉的制备方法为:选用甲醇和二氯甲烷组合试剂,将硼酸盐衍生物及促溶剂充分溶解后,放入设置温度为45℃的真空干燥箱中,烘干2~4h后取出,常温储存。
3.根据权利要求1所述的修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,其特征在于,所述表面活性剂为Tween20、Tween80或Tween X-100中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测系统,其特征在于,所述促溶剂为N-乙烯基酰胺类聚合物。
5.一种修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)在糖化血红蛋白分析仪中设置临床分析得到的血红素范围数值,超出这一范围值时即提示“血色素过低”并作出相应报警;
(2)将R1-A试剂干粉和R1-B试剂混合,充分溶解后加入全血样本,充分反应得到反应液;然后将反应液滴加到层析卡中,待充分吸收后,再移取R2试剂滴加到层析卡中,待充分吸收后,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪内进行检测;
(3)当糖化血红蛋白分析仪报警提示时,调整加样量,重新检测,即可得到修正的HbA1c测值。
6.根据权利要求5所述的修正贫血对糖化血红蛋白测值影响的检测方法,其特征在于,所述步骤(2)的具体步骤如下:
取一支R1-A试剂干粉,加入适量R1-B试剂,上下颠倒10~15次左右,保证充分溶解,得到R1-A和R1-B复合检测试剂;
将待测全血样本加入上述充分溶解好的R1-A和R1-B复合检测试剂中,上下颠倒10~15次,充分混匀,于室温下静置,得到反应液;
移取上述反应液滴加到层析卡中间的加样孔内;待充分吸收后,再移取R2试剂滴加在层析卡中间的加样孔内;待充分吸收,将层析卡置于糖化血红蛋白分析仪上进行检测。
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